Раскраски для взрослых: постигни дзен в кляксе, приручи линию и подружись с дудлами
Творчество
Раскраски для взрослых: постигни дзен в кляксе, приручи линию и подружись с дудлами16 июня 2016 6 839 просмотров
Юлия Скрипник
Сначала вы делаете воодушевленной страницу. А потом — себя самого и мир вокруг. Посмотрите сами на эти необычные раскраски для взрослых и творческие блокноты — и вы разделите наш восторг.
Одна про дудлы, про толпы невероятных дудлов. Вы слегка ошалеете от их безудержного веселья! Вторая — о поиске смысла и познании мира через кляксы. А третья и вовсе про творческий беспорядок — поможет расслабиться и обрести счастье в мелочах. И в заключении — творческий блокнот: он заставит вас удивиться собственной креативности.
Nulla dies sine linea!
Сборище дудлов
Если вам надоели геометрические узоры, котики и цветы — эта книга для вас. В новой раскраске Зиффлина и иллюстратора Лея Мелендреса еще больше замысловатых паттернов, сверхъестественных существ и уникальных миров. Дракон, рыцарь, йетти и сборище крейзанутых дудлов — подходящая компания для отличного вечера.
И этой красоты — 50 страниц. Бумага плотная и выдержит любой инструмент: можно раскрашивать красками, фломастерами, гелевыми ручками, карандашами, маркерами. Каждая композиция детально прорисована. Подходит и взрослым, и детям. Хорошее настроение и драйв во время раскрашивания гарантированы. А законченные листы на стене в рамке будут вызывать улыбку.
Тот, кто пройдет про тропе дудлов, уже никогда не будет прежним ;). Источник — @miftvorchestvo.Хирамеки
Каждая клякса — это вдохновение. Каждая линия — свободна. Откройте свое воображение. «Хирамеки» в переводе с японского означает «своеобразный стиль», «особый отпечаток», «место, где встречаются каракули и воображение». Проще говоря, это искусство превращения случайной кляксы во что-то удивительное.
Хирамеки заключает в себе два основных вида мыслительного процесса: поиск смысла и познание мира. В маленькой кляксе скрыта магия: ее суть становится явной, стоит лишь добавить черточки и точки так, как подсказывает фантазия.
Если верить тем, кто говорит, что счастье в мелочах, то эта книга должна долго развлекать ваши глаза, руки и голову. А еще почти на каждой странице есть сумаcшедшие забавные хокку.
Пучок волос — раз, клок волос — два,
вот — шевелюра, а вот — борода.
Хирамеки разделены на 7 уровней — от простых до самых сложных. Вы сможете увидеть в кляксах лица, предметы, животных и даже пришельцев. Настоящее пиршество для вашей фантазии. На каждой странице — воодушевление и радость.
Посмотрите на эти кляксы и позвольте вашему воображению творить магию. Источник — @miftvorchestvo.Творческий беспорядок
Творческий беспорядок — это уютно и очень красиво. Эта раскраска о любви к мелочам жизни поможет увидеть красоту в повседневных вещах, привести мысли в порядок и расслабиться. Иллюстрации насыщены мелкими деталями: книги, одежда, посуда, носки. Все как в жизни — интересно и красочно!
Разбирать запасы — занятие медитативное, то же самое можно сказать и о раскрашивании.
Это успокаивающее, расслабляющее занятие и для педантов, и для любителей бардака. Вас ждут очаровательные и забавные предметы, которые можно найти в любой квартире — кофейные чашки и солнечные очки, забытые туфли, парочка любовных писем.
Просто откройте «Творческий беспорядок» и добавьте цвета! — Фото@miftvorchestvoЛиния — это точка, которая пошла погулять
Необычный творческий блокнот для рисования, на создание которого вдохновил жизненный девиз художника-абстракциониста Пауля Клее — «Nulla dies sine linea» («Ни дня без линии»). В нем созданы все условия, чтобы удивиться собственной креативности.
А как бы вы изобразили красный, который радуется синему? Да-да, попробуйте проделать это прямо сейчас -)Внутри — классные иллюстрации и полезные советы. На каждой странице вы найдете инструкции, которые можно трактовать по-разному, что дает максимальную свободу творчества. Художественные навыки не нужны. Чтобы начать — просто освободите ум и следуйте за интуицией.
Вот примеры заданий:
- Представьте и нарисуйте, что фиолетовый удивился, увидев оранжевый
- Дорисуйте к красному маку зеленую траву
- Сделайте эту страницу воодушевленной
- Изобразите кошку десятью, пятью, одной линией
- Нарисуйте круги, совершающие марафонский забег
- Как бы выглядел цветок-астронавт?
- Нарисуйте свое любимое воспоминание.
Для того чтобы получать удовольствие от рисования, совсем необязательно уметь рисовать. Научившись творить без боязни ошибиться, вы почувствуете себя свободным. Раскрашивайте, творите и радуйтесь лету!
App Store: Pixel Art: Раскраска по цифрам
Расслабьтесь и получите удовольствие, раскрашивая по номерам! Выбирайте из более чем 10 000 картинок или создавайте свои пиксельные изображения.
Особенности:
— Выбирайте из множества картинок на любой вкус: Мандалы, Узоры, Животные, Птицы, Цветы, Города, Еда и многие другие;
— Раскрашивайте новые картинки — наша коллекция обновляется каждую неделю;
— 3D-раскраска. Получите превосходные впечатления от раскрашивания 3D-изображений;
— Pixel Art камера. Делайте селфи или используйте любые фото для раскрашивания собственных пиксельных картинок!
— Используйте различные инструменты раскраски: Волшебную палочку, чтобы раскрасить несколько соседних ячеек с одним и тем же числом, или Цветную кляксу, чтобы раскрасить несколько соседних ячеек с любым числом;
— Оцените понятный и удобный дизайн Pixel Art. Рисовать по номерам — это интересно и просто!
Раскрашивание еще никогда не было столь простым! Никаких хлопот с подбором цветов. Просто расслабьтесь и наслаждайтесь!
Pixel Art Премиум
Подписка Pixel Art Премиум позволяет разблокировать все функции, получить доступ к ежедневным обновлениям и убрать рекламу.
Оплата будет списана из аккаунта Apple ID при подтверждении покупки. Подписка продлевается автоматически, если автоматическое продление не отключено как минимум за 24 часа до конца текущего периода. Плата за продление списывается со счета за 24 часа до конца текущего периода. Вы можете управлять подписками. Автоматическое продление подписки можно отключить в настройках аккаунта Apple ID. Для получения дополнительной информации перейдите по ссылке https://support.apple.com/ru-ru/HT202039. Неиспользованная часть бесплатного пробного периода аннулируется после приобретения подписки.
Лицензионное соглашение: https://easybrain.com/terms.html
Политика конфиденциальности: https://easybrain.com/policy.html
Раскраска для взрослых – Деньги – Коммерсантъ
Наст Дж. Эффект визуализации (Idea Mapping: How to Access Your Hidden Brain Power, Learn Faster, Remember More and Achieve Success in Business).— М.: Эксмо, 2008.— 256 с.
Джейми Наст — профессиональный дрессировщик менеджеров. Забудьте, пишет автор, о линейной организации информации. Давайте законспектируем сложную мысль в схеме-картинке — это и емко, и логично, и наглядно. Типовая картинка по виду похожа на нейрон: это клякса с многочисленными лучиками, утончающимися по мере отдаления от центра. В середине кляксы располагается главная идея, на толстых участках веток — ее ключевые элементы, на тоненьких — дальнейшие подробности. Все это в идеале должно быть раскрашено, а потренироваться можно на самой книге — это предусмотрено автором. Читать схему предлагается от центра и далее по часовой стрелке.
Не совсем понимаю, почему этот отличный прикладной прием должен сделать из читателя успешного бизнесмена. Во всяком случае, все карты, иллюстрирующие движение к успеху, невообразимо мутны. Например, логическая линия «работа — стремления — лидерство — успех» не воспринимается иначе как мантра для самогипноза. А вот карты лекций и докладов, напротив, вполне внятны. Правда, подозреваю, что студенты уже давно и с успехом рисуют что-то подобное для осмысления громоздкой информации: сама рисовала цветную схему боевых действий гражданской войны.
Тем не менее госпожа Наст пытается внушить читателю, что ее метод можно успешно применить к чему угодно. Оно и понятно, ведь универсальные вещи лучше продаются: редкий клиент устоит перед возможностью купить крысоловку, которая элегантно раскладывается в яйцерезку. В некий момент (стр. 205) автор намекает, что карты и схемы помогут вам похудеть. А в последних главах советует дарить людям их персональные карты (биографию, изложенную в кляксах), составлять заранее рисованные планы телефонных звонков, а также при помощи карт определять свои цели. Последнее — вообще какой-то мистический ритуал. «По старой традиции,— объясняет автор,— некоторые люди определяют свои цели каждый год. Вероятно, стоит определять цели ежемесячно или еженедельно». Возможно, автор пытается включить в целевую аудиторию людей с фантастически амебообразным устройством психики, которые не в состоянии понять, зачем они, собственно, эту карту рисуют.
Но в целом, если отмести коммерческие перегибы (в том числе главу 7, посвященную рекламе некоего софта Mindjet, который как нельзя лучше подходит для рисования ментальных карт), книжка небессмысленная. Ее единственным системным изъяном выглядит то, что хваленый трехмерный и объемный метод изложен тем самым линейным способом, против использования которого предостерегает автор. «Люди запоминают 10% услышанного, 20% прочитанного и около 80% увиденного и сделанного»,— сообщается в предисловии. Таким образом, на усвоение более 20% автор и не рассчитывает.
В общем, резюме такое. Не знаю, как менеджерам, а вот студентам-авральщикам я бы эту книжку порекомендовала. А для целей обучения деловому успеху она полезна примерно в той же мере, что и стакан морковного сока: точно не повредит.
Наталья Скорлыгина
Обжора клякса играть. Игра грязная клякса
Описание флеш игры
Клякса 2 — Веселая рисовалка
Blobink 2
Клякса 2
Игра «Клякса 2» увлекает с первых секунд после запуска простотой, новизной задумки и нескучным музыкальным сопровождением. Жизнерадостная клякса стремится превратить окружающий черно-белый мир в цветную картинку. Помимо повсеместного раскрашивания главному персонажу игры приходится выполнять миссии: спасать, помогать.
Играть в «Кляксу 2» можно одному и вдвоем. Игра на двоих предполагает разделение участков картинки и задач уровня. В интерактивную раскраску понравится играть детям с родителями и представителям творческих профессии. Простая забавная флешка убьет время и поможет запустить процесс генерации творческих идей, не зря же терапия рисованием так популярна сегодня.
Как играть
Представьте себя в роли волшебника с палочкой. Прикосновение магического инструмента делает безжизненные серы дома и машины разноцветными, равно как и касание кляксы.
Запустите игру, выберите режим — на время, для двоих, для одного — и отправляйтесь в чудесное путешествие в сказку-раскраску.
Управление
Управлять передвижением краски первому игроку предстоит при помощи клавиш-стрелок. Второй игрок будет управлять своей кляксой с буквенного крестика: A, S, D и W.
Найдите время на то, чтобы увидеть мир в цвете и принять участие в его раскрашивании — запускайте игру «Клякса 2».
Восхитительная и очень красочная игра «Клякса 2» поражает воображение и развивает фантазию. Приключения классически разделены на три части «от простого к сложному». Разделяют действия уровни с боссами. В этой флешке вы – трудолюбивая и жизнерадостная клякса, цель которой – раскрасить весь окружающий мир. Все, до чего маленький невзрачный персонаж прикасается, приобретает цвет. Нажав на фонтанчик, вы подарите оттенок фону, – на некоторых уровнях именно это место является завершающей точкой. Но сложно назвать эту игру просто раскраской – здесь есть препятствия, которые нужно обходить, например, воду. В более «продвинутых» уровнях нужно спасать друзей, лавировать между речными потоками, ориентироваться в полной темноте и обретать все новые сверхспособности. Эта замысловатая флешка – целый мир для тех, кто хочет поднять себе настроение.
Не можете пройти уровень в одиночку? Подключите друга и оцените возможность игры на двоих. Можно разделиться и окрашивать разные части картинки, а также выполнять независимые функции – один окрашивает, другой спасает друга Кляксы, например. А уровни с боссами превратятся для вас в настоящую гонку на выживание, которую сложно пройти с первого раза. Кстати, если один из вас ошибется (натолкнется на препятствие, попадется боссу или неудачно обойдет воду), то уровень завершится для обоих персонажей. Но не расстраивайтесь – жмите пробел и продолжайте играть с того же места, и, в дальнейшем, попытайтесь проходить приключения в команде.
То, что все не любят грязь, никогда не было секретом. Да, совсем-совсем не любят и старательно избавляются от любой грязи. А вы когда-нибудь задумывались, а как относится грязь к всеобщей нелюбви и стремлению к чистоте? Грязь старается всячески избежать столкновений с ревнителями чистоты и их помощниками – всеми этими губками, веничками, пылесосами. Вашим персонажем станет грязная капля. Ей стало известно, что запланирована Большая Уборка. А это значит, всей собравшейся грязи придет конец. Вот и пылесос – этот кошмар и первый враг грязи, уже показался! Этого монстра грязная капля боится больше всего. Спасите бедняжку, пока не стало поздно!
Вообще-то капля давно собиралась покинуть эти места ради путешествия в далекий Голливуд. Но для этого требуется помощник – вы.
Как играть?
Капля сможет стать кинозвездой, если сумеет ускользнуть. Но билет на автобус стоит денег и их придется срочно собирать. Вам придется метаться между разбросанным всюду мусором и цеплять каждую монетку. Торопитесь, пылесос уже совсем рядом! Да и на автобус капелька может просто не успеть. Двигайтесь быстро, точно перемещая персонаж в безопасные места. На каждом уровне вас ожидает новая локация, поэтому повторений не будет.
На нашем игровом сайте мы предлагаем широкий выбор бесплатных игр для всей семьи. От классических игр на ловкость типа Клондайк до сверхпопулярных гонок в стиле Uphill Rush. У нас есть всё. Бесплатные флеш игры являются самым быстро развивающимся сегментом веб-развлечений, и каждый день мы добавляем новые захватывающие игры .
Вы можете выбрать из десятков категорий бесплатных игр . Логические игры включают в себя классику в стиле Маджонг ; Бродилки проверят вашу реакцию и навыки навигации; Экшн игры помогут вам снять напряжение; Игры на ловкость типа Bubble Shooter помогут расслабиться; А мультиплеер игры проверят ваши навыки в соревнованиях со всем миром.
