Связанные заказы

Функция «Связанные заказы» позволяет связать другие заказы с производственным заказом. Это очень полезно в ситуациях с невыполненными заказами, когда создание связи между заказом на продажу и производственным заказом может легко помочь вам перейти от одного заказа к другому.

Начать производство

Для начала производства:

1. Установите тип производства на Разборка
2. Установите место заказа
3. Установите количество для производства
4. Установите запас отходов
5. Нажмите Начать производство

Операция «Начать производство» установит статус заказа в «В производстве».Эта операция также позволит выделить необходимый запас готового изделия для разборки.

Убедитесь, что готовой продукции достаточно для начала производства

Полное производство

Для выполнения производственного заказа:

1. Установить объем заказа
2. Нажмите Завершить

Завершенная производственная операция установит статус заказа на Завершенный. Эта операция будет:

• Освобождение отчислений, выполненных для продукта для разборки, когда заказ был установлен как «В производстве»
• Уменьшение запаса готовой продукции в наличии
• Увеличение запаса компонентов в наличии
• Обновление значения скользящей средней стоимости компонентов для учета дополнительной рабочей силы стоимость, если есть

Отмена производства

Отмена заказов на разборку в настоящее время не поддерживается.

Изменения в разнообразии и составе растительности после вывоза скота вдоль высокогорного уклона | Интернет-исследования в области здравоохранения и окружающей среды (HERO)

ID ГЕРОЯ

6968557

Тип ссылки

Журнальная статья

Заголовок

Изменения в разнообразии и составе растительности после вывоза скота вдоль возвышенного склона

Авторы)

Дэвис, GM; Бодарт, Дж.; ,

Год

2015

Рецензируется ли эксперт?

да

Журнал

iForest
ISSN: 1971-7458

Издатель

SISEF-SOC ITALIANA SELVICOLTURA ECOL FORESTALE

Место нахождения

ПОТЕНЦА

Номера страниц

582-589

DOI

Идентификатор Web of Science

Абстрактный

Среда обитания европейских вересковых пустошей — это культурные ландшафты, образовавшиеся из ранее покрытых лесом экосистем. Пустоши представляют значительный природоохранный интерес, но они подверглись длительной деградации из-за ряда факторов, включая чрезмерный выпас домашнего скота.Растет признание необходимости восстановления горных ландшафтов для создания разнообразной мозаики лесов, вересковых пустошей и экотонов на опушках лесов. В некоторых исследованиях удаление поголовья было достаточным для восстановления вересковых пустошей, но часто требуются более интенсивные вмешательства. В нескольких исследованиях специально изучалось, как абиотические градиенты, связанные с изменением высоты, могут влиять на успех восстановления. Мы изучили различия в растительности между пастбищными и восстановленными участками на 500-метровом градиенте высоты, разделенном на двух склонах холмов, которые были частью масштабного проекта по восстановлению ландшафта в шотландских южных возвышенностях.Альфа- и гамма-разнообразие видов демонстрировало нелинейную реакцию на высоту, но влияние выпаса скота различалось между участками. Выпас увеличил разнообразие на более низком участке, но уменьшил его на более высоком участке. Различные последствия выпаса скота на высоте можно интерпретировать в контексте уровней конкуренции и вероятного влияния на темпы колонизации и вымирания. Различия в составе сообщества оценивались с помощью PERMANOVA, NMDS и кластерного анализа и в основном контролировались высотой без существенного влияния выпаса скота.Краеугольный вересковый вид Calluna vulgaris не отмечен ни на одной из наших контрольных площадок, но некоторые другие кустарнички были обычны. Изменения в структуре сообщества после удаления запасов происходят медленно на возвышенных участках, но первоначальные воздействия тесно связаны с абиотическими условиями участка и составом растительности до восстановления. Поэтому во время крупномасштабной реставрации жизненно важно учитывать, насколько широко применяемые методы лечения могут различаться по своему эффекту в зависимости от ландшафта. Изменения в разнообразии могут служить полезным ранним индикатором важных экологических процессов и вероятных направлений изменений.

» Какова скорость сборки и разборки цитоскелета?

Рисунок 1: Моментальные снимки динамики микротрубочек.Эта серия снимков получена из экстракта яиц Xenopus, что позволяет восстановить динамику микротрубочек. Временной интервал между изображениями составляет 6 секунд. Обратите внимание, что отдельные нити как растут, так и сжимаются с характерным периодом полураспада чуть меньше минуты. (Адаптировано из R. Tournebize et al., The EMBO Journal Vol.16 No.18 pp.5537–5549, 1997.)

Что же делает полимеры цитоскелета такими отличными от полимеров, из которых состоят пластиковые пакеты и контейнеры, заполняющие наши магазины, и от нейлона в одежде, которую мы носим? Прежде всего, именно их увлекательная и противоречивая динамика делает нити цитоскелета, такие как актин и микротрубочки, такими отличными от полимеров индустриальной эпохи.Чтобы получить представление об этой сложной динамике, нам нужно только рассмотреть определяющий акт отдельных клеток, когда они делятся, чтобы стать двумя новыми дочерьми. Микротрубочки в митотическом веретене делящихся клеток участвуют в постоянном танце, увеличиваясь и уменьшаясь снова и снова (см. рис. 1). Точно так же актин на переднем крае подвижных клеток также участвует в непрекращающемся параде зародышеобразования, ветвления, роста и деполимеризации. В этой виньетке мы подводим итоги скорости, связанной со сборкой и разборкой этих биологических полимеров, а числа, обсуждаемые здесь, служат для понимания контекстов, варьирующихся от времени метафазы в клеточном цикле до скорости, с которой подвижные клетки могут двигаться. перемещаться по поверхностям.

Рисунок 2: Длина микротрубочек в зависимости от времени. Длина микротрубочек как функция времени показывает периоды роста, перемежающиеся катастрофами, при которых филаменты быстро деполимеризуются. (Адаптировано из D.K. Fygenson et al., Phys. Rev. E50:1579, 1994.)

Если мы посмотрим под микроскопом на флуоресцентно меченные микротрубочки, мы увидим, что эти нити выполняют причудливую серию событий роста и сжатия, как показано на снимках видеомикроскопического исследования динамической нестабильности на рисунке 1.С количественной точки зрения можно отслеживать длину микротрубочек как функцию времени. Кадры из видео, подобные показанным здесь, позволяют нам распознать четыре ключевых параметра, характеризующих динамику микротрубочек: сами скорости роста и сокращения, а также скорости, с которыми микротрубочки переходят между фазами роста и сокращения. Как видно из данных на рис. 2, такие временные графики позволяют нам сразу считать приблизительные значения скоростей in vitro , характеризующих как рост, так и усадку этих полимеров.Чтобы быть конкретным, отметим, что для данных, показанных на этом рисунке, микротрубочка растет примерно на 8 мкм в течение примерно 4 минут, что соответствует скорости роста 2 мкм/мин ≈ 30 нм/с. Эти цифры напоминают нам о времени клеточного цикла, когда митоз занимает несколько десятков минут, что согласуется с этой скоростью полимеризации 2 мкм/мин, когда мы видим, что перемещение хромосом на расстояние в несколько десятков микрон должно занять десятки минут. Далее, если вспомнить из виньетки на тему «Каковы размеры нитей клетки?» что размер мономера порядка 5 нм, это означает, что скорость роста составляет примерно 5-10 добавленных мономеров в секунду.Поскольку микротрубочка состоит из тринадцати протофиламентов, нам нужно умножить эти 5-10 мономеров в секунду на коэффициент 13, что даст чистую скорость добавления примерно 100 мономеров в секунду на растущем конце микротрубочки.

Рисунок 3: Измерение скорости деполимеризации микротрубочек в митотическом веретене. (A) Схема микротрубочек до и после разреза. Вновь образованные плюс-концы затем подвергаются деполимеризации, которую можно визуализировать флуоресцентно. (B) (C) (Адаптировано из Дж.Brugues et al., Cell 149:554, 2012.)

Как насчет in vivo скоростей динамики микротрубочек? Недавние эксперименты по динамике расхождения хромосом митотическим веретеном были проведены на экстрактах яиц лягушки Xenopus laevis. Идея этого эксперимента заключается в том, что, разрезая микротрубочки с помощью лазера, как показано на рисунке 3А, можно наблюдать и измерять результирующую динамику по мере того, как вновь образованные плюс-концы сжимаются в результате деполимеризации. Эксперимент показан на рисунке 3, где показан пример динамики после обрезки шпинделя.Измеренная скорость деполимеризации составляет 35±2 мкм/мин. Эта скорость соответствует примерно 500 нм/с. Если вспомнить, что каждый мономер имеет размер примерно 5 нм, это означает, что один протофиламент на данной микротрубочке теряет примерно 100 мономеров каждую секунду. Поскольку на микротрубочку приходится 13 протофиламентов, общая скорость потери из укорачивающейся микротрубочки составляет примерно 1000 мономеров в секунду.