Мы сами разрабатываем новые бесплатные игры на нашем сайте, поэтому вы всегда можете быть уверены в их качестве. Игры для девочек, для мальчиков, для мам, пап, бабушек и дедушек – всё это вы найдете только на сайт. Это ваш центр бесплатных флеш онлайн игр !
В наши игры всегда можно играть бесплатно онлайн. Мы строго контролируем содержимое сайта, поэтому наши flash игры предназначены для всех. Приятной игры!
Сайт всегда предлагает широчайший выбор бесплатных игр онлайн. Совершенно новые игры появляются на сайте ежедневно!
сайт всегда предлагает широчайший выбор бесплатных игр онлайн. Совершенно новые игры появляются на сайте ежедневно!
РАСКРАСКА – КАРКАС ДЕТСКОГО РАЗВИТИЯ.
Раскрашивание относится к детским развивающим занятиям. Этот процесс играет огромную роль в формировании многочисленных навыков.Часто мы воспринимаем раскраски как инструмент развития мелкой моторики, или вовсе как просто занятное времяпрепровождение. Однако раскраски способны на большее!
Считается, что главное предназначение раскраски – это тренировка детской руки. Несомненно, раскрашивание способствует развитию мелкой моторики, которая в свою очередь связана с нервной системой, зрением, вниманием, памятью и вообще развитием личности в целом. Одна из областей науки считает, что это связано с тем, что в головном мозге речевой и моторный центры находятся очень близко друг к другу, и, развивая один, вы автоматически активизируете другой. Это действительно так, но не все так просто. «Скажи мне, и я забуду. Покажи мне, и я запомню. Дай мне сделать самому, и это останется со мной навсегда», — гласит древняя китайская пословица. На кончиках пальцев расположены особые нервные окончания, передающие информацию об этом мире в мозг. Поэтому все, что человек делает собственными руками, активизирует сразу все центры, непосредственным образом влияя на организм и личность в целом. Вот почему, например, художественная арт-терапия так популярна сегодня.
Когда ребенок раскрашивает какой-то объект, он развивает свой ум – происходит накопление и закрепление знаний о форме и цвете. Также развивается наблюдательность и терпение. Ведь нужно потратить достаточно много сил, чтобы научиться контролировать нажим карандаша или фломастеры, чтобы не разорвать бумагу или не наставить клякс. Это занятие дисциплинирует ребенка, учит выполнять монотонную работу, концентрироваться и доводить начатое дело до конца, воспитывает усидчивость, аккуратность и самостоятельность.
Раскраски — это верный путь в мир изобразительного искусства и творчества. В процессе раскрашивания ребенок имеет возможность самостоятельно выбирать цвета, комбинировать их между собой. Это творческий процесс, который способствуют развитию фантазии ребенка и сам по себе является «волшебным» для любого малыша, ведь можно раскрасить картинку как положено, а можно придать ей совершенно фантастический вид.
По тому, какие цвета ребенок выбирает и как он их смешивает друг с другом, можно делать выводы о его психоэмоциональном состоянии.
Раскрашивание успокаивает нервную систему, позволяя снять излишнее напряжение и угомонить даже слишком активного ребенка. Это хороший способ переключить его внимание или избавиться от стрессовой ситуации.
Начинать этот увлекательный и полезный процесс можно даже в самом раннем возрасте, некоторые родители дают простые раскраски детям до 2-х лет. Первая раскраска ребенка должна иметь 2-3 знакомых для него объекта, желательно крупного размера. Раскрашивать такие вещи можно начинать руками, например, используя специальные пальчиковые краски.
Никогда не ждите, что с первых занятий малыш будет рисовать в рамках контура. Всегда проходит некоторое время, прежде чем ребенок понимает, что именно требуется и начинает стараться делать правильно. Важно обязательно хвалить свое чадо, и только иногда указывать ему на недостатки в его работе. Процесс раскрашивания, как и любой другой, предполагает совершенствование, как в сложности рисунка, так и в выборе инструментов. Ребенку постарше следует предложить карандаши или фломастеры – эти два инструмента наиболее полезны ему для будущего обучения письму. И вначале рекомендуется использовать тренажеры для письма, разработанные специально для того, чтобы ребенок изначально правильно держал пишущий инструмент. От правильности захвата зависит как будущий почерк, так и правильный сигнал от нервных окончаний. Если по каким-то причинам, нет возможности приобрести тренажер для письма, то специалисты рекомендуют использовать треугольные фломастеры или карандаши, особенно это касается ранних стадий. Учите ребенка делать выбор с самого начала, не заставляйте его раскрашивать то, чего он не хочет – очень важно поддерживать его умственное здоровье, давая ему возможность заниматься более интересным для себя делом.
Раскрашивание можно рассматривать и как прекрасный метод обучения. Используя раскраски можно изучать не только цвета и формы, но и цифры, буквы, учиться читать (если ваша раскраска сделана, например, по мотивам любимой сказки), познавать другие миры и рассказывать свои собственные истории. Поскольку большинству деток раскрашивание нравится, такое обучение будет эффективным.
Тем не менее, чтобы достичь положительных результатов при раскрашивании, необходимо грамотно подходить к этому вопросу. Здесь следует отметить одно из наиболее важных правил, которое заключается в подборе раскрасок из учета возраста ребенка. Современный рынок пестрит предложениями, и, к сожалению, не все раскраски пригодны для деток. Так, например, на ранних стадиях не стоит останавливаться на раскрасках по мотивам западных мультфильмов. Эта анимация создана взрослыми людьми и в большинстве своем для взрослых. Соответственно, если вы все же покупаете такой материал своим детям, то старайтесь давать его в более взрослом возрасте. Так же стоит относиться внимательнее к отличиям в культурном и этническом отношении. Детский мозг может не справится с различиями в том, что он видит в реальности и тем, что может быть представлено материалами другой культуры. Относитесь внимательно, объясняйте ребенку сюжеты, которые он раскрашивает, но не ограничивайте его в познании другого.
| Лунтик и его друзья | Сарра Ансон | 2:30:42 | 37890 |
| Колобок | Русская народная | 04:29 | 34030 |
| Волшебник Изумрудного города | Александр Волков | 5:18:15 | 31220 |
| Цветик-семицветик | Валентин Катаев | 19:28 | 20280 |
| Аленький цветочек | Аксаков Сергей Тимофеевич | 41:27 | 19270 |
| Карлсон, который живёт на крыше | Астрид Линдгрен | 3:23:12 | 18540 |
| Всё Простоквашино | Успенский Эдуард | 4:48:03 | 18480 |
| Золотой ключик, или Приключения Буратино | Алексей Николаевич Толстой | 56:09 | 18370 |
| Маша и медведь | Русская народная | 06:11 | 18130 |
| Витя Малеев в школе и дома | Николай Носов | 5:16:03 | 17960 |
| Снежная королева | Ганс Христиан Андерсен | 1:08:32 | 15750 |
| Умная собачка Соня | Андрей Усачёв | 1:08:50 | 15540 |
| Белоснежка и семь гномов | Братья Гримм | 10:23 | 15240 |
| Винни-Пух и все-все-все | Алан Александр Милн | 1:37:05 | 14920 |
| Дюймовочка | Ганс Христиан Андерсен | 29:05 | 14320 |
| Смешарики | Алексей Лебедев | 7:46:59 | 14190 |
| Приключения Тома Сойера | Марк Твен | 8:17:39 | 14030 |
| Волк и семеро козлят | Братья Гримм | 08:05 | 13690 |
| Карлик Нос | Вильгельм Гауф | 46:33 | 13650 |
| Сказка о царе Салтане | Александр Сергеевич Пушкин | 44:36 | 13330 |
| Карлсон, который живет на крыше, проказничает опять | Астрид Линдгрен | 4:10:49 | 12920 |
| Бременские музыканты | Братья Гримм | 07:51 | 12830 |
| Незнайка в Солнечном городе | Николай Носов | 8:46:58 | 12650 |
| Сказка о мёртвой царевне и семи богатырях | Александр Сергеевич Пушкин | 28:09 | 12490 |
| Теремок | Русская народная | 04:38 | 12150 |
| Русалочка | Ганс Христиан Андерсен | 1:04:27 | 11910 |
| Три поросенка | Сергей Михалков | 18:28 | 11250 |
| Айболит | Корней Иванович Чуковский | 08:28 | 10970 |
| Золушка или хрустальная туфелька | Шарль Перро | 21:00 | 10930 |
| В стране невыученных уроков | Лия Гераскина | 2:01:16 | 10550 |
| Приключения Эмиля из Лённеберги | Астрид Линдгрен | 7:32:18 | 10480 |
| Пеппи поселяется в вилле Курица | Астрид Линдгрен | 2:53:42 | 10440 |
| Три медведя | Русская народная | 06:51 | 9750 |
| Волк и козлята | Русская народная | 07:02 | 9730 |
| Василиса Прекрасная | Русская народная | 29:49 | 9690 |
| Алиса в стране чудес | Льюис Кэрролл | 1:30:22 | 9610 |
| Маленький принц | Антуан Де Сент-Экзюпери | 1:12:57 | 9520 |
| Приключения Незнайки и его друзей | Николай Носов | 5:03:56 | 9150 |
| Красная Шапочка | Шарль Перро | 05:05 | 8930 |
| Незнайка на Луне | Николай Носов | 14:09:59 | 8880 |
| Иван-царевич и серый волк | Русская народная | 17:15 | 8400 |
| Сказка о рыбаке и рыбке | Александр Сергеевич Пушкин | 12:16 | 8110 |
| Карлсон, который живёт на крыше, опять прилетел | Астрид Линдгрен | 3:45:23 | 8010 |
| Рапунцель | Братья Гримм | 08:43 | 7820 |
| Кошкин дом | Самуил Маршак | 35:16 | 7420 |
| Кот в сапогах | Шарль Перро | 14:03 | 7100 |
| Щелкунчик и мышиный король | Амадей Гофман | 55:37 | 7080 |
| Мойдодыр | Корней Иванович Чуковский | 05:34 | 7000 |
| Папа, мама, бабушка, восемь детей и грузовик | Анне-Катарина Вестли | 13:20:26 | 6950 |
| Королевство кривых зеркал | Виталий Губарев | 3:10:37 | 6790 |
| Приключения Синдбада-Морехода | Арабская сказка | 1:00:57 | 6500 |
| Двенадцать месяцев | Самуил Маршак | 24:34 | 6360 |
| Тимур и его команда | Аркадий Гайдар | 2:37:06 | 6350 |
| Царевна-лягушка | Русская народная | 18:00 | 6210 |
| Курочка Ряба | Русская народная | 01:06 | 6200 |
| Огниво | Ганс Христиан Андерсен | 17:03 | 5870 |
| Домовёнок Кузя | Татьяна Александрова | 2:10:55 | 5760 |
| Живая вода | Братья Гримм | 21:33 | 5670 |
| Морозко | Русская народная | 05:08 | 5330 |
| Красавица и чудовище | Дисней | 11:33 | 5250 |
| Питер Пэн | Барри Джеймс | 6:23:34 | 5240 |
| Урфин Джюс и его деревянные солдаты | Александр Волков | 6:02:28 | 5240 |
| Самая маленькая принцесса | Анна Деус | 03:40 | 5000 |
| Совёнок | Анна Деус | 03:03 | 5000 |
| Любопытный зайчонок | Анна Деус | 08:20 | 5000 |
| Мишкина каша | Николай Носов | 15:06 | 4970 |
| Сивка-бурка | Русская народная | 16:10 | 4940 |
| Король Лев | Дисней | 14:11 | 4850 |
| Чук и Гек | Аркадий Гайдар | 1:11:43 | 4760 |
| Механический дед Мороз | Свен Нурдквист | 2:59:52 | 4630 |
| Иван — крестьянский сын и Чудо-Юдо | Русская народная | 26:27 | 4610 |
| Баба-яга | Русская народная | 10:18 | 4600 |
| Белочка и Зайка | Анна Деус | 02:18 | 4500 |
| Дон Кихот | Мигель де Сервантес | 3:39:33 | 4500 |
| Репка | Русская народная | 02:20 | 4440 |
| Мешок яблок | Сутеев Владимир Григорьевич | 12:23 | 4430 |
| Летучий корабль | Русская народная | 24:33 | 4420 |
| Муха-Цокотуха | Корней Иванович Чуковский | 04:10 | 4410 |
| Девочка на шаре | Виктор Драгунский | 16:52 | 4340 |
| Дудочка и кувшинчик | Валентин Катаев | 13:24 | 4320 |
| Гадкий утенок | Ганс Христиан Андерсен | 25:18 | 4300 |
| Холодное сердце | Вильгельм Гауф | 56:00 | 4300 |
| Мышонок Пик | Виталий Бианки | 58:36 | 4260 |
| Хома и Суслик | Альберт Иванов | 14:11:15 | 4210 |
| Пеппи собирается в путь | Астрид Линдгрен | 2:53:15 | 4180 |
| Автомобильчик Бип | Тамара Крюкова | 29:22 | 4130 |
| Сказка о царе Берендее | Русская народная | 44:40 | 4100 |
| Гензель и Гретель | Братья Гримм | 24:10 | 4070 |
| Маленький Мук | Вильгельм Гауф | 33:44 | 4040 |
| Мэри Поппинс | Памела Трэверс | 3:08:49 | 4030 |
| Пеппи в стране Веселии | Астрид Линдгрен | 2:34:05 | 4010 |
| Кощей Бессмертный | Русская народная | 23:59 | 3980 |
| Паровозик Пых | Тамара Крюкова | 32:19 | 3970 |
| Гуси-лебеди | Русская народная | 03:37 | 3900 |
| Спящая красавица | Шарль Перро | 24:56 | 3860 |
| Приключения барона Мюнхаузена | Рудольф Эрих Распе | 1:32:22 | 3770 |
| Али-Баба и сорок разбойников | Арабская сказка | 30:07 | 3750 |
| Фея Динь-Динь | Дисней | 08:56 | 3730 |
| Приключения Чиполлино | Джанни Родари | 1:00:17 | 3600 |
| Сказка о золотом петушке | Александр Сергеевич Пушкин | 11:40 | 3500 |
| Телефон | Корней Иванович Чуковский | 03:56 | 3500 |
| Федорино горе | Корней Иванович Чуковский | 06:42 | 3430 |
| Как муравьишка домой спешил | Виталий Бианки | 14:26 | 3420 |
| Дети капитана Гранта | Жюль Верн | 3:07:19 | 3360 |
| Немо | Дисней | 20:28 | 3260 |
| Волшебная лампа Аладдина | Арабская сказка | 43:41 | 3240 |
| Черная курица, или Подземные жители | Антоний Погорельский | 1:40:20 | 3230 |
| Сказка о попе и о работнике его Балде | Александр Сергеевич Пушкин | 09:30 | 3190 |
| Каша из топора | Русская народная | 02:38 | 3170 |
| Конёк-Горбунок | Пётр Ершов | 2:10:20 | 3160 |
| Кот Леопольд | Аркадий Хайт | 26:13 | 3150 |
| Русалочка (Дисней) | Дисней | 14:12 | 3120 |
| Король Дроздобород | Братья Гримм | 24:42 | 3050 |
| Котёнок по имени Гав | Григорий Остер | 40:03 | 3010 |
| Чудесное путешествие Нильса с дикими гусями | Сельма Лагерлеф | 1:59:55 | 2980 |
| Рони, дочь разбойника | Астрид Линдгрен | 6:33:16 | 2920 |
| Тук-тук-тук | Николай Носов | 12:37 | 2810 |
| Сказка про котенка Уголька, беглого хомяка и ворону Матрёну | Ирина Рогалёва | 22:26 | 2810 |
| Аладдин (Дисней) | Дисней | 14:06 | 2790 |
| Ежик в тумане | Сергей Козлов | 6:33:27 | 2770 |
| Жёлтый туман | Александр Волков | 7:23:43 | 2730 |
| Соловей | Ганс Христиан Андерсен | 30:34 | 2730 |
| Чебурашка | Успенский Эдуард | 45:49 | 2720 |
| Илья Муромец и Соловей разбойник | Русская народная | 14:57 | 2690 |
| Принцесса на горошине | Ганс Христиан Андерсен | 02:57 | 2660 |
| Золушка (Дисней) | Дисней | 14:16 | 2660 |
| Ромашка | Ганс Христиан Андерсен | 10:55 | 2650 |
| Тараканище | Корней Иванович Чуковский | 05:59 | 2650 |
| Волшебный магазин | Сутеев Владимир Григорьевич | 35:45 | 2570 |
| Финист-ясный сокол | Русская народная | 19:19 | 2560 |
| Золотой гусь | Братья Гримм | 12:08 | 2550 |
| По щучьему веленью | Русская народная | 16:49 | 2530 |
| У Лукоморья дуб зеленый | Александр Сергеевич Пушкин | 02:03 | 2520 |
| Бобик в гостях у Барбоса | Николай Носов | 09:14 | 2490 |
| Бэмби | Дисней | 15:30 | 2490 |
| Три охотника | Николай Носов | 10:36 | 2430 |
| Мальчик с пальчик | Шарль Перро | 13:24 | 2420 |
| Палочка-выручалочка | Сутеев Владимир Григорьевич | 07:53 | 2400 |
| Петушок золотой гребешок | Русская народная | 04:48 | 2390 |
| Петушок и бобовое зернышко | Русская народная | 02:42 | 2390 |
| Сказки дядюшки Римуса | Джоэль Чендлер Харрис | 1:52:29 | 2370 |
| Про Бегемота, который боялся прививок | Сутеев Владимир Григорьевич | 03:57 | 2360 |
| Фенька | Алексей Пантелеев | 16:25 | 2350 |
| Волшебное яблочко | Русская народная | 24:56 | 2350 |
| Сказка о глупом мышонке | Самуил Маршак | 04:57 | 2320 |
| Волшебница | Шарль Перро | 05:52 | 2320 |
| Бычок-смоляной бочок | Русская народная | 07:21 | 2300 |
| Про Веру и Анфису | Успенский Эдуард | 53:34 | 2300 |
| Однажды Катя с Манечкой | Ирина Пивоварова | 6:57:34 | 2270 |
| Кот и лиса | Русская народная | 07:21 | 2250 |
| Кошка, которая гуляла сама по себе | Редьярд Киплинг | 33:25 | 2250 |
| Принц и нищий | Марк Твен | 9:11:34 | 2240 |
| Серая Шейка | Мамин-Сибиряк | 21:32 | 2230 |
| Поди туда-не знаю куда, принеси то-не знаю что | Русская народная | 46:07 | 2220 |
| Каникулы в Простоквашино | Успенский Эдуард | 19:46 | 2220 |
| Стоптанные туфельки | Братья Гримм | 13:20 | 2200 |
| Царевна Несмеяна | Русская народная | 05:55 | 2200 |
| Заплатка | Николай Носов | 03:49 | 2180 |
| Петя Иванов и волшебник Тик-Так | Сутеев Владимир Григорьевич | 51:36 | 2170 |
| О чём думает моя голова | Ирина Пивоварова | 5:21:47 | 2170 |
| Джельсомино в Стране лжецов | Джанни Родари | 3:35:23 | 2150 |
| Тайна третьей планеты | Кир Булычёв | 54:58 | 2130 |
| Винни-Пух (Дисней) | Дисней | 18:27 | 2120 |
| Дикие лебеди | Ганс Христиан Андерсен | 12:20 | 2120 |
| Стойкий оловянный солдатик | Ганс Христиан Андерсен | 13:13 | 2120 |
| Кладовая солнца | Михаил Пришвин | 1:49:08 | 2100 |
| Дядя Федор, пес и кот | Успенский Эдуард | 1:13:31 | 2070 |
| Приключения Пиноккио. История деревянной куклы | Карло Коллоди | 4:09:06 | 2040 |
| Рикки Тикки Тави | Редьярд Киплинг | 38:53 | 2000 |
| Живая шляпа | Николай Носов | 03:38 | 2000 |
| Белоснежка (Дисней) | Дисней | 14:47 | 2000 |
| Гном Гномыч и Изюмка | Агнеш Балинт | 1:58:13 | 2000 |
| Баба Яга и ягоды | Русская народная | 02:55 | 1990 |
| Три поросёнка (Дисней) | Дисней | 08:35 | 1970 |
| Кто сказал «МЯУ»? | Сутеев Владимир Григорьевич | 06:16 | 1960 |
| Зима в Простоквашино | Успенский Эдуард | 1:01:21 | 1940 |
| Фантазёры | Николай Носов | 08:40 | 1940 |
| Если бы я был взрослым | Виктор Драгунский | 04:44 | 1920 |
| Голубой щенок | Юрий Энтин | 20:32 | 1920 |
| Лягушка-путешественница | Всеволод Гаршин | 12:51 | 1910 |
| Бармалей | Корней Иванович Чуковский | 07:04 | 1880 |
| Тайное становится явным | Виктор Драгунский | 06:37 | 1880 |
| Тачки | Дисней | 13:10 | 1870 |
| Крокодил Гена и его друзья | Успенский Эдуард | 1:44:45 | 1860 |
| Горшочек каши | Братья Гримм | 02:27 | 1850 |
| Куриный бульон | Виктор Драгунский | 09:49 | 1840 |
| Алиса в стране чудес (Дисней) | Дисней | 16:33 | 1840 |
| Рататуй | Дисней | 19:27 | 1830 |
| Краденое солнце | Корней Иванович Чуковский | 03:55 | 1820 |
| Крошка Енот и тот, кто сидит в пруду | Лилиан Мур | 11:01 | 1800 |
| История игрушек | Дисней | 15:44 | 1790 |
| Заяц и ёж | Братья Гримм | 06:22 | 1780 |
| 101 далматинец | Дисней | 13:12 | 1770 |
| Зайкина избушка | Русская народная | 06:02 | 1770 |
| Маленькие человечки | Братья Гримм | 06:33 | 1770 |
| Сестрица Алёнушка и братец Иванушка | Русская народная | 05:57 | 1750 |
| Приключения Карандаша и Самоделкина | Юрий Дружков | 2:17:19 | 1750 |
| Маша и Ойка | Софья Прокофьева | 1:11:48 | 1740 |
| Серёжик | Елена Ракитина | 5:42:23 | 1730 |
| Румпельштильцхен | Братья Гримм | 10:47 | 1710 |
| Смелый кораблик | Тамара Крюкова | 32:55 | 1700 |
| Калиф аист | Вильгельм Гауф | 26:49 | 1680 |
| Друг детства | Виктор Драгунский | 07:25 | 1680 |
| Заколдованная королевна | Русская народная | 20:04 | 1680 |
| Лиса и волк | Русская народная | 04:37 | 1670 |
| Приключения Бибигона | Корней Иванович Чуковский | 28:49 | 1650 |
| Замазка | Николай Носов | 05:44 | 1600 |
| Яблоко | Сутеев Владимир Григорьевич | 04:58 | 1580 |
| О Военной тайне, о Мальчише-Кибальчише и его твёрдом слове | Аркадий Гайдар | 24:22 | 1570 |
| Братья Маугли | Редьярд Киплинг | 1:05:04 | 1570 |
| Марья Моревна | Русская народная | 27:01 | 1570 |
| Двадцать лет под кроватью | Виктор Драгунский | 10:00 | 1560 |
| Снегурочка | Русская народная | 05:09 | 1550 |
| Шесть лебедей | Братья Гримм | 20:10 | 1550 |
| Серебряное копытце | Павел Бажов | 22:26 | 1530 |
| Автомобиль | Николай Носов | 04:54 | 1500 |
| Суперсемейка | Дисней | 15:18 | 1490 |
| Две ящерки | Павел Бажов | 46:02 | 1490 |
| Шёл по городу волшебник | Юрий Томин | 6:42:35 | 1490 |
| Разные колёса | Сутеев Владимир Григорьевич | 03:39 | 1480 |
| Цыплёнок Цыпа | Дисней | 17:33 | 1480 |
| Шурик у дедушки | Николай Носов | 10:54 | 1480 |
| Юные сурки идут по следу | Дисней | 14:23 | 1470 |
| Муфта, Полботинка и Моховая Борода | Эно Рауд | 12:48:47 | 1460 |
| Госпожа Метелица | Братья Гримм | 09:00 | 1450 |
| Вот какой рассеянный | Самуил Маршак | 03:28 | 1450 |
| Ахи Страхи (Ничуть не страшно) | Андрей Кириллов | 17:05 | 1450 |
| Кот-рыболов | Сутеев Владимир Григорьевич | 07:53 | 1430 |
| Три толстяка | Юрий Олеша | 5:10:11 | 1420 |
| Приключения Флика, или Жизнь жуков | Дисней | 13:26 | 1420 |
| Приключения желтого чемоданчика | Софья Прокофьева | 3:40:21 | 1420 |
| Вождь краснокожих | О. Генри | 33:22 | 1420 |
| Наказанная царевна | Русская народная | 16:18 | 1400 |
| Чип и Дейл | Дисней | 11:01 | 1400 |
| Приключения поросёнка Фунтика | Валерий Шульжик | 45:39 | 1400 |
| Крокодил | Корней Иванович Чуковский | 14:18 | 1400 |
| Двенадцать братьев | Братья Гримм | 17:22 | 1400 |
| Алые паруса | Александр Грин | 3:22:47 | 1400 |
| Зимовье зверей | Русская народная | 08:08 | 1390 |
| Лиса и гуси | Братья Гримм | 02:31 | 1390 |
| Под грибом | Сутеев Владимир Григорьевич | 03:32 | 1380 |
| Федина задача | Николай Носов | 05:58 | 1370 |
| Хозяйка медной горы | Павел Бажов | 27:18 | 1360 |
| Паровозик из Ромашково | Геннадий Цыферов | 12:20 | 1360 |
| Покахонтас | Дисней | 15:39 | 1350 |
| Терешечка | Русская народная | 07:10 | 1350 |
| Крошечка-Хаврошечка | Русская народная | 07:37 | 1340 |
| Мышонок и карандаш | Сутеев Владимир Григорьевич | 03:24 | 1330 |
| Клякса | Николай Носов | 05:41 | 1330 |
| Сестра моя Ксения | Виктор Драгунский | 08:23 | 1320 |
| Новогодние каникулы Вани Огородникова | Алексей и Анна Епифановы | 1:30:45 | 1320 |
| Приключения Петрова и Васечкина | Владимир Алеников | 2:29:12 | 1320 |
| Гном-Тихогром | Братья Гримм | 16:05 | 1310 |
| Голубая чашка | Аркадий Гайдар | 1:01:38 | 1300 |
| Белый Бим Чёрное ухо | Гавриил Троепольский | 8:53:28 | 1300 |
| Детство | Иван Суриков | 03:43 | 1300 |
| Мой друг Васька Рогов | Константин Мелихан | 2:07:30 | 1290 |
| Саша и Маша | Анни Шмидт | 6:45:07 | 1290 |
| Гусиное горлышко | Виктор Драгунский | 12:41 | 1290 |
| Петя и Красная Шапочка | Сутеев Владимир Григорьевич | 16:46 | 1280 |
| Микки Маус, Дональд и Гуфи | Дисней | 18:25 | 1280 |
| Братец медвежонок | Дисней | 20:50 | 1270 |
| Баранкин, будь человеком | Валерий Медведев | 4:16:45 | 1270 |
| Как львенок и черепаха пели песенку | Инесса Ковалевская | 08:30 | 1270 |
| Каменный цветок | Павел Бажов | 1:04:44 | 1260 |
| Одна капля убивает лошадь | Виктор Драгунский | 05:46 | 1260 |
| Сундук-самолёт | Ганс Христиан Андерсен | 18:19 | 1240 |
| Дамбо | Дисней | 14:09 | 1240 |
| Арбузный переулок | Виктор Драгунский | 10:37 | 1230 |
| Атлантида (Затерянный мир) | Дисней | 21:19 | 1230 |
| Дед Мороз и серый волк | Сутеев Владимир Григорьевич | 18:10 | 1230 |
| Одноглазка, двуглазка и треглазка | Братья Гримм | 18:42 | 1230 |
| Пора спать | Мамин-Сибиряк | 23:05 | 1220 |
| Что я люблю | Виктор Драгунский | 04:21 | 1220 |
| Мулан | Дисней | 15:03 | 1220 |
| Малахитовая шкатулка | Павел Бажов | 1:10:07 | 1200 |
| Соломинка, уголек и боб | Братья Гримм | 03:36 | 1200 |
| Саша | Николай Носов | 14:40 | 1200 |
| Оле-Лукойе | Ганс Христиан Андерсен | 29:45 | 1190 |