Рисунок 4: Измерение констант скорости полимеризации актиновых филаментов. (A) Электронно-микроскопическое изображение, показывающее структуры, используемые для определения скоростей как на зазубренных, так и на заостренных концах.(B) Концентрация мономера актина в мкМ показана рядом с каждым временным ходом. (C) Константы скорости как для актина АТФ, так и для АДФ. Входящие скорости имеют единицы измерения мкМ-1 с-1, в то время как неправильные скорости имеют единицы измерения с-1. Обратите внимание на большую асимметрию в показателях между колючим и заостренным концами. (A, любезно предоставлено M. Footer; B, C, адаптировано из T.D. Pollard, J. Cell Biol. 103:2747, 1986.) (RP: все числа перепутаны – необходимо исправить здесь и в PBOC)

Рисунок 5: Скорость роста актиновых филаментов in vivo. (A) Темпы роста в различных областях эндотелиальной клетки человека.(B) Скорость роста на переднем крае клетки. (C) Скорость роста на задней кромке клетки. (Адаптировано из KT Applegate, Journal of Structural Biology 176 (2011) 168–184)

Точно так же, как микротрубочки проявляют динамическую нестабильность, которая приводит к периодам роста и сокращения, актиновые филаменты также подвержены целому ряду интересных динамических процессов. Самый простой способ охарактеризовать важный характер динамики полимеризации и деполимеризации актина состоит в том, чтобы отметить наличие структурной асимметрии между двумя концами филамента.Это диктует, что скорость добавления и потери мономера на двух концах различна, и этот факт играет центральную роль в их интригующей динамике. Одной из самых ранних попыток параметризации различных констант скорости на двух концах было экспериментальное исследование с использованием электронной микроскопии, где длины актиновых филаментов измеряли как функцию времени после инкубации при различных концентрациях актина. Полученные данные этого эксперимента показаны на рис. 4, который показывает поразительную асимметрию в константах скорости на двух концах (зазубренном и заостренном) и, кроме того, как эти скорости зависят от того, связан ли актин с АТФ или АДФ.

Актин является ключевым участником клеточной подвижности, как мы уже видели в нескольких других виньетках. Как показатели in vitro, описанные выше, соотносятся с тем, что наблюдается в живых клетках? Сложные инструменты анализа изображений позволили одновременно наблюдать за динамикой всех многочисленных филаментов внутри подвижной клетки, как показано на рисунке 5. Обратите внимание, что результаты этого исследования in vivo с использованием флуоресцентной микроскопии удивительно согласуются с зарегистрированными показателями in vitro. на рисунке 4.В частности, если мы посмотрим на скорость роста зазубренных концов на Рисунке 4 и экстраполируем изменение длины на минутную шкалу времени, мы увидим, что скорость роста составляет десятки мкм/мин, что согласуется с исследованиями флуоресценции, счастливой само- согласованность между совершенно разными методами.

Филаменты цитоскелета также играют ключевую роль в динамике бактерий. Одним из наиболее интересных тематических исследований является система ParM, которая отвечает за сегрегацию бактериальных плазмид перед клеточным делением.В схематической форме считается, что принцип работы этих полимеров заключается в том, что каждый конец растущего полимера прикрепляется к плазмиде, и по мере того, как полимер растет по клетке, он отталкивает две плазмиды к различным будущим дочерним клеткам. Как видно на рисунке 6, скорость полимеризации ParM in vitro можно оценить, отметив, что длина увеличивается на несколько микрон в течение минутного масштаба времени, что приводит к скорости роста в несколько мкм/мин. Структурно ParM по существу неотличим от актина, хотя его роль в сегрегации ДНК, а также тот факт, что он проявляет динамическую нестабильность, показанную на рис. 6B, заставляет его занимать концептуальную золотую середину между актином и микротрубочками.

Рисунок 6: Динамика ParM. (A) В начале пленки нить ParM растет. Красные стрелки указывают на концевые концы нити и служат реперным маркером для оценки усадки нити. (B) График показывает длину нити как функцию времени. (Адаптировано из E.C. Garner et al., Science 306:1021, 2004.)

Композиции »Washington Mills Ceramics Corporation

Этот глоссарий представляет собой исчерпывающий список составов продуктов, предлагаемых Washington Mills Ceramics, включая: керамические, пластмассовые и стальные среды для массовой отделки.Каждый состав сопровождается кратким описанием – физико-химическими характеристиками, областью применения, насыпной плотностью, цветом.

DURAMEDIA®

DURAMEDIA® 10

DURAMEDIA® 10 — чрезвычайно твердый, мелкозернистый, не содержащий абразивов керамический наполнитель. Это проверенный выбор для использования в химически ускоренных процессах благодаря его исключительной ударопрочности. Наиболее распространенные области применения включают полировку, полировку, легкое удаление заусенцев и вождение отслаивающихся абразивов.(85 фунтов/куб. фут, цвет: слоновая кость)

DURAMEDIA® 20/F

DURAMEDIA® 20/F — это керамический наполнитель на основе оксида алюминия, универсальный для универсального применения и финишной обработки слабоабразивных масс. Этот носитель может обеспечить низкую скорость износа при разумной скорости съема металла. (85 фунтов/куб. фут, цвет: белый)

DURAMEDIA® 30

DURAMEDIA® 30 — это мелкозернистый керамический материал на основе оксида алюминия, обеспечивающий гладкую поверхность и в то же время обеспечивающий быстрое удаление металла при среднем износе.Он используется для высокопроизводительной резки, удаления заусенцев и улучшения поверхности. (95 фунтов/куб. фут, цвет: светло-серый)

DURAMEDIA® 40

DURAMEDIA® 40 — это чрезвычайно быстрорежущий керамический материал на основе оксида алюминия, обеспечивающий чистовую отделку с максимальным удалением металла за минимальное время. Этот керамический материал используется для быстрой резки, закругления, удаления заусенцев и улучшения поверхности. (100 фунтов/куб. фут, цвет: коричневый)

DURAMEDIA® 50/SC

DURAMEDIA® 50 / SC представляет собой мелкозернистый материал на основе карбида кремния, который относительно хорошо изнашивается и мягко режет.Он особенно подходит для материалов, подлежащих сварке, пайке или пайке, где недопустимо воздействие коричневого плавленого оксида алюминия. (85 фунтов/куб. фут, цвет: бежевый с синим/черным зерном)

DURAMEDIA® 120

DURAMEDIA® 120 — чрезвычайно плотный, прочный и не содержащий абразивов керамический материал. Его тонкая кристаллическая структура обеспечивает превосходную прочность тела и сопротивление разрушению. 120 идеально подходит для процессов с химическим ускорением и высокоэнергетической финишной обработки массы.Лучше всего подходит для удаления легких заусенцев, полировки, забивания свободных абразивов и закругления. (120 фунтов/куб. фут, цвет: коричневый)

DURAMEDIA® 120-C

DURAMEDIA® 120-C представляет собой агрессивную формулу на основе оксида алюминия (абразивная версия 120), которая обеспечивает высокую плотность и низкий уровень износа в тех случаях, когда не используются химические ускорители. Он обычно используется для обработки прочных аэрокосмических сплавов, таких как титан, из-за его превосходной резки. (120-125 фунтов/куб. фут, цвет: темно-коричневый)

DURAMEDIA® 140

DURAMEDIA® 140 — это предварительно отформованная версия нашего продукта DURALUM® XM; он имеет точные характеристики отделки, которые, как известно, обеспечивает XM, но экструдируется до различных форм и размеров, чтобы свести к минимуму полегание.Он идеально подходит для получения яркого полированного покрытия, удаления небольших заусенцев, формирования радиуса и забивания отслаивающихся абразивов. (140 фунтов/куб. фут, цвет: темно-коричневый)

DURAMEDIA® 3DCM

DURAMEDIA® 3DCM — это высококачественная формула на основе оксида алюминия, разработанная для твердых сплавов, используемых в аддитивном производстве. Исключительно для использования на аэрокосмических сплавах, таких как титан. (125 фунтов/куб. фут, цвет: темно-коричневый)

DURAMEDIA® C

DURAMEDIA® C представляет собой более крупнозернистый керамический материал на основе оксида алюминия, который имеет превосходное соотношение износа металла и материала, что делает его подходящим для широкого спектра применений.Характеристики огранки и отделки стали C годами являются отраслевым стандартом. (90 фунтов/куб. фут, цвет: синий)