| Что я видел | Борис Житков | 8:47:27 | 1190 |
| Геркулес | Дисней | 14:32 | 1190 |
| Теремок в стихах | Самуил Маршак | 23:36 | 1190 |
| Волшебное кольцо | Русская народная | 42:14 | 1180 |
| Добрыня Никитич и Змей Горыныч | Русская народная | 18:39 | 1180 |
| Пряничный домик | Братья Гримм | 12:15 | 1180 |
| Лиса и журавль | Русская народная | 02:22 | 1170 |
| Песочный человек | Амадей Гофман | 1:51:02 | 1170 |
| Лиса и дрозд | Русская народная | 06:55 | 1170 |
| Про репку | Николай Носов | 19:01 | 1160 |
| Приключения капитана Врунгеля | Андрей Некрасов | 1:17:17 | 1160 |
| Лис и пёс | Дисней | 13:36 | 1160 |
| Первая охота | Виталий Бианки | 06:13 | 1150 |
| Дядя Миша | Сутеев Владимир Григорьевич | 06:10 | 1150 |
| Бабушка Вьюга | Братья Гримм | 11:07 | 1140 |
| Великан Грог | Ким Уиброу | 17:02 | 1140 |
| Тетя Дяди Федора | Успенский Эдуард | 1:05:56 | 1140 |
| Жили-были Ёжики | Вениамин Смехов | 46:26 | 1140 |
| Терем-теремок | Сутеев Владимир Григорьевич | 07:15 | 1130 |
| Король-лягушонок, или Железный Генрих | Братья Гримм | 10:09 | 1130 |
| Диво дивное, чудо чудное | Русская народная | 12:20 | 1120 |
| Подарки феи | Шарль Перро | 08:56 | 1110 |
| Карасик | Николай Носов | 12:28 | 1110 |
| Маугли (Дисней) | Дисней | 11:03 | 1110 |
| Леди и Бродяга | Дисней | 11:14 | 1110 |
| Королевские дети | Братья Гримм | 28:41 | 1100 |
| Три котёнка | Сутеев Владимир Григорьевич | 01:21 | 1100 |
| Как игрушки пошли учиться, или Петя Кляксин на необитаемом острове | Александр Дитрих | 44:18 | 1100 |
| Семья Ларссенов | Ян Улоф Экхольм | 1:08:16 | 1100 |
| Белоснежка и Алоцветик | Братья Гримм | 13:30 | 1100 |
| Остров сокровищ | Роберт Стивенсон | 1:14:05 | 1071 |
| Любимая девочка Дяди Федора | Успенский Эдуард | 1:07:29 | 1070 |
| Синяя Борода | Шарль Перро | 12:09 | 1060 |
| Затейники | Николай Носов | 03:26 | 1060 |
| Рассказы о животных | Борис Житков | 1:33:40 | 1040 |
| О молодильных яблоках и живой воде | Русская народная | 35:02 | 1040 |
| Золотой горшок | Амадей Гофман | 4:06:56 | 1030 |
| Кораблик | Сутеев Владимир Григорьевич | 02:17 | 1030 |
| Капризная кошка | Сутеев Владимир Григорьевич | 04:09 | 1020 |
| Новое платье короля | Ганс Христиан Андерсен | 11:23 | 1020 |
| Сверху вниз, наискосок | Виктор Драгунский | 08:38 | 1020 |
| Бой на Калиновом мосту | Русская народная | 12:53 | 1010 |
| Сказка об умном мышонке | Самуил Маршак | 06:05 | 1010 |
| Алёша Попович и Тугарин Змеевич | Русская народная | 19:07 | 1010 |
| Робин Гуд | Дисней | 09:40 | 1000 |
| Жар-птица и Василиса-царевна | Русская народная | 10:25 | 1000 |
| Старик из стеклянной горы | Братья Гримм | 07:00 | 990 |
| Девушка-дикарка | Братья Гримм | 21:36 | 990 |
| Хитрый способ | Виктор Драгунский | 09:11 | 990 |
| Чей нос лучше | Виталий Бианки | 06:16 | 990 |
| Происшествие в стране Мульти-Пульти | Аркадий Хайт | 1:11:33 | 980 |
| Белые амадины | Виктор Драгунский | 17:07 | 970 |
| Заяц и черепаха | Дисней | 07:43 | 970 |
| Наш друг Пишичитай | Евгений Агранович | 20:08 | 960 |
| Замарашка | Шарль Перро | 14:47 | 960 |
| Скорый гонец | Русская народная | 20:56 | 950 |
| Прятки | Николай Носов | 05:04 | 950 |
| Снежный дом | Алексей Николаевич Толстой | 22:55 | 940 |
| Тарзан | Дисней | 11:14 | 930 |
| Жихарка | Русская народная | 04:47 | 930 |
| Гарантийные человечки | Успенский Эдуард | 1:19:37 | 920 |
| Смерть шпиона Гадюкина | Виктор Драгунский | 14:28 | 920 |
| Тигр! Тигр! | Редьярд Киплинг | 51:39 | 910 |
| Пастушья дудочка | Русская народная | 07:52 | 910 |
| Как собака друга искала | Русская народная | 03:42 | 910 |
| Мороз Иванович | Владимир Одоевский | 18:55 | 910 |
| Лило и Стич | Дисней | 18:27 | 910 |
| Горбун из Нотр-Дама | Дисней | 13:50 | 900 |
| Лисичка со скалочкой | Русская народная | 03:29 | 900 |
| Сочневы камешки | Павел Бажов | 26:24 | 890 |
| Заколдованная буква | Виктор Драгунский | 03:44 | 890 |
| Ровно 25 кило | Виктор Драгунский | 06:09 | 880 |
| Горячий камень | Аркадий Гайдар | 11:50 | 880 |
| Маленькая Баба-Яга | Отфрид Пройслер | 45:02 | 870 |
| Путаница | Корней Иванович Чуковский | 02:34 | 850 |
| Где это видано, где это слыхано | Виктор Драгунский | 16:46 | 850 |
| Петух и краски | Сутеев Владимир Григорьевич | 00:55 | 850 |
| Усатый-полосатый | Самуил Маршак | 05:26 | 850 |
| Дед Мороз и лето | Василий Ливанов | 21:33 | 850 |
| Коты-аристократы | Дисней | 13:31 | 840 |
| Дочь болотного царя | Ганс Христиан Андерсен | 46:02 | 830 |
| Профессор кислых щей | Виктор Драгунский | 05:47 | 830 |
| Морской царь и Василиса Премудрая | Русская народная | 17:16 | 830 |
| Снеговик | Ганс Христиан Андерсен | 13:55 | 820 |
| Городок в табакерке | Владимир Одоевский | 18:11 | 820 |
| Храбрый портняжка | Братья Гримм | 15:46 | 800 |
| Коза дереза | Русская народная | 05:03 | 800 |
| Синий кинжал | Виктор Драгунский | 05:52 | 800 |
| Независимый Горбушка | Виктор Драгунский | 11:08 | 790 |
| Верные звери | Братья Гримм | 11:13 | 790 |
| Братец из тыквы (Кукулик) | Мария Дюричкова | 25:20 | 780 |
| Лиса и медведь | Русская народная | 09:08 | 780 |
| Пожар во флигеле, или подвиг во льдах | Виктор Драгунский | 11:41 | 780 |
| Чудесная рубашка | Русская народная | 13:09 | 770 |
| Окаменелое царство | Русская народная | 07:23 | 770 |
| Про храброго Зайца-длинные уши, косые глаза, короткий хвост | Мамин-Сибиряк | 06:45 | 760 |
| Леденец | Николай Носов | 04:00 | 760 |
| Гулливер в стране лилипутов | Джонатан Свифт | 1:28:02 | 760 |
| Пиноккио (Дисней) | Дисней | 13:50 | 750 |
| Тим Талер или Проданный Смех | Джеймс Крюс | 1:54:56 | 750 |
| О Молочке, овсяной Кашке и сером котишке Мурке | Мамин-Сибиряк | 10:35 | 740 |
| Снегурушка и лиса | Русская народная | 04:55 | 730 |
| Лиса и заяц | Русская народная | 05:14 | 730 |
| Пузырь, соломинка и лапоть | Русская народная | 00:48 | 720 |
| Хитрая наука | Русская народная | 14:16 | 720 |
| Царица пчел | Братья Гримм | 07:11 | 710 |
| Мотогонки по отвесной стене | Виктор Драгунский | 08:14 | 710 |
| Главные реки Америки | Виктор Драгунский | 08:57 | 700 |
| Елена Премудрая | Русская народная | 12:15 | 700 |
| Крылатый, мохнатый да масленый | Русская народная | 08:43 | 700 |
| Площадь картонных часов | Леонид Яхнин | 34:51 | 700 |
| Козлёнок, который считал до десяти | Альф Прейсен | 08:31 | 690 |
| Королек и медведь | Братья Гримм | 09:14 | 690 |
| Серебряное блюдечко и наливное яблочко | Русская народная | 15:17 | 680 |
| О том, как жила-была последняя Муха | Мамин-Сибиряк | 25:00 | 680 |
| Находчивость | Николай Носов | 04:56 | 680 |
| Хлеб и золото | Арабская сказка | 04:09 | 680 |
| Мы ищем кляксу | Сутеев Владимир Григорьевич | 07:53 | 680 |
| Тихая сказка | Самуил Маршак | 05:12 | 680 |
| Весной | Сутеев Владимир Григорьевич | 02:26 | 670 |
| Былина о Дунае, Добрыне и Владимире Красно Солнышко | Русская народная | 24:41 | 670 |
| Рике с хохолком | Шарль Перро | 13:57 | 670 |
| Сражение у чистой речки | Виктор Драгунский | 07:37 | 670 |
| Цыплёнок и утёнок | Сутеев Владимир Григорьевич | 01:31 | 670 |
| Журавль и цапля | Русская народная | 04:06 | 660 |
| Два Ивана — солдатских сына | Русская народная | 36:20 | 660 |
| Голубая змейка | Павел Бажов | 31:28 | 650 |
| Вовка в Тридевятом царстве | Вадим Коростылёв | 19:10 | 640 |
| Вершки и корешки | Русская народная | 01:56 | 640 |
| Дружба кошки и мышки | Братья Гримм | 07:48 | 640 |
| Райский сад | Ганс Христиан Андерсен | 35:12 | 630 |
| Ель | Ганс Христиан Андерсен | 25:27 | 630 |
| Умнее всех | Мамин-Сибиряк | 20:54 | 620 |
| Про Козявочку | Мамин-Сибиряк | 09:20 | 610 |
| Деревянный орел | Русская народная | 13:14 | 610 |
| Злой князь | Ганс Христиан Андерсен | 06:46 | 610 |
| Приказчиковы подошвы | Павел Бажов | 19:32 | 590 |
| Как лиса училась летать | Русская народная | 01:23 | 590 |
| Как в джунгли пришёл страх | Редьярд Киплинг | 52:11 | 580 |
| Лиса и тетерев | Русская народная | 02:09 | 580 |
| Дорожный товарищ | Ганс Христиан Андерсен | 40:01 | 580 |
| Хрустальный шар | Братья Гримм | 09:11 | 570 |
| Ухти-Тухти | Беатрис Поттер | 20:54 | 570 |
| Ветер рассказывает о Вальдемаре До и его дочерях | Ганс Христиан Андерсен | 30:55 | 570 |
| Охота питона Каа | Редьярд Киплинг | 1:18:39 | 570 |
| Самое дорогое | Русская народная | 06:03 | 570 |
| Свинопас | Ганс Христиан Андерсен | 11:26 | 560 |
| Тиха украинская ночь | Виктор Драгунский | 10:34 | 560 |
| Это что за птица? | Сутеев Владимир Григорьевич | 07:15 | 560 |
| Маленький Клаус и Большой Клаус | Ганс Христиан Андерсен | 27:52 | 550 |
| Пожар | Самуил Маршак | 06:44 | 550 |
| Горный мастер | Павел Бажов | 38:19 | 550 |
| Золотая антилопа | Лев Атаманов | 35:02 | 550 |
| Мороз и заяц | Русская народная | 02:50 | 550 |
| Лисичкин хлеб | Михаил Пришвин | 03:23 | 550 |
| Чудо-дерево | Корней Иванович Чуковский | 01:21 | 540 |
| Бабочка | Сутеев Владимир Григорьевич | 02:24 | 540 |
| Гвоздик, Лампочка и Синий мячик | Лейла Курашинова | 08:55 | 540 |
| Улитка и роза | Ганс Христиан Андерсен | 06:44 | 530 |
| Огневушка-поскакушка | Павел Бажов | 26:18 | 530 |
| Умная Гретель | Братья Гримм | 08:44 | 530 |
| Иванушка-дурачок | Русская народная | 08:09 | 530 |
| Цветы маленькой Иды | Ганс Христиан Андерсен | 15:41 | 530 |
| Красный шарик в синем небе | Виктор Драгунский | 06:31 | 530 |
| Ничего изменить нельзя | Виктор Драгунский | 09:34 | 520 |
| Подземный человечек | Братья Гримм | 16:56 | 520 |
| Большой морской змей | Ганс Христиан Андерсен | 27:43 | 520 |
| Гадкий утёнок (Дисней) | Дисней | 14:24 | 510 |
| Кривая уточка | Русская народная | 02:49 | 510 |
| Столик, сам накройся, золотой осел и дубинка из мешка | Братья Гримм | 28:03 | 510 |
| Зеленчатые леопарды | Виктор Драгунский | 07:39 | 510 |
| Горшеня | Русская народная | 10:41 | 500 |
| Ленивый Хайнц | Братья Гримм | 07:50 | 500 |
| Мастер-ломастер | Самуил Маршак | 03:07 | 500 |
| Серебряная монетка | Ганс Христиан Андерсен | 13:32 | 490 |
| Счастливое семейство | Ганс Христиан Андерсен | 09:37 | 480 |
| Три счастливчика | Братья Гримм | 08:44 | 480 |
| Дочь и падчерица | Русская народная | 08:44 | 470 |
| Волшебная дудочка | Русская народная | 07:47 | 470 |
| Чего боялся Петя | Самуил Маршак | 01:45 | 470 |
| Двенадцать пассажиров | Ганс Христиан Андерсен | 12:43 | 460 |
| Про Комара Комаровича-длинный нос и про мохнатого Мишу-короткий хвост | Мамин-Сибиряк | 11:58 | 460 |
| Он живой и светится | Виктор Драгунский | 05:12 | 460 |
| Дикая собака Динго или повесть о первой любви | Рувим Фраерман | 1:52:32 | 450 |
| Верное средство | Арабская сказка | 02:08 | 450 |
| Бутылочное горлышко | Ганс Христиан Андерсен | 32:36 | 450 |
| Золотой топор | Русская народная | 01:58 | 440 |
| Свинья-копилка | Ганс Христиан Андерсен | 06:33 | 440 |
| Семь Симеонов | Русская народная | 13:45 | 430 |
| Три змеиных листочка | Братья Гримм | 11:02 | 430 |
| Бычок — чёрный бочок, белые копытца | Русская народная | 06:22 | 430 |
| Лесная старуха | Братья Гримм | 08:08 | 430 |
| Зайкин кораблик | Сутеев Владимир Григорьевич | 04:47 | 430 |
| Лис и мышонок | Виталий Бианки | 00:36 | 430 |
| Синюшкин колодец | Павел Бажов | 36:12 | 430 |