DURAMEDIA® ECH

DURAMEDIA® ECH — это керамический наполнитель на основе оксида алюминия, который используется в общих целях для получения гладкой поверхности благодаря размеру зерна абразива на основе оксида алюминия. Он предназначен для средних операций резания, обеспечивает высокоэффективное режущее действие для снятия заусенцев и удаления металла. (90 фунтов/куб. фут, цвет: коричневый)

DURAMEDIA® FB

DURAMEDIA® FB — чрезвычайно твердый и износостойкий керамический материал, не содержащий абразива.Рекомендуется для придания блеска, полировки и полировки и в основном используется для полировки всех черных и цветных металлов. (85 фунтов/куб. фут, цвет: белый)

DURAMEDIA® H

DURAMEDIA® H — это керамический материал на основе оксида алюминия, прочный, быстрорежущий, долговечный и эффективный материал с высокой плотностью. Это агрессивная среда, известная быстрым удалением металла и лучше всего применяемая там, где требуется короткое время цикла. (110 фунтов/куб. фут, цвет: коричневый/серый/светло-коричневый)

DURALITE® II

DURALITE®II представляет собой легкую среду на основе оксида алюминия с превосходным коэффициентом износа, предназначенную для использования на деликатных деталях.Он служит альтернативой пластику для легкого удаления заусенцев и подготовки поверхности на более мягких металлах. (65 фунтов/куб. фут, цвет: бежевый)

DURALITE® II-S

DURALITE®II-S — версия DURALITE®II из карбида кремния. В дополнение к легкому весу и отличному соотношению износа к износу, он может использоваться там, где воздействие расплавленного оксида алюминия нежелательно. Он также обеспечивает мягкое режущее действие, когда требуется более короткое время цикла. (65 фунтов/куб. фут, цвет: бежевый)

DURAMEDIA® PWS

DURAMEDIA® PWS — это запатентованный наполнитель, сплавленный с циркониевым абразивом, специально разработанный для максимальной режущей способности металлов, в частности для снятия заусенцев с металлов аэрокосмической отрасли.Для такого агрессивного медиа у него умеренная скорость истощения. (примерно 105 фунтов/куб. фут, цвет: не совсем белый/светло-коричневый)

DURAMEDIA® WK

DURAMEDIA® WK — это керамический материал на основе оксида алюминия, обеспечивающий эффективную и быструю резку. В этом клеевом составе используется высокая концентрация смесей оксида алюминия, что приводит к низкой скорости износа среды. Он может использоваться во всех типах оборудования для массовой отделки и имеет отличные характеристики износа, даже при использовании в высокоэнергетических машинах.(100 фунтов/куб. фут, цвет: коричневый)

DURALUM® XA

DURALUM® XA — идеальный самородок для акробатики — плотный, прочный и легко режущий. Это настоящий микрокристаллический абразив из плавленого оксида алюминия. Изготовленный с помощью уникального процесса «холодного литья», его прочная структура, сверхмелкий размер кристаллов и тщательно контролируемый химический состав (включая диоксид титана) делают его прочным и долговечным. При правильном приготовлении XA является превосходной полирующей средой. (145 фунтов/куб. фут, цвет: серый/угольный/черный)

DURAMEDIA® XC

DURAMEDIA® XC — это плотный, прочный и легко режущий материал на основе оксида алюминия.Изготовленный с помощью уникального процесса «холодного литья», его прочная структура, сверхмелкий размер кристаллов и тщательно контролируемый химический состав (включая диоксид титана) делают его прочным, долговечным, быстрорежущим, долговечным и ударопрочным в широком диапазоне. требовательные приложения. Это также превосходный полирующий материал при правильном приготовлении. (90 фунтов/куб. фут, цвет: оливково-зеленый)

DURAMEDIA® Пластик

Пластик DURAMEDIA® низкой плотности 10

DPLD 10 представляет собой пластиковый материал низкой плотности, связанный смолой, который обеспечивает чистовую обработку препластин толщиной в микродюйм с очень мягким режущим действием.Его применения включают полировку, полировку или нанесение покрытия для создания гладкой, чистой и отражающей поверхности. (68 фунтов/куб. фут, цвет: синий)

DURAMEDIA® Пластик низкой плотности 30

DPLD 30 — это быстрорежущий пластиковый носитель на основе смолы, обеспечивающий очень яркую поверхность толщиной в микродюйм. Это устраняет двухэтапные операции, когда требуется полировка или покрытие деталей. (75 фунтов/куб. фут, цвет: темно-бордовый)

Пластик DURAMEDIA® низкой плотности 40

DPLD 40 представляет собой пластиковую среду общего назначения на связке из смолы для всех черных и цветных металлов.Он быстро режется и обеспечивает гладкую матовую поверхность. Его приложения включают удаление заусенцев, заусенцев и штампов, а также легкое выравнивание линий разъема. (68 фунтов/куб. фут, цвет: темно-зеленый)

DURAMEDIA® Пластик низкой плотности 40 MC

DPLD 40 MC представляет собой пластиковый носитель на смоляной основе и более агрессивный вариант нашей стандартной формулы 40. Он производит аналогичную матовую поверхность и покрывает всю поверхность 40, но с немного более быстрым временем цикла. (70 фунтов/куб. фут, цвет: синий)

DURAMEDIA® Пластик высокой плотности 130

DPHD 130 — это быстрорежущий пластиковый носитель на смоляной основе, обеспечивающий низкую матовость.Используется для снятия заусенцев и удаления поверхностного металла с черных и цветных металлов, сокращает время цикла и обеспечивает чистовую отделку до листового металла. (88 фунтов/куб. фут, цвет: голубой)

DURAMEDIA® Пластик высокой плотности 130 EZ

DPHD 130EZ — это быстрорежущий пластиковый материал на связке из смолы, предназначенный для работы с самыми сложными сплавами. Его можно использовать для всего спектра черных и цветных металлов, когда время цикла является основным фактором. (90 фунтов/куб. фут, цвет: светло-зеленый)

Высококачественный пластик DURAMEDIA® 230FC

DPHP 230FC — это агрессивный, быстрорежущий пластиковый материал на связке из смолы, разработанный для повышения производительности при сокращении времени цикла.Идеально подходит для удаления машинных линий и формирования радиуса на твердых металлах. (77 фунтов/куб. фут, цвет: темно-коричневый)

Высококачественный пластик DURAMEDIA® 250FC

DPHP 250FC — это наиболее агрессивный режущий пластиковый носитель на смоляной основе. Он подходит для деталей, которые подлежат сварке или пайке. Его применение включает удаление заусенцев и удаление поверхностей на всех черных металлах. (78 фунтов/куб. фут, цвет: темно-синий)

Высококачественный пластик DURAMEDIA® 310MC

DPHP 310MC — это неагрессивный пластиковый материал на основе смолы, обеспечивающий минимальный разрез.Он производит матовую поверхность практически без удаления материала. Идеально подходит для использования с химическими ускорителями и в качестве драйвера сыпучих абразивов. (60 фунтов/куб. фут, цвет: черный)

Высококачественный пластик DURAMEDIA® 350MC

DPHP 350MC представляет собой пластиковый носитель на смоляной связке, обеспечивающий чрезвычайно низкое микродюймовое покрытие с мягким режущим действием. Он используется в основном для черных металлов, которые требуют очень тонкой обработки и будут подвергаться гальванопокрытию, сварке или пайке. (60 фунтов./куб.фут, цвет: серый)

DURAMEDIA® Сталь

Углеродистая сталь DURAMEDIA®

Этот продукт изготовлен из низкоуглеродистой стали AISI/SAE. Это наиболее распространенный химический состав углеродистой стали. Он производит блестящую и гладкую поверхность без заусенцев.

DURAMEDIA® Серия 300 из нержавеющей стали

Серия 300 представляет собой наиболее распространенный химический состав среды из нержавеющей стали и рекомендуется, когда требуется полная защита от ржавчины.Он производит блестящую и гладкую поверхность без заусенцев. Это выгодно, поскольку позволяет сократить время финишной обработки за счет использования более кислых соединений в агрессивных процессах. Его способность противостоять коррозии может устранить или уменьшить количество соединений.

Нацеливание на обратимую разборку как механизм контроля активности V-АТФазы

Curr Protein Pept Sci. Авторская рукопись; доступно в PMC 2013 1 марта.

Опубликовано в окончательной редакции как:

Curr Protein Pept Sci. 2012 март; 13(2): 117–123.

PMCID: PMC3536023

NIHMSID: NIHMS429198

Abstract

Вакуолярные протон-транслоцирующие АТФазы (V-АТФазы) являются высококонсервативными протонными насосами, состоящими из субкомплекса периферической мембраны, называемого V ₁ , который содержит сайты гидролиза АТФ, присоединенного к интегральному мембранному субкомплексу, называемому V _o . , который охватывает протонную пору.Регуляция V-АТФазы посредством обратимой диссоциации, характеризующаяся высвобождением собранных секторов V ₁ в цитозоль и ингибированием как АТФазной, так и протонтранспортной активности, была впервые идентифицирована у табачной анкилостомы и дрожжей. С тех пор стало ясно, что модуляция уровня сборки VATPase также является регуляторным механизмом в клетках млекопитающих. В этом обзоре обсуждаются последствия обратимой разборки для структуры V-ATPase, а также понимание лежащих в основе взаимодействий между субъединицами, полученное в недавних структурных работах.Хотя первоначальные эксперименты были сосредоточены на депривации глюкозы как триггере разборки, теперь ясно, что сборка V-ATPase может регулироваться другими внеклеточными условиями. В соответствии со сложной интегрированной реакцией на внеклеточные сигналы было предложено, чтобы ряд различных регуляторных белков, включая RAVE/рабконнектин, альдолазу и другие гликолитические ферменты, а также протеинкиназу А, контролировали сборку и разборку V-АТФазы. Вполне вероятно, что множественные пути передачи сигналов диктуют конечный уровень сборки и активности.Тканеспецифическое ингибирование V-АТФазы является потенциальной терапией остеопороза и рака; обсуждается возможность использования обратимой разборки при разработке новых ингибиторов V-АТФазы.

Обратимая разборка как регуляторный механизм

V-АТФазы представляют собой высококонсервативные протонные насосы, подкисляющие лизосомы, эндосомы, аппарат Гольджи и некоторые секреторные гранулы у всех эукариот [1, 2]. Они также могут привлекаться к плазматической мембране для экспорта протонов в некоторых клетках [2, 3].V-АТФазы состоят из периферического мембранного комплекса (V ₁ ), который содержит сайты связывания АТФ, присоединенного к ассоциированному с мембраной комплексу (V _o ), который содержит протонную пору. Перекачка протонов, управляемая АТФ, требует стабильной ассоциации этих двух субкомплексов. Модель дрожжевой V-АТФазы показана на рис. по соглашению субъединицы V ₁ обозначаются прописными буквами (A-H), а субъединицы V _o обозначаются строчными буквами (a, c, c’, c”, d и e).Общая структура V-АТФаз у всех эукариот очень похожа, и между генами субъединиц разных видов существует обширная гомология.

Модель структуры и обратимой разборки V-АТФазы: A. Модель состава и структуры субъединицы V-АТФазы; оценка стехиометрии на основе Ref. [27]. V ₁ субъединиц обозначены прописными буквами, а V _o субъединиц указаны строчными буквами.Субъединица С высвобождается из обоих секторов при разборке.

Несколько лет назад было показано, что субкомплекс V ₁ отсоединяется от комплекса V _o в ответ на депривацию глюкозы, как на внутренних мембранах дрожжевых клеток, так и на апикальной плазматической мембране табачного рогового червя ( Manduca sexta ) кишка () [4, 5]. Разборка V ₁ из V _o ингибирует активность обоих секторов и, что примечательно, оказалась полностью обратимой [4, 6, 7].Эти первоначальные исследования заложили основу для обратимой разборки как основного механизма регуляции V-ATPases. Поскольку этот процесс был подробно рассмотрен [2, 8, 9], я лишь суммирую основные черты, а затем сосредоточусь на более свежих данных, включая структурные последствия, потенциальные сигнальные пути и перспективы воздействия на обратимую разборку как средства контроля V- АТФазная активность терапевтически.

Ранние исследования разборки и повторной сборки V-АТФазы у дрожжей и M.sexta указал на ряд общих черт этого процесса. Субъединицы V ₁ высвобождались из мембраны в виде комплекса, за исключением субъединицы С V ₁ , которая в значительной степени отделялась как от субкомплексов V ₁ , так и от субкомплексов V _o после депривации глюкозы [4, 6, 10]. ]. Высвобожденные секторы V ₁ не гидролизуют MgATP, физиологический субстрат собранных V-АТФаз, что указывает на то, что высвобожденные сектора V ₁ могут быть ингибированы для защиты цитозольных запасов АТФ от гидролиза АТФ, не связанного с транспортом протонов [6, 7].Последующие данные позволили предположить, что за это ингибирование ответственна субъединица V ₁ H [7, 11, 12]. У дрожжей как разборка, так и повторная сборка завершаются в течение 5 минут после депривации и повторного добавления глюкозы, соответственно, и ни один из них не требует синтеза нового белка [4], что указывает на то, что ранее существовавшие комплексы V-ATPase разбираются и собираются заново. Кроме того, промежуточные уровни сборки V-АТФазы наблюдаются в дрожжевых клетках, выращенных в бедных источниках углерода, что указывает на то, что разборка не была явлением «все или ничего», а скорее средством настройки сборки и активности V-АТФазы на углерод. доступность источника.Общая картина, возникшая в результате исследований как дрожжей, так и M. sexta , заключалась в том, что взаимодействие V ₁ — V _o может быть основной мишенью регуляции V-АТФазы, и что активность V-АТФазы можно быстро регулировать в реакция на доступность питательных веществ.

Параллели между обратимой диссоциацией в системах M. sexta позволили предположить, что обратимая разборка является высококонсервативным регуляторным механизмом, но доказательства существования этого механизма в клетках млекопитающих появлялись медленнее.Регулируемая сборка V-ATPase в ответ на сигналы созревания впервые была обнаружена в дендритных клетках [13]. В этих условиях лизосомальное закисление было частично подавлено в незрелых дендритных клетках как механизм ингибирования процессинга антигена и обеспечения хранения в лизосомах; снижение лизосомального закисления сопровождалось снижением сборки секторов V ₁ и V _o . По мере того как клетки вызывали созревание и индуцировали лизосомальный протеолиз антигена, собирались V-АТФазы, и лизосомы подкислялись.Совсем недавно было показано, что стимуляция секреции клеток альвеолярного эпителия типа II запускает разборку V ₁ из V _или как средство ингибирования активности V-АТФазы [14]. Интересно, что оба этих случая демонстрируют контроль активности V-АТФазы на уровне сборки ферментов, работающих в противоположных направлениях, но не имеют очевидной связи с глюкозой. Пути, передающие сигналы сборки, в обоих случаях не совсем понятны. Одни из первых доказательств глюкозозависимого контроля сборки V-АТФазы в клетках млекопитающих были получены в культивируемых клетках почек [15, 16].Обратимые глюкозозависимые изменения в сборке и активности V-АТФазы были продемонстрированы в клетках LLC-PK1, модели клеток проксимальных канальцев свиньи. В этих клетках лишение глюкозы приводило как к потере подкисления органелл, так и к высвобождению субъединиц V ₁ в цитозоль; повторное добавление глюкозы восстанавливало как подкисление органелл, локализацию V ₁ на внутренних мембранах, так и активность V-АТФазы. В модели клеток проксимальных канальцев человека, клетках HK-2, глюкоза стимулировала рекрутирование V ₁ на апикальную плазматическую мембрану, но также изменяла перенос интактного комплекса, предполагая, что V ₁ может достигать плазматической мембраны за счет везикулярного транспорта. а не рекрутированием из цитозольного пула [16].Интересно, что как индуцированный глюкозой перенос, так и сборка в этих почечных клетках зависели от активности фосфатидилинозитол-3-киназы (PI3 kinase) [15, 16]. Кроме того, было обнаружено, что гликолитические ферменты, особенно альдолаза, связаны с V-АТФазой в клетках почек, что указывает на связь между гликолизом и сборкой/активностью ВАТФазы (описано ниже) [17-19].

В совокупности эти эксперименты ясно показывают, что степень сборки V ₁ — V _o может быть важной регулирующей мишенью в клетках млекопитающих, хотя на многие вопросы еще предстоит ответить.Кроме того, эти данные предполагают, что глюкоза может быть только одним из нескольких сигналов, способных регулировать сборку V ₁ — V _o . Этот вывод также подтверждается недавними данными в системе дрожжей, предполагающими, что другие условия, такие как измененный внеклеточный рН, также могут определять уровень сборки V-АТФазы [20, 21], и предыдущими данными о растениях, что другие сигналы, такие как солевой стресс, могут модулировать Сборка V-АТФазы [22]. Таким образом, в то время как индуцируемые глюкозой изменения в сборке VATPase все еще являются основной парадигмой обратимой разборки, теперь ясно, что множественные пути и сигналы могут влиять на сборку и активность V-ATPases.