| Девочка со спичками | Ганс Христиан Андерсен | 09:59 | 420 |
| Нашествие джунглей | Редьярд Киплинг | 1:12:14 | 420 |
| Как лиса с овцой волка наказали | Русская народная | 02:06 | 420 |
| Петух и жерновцы | Русская народная | 04:53 | 420 |
| Слово | Русская народная | 07:00 | 420 |
| Болтунья | Русская народная | 05:12 | 420 |
| Сказка о четырёх глухих | Владимир Одоевский | 10:04 | 420 |
| Жадный вельможа | Русская народная | 05:54 | 410 |
| Топтыгин и лиса | Корней Иванович Чуковский | 04:37 | 410 |
| Ванькины именины | Мамин-Сибиряк | 19:34 | 400 |
| Айболит и воробей | Корней Иванович Чуковский | 03:14 | 400 |
| Вася Весёлкин | Михаил Пришвин | 15:26 | 400 |
| Ослик | Братья Гримм | 12:09 | 400 |
| Три пряхи | Братья Гримм | 07:23 | 400 |
| Солдат и царица | Русская народная | 17:11 | 400 |
| Англичанин Павля | Виктор Драгунский | 04:49 | 390 |
| То, чего не было | Всеволод Гаршин | 10:51 | 390 |
| Раз, два — дружно! | Сутеев Владимир Григорьевич | 06:58 | 390 |
| Мистер Твистер | Самуил Маршак | 12:56 | 390 |
| Синий лапоть | Михаил Пришвин | 06:45 | 380 |
| Этажи леса | Михаил Пришвин | 05:08 | 380 |
| Волшебный холм | Ганс Христиан Андерсен | 13:47 | 380 |
| О жабе и розе | Всеволод Гаршин | 18:15 | 380 |
| Веретено, ткацкий челнок и иголка | Братья Гримм | 09:15 | 370 |
| Выскочка | Михаил Пришвин | 05:19 | 370 |
| Дымка и Антон | Виктор Драгунский | 03:34 | 370 |
| Святогор и Илья Муромец | Русская народная | 11:27 | 360 |
| Про славного царя Гороха | Мамин-Сибиряк | 46:17 | 360 |
| Расскажите мне про Сингапур | Виктор Драгунский | 13:14 | 360 |
| Эльф розового куста | Ганс Христиан Андерсен | 13:07 | 350 |
| Бутерброд | Корней Иванович Чуковский | 00:37 | 350 |
| Дочь-семилетка | Русская народная | 08:42 | 350 |
| Изобретатель | Михаил Пришвин | 08:40 | 350 |
| Умная внучка | Русская народная | 13:54 | 350 |
| Хрустальная гора | Русская народная | 05:56 | 340 |
| Очески | Братья Гримм | 01:54 | 340 |
| Капля воды | Ганс Христиан Андерсен | 04:23 | 330 |
| Приемыш | Мамин-Сибиряк | 20:31 | 330 |
| Радость | Корней Иванович Чуковский | 00:54 | 330 |
| Надо иметь чувство юмора | Виктор Драгунский | 06:17 | 330 |
| Что бывало | Борис Житков | 1:01:49 | 330 |
| Повесть о том, как один мужик двух генералов прокормил | Салтыков-Щедрин | 19:34 | 330 |
| У страха глаза велики | Русская народная | 02:13 | 330 |
| Скверный мальчишка | Ганс Христиан Андерсен | 04:24 | 330 |
| Охота за бабочкой | Михаил Пришвин | 02:17 | 320 |
| Весна | Редьярд Киплинг | 43:31 | 320 |
| Что сделала Мура | Корней Иванович Чуковский | 00:28 | 320 |
| Три брата | Братья Гримм | 05:52 | 320 |
| Семь воронов | Братья Гримм | 07:13 | 320 |
| Грибы | Алексей Николаевич Толстой | 05:25 | 320 |
| Ёж | Михаил Пришвин | 06:10 | 320 |
| Аисты | Ганс Христиан Андерсен | 10:22 | 310 |
| Кот Васька | Алексей Николаевич Толстой | 01:46 | 310 |
| Нищий и счастье | Арабская сказка | 03:22 | 310 |
| Багаж | Самуил Маршак | 02:10 | 310 |
| Перо и чернильница | Ганс Христиан Андерсен | 07:27 | 310 |
| Чудесные лапоточки | Русская народная | 06:50 | 300 |
| Два мороза | Русская народная | 05:04 | 300 |
| Про Воробья Воробеича, Ерша Ершовича и весёлого трубочиста Яшу | Мамин-Сибиряк | 17:19 | 300 |
| Королевский анкас | Редьярд Киплинг | 55:15 | 290 |
| Угомон | Самуил Маршак | 06:32 | 290 |
| Последняя жемчужина | Ганс Христиан Андерсен | 05:28 | 290 |
| Пятеро из одного стручка | Ганс Христиан Андерсен | 07:00 | 290 |
| Еж | Алексей Николаевич Толстой | 01:14 | 280 |
| Маша и мышки | Алексей Николаевич Толстой | 03:01 | 280 |
| Attalea princeps | Всеволод Гаршин | 19:07 | 280 |
| Тень | Ганс Христиан Андерсен | 37:53 | 270 |
| Мена | Русская народная | 04:38 | 270 |
| Медведь на воеводстве | Салтыков-Щедрин | 31:03 | 270 |
| Лиса и козел | Русская народная | 01:55 | 260 |
| Моя родина | Михаил Пришвин | 03:26 | 260 |
| Сказка о рыбаке и его жене | Братья Гримм | 31:13 | 260 |
| Старый уличный фонарь | Ганс Христиан Андерсен | 22:01 | 250 |
| Заяц-хваста | Русская народная | 01:37 | 250 |
| Детки в клетке | Самуил Маршак | 04:55 | 250 |
| Лён | Ганс Христиан Андерсен | 12:03 | 250 |
| Рыжие собаки | Редьярд Киплинг | 1:12:02 | 250 |
| Бузинная матушка | Ганс Христиан Андерсен | 22:00 | 250 |
| Ребята и утята | Михаил Пришвин | 03:10 | 250 |
| Про Воронушку-чёрную головушку и жёлтую птичку Канарейку | Мамин-Сибиряк | 20:30 | 240 |
| Сорока | Алексей Николаевич Толстой | 02:37 | 240 |
| Кто заговорит первый | Русская народная | 06:22 | 230 |
| Пастушка и трубочист | Ганс Христиан Андерсен | 15:18 | 230 |
| Елка | Корней Иванович Чуковский | 00:39 | 230 |
| Батрак | Русская народная | 10:47 | 230 |
| Старый дом | Ганс Христиан Андерсен | 21:48 | 230 |
| Ангел | Ганс Христиан Андерсен | 05:32 | 230 |
| Штопальная игла | Ганс Христиан Андерсен | 11:17 | 230 |
| Кое-что | Ганс Христиан Андерсен | 19:03 | 220 |
| Умный мужик | Русская народная | 04:20 | 220 |
| Дикий помещик | Салтыков-Щедрин | 19:38 | 220 |
| Горшок | Алексей Николаевич Толстой | 04:46 | 210 |
| Золотой луг | Михаил Пришвин | 02:07 | 210 |
| Коняга | Салтыков-Щедрин | 16:20 | 210 |
| Умей обождать | Константин Ушинский | 01:52 | 200 |
| Ежики смеются | Корней Иванович Чуковский | 00:17 | 190 |
| Чайник | Ганс Христиан Андерсен | 09:06 | 190 |
| Чего только не придумают | Ганс Христиан Андерсен | 09:50 | 190 |
| Кот | Михаил Пришвин | 03:10 | 180 |
| Бегущая по волнам | Александр Грин | 1:42:12 | 180 |
| Сказка о том, кто ходил страху учиться | Братья Гримм | 29:48 | 180 |
| Ганс Чурбан | Ганс Христиан Андерсен | 09:07 | 180 |
| Гусак | Алексей Николаевич Толстой | 04:17 | 180 |
| Сова и кот | Алексей Николаевич Толстой | 02:00 | 180 |
| Премудрый пескарь | Салтыков-Щедрин | 15:21 | 180 |
| Про бабушку старушку | Русская народная | 03:10 | 170 |
| Гречиха | Ганс Христиан Андерсен | 04:12 | 160 |
| Муравей | Алексей Николаевич Толстой | 03:03 | 160 |
| Истинная правда | Ганс Христиан Андерсен | 06:17 | 150 |
| Побратимы | Ганс Христиан Андерсен | 29:23 | 150 |
| Присказка | Мамин-Сибиряк | 01:43 | 150 |
| Закаляка | Корней Иванович Чуковский | 00:35 | 150 |
| Котауси и Мауси | Корней Иванович Чуковский | 00:47 | 140 |
| Черепаха | Корней Иванович Чуковский | 00:41 | 140 |
| Сказание о гордом Аггее | Всеволод Гаршин | 26:35 | 140 |
| Скрюченная песня | Корней Иванович Чуковский | 00:42 | 130 |
| Козел | Алексей Николаевич Толстой | 01:31 | 130 |
| Синяя птица | Морис Метерлинк | 1:26:33 | 130 |
| Куриный бог | Алексей Николаевич Толстой | 02:23 | 120 |
| Мышка | Алексей Николаевич Толстой | 01:07 | 110 |
| Верблюд | Алексей Николаевич Толстой | 03:03 | 110 |
| Журка | Михаил Пришвин | 02:43 | 110 |
| Гаечки | Михаил Пришвин | 02:48 | 100 |
| Хромка | Михаил Пришвин | 03:34 | 100 |
| Приключения Нулика | Владимир Лёвшин и Эмилия Александрова | 1:45:31 | 100 |
| 99 зайцев | Петер Асбьёрнсен | 32:37 | 100 |
| Муравьишка | Испанская народная | 23:03 | 100 |
| Мудрец | Алексей Николаевич Толстой | 02:34 | 100 |
| Карась-идеалист | Салтыков-Щедрин | 27:50 | 100 |
| Похлёбка из камней | Итальянская народная | 13:09 | 100 |
| Большая докторская сказка | Карел Чапек | 48:32 | 100 |
| Гадюка | Юрий Сотник | 21:19 | 100 |
| Воротничок | Ганс Христиан Андерсен | 05:55 | 90 |
| Петушки | Алексей Николаевич Толстой | 02:05 | 80 |
| Рачья свадьба | Алексей Николаевич Толстой | 03:59 | 80 |
| Заяц | Алексей Николаевич Толстой | 02:20 | 80 |
| Картина | Алексей Николаевич Толстой | 01:54 | 60 |
| Говорящий грач | Михаил Пришвин | 02:00 | 60 |
| Лев ушёл из дома | Юрий Яковлев | 48:15 | 50 |
| Пико — Хрустальное Горлышко | Николай Космин | 1:52:34 | 50 |
| Курочка-королева | Испанская народная | 22:31 | 50 |
| Умная Мари | Французская народная | 13:59 | 50 |
| Синяя свечка | Братья Гримм | 12:38 | 50 |
| Приключения Тяпа | Суслов Вольт | 11:05 | 50 |
| Счастливый Ганс | Братья Гримм | 14:53 | 40 |
| Чучело | Владимир Железников | 1:36:31 | 35 |
| Берёза и три сокола | Русская народная | 02:47 | 30 |
| Сокровища капитана Флинта | Роберт Стивенсон | 39:44 | 30 |
| Кот-хвастун | Владимир Лёвшин | 27:42 | 30 |
| Где живут цифры | Андрей Усачёв | 47:16 | 30 |
| Большая девочка | Лидия Арманд | 02:42 | 30 |
| Маленький галисиец | Испанская народная | 06:16 | 25 |
| Лесные тайны | Французская народная | 19:28 | 25 |
| Настоящая невеста | Братья Гримм | 19:19 | 25 |
| Мудрая кошка | Шведская народная | 15:22 | 25 |
| Старый друг | Роман Темис | 06:15 | 25 |
| Глоток молока | Михаил Пришвин | 00:45 | 20 |
| В прятки | Лидия Арманд | 04:27 | 20 |
| Две лягушки | Японская народная | 06:33 | 15 |
| Тут-тук-тук, открой дверь | Японская народная | 32:45 | 10 |
| Как Кортезе заплатил за обед | Итальянская народная | 04:15 | 10 |
| Настоятель и служка | Японская народная | 05:02 | 10 |
| Как достать живую обезьяну | Японская народная | 17:19 | 10 |
| Неустрашимый царевич | Братья Гримм | 14:10 | 10 |
| Морской дьявол | Борис Савельев | 39:02 | 10 |
| Массаро Правда | Итальянская народная | 14:42 | 10 |
| Подарок домового | Шведская народная | 31:38 | 10 |
| Сны Гуалтьеро | Итальянская народная | 14:35 | 10 |
| Шалунишка с крылышками | Лидия Арманд | 03:30 | 10 |
| Лиса | Алексей Николаевич Толстой | 01:29 | 10 |
| Мерин | Алексей Николаевич Толстой | 02:59 | 10 |
| Порточки | Алексей Николаевич Толстой | 03:26 | 10 |
| Сверчок | Французская народная | 15:37 | 10 |
| Сын чародея | Французская народная | 10:29 | 5 |
| Чудная снежинка | Соловьёв–Несмелов | 05:26 | 5 |
| Храбрые дочери рыцаря и злой великан | Шведская народная | 15:31 | 5 |
| Аленький цветочек | Аксаков Сергей Тимофеевич | 42:15 | 130001 |
| Снежная королева | Ганс Христиан Андерсен | 58:45 | 110000 |
| Курочка Ряба | Русская народная | 00:20 | 98002 |
| Красная Шапочка | Шарль Перро | 03:20 | 97500 |
| Цветик-семицветик | Валентин Катаев | 11:00 | 97001 |
| Золушка | Шарль Перро | 14:10 | 96000 |
| Дюймовочка | Ганс Христиан Андерсен | 19:30 | 95000 |
| Маша и медведь | Русская народная | 03:30 | 95000 |
| Белоснежка и семь гномов | Братья Гримм | 14:50 | 94001 |
| Три поросенка | Русская народная | 03:40 | 94000 |
| Кот в сапогах | Шарль Перро | 06:20 | 93000 |
| Теремок | Русская народная | 02:20 | 93000 |
| Айболит | Корней Иванович Чуковский | 04:35 | 90001 |
| Двенадцать месяцев | Самуил Маршак | 11:10 | 90001 |
| Волк и семеро козлят | Братья Гримм | 02:40 | 90000 |
| Василиса Прекрасная | Русская народная | 14:25 | 90000 |
| Русалочка | Ганс Христиан Андерсен | 42:20 | 90000 |
| Сказка о мёртвой царевне и семи богатырях | Александр Сергеевич Пушкин | 12:55 | 87000 |
| Морозко | Русская народная | 07:10 | 87000 |
| Сказка о царе Салтане | Александр Сергеевич Пушкин | 23:25 | 86001 |
| Золотой ключик, или Приключения Буратино | Алексей Николаевич Толстой | 2:02:40 | 80000 |
| Волшебник Изумрудного города | Александр Волков | 3:24:15 | 80000 |
| Каша из топора | Русская народная | 01:50 | 73000 |
| Карлик Нос | Вильгельм Гауф | 50:00 | 71000 |
| Сказка о рыбаке и рыбке | Александр Сергеевич Пушкин | 05:50 | 70003 |
| Гадкий утенок | Ганс Христиан Андерсен | 16:05 | 70001 |