Структурные последствия обратимой разборки

V-АТФазы представляют собой сложные многосубъединичные ферменты, и существование обратимой разборки как регуляторного механизма имеет важное значение для структуры фермента. Каталитическая и регуляторная АТФ-связывающая (V ₁ субъединицы A и B) и протеолипидные субъединицы (V _o субъединицы c, c’ и c») V-АТФазы имеют значительную гомологию с субъединицами F-типа. АТФ-синтазы митохондрий, хлоропластов и бактерий, а также к архейным АТФазам (называемым как А-АТФазами, так и архейными V-АТФазами) [23, 24].Эти субъединицы являются центральными компонентами вращательного каталитического механизма обоих ферментов, предполагая общую эволюционную историю, которая разошлась, чтобы сделать эукариотические V-АТФазы специализированными протонными насосами, а F-АТФазы преимущественно АТФ-синтазами. В обоих классах ферментов функции связывания АТФ и гидролиза находятся в субъединицах периферической мембраны, которые присоединены к субъединицам протонной поры с помощью множества субъединиц «стебля». Эти стеблевые субъединицы обычно высоко консервативны среди эукариотических V-АТФаз, но обнаруживают гораздо меньшую гомологию с F-АТФазами.Кроме того, в то время как общая структура F-АТФаз включает один центральный (роторный) стебель и один периферический (статорный) стебель, V-АТФазы имеют один центральный стебель и несколько периферических стеблей [25-30]. Эукариотические V-АТФазы, в частности, по-видимому, имеют три периферических стебля (состоящих из субъединиц E и G V ₁ ), которые частично взаимодействуют с сектором V _o через две «мостиковые» субъединицы (субъединицы V ₁ ). С и З) [27-32]. У F-АТФаз одного периферического стебля достаточно, чтобы обеспечить стабильную сборку АТФ-синтазы и противостоять крутящему моменту, возникающему при вращательном катализе [33-35].Напротив, основные «статорные» функции любого роторного двигателя, стабильная сборка и устойчивость к крутящему моменту, по-видимому, разделены между тремя более слабыми периферическими соединительными стеблями в V-АТФазах [27-30, 36]. Такое распределение функций статора может обеспечить быстрое освобождение V ₁ в условиях разборки.

Понимание структурной основы обратимой разборки находится в центре внимания текущих исследований в ряде лабораторий, но недавние псевдоатомные модели, в основном возникшие в результате электронной микроскопии полной V-АТФазы и субкомплексов, сосредоточили внимание на ограниченном наборе белок-белковые взаимодействия, которые должны быть изменены при обратимой диссоциации [28-31].Субъединица С, которая высвобождается как из секторов V ₁ , так и из секторов V _o путем обратимой разборки, представляет особый интерес в этом отношении. Как предыдущие исследования сшивания, так и недавние биохимические данные с очищенными субъединицами показывают, что эта субъединица взаимодействует с двумя из трех периферических стеблей ЭГ, а также с субъединицей а V _или [30, 37, 38]. Один из двух стеблей ЭГ имеет гораздо большее сродство к субъединице С, чем другой, и экспрессируемые субъединицы образуют комплекс 1:1:1 [30, 38].Субъединица С имеет вытянутую структуру, образующую часть «воротника» на границе V ₁ — V _o , а на одном конце субъединицы С расположен четвертичный комплекс, состоящий из ножки ЭГ, субъединицы С и V _{. o может образовываться} субъединиц а [30, 31]. Из этой информации следует, что для того, чтобы произошла разборка V ₁ , должны быть нарушены взаимодействия субъединиц E, G и C V ₁ с субъединицей а V _или и что субъединица С также должна быть высвобождена из его тесное взаимодействие от V ₁ субъединиц E и G.До сих пор неясно, как это происходит, но у насекомых сообщалось о временном фосфорилировании субъединицы С во время повторной сборки разобранного фермента [10] (обсуждается ниже). Если это фосфорилирование окажется общим, возможно, что состояние фосфорилирования субъединицы С определяет ее взаимодействие с субъединицами V ₁ и/или V _или и, таким образом, может служить первичным детерминантом состояния сборки V-АТФазы.

Помимо критических взаимодействий с субъединицей С, есть данные, что субъединица Н, также расположенная на границе V ₁ — V _o , изменяет свои взаимодействия с субъединицами V ₁ и V _o во время обратимых разборка [11, 12].Субъединица H расположена рядом с субъединицей V _или a в современных моделях собранной V-АТФазы, и эти две субъединицы взаимодействуют in vitro [11, 29]. Субъединица H, по-видимому, теряет взаимодействие с V _o , когда происходит разборка сектора V ₁ [11]. Способность H-субъединицы подавлять активность АТФазы в свободных секторах V ₁ , вероятно, возникает в результате взаимодействия с центральной ножкой V ₁ , которое происходит в свободном V ₁ , но не в V ₁ V _o . [11, 12].

Интересно также, что ингибирование активности V-АТФазы может ингибировать разборку фермента, указывая на то, что катализ может сделать фермент более восприимчивым к разборке [39, 40]. Разборка дрожжевой V-АТФазы ингибируется конканамицином А, который связывается с сектором V _o фермента, или мутациями в секторе V _o , не позволяющими транспортировать протоны [39]. Кроме того, другой класс специфичных для млекопитающих ингибиторов V-АТФазы, салицилгалимиды, вызывает повышенную сборку V ₁ на мембране в клетках млекопитающих [41].В каждом из этих случаев изменение конформации в секторе V _o в результате связывания ингибитора или мутации, по-видимому, усиливает связывание V ₁ с V _o . Результаты с салицилгалимидами также позволяют предположить, что в некоторых клетках млекопитающих может происходить непрерывная разборка и повторная сборка V-АТФаз, так что полная способность к сборке V ₁ с V _или распознается только тогда, когда активность V-АТФазы ингибируется. .

Регуляторные белки и сигналы для обратимой разборки

Для обратимой разборки требуется, чтобы внеклеточные условия передавались V-АТФазам, которые часто находятся во внутренних органеллах.Это предполагает участие одного или нескольких сигнальных путей и возможность факторов сборки, помогающих повторной сборке. Хотя существует множество факторов сборки, участвующих в биосинтезе V-АТФазы, комплекс RAVE (регулятор H ⁺ -АТФазы вакуолярных и эндосомальных мембран) был первым комплексом сборки, участвующим в повторной сборке диссоциированных V ₁ и V _{. о} [42]. У дрожжей комплекс RAVE состоит из вездесущего адапторного белка Skp1p вместе с двумя другими субъединицами Rav1p и Rav2p [42]. SKP1 является незаменимым геном, и белок Skp1 играет важную роль в других комплексах [42], но мутанты rav1Δ и rav2Δ имеют более мягкую версию фенотипа Vma ^— , характерную для потери функции V-АТФазы у дрожжей [42, 43]. Гомологи RAV2 обнаружены только у грибов, а гомологи RAV1 обнаружены практически у всех эукариот. Rav1p является центральным компонентом комплекса RAVE, взаимодействуя не только с Skp1p и Rav2p, но и с комплексами V ₁ через субъединицы E и/или G и независимо с субъединицей C [43, 44].Комплексы RAVE-V ₁ могут быть выделены из цитозольных фракций, и предполагается, что Skp1 опосредует временные взаимодействия с мембранами, чтобы способствовать сборке с V _или [45]. Взаимодействие между RAVE и V ₁ не является внутренне чувствительным к глюкозе, что позволяет предположить, что этот комплекс не может быть сенсором глюкозы [43]. Комплекс RAVE был впервые охарактеризован у дрожжей, но совсем недавно было показано, что гомологи Rav1 у дрозофилы и мышей (называемые рабконнектинами) важны для подкисления органелл, предполагая, что этот комплекс играет законсервированную роль в регуляции активности и сборки V-АТФазы [46]. , 47].