| Маленький Мук | Вильгельм Гауф | 28:10 | 70000 |
| Карлсон, который живёт на крыше | Астрид Линдгрен | 2:20:15 | 70000 |
| Петушок и бобовое зернышко | Русская народная | 01:30 | 70000 |
| Витя Малеев в школе и дома | Николай Носов | 4:00:20 | 70000 |
| Бременские музыканты | Братья Гримм | 06:15 | 68000 |
| Иван-крестьянский сын и чудо-юдо | Русская народная | 14:20 | 67000 |
| Маленький принц | Антуан Де Сент-Экзюпери | 1:15:40 | 66000 |
| Рапунцель | Братья Гримм | 06:50 | 65000 |
| Колобок | Русская народная | 02:35 | 64000 |
| Спящая красавица | Шарль Перро | 06:25 | 63000 |
| Горшочек каши | Братья Гримм | 01:45 | 62000 |
| Царевна-лягушка | Русская народная | 10:30 | 61000 |
| Принцесса на горошине | Ганс Христиан Андерсен | 01:35 | 60000 |
| Мойдодыр | Корней Иванович Чуковский | 02:55 | 60000 |
| Кошкин дом | Самуил Маршак | 20:20 | 60000 |
| Румпельштильцхен | Братья Гримм | 06:25 | 59000 |
| Три медведя | Русская народная | 03:05 | 58000 |
| Король Дроздобород | Братья Гримм | 09:40 | 56000 |
| Сивка-бурка | Русская народная | 07:05 | 55000 |
| Маленькие человечки | Братья Гримм | 03:15 | 53000 |
| Сказка о глупом мышонке | Самуил Маршак | 02:15 | 53000 |
| Гуси-лебеди | Русская народная | 02:45 | 52000 |
| Огниво | Ганс Христиан Андерсен | 12:15 | 50000 |
| Гензель и Гретель | Братья Гримм | 15:35 | 50000 |
| Рикки Тикки Тави | Редьярд Киплинг | 30:10 | 50000 |
| Алиса в стране чудес | Льюис Кэрролл | 2:08:05 | 50000 |
| Винни-Пух и все-все-все | Алан Александр Милн | 4:04:15 | 50000 |
| Приключения Синдбада-Морехода | Арабская сказка | 35:50 | 49000 |
| Золотой гусь | Братья Гримм | 08:35 | 47000 |
| Лиса и волк | Русская народная | 02:55 | 47000 |
| Иван-царевич и серый волк | Русская народная | 10:55 | 46000 |
| Госпожа Метелица | Братья Гримм | 05:40 | 44000 |
| Бабушка Вьюга | Братья Гримм | 05:30 | 44000 |
| Лиса и тетерев | Русская народная | 01:05 | 43000 |
| Шесть лебедей | Братья Гримм | 10:50 | 41000 |
| Дикие лебеди | Ганс Христиан Андерсен | 30:50 | 40000 |
| Калиф аист | Вильгельм Гауф | 24:20 | 40000 |
| Телефон | Корней Иванович Чуковский | 02:15 | 40000 |
| Бычок-смоляной бочок | Русская народная | 04:05 | 40000 |
| Лягушка-путешественница | Всеволод Гаршин | 07:05 | 40000 |
| Стоптанные туфельки | Братья Гримм | 07:25 | 38000 |
| Баба Яга и ягоды | Русская народная | 02:00 | 37000 |
| Жихарка | Русская народная | 02:30 | 36900 |
| Сказка о попе и о работнике его Балде | Александр Сергеевич Пушкин | 05:40 | 35000 |
| Мальчик-с-пальчик | Шарль Перро | 07:20 | 35000 |
| Соломинка, уголек и боб | Братья Гримм | 02:10 | 35000 |
| Бой на Калиновом мосту | Русская народная | 06:40 | 34000 |
| Яблоко | Сутеев Владимир Григорьевич | 02:30 | 33940 |
| Как муравьишка домой спешил | Виталий Бианки | 08:40 | 33510 |
| Сказка о золотом петушке | Александр Сергеевич Пушкин | 05:25 | 32000 |
| Щелкунчик и мышиный король | Амадей Гофман | 1:55:00 | 32000 |
| Двенадцать братьев | Братья Гримм | 10:30 | 32000 |
| Финист-ясный сокол | Русская народная | 11:45 | 31000 |
| Пеппи поселяется в вилле Курица | Астрид Линдгрен | 2:14:10 | 30001 |
| Федорино горе | Корней Иванович Чуковский | 03:55 | 30001 |
| Ромашка | Ганс Христиан Андерсен | 07:05 | 30000 |
| Дудочка и кувшинчик | Валентин Катаев | 08:20 | 30000 |
| Конёк-Горбунок | Пётр Ершов | 58:20 | 30000 |
| Приключения Чиполлино | Джанни Родари | 4:29:30 | 30000 |
| Тимур и его команда | Аркадий Гайдар | 1:47:40 | 30000 |
| Репка | Русская народная | 00:45 | 28000 |
| Мышонок Пик | Виталий Бианки | 35:00 | 27700 |
| Белоснежка и Алоцветик | Братья Гримм | 08:15 | 26000 |
| Первая охота | Виталий Бианки | 03:25 | 25360 |
| Мешок яблок | Сутеев Владимир Григорьевич | 04:50 | 25100 |
| Алые паруса | Александр Грин | 2:17:55 | 25001 |
| Снегурочка | Русская народная | 03:15 | 25000 |
| Кошка, которая гуляла сама по себе | Редьярд Киплинг | 18:55 | 25000 |
| Чук и Гек | Аркадий Гайдар | 46:00 | 25000 |
| Царевна Несмеяна | Русская народная | 04:05 | 22000 |
| Под грибом | Сутеев Владимир Григорьевич | 02:00 | 21040 |
| Стойкий оловянный солдатик | Ганс Христиан Андерсен | 07:35 | 20001 |
| Мэри Поппинс | Памела Трэверс | 2:30:45 | 20001 |
| Братья Маугли | Редьярд Киплинг | 38:10 | 20000 |
| Пеппи собирается в путь | Астрид Линдгрен | 2:16:00 | 20000 |
| Серая Шейка | Мамин-Сибиряк | 14:55 | 20000 |
| Питер Пэн | Барри Джеймс | 3:04:35 | 20000 |
| Палочка-выручалочка | Сутеев Владимир Григорьевич | 04:40 | 18550 |
| Тараканище | Корней Иванович Чуковский | 03:30 | 18000 |
| Вершки и корешки | Русская народная | 01:00 | 18000 |
| Песочный человек | Амадей Гофман | 1:14:25 | 16000 |
| Крошка Енот и тот, кто сидит в пруду | Лилиан Мур | 06:50 | 15630 |
| Кто сказал «МЯУ»? | Сутеев Владимир Григорьевич | 03:35 | 15420 |
| Чудо-дерево | Корней Иванович Чуковский | 00:50 | 15000 |
| Дикая собака Динго или повесть о первой любви | Рувим Фраерман | 3:19:55 | 15000 |
| Приключения барона Мюнхаузена | Рудольф Эрих Распе | 1:06:25 | 15000 |
| Черная курица, или Подземные жители | Антоний Погорельский | 56:20 | 15000 |
| Зимовье зверей | Русская народная | 03:20 | 14000 |
| Чей нос лучше | Виталий Бианки | 04:05 | 13630 |
| Живая вода | Братья Гримм | 12:15 | 13000 |
| Золотой горшок | Амадей Гофман | 2:46:05 | 12000 |
| Горячий камень | Аркадий Гайдар | 07:05 | 11000 |
| Свинопас | Ганс Христиан Андерсен | 08:15 | 10000 |
| Пеппи в стране Веселии | Астрид Линдгрен | 2:02:45 | 10000 |
| Летучий корабль | Русская народная | 14:50 | 10000 |
| Веретено, ткацкий челнок и иголка | Братья Гримм | 05:25 | 10000 |
| Приключения Тома Сойера | Марк Твен | 6:19:10 | 10000 |
| Муфта, Полботинка и Моховая Борода | Эно Рауд | 10:14:55 | 10000 |
| Детки в клетке | Самуил Маршак | 05:25 | 9630 |
| Девушка-дикарка | Братья Гримм | 10:40 | 9500 |
| О Военной тайне, о Мальчише-Кибальчише и его твёрдом слове | Аркадий Гайдар | 11:35 | 9350 |
| Дружба кошки и мышки | Братья Гримм | 04:55 | 9000 |
| Кораблик | Сутеев Владимир Григорьевич | 00:55 | 9000 |
| Лиса и журавль | Русская народная | 01:15 | 8500 |
| Королевские дети | Братья Гримм | 16:25 | 8500 |
| Мороз Иванович | Владимир Одоевский | 12:35 | 8001 |
| Тень | Ганс Христиан Андерсен | 24:05 | 8000 |
| Королек и медведь | Братья Гримм | 04:50 | 8000 |
| Приключения Пиноккио. История деревянной куклы | Карло Коллоди | 3:26:55 | 8000 |
| Король-лягушонок, или Железный Генрих | Братья Гримм | 07:25 | 7500 |
| Оле-Лукойе | Ганс Христиан Андерсен | 19:45 | 7000 |
| Охота питона Каа | Редьярд Киплинг | 48:40 | 7000 |
| Ленивый Хайнц | Братья Гримм | 04:30 | 7000 |
| Три котёнка | Сутеев Владимир Григорьевич | 00:35 | 6900 |
| Крокодил | Корней Иванович Чуковский | 08:50 | 6800 |
| Муха-Цокотуха | Корней Иванович Чуковский | 02:20 | 6500 |
| Лесная старуха | Братья Гримм | 04:20 | 6500 |
| У Лукоморья дуб зеленый | Александр Сергеевич Пушкин | 00:55 | 6001 |
| Снеговик | Ганс Христиан Андерсен | 08:50 | 6000 |
| Сестрица Алёнушка и братец Иванушка | Русская народная | 03:50 | 6000 |
| Тигр! Тигр! | Редьярд Киплинг | 32:55 | 6000 |
| Одноглазка, двуглазка и треглазка | Братья Гримм | 11:20 | 6000 |
| Дядя Миша | Сутеев Владимир Григорьевич | 04:45 | 6000 |
| Петушок золотой гребешок | Русская народная | 03:00 | 5800 |
| Заяц-хваста | Русская народная | 01:02 | 5800 |
| Зайкина избушка | Русская народная | 03:25 | 5600 |
| Теремок в стихах | Самуил Маршак | 11:50 | 5600 |
| Ослик | Братья Гримм | 06:30 | 5500 |
| Марья Моревна | Русская народная | 15:30 | 5400 |
| Баба-яга | Русская народная | 04:30 | 5200 |
| Лисичка со скалочкой | Русская народная | 02:40 | 5200 |
| Новое платье короля | Ганс Христиан Андерсен | 07:30 | 5000 |
| Как в джунгли пришёл страх | Редьярд Киплинг | 31:15 | 5000 |
| Диво дивное, чудо чудное | Русская народная | 07:20 | 5000 |
| Холодное сердце | Вильгельм Гауф | 1:29:50 | 5000 |
| Очески | Братья Гримм | 01:05 | 5000 |
| Айболит и воробей | Корней Иванович Чуковский | 01:50 | 5000 |
| Если бы я был взрослым | Виктор Драгунский | 03:25 | 5000 |
| Два мороза | Русская народная | 04:05 | 4800 |
| Разные колёса | Сутеев Владимир Григорьевич | 02:40 | 4800 |
| Подземный человечек | Братья Гримм | 08:40 | 4500 |
| По щучьему веленью | Русская народная | 08:15 | 4400 |
| Самое дорогое | Русская народная | 02:25 | 4200 |
| Что я люблю | Виктор Драгунский | 02:45 | 4200 |
| Цыпленок и утенок | Сутеев Владимир Григорьевич | 01:05 | 4150 |
| Кощей Бессмертный | Русская народная | 10:30 | 4100 |
| Сказка о царе Берендее | Русская народная | 23:20 | 4100 |
| Лён | Ганс Христиан Андерсен | 07:55 | 4000 |
| Семь воронов | Братья Гримм | 04:50 | 4000 |
| Волшебная лампа Аладдина | Арабская сказка | 50:30 | 4000 |
| Серебряное копытце | Павел Бажов | 12:45 | 4000 |
| Чудесная рубашка | Русская народная | 09:00 | 3800 |
| Сверху вниз, наискосок | Виктор Драгунский | 05:05 | 3800 |
| Журавль и цапля | Русская народная | 01:30 | 3600 |
| Главные реки Америки | Виктор Драгунский | 05:00 | 3600 |
| Нашествие джунглей | Редьярд Киплинг | 52:00 | 3500 |
| Сказка о рыбаке и его жене | Братья Гримм | 14:50 | 3500 |
| Капризная кошка | Сутеев Владимир Григорьевич | 01:45 | 3460 |
| Королевский анкас | Редьярд Киплинг | 35:20 | 3400 |
| Мороз и заяц | Русская народная | 01:10 | 3400 |
| Ровно 25 кило | Виктор Драгунский | 08:15 | 3400 |
| Мышонок и карандаш | Сутеев Владимир Григорьевич | 01:50 | 3400 |
| Поди туда-не знаю куда, принеси то-не знаю что | Русская народная | 27:05 | 3200 |
| Профессор кислых щей | Виктор Драгунский | 04:30 | 3200 |
| Старик из стеклянной горы | Братья Гримм | 04:05 | 3001 |
| Attalea princeps | Всеволод Гаршин | 13:55 | 3001 |
| Рыжие собаки | Редьярд Киплинг | 48:05 | 3000 |
| Волшебное яблочко | Русская народная | 14:10 | 3000 |
| Пастушка и трубочист | Ганс Христиан Андерсен | 08:35 | 3000 |
| Бутерброд | Корней Иванович Чуковский | 00:25 | 3000 |
| Красный шарик в синем небе | Виктор Драгунский | 05:20 | 3000 |
| Голубая чашка | Аркадий Гайдар | 39:30 | 3000 |
| Малахитовая шкатулка | Павел Бажов | 41:40 | 3000 |
| Семь Симеонов | Русская народная | 07:55 | 2800 |
| Зеленчатые леопарды | Виктор Драгунский | 05:35 | 2800 |
| Котауси и Мауси | Корней Иванович Чуковский | 00:30 | 2700 |
| У страха глаза велики | Русская народная | 01:30 | 2700 |
| Хитрая наука | Русская народная | 08:15 | 2600 |
| Крылатый, мохнатый да масленый | Русская народная | 04:07 | 2600 |
| Волшебница | Шарль Перро | 05:50 | 2600 |
| Весна | Редьярд Киплинг | 39:55 | 2500 |
| Столик, сам накройся, золотой осел и дубинка из мешка | Братья Гримм | 20:45 | 2500 |
| Пастушья дудочка | Русская народная | 06:20 | 2400 |
| Штопальная игла | Ганс Христиан Андерсен | 06:25 | 2350 |
| Подарки феи | Шарль Перро | 05:50 | 2300 |
| Петух и краски | Сутеев Владимир Григорьевич | 00:35 | 2300 |
| Баранкин, будь человеком | Валерий Медведев | 3:10:35 | 2300 |
| Мистер Твистер | Самуил Маршак | 09:05 | 2300 |
| Волшебный магазин | Сутеев Владимир Григорьевич | 22:50 | 2260 |
| Снегурушка и лиса | Русская народная | 02:20 | 2200 |