Ряд гликолитических ферментов связывается с V-АТФазой, и была предложена модель, в которой эти ферменты обеспечивают локальный источник АТФ для фермента [17-19, 48, 49]. Такой гликолитически активный комплекс также может быть привлекательной мишенью для регуляции V-АТФазы в ответ на уровень глюкозы, и действительно, взаимодействия V-АТФазы с альдолазой, по-видимому, одновременно чувствительны к глюкозе и важны для поддержания V ₁ — V _или в сборе [17, 18, 48]. Взаимодействие V-АТФазы/альдолазы было впервые описано в клетках почек, а затем распространено на дрожжи.Дрожжевая V-АТФаза разобрана у мутантов с делецией альдолазы, но мутации потери функции в гликолитических ферментах останавливают метаболизм глюкозы в дрожжах и, таким образом, вероятно, имитируют лишение глюкозы [17, 18]. Однако точечная мутация в альдолазе, сохраняющая ее ферментативную функцию in vitro, но нарушающая взаимодействие с V-АТФазой, также снижает сборку V ₁ с V _или , указывая на сигнальную роль альдолазы помимо ее ферментативной роли в гликолизе. 48]. Показано, что другой гликолитический фермент, фосфофруктокиназа (ФФК), взаимодействует с субъединицей V _или а как в клетках почек человека, так и в клетках дрожжей [19, 49].Интересно, что мутации в изоформе а4-субъединицы почки человека, которые вызывают ацидоз дистальных почечных канальцев, предполагая потерю функции V-АТФазы в почках, также нарушают взаимодействие PFK и влияют на экспрессию, сборку или функцию V-АТФазы при введении в дрожжевые клетки [49]. ]. Эти результаты свидетельствуют в пользу консервативной регуляторной связи между гликолитическими ферментами и V-АТФазой.

Имеются также существенные доказательства того, что протеинкиназа А (ПКА) и пути ее активации участвуют в регуляции сборки V-АТФазы.Убедительные доказательства участия PKA в передаче сигналов повторной сборки V-АТФазы были получены у мясной мухи ( Calliphora vicina ) [50-52], а фосфорилирование субъединицы C V ₁ в условиях, способствующих сборке фермента, было сообщено как у C vicina и M. sexta [10]. Фосфорилирование субъединицы C не требуется для ассоциации субъединицы C с V ₁ и не обнаруживается после повторной сборки комплексов V ₁ V _o , но субъединица C фосфорилируется, когда PKA активируется аналогами цАМФ или гормональной стимуляцией. 10].У дрожжей генетический скрининг мутантов, которым не удалось разобрать V-АТФазу в условиях пониженного уровня глюкозы, выявил мутации в IRA1 и IRA2 , двух негативных регуляторах дрожжевого Ras, предполагая, что путь Ras/цАМФ может регулировать V- Сборка АТФазы [53]. В последующих экспериментах было показано, что ряд условий, повышающих уровень активности ПКА, начиная от конститутивной активации Ras и заканчивая делецией негативной регуляторной субъединицы самой ПКА, также предотвращает разборку дрожжевой V-АТФазы при депривации глюкозы. 53].Как и в системе насекомых, эти результаты предполагают, что активация PKA, установленного чувствительного к глюкозе фермента [54], способствует сборке V-ATPase, хотя не было показано PKA-зависимого фосфорилирования дрожжевой субъединицы V ₁ C. Однако остаются вопросы о точной роли PKA в регуляции сборки V-ATPase. Совсем недавно было высказано предположение, что PKA действует ниже сборки V-ATPase как в дрожжевых, так и в бета-клетках поджелудочной железы, в то время как изменения pH цитозоля, связанные с активным метаболизмом глюкозы, были задействованы в качестве сигнала, способствующего сборке V-ATPase [21].Эти результаты согласуются с данными, показывающими, что разборка V-АТФазы подавляется при высоком внеклеточном рН [20], но их нелегко согласовать с результатами, предполагающими, что активность PKA стимулирует сборку и активность V-АТФазы [10, 53]. Кроме того, как в светлых клетках придатка яичка, так и в интеркалированных клетках собирательных трубочек почек, PKA повышает активность V-АТФазы на плазматической мембране за счет рекрутирования интактного фермента в везикулах из внутриклеточного компартмента, а не за счет повторной сборки V ₁ с В _или ; эта мобилизация V-АТФазы на плазматическую мембрану включает PKA-зависимое фосфорилирование субъединицы V ₁ A [55-57].Т.о., несмотря на то, что имеются убедительные доказательства того, что PKA является важным регулятором V-ATPase, полный спектр и механизмы его регуляторной роли все еще являются областями активных исследований.

Наконец, следует отметить, что существует ряд других сигнальных путей, которые вовлечены в регуляцию сборки V-АТФазы. Как описано выше, активность PI-3-киназы была необходима для повторной сборки секторов V ₁ с секторами V _o при повторном добавлении глюкозы в моделях культур тканей почек [15, 16].PI 3-киназа фосфорилирует фосфатидилинозитоловые липидные головные группы и, таким образом, будет воздействовать на липидную среду, а не непосредственно на V-АТФазу. В дрожжевых клетках мутация либо PI-3-киназы Vps34p, либо фосфатидилинозитол-3-фосфат-5-киназы Fab1p снижает вакуолярное закисление [58-60], но, по крайней мере, у мутанта vps34Δ это в первую очередь отражает перенос, а не V Сборка АТФазы, дефект [59]. Кроме того, захват V-АТФаз с одинаковым изоформным составом в разных органеллах изменяет их реакцию на депривацию глюкозы [61], указывая на то, что некоторые аспекты обратимого процесса разборки чувствительны к мембранному окружению.

Обратимая разборка как цель для разработки лекарств

Хотя существует ряд ситуаций, когда ингибирование активности V-АТФазы может иметь терапевтический вирусной инфекции [67, 68], существуют серьезные препятствия для разработки терапевтических ингибиторов V-АТФазы [69]. Наиболее серьезным барьером может быть проблема селективности, поскольку ингибирование V-АТФаз вне ткани-мишени может вызывать серьезные побочные эффекты [70-72].Делеция конститутивных субъединиц V-ATPase летальна для млекопитающих, что указывает на то, что V-ATPase необходимы для жизнеспособности в некоторых местах [73]. Следовательно, полезные терапевтические средства, нацеленные на V-АТФазу, будут нуждаться в селективности (способности отличать целевые V-АТФазы от таковых в других тканях), и эта проблема решается несколькими способами, включая нацеливание на определенные изоформы/взаимодействия субъединиц и использование ферментативных различий V-АТФаз в разных средах [71, 72, 74].Различия в чувствительности V-АТФаз в различных тканях и органеллах к обратимой разборке могут обеспечить дополнительный уровень специфичности для разработки лекарств. Кроме того, способность обратимой разборки «подавлять» активность V-АТФазы, а не полностью устранять ее, также может быть полезной характеристикой для использования при разработке ингибиторов. Наконец, регуляторы, участвующие в обратимой разборке, также обеспечивают дополнительные мишени для терапии, направленной на модулирование активности V-ATPase.

Стратегии разработки лекарств, прямо или косвенно воздействующие на V-АТФазу посредством обратимой разборки, выиграют от лучшего понимания структуры и взаимодействия субъединиц ВАТФазы. Как описано выше, критические взаимодействия субъединиц, которые поддерживают сборку и активность V-ATPase, возникают в результате структурных исследований, но для разработки лекарств требуется дополнительная структурная информация с высоким разрешением. Недавно Картнер и соавт. провели скрининг химических ингибиторов специфичного для остеокластов взаимодействия субъединиц V ₁ — V _o и обнаружили новый ингибитор резорбции кости, предполагая, что они идентифицировали ингибитор, который нацелен на V-АТФазы в плазматической мембране остеокластов [72].Предварительные данные о дрожжах свидетельствуют о том, что различные изоформы субъединиц могут различаться по своей чувствительности к обратимой разборке; в частности, комплексы, содержащие специфичную для вакуолей изоформу a субъединицы, Vph2p, более чувствительны к депривации глюкозы, чем комплексы, содержащие изоформу Golgi/эндосомы, Stv1p [75]. Если четыре изоформы человеческой субъединицы а также различаются по своей чувствительности к обратимой разборке, то нацеливание на этот процесс может обеспечить тканеспецифическое ингибирование V-АТФазы.Поскольку взаимодействия между субъединицами, критические для повторной сборки V-ATPase, становятся ясными, потенциал для специфической для изоформ регуляции, вероятно, станет более ясным. Подходы, аналогичные использованным Картнером и соавт. [72] затем можно использовать для разработки или скрининга ингибиторов, которые предотвращают повторную сборку и улавливают V-АТФазу в ее разобранном и естественно ингибированном состоянии. Как описано выше, современные ингибиторы V-АТФазы имеют тенденцию улавливать фермент в собранном состоянии [39, 41], но, учитывая разные уровни сборки VATPases в разных тканях и типах клеток [13, 14], это может быть преимуществом. иметь классы ингибиторов, способных нацеливаться либо на собранные, либо на разобранные V-АТФазы.

По мере поступления дополнительной информации о сигнальных путях, лежащих в основе обратимой разборки, регуляторы, участвующие в этом процессе, также станут кандидатами на разработку или скрининг лекарств. В настоящее время комплекс RAVE представляется наиболее привлекательной мишенью для разработки лекарств, поскольку он играет довольно специфическую роль в сборке V-АТФазы, в то время как другие потенциальные регуляторы, такие как PKA и гликолитические ферменты, несомненно, выполняют несколько функций. В дрожжевых клетках потеря функции RAVE дает менее тяжелый фенотип, чем полная потеря функции V-АТФазы [42, 43].Это может свидетельствовать о том, что некоторым популяциям V-ATPases не требуется RAVE для сборки и функционирования. Пока еще не установлено, проявляет ли комплекс RAVE какую-либо специфичность к изоформе или органелле субъединицы, но отсутствие обратимой разборки в V-АТФазах Гольджи может свидетельствовать о сниженной потребности в функции RAVE для этих насосов [61]. Это, в свою очередь, предполагает, что синтетические ингибиторы RAVE могут воздействовать на субпопуляцию V-АТФаз, возможно, с менее серьезными побочными эффектами, чем обычные ингибиторы V-АТФазы.У Drosophila мутации с потерей функции гомолога RAV1 Rabconnectin 3 (Rbcn-3) приводят к сходным фенотипам развития, как и мутации с потерей функции в субъединицах V-ATPase, включая ингибирование передачи сигналов Notch [47]. Подобные эффекты молчания Rbcn-3 наблюдались в клетках млекопитающих [46]. На первый взгляд, эти результаты предполагают, что преимущества ингибирования RAVE у дрожжей не будут распространяться на клетки млекопитающих, хотя полные последствия потери RAVE во многих тканях не оценивались.Тем не менее, эти исследования rabconnectin еще больше стимулировали интерес к V-ATPase или ингибиторам RAVE в качестве терапевтических средств против рака, поскольку для ряда злокачественных новообразований требуется передача сигналов Notch. Эндосомальное закисление с помощью V-АТФаз, по-видимому, является новым и существенным требованием пути Notch [46, 76].

Таким образом, V-АТФазы представляют собой универсальные, вездесущие и строго регулируемые насосы, влияющие на многие аспекты физиологии млекопитающих. Их полное физиологическое влияние все еще обнаруживается, как предполагают недавние неожиданные доказательства их участия в пути Notch и, независимо, в передаче сигналов Wnt, др. важном пути развития и рака [76, 77].Как консервативный и вездесущий механизм регуляции V-ATPase, обратимая разборка обеспечивает привлекательную мишень для фармакологического вмешательства в функцию V-ATPase. Чтобы реализовать этот потенциал, будущие эксперименты должны быть нацелены на молекулярную основу обратимой разборки, как с точки зрения структуры V-АТФазы, так и с точки зрения передачи сигналов.

Ссылки

ПРЕДВАРИТЕЛЬНЫЙ УБЫТОК В ОТНОШЕНИИ ХИМИЧЕСКОГО СОСТАВА Примеры статей

Относящиеся к

Удержание за невыплаченную заработную плату и неустойку FH или по письменному запросу уполномоченного представителя Министерства труда удержать или обеспечить удержание любых денежных средств, подлежащих выплате за работу, выполненную подрядчиком или субподрядчиком по любому такому контракту или любому другому федеральному контракту с тем же генеральным подрядчиком, или любой другой контракт с федеральной поддержкой в ​​соответствии с Законом о контрактном рабочем времени и стандартах безопасности, который принадлежит тому же генеральному подрядчику, такие суммы, которые могут быть определены как необходимые для выполнения любых обязательств такого подрядчика или субподрядчика в отношении невыплаченной заработной платы и заранее оцененных убытков в соответствии с пунктом, указанным в пункте (2.) этого раздела.

Выплата заранее оцененных убытков Если вы поставляете свое молоко полностью или частично третьему лицу в течение Месяца, вы должны, если этого требует DFMC, немедленно выплатить DFMC заранее оцененные убытки за этот Месяц, рассчитанные следующим образом: $X = W центов x (Y – Z) Где: $X – сумма, подлежащая уплате вами в пользу DFMC за соответствующий месяц. Если $X является отрицательной суммой, вы не платите никакой суммы. Y — среднемесячное количество литров, которое вы поставляли в DFMC, за 12 месяцев, непосредственно предшествующих соответствующему месяцу (или, если вы не поставляли в DFMC в течение 12 месяцев, среднемесячное количество литров, которое вы поставляли в DFMC в течение периода, когда вы поставляли ДФМС).Z — количество литров, поставленных вами в DFMC за соответствующий Месяц.

Нарушение; ответственность за невыплату заработной платы; заранее оцененные убытки В случае любого нарушения пункта, изложенного в пункте (1.) настоящего раздела, подрядчик и любой ответственный за это субподрядчик несут ответственность за невыплаченную заработную плату. Кроме того, такой подрядчик и субподрядчик несут ответственность перед Соединенными Штатами (в случае выполнения работ по контракту для округа Колумбия или территории, перед таким округом или такой территорией) за заранее оцененные убытки.Такая заранее оцененная неустойка рассчитывается в отношении каждого отдельного рабочего или механика, включая сторожей и охранников, нанятых в нарушение пункта, изложенного в пункте (1.) настоящего раздела, в размере 10 долларов за каждый календарный день, когда такой лицо было обязано или разрешено работать сверх стандартной рабочей недели в сорок часов без выплаты сверхурочной заработной платы, требуемой в соответствии с пунктом, изложенным в пункте (1.) настоящей статьи.

Уведомления о простоях и техническом обслуживании В случае, если Оператор регистратуры планирует техническое обслуживание, он направляет уведомление в отдел ICANN по чрезвычайным ситуациям не менее чем за двадцать четыре (24) часа до начала технического обслуживания.Отдел аварийных операций ICANN отметит запланированное время проведения технического обслуживания и приостановит оказание услуг по экстренной эскалации для отслеживаемых служб на период ожидаемого перерыва в обслуживании. Если Оператор регистратуры объявляет об отключении в соответствии со своими договорными обязательствами с ICANN в отношении услуг в соответствии с соглашением об уровне обслуживания и требованиями к производительности, он уведомляет об этом отдел ICANN по чрезвычайным ситуациям. Во время этого объявленного сбоя отдел ICANN по чрезвычайным ситуациям отметит и приостановит предоставление услуг экстренной эскалации для задействованных контролируемых служб.

Уплата налога с продаж, использования или аналогичных налогов Все продажи, использование, передача, нематериальные активы, регистрация, документальная печать или аналогичные налоги или сборы любого характера, применимые к сделкам, предусмотренным настоящим Соглашением, или являющиеся их результатом. несут Продавцы.

Абсолютное обязательство; Частичная заранее оцененная сумма убытков Обязательства Компании по выпуску и доставке Обыкновенных акций, приобретенных при исполнении настоящего Разрешения при исполнении настоящего Разрешения в соответствии с условиями настоящего Соглашения, являются абсолютными и безусловными, независимо от каких-либо действий или бездействия держателя для обеспечения соблюдения то же самое, любой отказ или согласие в отношении любого положения настоящего документа, восстановление любого судебного решения в отношении любого лица или любые действия по принудительному исполнению того же самого, или любой зачет, встречный иск, возмещение, ограничение или прекращение, или любое нарушение или предполагаемое нарушение со стороны держателя или любого другого лица любого обязательства перед Компанией или любого нарушения или предполагаемого нарушения закона со стороны держателя или любого другого лица, и независимо от любых других обстоятельств, которые могли бы иным образом ограничить такое обязательство Компании перед Держателем в связи с выпуском такие Обыкновенные акции, приобретенные при исполнении настоящего Разрешения; при условии, однако, что такая поставка не действует как отказ Компании от любых таких действий, которые Компания может предпринять против держателя.В случае, если держатель настоящего Варранта решит исполнить любую или всю его часть, Компания не может отказать в исполнении на основании любого заявления о том, что держатель или любое лицо, связанное или связанное с держателем, участвовало в каком-либо нарушении закона, соглашения или по любой другой причине, кроме случаев, когда был запрошен и получен судебный запрет с уведомлением держателя, ограничивающий и/или предписывающий исполнение всего или части настоящего Гарантии, и Компания размещает поручительство в пользу держателя в сумма в размере 150% от стоимости Обыкновенных акций, которые будут приобретены при исполнении настоящего Разрешения, на которое распространяется судебный запрет, который остается в силе до завершения арбитражного разбирательства/судебного разбирательства по основному спору и выручке из которых подлежит выплате держателю в той мере, в какой он получает судебное решение.При отсутствии такого судебного запрета Компания должна выпустить Обыкновенные акции, приобретенные при исполнении настоящего Разрешения, после должным образом уведомленного исполнения. Если Компания по какой-либо причине не в состоянии доставить владельцу такой сертификат или сертификаты в соответствии с Разделом 3.1 к Дате доставки акций, Компания должна выплатить держателю наличными в качестве заранее оцененных убытков, а не в качестве штрафа, за каждую 1000 долларов США Справедливая рыночная стоимость Обыкновенных акций, которые будут приобретены при исполнении настоящего Разрешения, 10 долларов США за Торговый день (увеличение до 20 долларов США за Торговый день на пятый (5-й) Торговый день после начала начисления заранее оцененных убытков) за каждый Торговый день после такой Даты доставки Акций до тех пор, пока такие сертификаты не будут доставлены или держатель не отменит такое исполнение.Ничто в настоящем документе не ограничивает право владельца требовать возмещения фактических убытков за неспособность Компании доставить Обыкновенные акции, приобретенные при исполнении настоящего Гарантии, в течение периода, указанного в настоящем документе, и держатель имеет право использовать все средства правовой защиты, доступные ему в соответствии с настоящим Соглашением, в законом или по праву справедливости, включая, помимо прочего, постановление о конкретном исполнении и / или судебный запрет. Осуществление любых таких прав не запрещает владельцу добиваться возмещения убытков в соответствии с любым другим разделом настоящего Соглашения или применимым законодательством.