| Мотогонки по отвесной стене | Виктор Драгунский | 06:15 | 2200 |
| Кот-рыболов | Сутеев Владимир Григорьевич | 04:35 | 2150 |
| Путаница | Корней Иванович Чуковский | 01:40 | 2050 |
| Чудесное путешествие Нильса с дикими гусями | Сельма Лагерлеф | 4:17:00 | 2001 |
| Городок в табакерке | Владимир Одоевский | 12:50 | 2001 |
| Капля воды | Ганс Христиан Андерсен | 03:00 | 2000 |
| Три брата | Братья Гримм | 04:25 | 2000 |
| Ежики смеются | Корней Иванович Чуковский | 00:10 | 2000 |
| Гусиное горлышко | Виктор Драгунский | 07:25 | 2000 |
| Как собака друга искала | Русская народная | 01:45 | 2000 |
| О жабе и розе | Всеволод Гаршин | 12:30 | 2000 |
| Три толстяка | Юрий Олеша | 3:24:15 | 2000 |
| Принц и нищий | Марк Твен | 6:16:00 | 2000 |
| Хозяйка Медной горы | Павел Бажов | 17:15 | 2000 |
| Каменный цветок | Павел Бажов | 38:05 | 2000 |
| Это что за птица? | Сутеев Владимир Григорьевич | 02:55 | 1940 |
| Пожар во флигеле, или подвиг во льдах | Виктор Драгунский | 08:20 | 1800 |
| О молодильных яблоках и живой воде | Русская народная | 22:15 | 1800 |
| Заяц и ёж | Братья Гримм | 04:20 | 1780 |
| Тихая сказка | Самуил Маршак | 01:30 | 1700 |
| Коза дереза | Русская народная | 03:00 | 1600 |
| Смерть шпиона Гадюкина | Виктор Драгунский | 11:30 | 1600 |
| Пряничный домик | Братья Гримм | 08:20 | 1500 |
| Закаляка | Корней Иванович Чуковский | 00:25 | 1500 |
| Еж | Алексей Николаевич Толстой | 00:40 | 1500 |
| Три змеиных листочка | Братья Гримм | 07:25 | 1500 |
| Кот Васька | Алексей Николаевич Толстой | 01:00 | 1400 |
| Ничего изменить нельзя | Виктор Драгунский | 05:40 | 1400 |
| Лиса и медведь | Русская народная | 05:20 | 1400 |
| Терешечка | Русская народная | 04:30 | 1350 |
| Сорока | Алексей Николаевич Толстой | 01:25 | 1300 |
| Ель | Ганс Христиан Андерсен | 15:45 | 1250 |
| Ослиная шкура | Шарль Перро | 15:40 | 1200 |
| Ванькины именины | Мамин-Сибиряк | 12:10 | 1200 |
| Грибы | Алексей Николаевич Толстой | 02:40 | 1200 |
| Сражение у чистой речки | Виктор Драгунский | 05:35 | 1200 |
| Али-Баба и сорок разбойников | Арабская сказка | 33:50 | 1200 |
| Чайник | Ганс Христиан Андерсен | 03:00 | 1200 |
| Лиса и дрозд | Русская народная | 03:55 | 1170 |
| Медведко | Мамин-Сибиряк | 08:45 | 1100 |
| Муравей | Алексей Николаевич Толстой | 01:35 | 1100 |
| Эльф розового куста | Ганс Христиан Андерсен | 08:50 | 1000 |
| Как лиса училась летать | Русская народная | 00:50 | 1000 |
| О Молочке, овсяной Кашке и сером котишке Мурке | Мамин-Сибиряк | 06:20 | 1000 |
| Елка | Корней Иванович Чуковский | 00:30 | 1000 |
| Сова и кот | Алексей Николаевич Толстой | 00:55 | 1000 |
| Домовёнок Кузя | Татьяна Александрова | 2:09:30 | 1000 |
| Рассказы о животных | Борис Житков | 1:24:30 | 1000 |
| Кладовая солнца | Михаил Пришвин | 1:12:20 | 1000 |
| Сказание о гордом Аггее | Всеволод Гаршин | 17:05 | 1000 |
| Тиха украинская ночь | Виктор Драгунский | 06:35 | 1000 |
| Джельсомино в Стране лжецов | Джанни Родари | 3:07:00 | 1000 |
| Три пряхи | Братья Гримм | 04:45 | 1000 |
| Сказки дядюшки Римуса | Джоэль Чендлер Харрис | 1:32:30 | 1000 |
| Иванушка-дурачок | Русская народная | 04:55 | 950 |
| Хрустальная гора | Русская народная | 04:20 | 900 |
| Илья Муромец и Соловей разбойник | Русская народная | 10:06 | 900 |
| О том, как жила-была последняя Муха | Мамин-Сибиряк | 15:20 | 900 |
| Маша и мышки | Алексей Николаевич Толстой | 01:40 | 900 |
| Петя Иванов и волшебник Тик-Так | Сутеев Владимир Григорьевич | 31:20 | 900 |
| Голубая змейка | Павел Бажов | 21:00 | 900 |
| Терем-теремок | Сутеев Владимир Григорьевич | 03:35 | 890 |
| Раз, два — дружно! | Сутеев Владимир Григорьевич | 03:35 | 880 |
| Золотой топор | Русская народная | 01:10 | 850 |
| Козлёнок, который считал до десяти | Альф Прейсен | 05:00 | 850 |
| Мы ищем кляксу | Сутеев Владимир Григорьевич | 04:25 | 840 |
| Дочь Болотного Царя | Ганс Христиан Андерсен | 1:10:20 | 820 |
| Чего боялся Петя | Самуил Маршак | 01:15 | 820 |
| Синяя Борода | Шарль Перро | 06:40 | 800 |
| Пора спать | Мамин-Сибиряк | 13:25 | 800 |
| Заяц | Алексей Николаевич Толстой | 01:15 | 800 |
| Морской царь и Василиса Премудрая | Русская народная | 13:25 | 800 |
| Хитрый способ | Виктор Драгунский | 06:00 | 800 |
| Про Бегемота, который боялся прививок | Сутеев Владимир Григорьевич | 02:05 | 800 |
| Огневушка-поскакушка | Павел Бажов | 17:10 | 800 |
| Добрыня Никитич и Змей Горыныч | Русская народная | 08:44 | 800 |
| Крошечка-Хаврошечка | Русская народная | 04:05 | 750 |
| Бутылочное горлышко | Ганс Христиан Андерсен | 20:20 | 720 |
| Приемыш | Мамин-Сибиряк | 16:15 | 701 |
| Дочь и падчерица | Русская народная | 02:55 | 700 |
| Рике с хохолком | Шарль Перро | 12:35 | 700 |
| Верблюд | Алексей Николаевич Толстой | 01:30 | 700 |
| Алёша Попович и Тугарин Змеевич | Русская народная | 06:34 | 700 |
| Лиса и заяц | Русская народная | 02:50 | 700 |
| Петя и Красная Шапочка | Сутеев Владимир Григорьевич | 09:50 | 670 |
| Лиса и козел | Русская народная | 00:55 | 650 |
| Хромка | Михаил Пришвин | 02:15 | 650 |
| Горшеня | Русская народная | 06:40 | 600 |
| Присказка | Мамин-Сибиряк | 00:50 | 600 |
| Мышка | Алексей Николаевич Толстой | 00:45 | 600 |
| Дикий помещик | Салтыков-Щедрин | 14:05 | 600 |
| Синий кинжал | Виктор Драгунский | 03:55 | 600 |
| Садко | Русская народная | 12:35 | 600 |
| Последняя жемчужина | Ганс Христиан Андерсен | 05:00 | 575 |
| Серебряное блюдечко и наливное яблочко | Русская народная | 06:00 | 550 |
| Пляши, куколка, пляши! | Ганс Христиан Андерсен | 01:50 | 540 |
| То, чего не было | Всеволод Гаршин | 08:00 | 501 |
| Серебряная монетка | Ганс Христиан Андерсен | 07:50 | 500 |
| Про Воробья Воробеича, Ерша Ершовича и весёлого трубочиста Яшу | Мамин-Сибиряк | 10:20 | 500 |
| Три счастливчика | Братья Гримм | 05:05 | 500 |
| Лиса | Алексей Николаевич Толстой | 00:55 | 500 |
| Автомобиль | Николай Носов | 03:25 | 500 |
| Что бывало | Борис Житков | 54:00 | 500 |
| Жар-птица и Василиса-царевна | Русская народная | 07:00 | 500 |
| Вольга и Микула Селянинович | Русская народная | 06:05 | 500 |
| Два Ивана-солдатских сына | Русская народная | 19:40 | 450 |
| Бабочка | Сутеев Владимир Григорьевич | 00:50 | 430 |
| Пятеро из одного стручка | Ганс Христиан Андерсен | 06:00 | 425 |
| Ставр Годинович | Русская народная | 12:10 | 420 |
| Ангел | Ганс Христиан Андерсен | 04:35 | 420 |
| Живая шляпа | Николай Носов | 02:20 | 401 |
| Воротничок | Ганс Христиан Андерсен | 04:20 | 400 |
| Умная Гретель | Братья Гримм | 05:05 | 400 |
| Про Воронушку-чёрную головушку и жёлтую птичку Канарейку | Мамин-Сибиряк | 12:30 | 400 |
| Радость | Корней Иванович Чуковский | 00:35 | 400 |
| Картина | Алексей Николаевич Толстой | 01:00 | 400 |
| Бычок — чёрный бочок, белые копытца | Русская народная | 03:35 | 400 |
| Гаечки | Михаил Пришвин | 02:00 | 400 |
| Синюшкин колодец | Павел Бажов | 23:00 | 400 |
| Горный мастер | Павел Бажов | 22:35 | 400 |
| Илья Муромец и Калин-царь | Русская народная | 20:30 | 400 |
| Солдат и царица | Русская народная | 12:20 | 400 |
| Замазка | Николай Носов | 03:35 | 380 |
| Заплатка | Николай Носов | 02:25 | 360 |
| Приключения Бибигона | Корней Иванович Чуковский | 17:25 | 350 |
| Умнее всех | Мамин-Сибиряк | 12:35 | 350 |
| Дочь-семилетка | Русская народная | 04:40 | 350 |
| Старый уличный фонарь | Ганс Христиан Андерсен | 12:25 | 350 |
| Чего только не придумают | Ганс Христиан Андерсен | 05:40 | 350 |
| Иван Гостиный сын | Русская народная | 04:50 | 350 |
| Умная внучка | Русская народная | 10:20 | 350 |
| Затейники | Николай Носов | 01:55 | 340 |
| Карасик | Николай Носов | 08:35 | 320 |
| Ганс Чурбан | Ганс Христиан Андерсен | 06:20 | 300 |
| Храбрый портняжка | Братья Гримм | 09:45 | 300 |
| Кто заговорит первый | Русская народная | 03:55 | 300 |
| Про Козявочку | Мамин-Сибиряк | 05:15 | 300 |
| Скрюченная песня | Корней Иванович Чуковский | 00:30 | 300 |
| Горшок | Алексей Николаевич Толстой | 02:45 | 300 |
| Фантазёры | Николай Носов | 05:50 | 300 |
| Святогор и Илья Муромец | Русская народная | 07:35 | 300 |
| Мишкина каша | Николай Носов | 10:40 | 281 |
| Клякса | Николай Носов | 04:10 | 270 |
| Леденец | Николай Носов | 02:00 | 260 |
| Саша | Николай Носов | 09:10 | 250 |
| Про бабушку старушку | Русская народная | 01:25 | 250 |
| Маленький Клаус и Большой Клаус | Ганс Христиан Андерсен | 21:15 | 250 |
| Федина задача | Николай Носов | 04:15 | 240 |
| Шурик у дедушки | Николай Носов | 07:35 | 230 |
| Находчивость | Николай Носов | 03:20 | 220 |
| Про репку | Николай Носов | 11:20 | 210 |
| Волшебное кольцо | Русская народная | 22:45 | 201 |
| Истинная правда | Ганс Христиан Андерсен | 03:55 | 200 |
| Про Комара Комаровича-длинный нос и про мохнатого Мишу-короткий хвост | Мамин-Сибиряк | 06:50 | 200 |
| Мудрец | Алексей Николаевич Толстой | 01:25 | 200 |
| Прятки | Николай Носов | 03:35 | 200 |
| Топтыгин и лиса | Корней Иванович Чуковский | 02:20 | 200 |
| Что я видел | Борис Житков | 5:17:25 | 200 |
| Медведь на воеводстве | Салтыков-Щедрин | 20:35 | 200 |
| Хрустальный шар | Братья Гримм | 05:40 | 200 |
| Белые амадины | Виктор Драгунский | 10:45 | 200 |
| Вавила и скоморохи | Русская народная | 06:10 | 200 |
| Снежный дом | Алексей Николаевич Толстой | 06:00 | 200 |
| Умей обождать | Константин Ушинский | 01:52 | 200 |
| Три охотника | Николай Носов | 07:20 | 190 |
| Умный мужик | Русская народная | 02:30 | 190 |
| Мена | Русская народная | 03:30 | 180 |
| Тук-тук-тук | Николай Носов | 08:50 | 180 |
| Премудрый пескарь | Салтыков-Щедрин | 10:50 | 180 |
| Есть же разница | Ганс Христиан Андерсен | 06:45 | 180 |
| Сказка о том, кто ходил страху учиться | Братья Гримм | 20:00 | 180 |
| Слово | Русская народная | 04:30 | 170 |
| Бабушка | Ганс Христиан Андерсен | 03:30 | 170 |
| Елена Премудрая | Русская народная | 09:10 | 160 |
| Ветер рассказывает о Вальдемаре До и его дочерях | Ганс Христиан Андерсен | 20:25 | 155 |
| Как лиса с овцой волка наказали | Русская народная | 01:20 | 150 |
| Про храброго Зайца-длинные уши, косые глаза, короткий хвост | Мамин-Сибиряк | 03:45 | 150 |
| Большой морской змей | Ганс Христиан Андерсен | 17:25 | 150 |
| Волшебная дудочка | Русская народная | 04:10 | 140 |
| Петух и жерновцы | Русская народная | 02:45 | 130 |
| Этажи леса | Михаил Пришвин | 03:20 | 130 |
| Хлеб и золото | Арабская сказка | 02:15 | 120 |
| Добрыня и Алёша | Русская народная | 07:00 | 120 |
| Жадный вельможа | Русская народная | 03:55 | 110 |
| Зайкин кораблик | Сутеев Владимир Григорьевич | 02:05 | 110 |
| Счастливое семейство | Ганс Христиан Андерсен | 06:10 | 100 |
| Квикверн | Редьярд Киплинг | 47:25 | 100 |
| Замарашка | Шарль Перро | 11:25 | 100 |
| Царица пчел | Братья Гримм | 04:05 | 100 |
| Про славного царя Гороха | Мамин-Сибиряк | 49:10 | 100 |
| Козел | Алексей Николаевич Толстой | 00:40 | 100 |
| Черепаха | Корней Иванович Чуковский | 00:20 | 100 |
| Болтунья | Русская народная | 02:10 | 100 |
| Вася Весёлкин | Михаил Пришвин | 10:20 | 100 |
| Куриный бульон | Виктор Драгунский | 06:55 | 100 |
| Петушки | Алексей Николаевич Толстой | 01:15 | 91 |