Обработка недопустимых расходов, ранее предъявленных к оплате Компания Progenity далее соглашается с тем, что в течение 90 дней с Даты вступления в силу настоящего Соглашения она уведомит соответствующих финансовых посредников TRICARE, перевозчиков и/или подрядчиков, а также финансовых агентов FEHBP о любых недопустимых расходах. (как определено в этом параграфе), включенные в платежи, ранее запрошенные в Соединенных Штатах или любой программе штата Медикейд, включая, помимо прочего, платежи, запрашиваемые в любых отчетах о расходах, отчетах о расходах, информационных отчетах или платежных запросах, уже представленных компанией Progenity. или любой из его дочерних компаний или аффилированных лиц, и должен запросить и согласиться с тем, чтобы такие отчеты о расходах, отчеты о расходах, информационные отчеты или платежные требования, даже если они уже были оплачены, были скорректированы с учетом последствий включения Недопустимых расходов.Progenity соглашается с тем, что Соединенные Штаты, как минимум, имеют право возместить компании Progenity любую переплату, а также применимые проценты и штрафы в результате включения таких Недопустимых расходов в ранее представленные отчеты о расходах, информационные отчеты, отчеты о расходах или запросы. для оплаты. Любые платежи, причитающиеся после внесения корректировок, должны быть выплачены Соединенным Штатам в соответствии с указаниями Министерства юстиции и/или соответствующих агентств. Соединенные Штаты оставляют за собой право не согласиться с любыми расчетами, представленными Progenity или любой из ее дочерних или аффилированных компаний в отношении влияния включения Недопустимых затрат (как определено в этом параграфе) на отчеты о затратах Progenity или любой из ее дочерних или аффилированных компаний, стоимость отчеты или информационные отчеты.

Заранее оцененные убытки Обязательства Компании по выплате любых частично заранее оцененных убытков или других сумм, причитающихся в соответствии с Документами по сделке, являются постоянным обязательством Компании и не прекращаются до тех пор, пока не будут выплачены все невыплаченные частичные заранее оцененные убытки и другие суммы, несмотря на тот факт, что документ или гарантия, в соответствии с которыми такие частичные заранее оцененные убытки или другие суммы должны быть уплачены, должны быть аннулированы.

Пособия пенсионерам – процесс оплаты Любая медсестра, которая выходит на пенсию и желает участвовать в планах пособий, как указано в статье 17.01(h) обеспечит авансовую выплату пособий либо посредством чеков с датой, выдаваемой на ежегодной основе, либо посредством предварительно утвержденного процесса снятия. Понятно, что любая транзакция будет датироваться первым числом каждого месяца. Работодатель будет уведомлять Союз о затратах на пособия вышедших на пенсию медсестер в январе каждого года, и каждый раз, когда расходы на пособия пересматриваются Работодателем.

Перебои в работе и техническое обслуживание В случае, если Оператор регистратуры планирует техническое обслуживание, он уведомит об этом отдел ICANN по чрезвычайным ситуациям не менее чем за 24 (двадцать четыре) часа до начала технического обслуживания.Отдел аварийных операций ICANN отметит запланированное время проведения технического обслуживания и приостановит оказание услуг по экстренной эскалации для отслеживаемых служб на период ожидаемого перерыва в обслуживании. Если Оператор регистратуры объявляет об отключении в соответствии со своими договорными обязательствами с ICANN в отношении услуг в соответствии с соглашением об уровне обслуживания и требованиями к производительности, он уведомляет об этом отдел ICANN по чрезвычайным ситуациям. Во время этого объявленного сбоя отдел ICANN по чрезвычайным ситуациям отметит и приостановит предоставление услуг экстренной эскалации для задействованных контролируемых служб.

ИНКОНЕЛЬ 718 УНС Н07718

Ni 52,5, Cr 19,0 Fe 18,5 Mo 3,0 Nb+Ta 3,6

Склады высокоэффективных сплавов и производит Inconel 718 этого класса в следующих формах: Пруток, полосовой прокат, обрезки проволоки, свободная бухта, проволочная катушка, лист, пластина, труба, фитинг, диск, обработанная. Запросить цену на этот сорт.

Скачать PDF или просмотреть как HTML

Обзор

Inconel 718 представляет собой упрочненный сплав Gamma Prime с превосходными механическими свойствами при повышенных температурах, а также при криогенных температурах.Подходит для температур примерно до 1300 F. Может легко обрабатываться и подвергаться старению.

Отличная прочность от -423 градусов F до 1300 градусов F (от -253 градусов C до 705 градусов C). Упрочняется старением и может быть сварен в полностью состаренном состоянии. Превосходная стойкость к окислению до 1800 градусов по Фаренгейту (980 градусов по Цельсию). Обычно продается в отожженном состоянии на твердый раствор, но его можно заказать в состаренном состоянии, в холодном состоянии или в холодном состоянии и в состаренном состоянии.

Приложения

Использование Inconel 718, как правило, связано с компонентами газовых турбин и криогенными резервуарами для хранения.Реактивные двигатели, корпуса и детали насосов, ракетные двигатели и реверсоры тяги, проставки ядерных тепловыделяющих элементов, оснастка для горячего прессования. Другими популярными областями применения являются высокопрочные болтовые соединения и шахтные валы.

Химия

Данные о растяжении

Технические характеристики

Обработка

Рейтинг обрабатываемости

Сплавы на основе никеля и кобальта, устойчивые к коррозии, температуре и износу, такие как Inconel 718, классифицируются как сплавы со средней или высокой степенью сложности при механической обработке, однако следует подчеркнуть, что эти сплавы можно обрабатывать с использованием обычных методов производства с удовлетворительной скоростью.Во время механической обработки эти сплавы быстро затвердевают, выделяют сильное тепло во время резки, привариваются к поверхности режущего инструмента и обладают высокой устойчивостью к удалению металла из-за их высокой прочности на сдвиг. Ниже приведены ключевые моменты, которые следует учитывать при операциях механической обработки:

МОЩНОСТЬ — Машина должна быть максимально жесткой и мощной.
ЖЕСТКОСТЬ — Заготовка и инструмент должны удерживаться жестко. Минимизируйте вылет инструмента.
ОСТРОСТЬ ИНСТРУМЕНТА — Всегда следите за тем, чтобы инструменты были острыми. Меняйте заточенные инструменты через регулярные промежутки времени, а не по необходимости. Изнашиваемая кромка размером 0,015 дюйма считается затупившимся инструментом.
ИНСТРУМЕНТЫ — Используйте инструменты с положительным передним углом для большинства операций механической обработки. Инструменты с отрицательным передним углом можно использовать для прерывистого резания и удаления большого припуска. Для большинства применений предлагаются инструменты с твердосплавными наконечниками. Можно использовать высокоскоростные инструменты с более низкой производительностью, и их часто рекомендуют для прерывистого резания.
ПРИНЦИПИАЛЬНЫЕ РЕЗЫ — Используйте тяжелые, постоянные подачи для поддержания положительного режущего действия. Если подача замедляется и инструмент останавливается в резе, происходит наклеп, стойкость инструмента ухудшается, а жесткие допуски становятся невозможными.
СМАЗКА — желательны смазочные материалы, растворимые масла рекомендуются, особенно при использовании твердосплавного инструмента. Подробные параметры обработки представлены в таблицах 16 и 17. Общие рекомендации по плазменной резке представлены в таблице 18.

INCONEL® является зарегистрированной торговой маркой группы компаний INCO.