| Аисты | Ганс Христиан Андерсен | 08:50 | 90 |
| Наказанная царевна | Русская народная | 12:00 | 90 |
| Выскочка | Михаил Пришвин | 03:35 | 90 |
| Волшебный холм | Ганс Христиан Андерсен | 12:45 | 85 |
| Карась-идеалист | Салтыков-Щедрин | 20:10 | 81 |
| Белый котик | Редьярд Киплинг | 36:50 | 80 |
| Рачья свадьба | Алексей Николаевич Толстой | 02:15 | 80 |
| Бузинная матушка | Ганс Христиан Андерсен | 14:20 | 80 |
| Заколдованная королевна | Русская народная | 11:35 | 80 |
| Глоток молока | Михаил Пришвин | 00:25 | 80 |
| Кое-что | Ганс Христиан Андерсен | 12:05 | 80 |
| Маленький Тумаи | Редьярд Киплинг | 37:50 | 70 |
| Гречиха | Ганс Христиан Андерсен | 02:55 | 70 |
| Куриный бог | Алексей Николаевич Толстой | 01:15 | 70 |
| Батрак | Русская народная | 06:35 | 70 |
| Говорящий грач | Михаил Пришвин | 01:10 | 70 |
| Сказка об умном мышонке | Самуил Маршак | 03:05 | 70 |
| Слуги её величества | Редьярд Киплинг | 30:45 | 60 |
| Скорый гонец | Русская народная | 10:40 | 60 |
| Гусак | Алексей Николаевич Толстой | 02:10 | 60 |
| Девочка со спичками | Ганс Христиан Андерсен | 04:40 | 60 |
| Сказка о морковке | Ганс Христиан Андерсен | 01:50 | 55 |
| Дорожный товарищ | Ганс Христиан Андерсен | 34:10 | 55 |
| Чудо Пурун Бхагата | Редьярд Киплинг | 30:00 | 50 |
| Что сделала Мура | Корней Иванович Чуковский | 00:20 | 50 |
| Побратимы | Ганс Христиан Андерсен | 17:25 | 50 |
| Мерин | Алексей Николаевич Толстой | 01:30 | 50 |
| Окаменелое царство | Русская народная | 04:45 | 50 |
| Изобретатель | Михаил Пришвин | 05:10 | 50 |
| Две ящерки | Павел Бажов | 28:55 | 50 |
| Синяя свечка | Братья Гримм | 08:15 | 50 |
| Могильщики | Редьярд Киплинг | 43:15 | 40 |
| Райский сад | Ганс Христиан Андерсен | 26:40 | 40 |
| Порточки | Алексей Николаевич Толстой | 01:40 | 40 |
| Деревянный орел | Русская народная | 08:40 | 40 |
| Кот | Михаил Пришвин | 02:05 | 40 |
| Повесть о том, как один мужик двух генералов прокормил | Салтыков-Щедрин | 13:30 | 40 |
| Счастливый Ганс | Братья Гримм | 10:05 | 40 |
| Свинья-копилка | Ганс Христиан Андерсен | 04:10 | 30 |
| Охота за бабочкой | Михаил Пришвин | 01:40 | 30 |
| Нищий и счастье | Арабская сказка | 02:00 | 30 |
| Перо и чернильница | Ганс Христиан Андерсен | 04:05 | 30 |
| Берёза и три сокола | Русская народная | 01:50 | 30 |
| Настоящая невеста | Братья Гримм | 13:15 | 25 |
| Скверный мальчишка | Ганс Христиан Андерсен | 03:25 | 20 |
| Верное средство | Арабская сказка | 01:05 | 20 |
| Синий лапоть | Михаил Пришвин | 04:20 | 20 |
| Коняга | Салтыков-Щедрин | 11:15 | 20 |
| Кривая уточка | Русская народная | 01:10 | 15 |
| Соловей | Ганс Христиан Андерсен | 17:30 | 10 |
| Цветы маленькой Иды | Ганс Христиан Андерсен | 13:30 | 10 |
| Сундук-самолёт | Ганс Христиан Андерсен | 10:30 | 10 |
| Сказка о четырёх глухих | Владимир Одоевский | 07:40 | 10 |
| Старый дом | Ганс Христиан Андерсен | 15:05 | 10 |
| Улитка и роза | Ганс Христиан Андерсен | 03:50 | 10 |
| Весной | Сутеев Владимир Григорьевич | 00:50 | 10 |
| Двенадцать пассажиров | Ганс Христиан Андерсен | 07:45 | 10 |
| Злой князь | Ганс Христиан Андерсен | 04:35 | 10 |
| Неустрашимый царевич | Братья Гримм | 09:15 | 10 |
| Сочневы камешки | Павел Бажов | 17:05 | 5 |
| Приказчиковы подошвы | Павел Бажов | 12:25 | 5 |
| Независимый Горбушка | Виктор Драгунский | 10:15 | 0 |
методов обнаружения | ЛСР | Bio-Rad
ru-ruLUSQ6KKG4Методы обнаруженияМетоды обнаружения / webroot / web / html / lsr / solutions / technologies / western_blottingВ этом разделе представлен обзор различных методов обнаружения, используемых для визуализации белки после иммунодетекции. Теория, лежащая в основе нескольких широко используемых вестерн-блоттингов методы обнаружения, такие как колориметрические, хемилюминесцентные и флуоресцентные методы, и другие менее распространенные методы, такие как хемофлуоресценция, авторадиография и иммунозолото. методы маркировки выделены ниже.
Связанные темы : Антитело Отбор и разбавление , Удаление и Reprobing Membranes и Western Промокание .
Обнаружение белковСвязанные с мембраной белки обычно обнаруживаются с помощью вторичных антител, которые помечены радиоизотопами или коллоидным золотом или конъюгированы с флуоресцентными молекулы (флуорофоры) или фермент, такой как щелочная фосфатаза (AP) или хрен пероксидаза (HRP).В ранних системах блоттинга использовались реагенты с меткой 125 , аналогичные к тем, которые используются в радиоиммуноанализах. Эти системы обеспечивают чувствительные результаты, но особые проблемы обращения с реагентами 125 I и их утилизации не позволяют продолжали использовать эту технику. С тех пор ряд ферментных систем и детекторов реагенты эволюционировали.
Механизм обнаружения химического состава. В каждом методе детекции вестерн-блоттинга, детектируемый сигнал генерируется после связывания антитело, специфичное для интересующего белка. При колориметрическом обнаружении ( A ) сигнал — цветной осадок. При хемилюминесценции ( B ) сама реакция излучает свет.При обнаружении флуоресценции ( C ) антитело помечен флуорофором.
В наиболее распространенных методах обнаружения используются вторичные антитела, конъюгированные с AP или HRP. В этих методах при добавлении ферментного субстрата образуется окрашенный осадок. наносится на блот (колориметрическое определение), хемилюминесцентный или флуоресцентный продукт формируется, и световой сигнал фиксируется на пленке или с помощью цифрового изображения систему (см. рисунок выше).Вторичные антитела, конъюгированные с флуорофорами, набирают популярность и может быть непосредственно визуализирована и захвачена с помощью совместимого тепловизора без необходимость дополнительного жидкого субстрата (см. Флуоресценция Обнаружение ).
Колориметрическое обнаружение Колориметрические системы HRP
Системы HRP имеют преимущество перед
другие системы обнаружения в том, что как ферментный конъюгат, так и колориметрическое обнаружение
субстраты экономичны.Наиболее распространенными субстратами для колориметрической пероксидазы пероксидазы являются 4-хлор-1-нафтол.
(4CN) (Hawkes et al. 1982) и 3,3′-диаминобензидин (DAB) (Tsang et al. 1985) (см.
рисунок ниже). Некоторые ограничения колориметрических систем обнаружения HRP уменьшены.
чувствительность по сравнению с колориметрическими системами обнаружения AP, исчезновение пятен при
воздействие света, ингибирование активности HRP азидом и неспецифическое цветное осаждение.
Ферменты, такие как AP и HRP, превращают несколько субстратов в окрашенный осадок. (см. таблицу ниже). Поскольку осадок накапливается на пятне, появляется цветной сигнал, который легко увидеть на пятне. Ферментативный реакция может быть отслежена и остановлена при достижении желаемого сигнала над фоном. Колориметрическое обнаружение проще в использовании, чем методы обнаружения на основе пленки, которые требуют метод проб и ошибок при определении подходящего времени воздействия и использование дорогостоящих материалов такие как рентгеновская пленка и химикаты для фотолаборатории.Колориметрическое обнаружение считается метод средней чувствительности по сравнению с радиоактивным или хемилюминесцентным детектированием.
Параметры колориметрического обнаружения с помощью HRP. DAB и 4CN — это обычно используемые хромогенные субстраты для HRP. В присутствии H 2 O 2 , HRP катализирует окисление субстрата до продукта, который виден на блоте. Слева реакция с DAB; правильно, реакция с 4CN.
Колориметрические системы AP
В колориметрических системах AP используется растворимый 5-бром-4-хлор-3-индолилфосфат (BCIP). и нитросиний тетразолий (NBT) в качестве субстратов для получения стабильного продукта реакции которые не исчезнут (см. рисунок ниже).AP может быть легко деактивирован воздействием кислые растворы. Множественное зондирование одной и той же мембраны альтернативным антителом датчики могут быть выполнены с использованием подложек разного цвета, например, синего цвета. и красный (Блейк и др. 1984, Тернер 1983, Куриен и Скофилд 2003).
Колориметрическая проявка AP. В колориметрической система AP катализирует субстраты BCIP и NBT с образованием окрашенного осадка. визуализация белка на вестерн-блоте. Сначала дефосфорилирование BCIP с помощью AP происходит, давая промежуточное соединение бромхлориндоксила. Затем индоксил окисляется. с помощью NBT для получения индигоидного красителя (пурпурный осадок).НБТ также снижается на индоксил, раскрывающий тетразольное кольцо с образованием нерастворимого диформазана (синий осадок). Комбинация индигоидного красителя BCIP и нерастворимого формазана NBT образует осадок пурпурно-синего цвета.
Колориметрические и хемилюминесцентные блоты. Разведение слитого белка GST иммунодетектировали с использованием моноклональных антител, специфичных к GST, за которым следует A , вторичное антитело, конъюгированное с AP, и BCIP / NBT. субстрат для колориметрического обнаружения или B вторичный конъюгированный с HRP антитела и Immun-Star & trade; WesternC и торговля; хемилюминесцентный субстрат для хемилюминесценции обнаружение.
Колориметрические системы обнаружения
| Обнаружение Метод | Подложка | Обнаружение Чувствительность | Сигнал Цвет | Продукт Параметры | Преимущества | ||
| Обнаружение и подложка | |||||||
| Иммуноблоттинг Наборы для анализа | Наборы | Сухой Порошок | |||||
| Колориметрический HRP | 4CN | 500 стр. | Фиолетовый | X | X | X | Быстрое проявление цвета, низкая стоимость, низкая фоновая активность ферментов |
| Колориметрический HRP | DAB | 500 стр. | Коричневый | & nbsp; | & nbsp; | X | Нерастворимый продукт, легко образующий хелат с четырехокиси осмия.Чувствительность может быть усилен добавлением металлов |
| Колориметрический HRP | Opti-4CN & trade; | 100 стр. | Фиолетовый | X | & nbsp; | & nbsp; | Высокая чувствительность, немеркнущий цвет, низкий фон |
| Колориметрический HRP | Opti-4CN с усилением | 5 стр. | Фиолетовый | X | & nbsp; | & nbsp; | Наилучшая доступная чувствительность & mdash; равный хемилюминесценции; Комплект предоставляет все необходимые компоненты |
| Колориметрическая точка доступа | BCIP / NBT | 100 стр. | Фиолетовый | X | X | X | Высокая чувствительность |
Предварительно смешанный индивидуальный колориметрический субстрат
Предварительно смешанный
наборы ферментных субстратов и реактивы для проявления, в том числе порошковые 4CN и DAB красители
реагенты проявки, также доступны.Готовые наборы удобны и надежны,
и они снижают воздействие опасных реагентов, используемых для окрашивания белков.
кляксы.
Иммуноблот & reg; Наборы для анализа
Иммун-Блот
наборы для анализа содержат реагенты, необходимые для стандартной колориметрии HRP / 4CN или AP.
обнаружение на вестерн-блоттинге с дополнительным удобством предварительно смешанных буферов и ферментов
подложки.Кроме того, эти наборы содержат вторичные антитела, конъюгированные с
HRP или AP. Все компоненты набора проходят индивидуальную проверку качества при применении блоттинга.
В каждый комплект входит инструкция по эксплуатации с тщательно протестированным протоколом и
руководство по поиску и устранению неисправностей, которое упрощает иммунологическое выявление.
Opti-4CN & trade; и усиленный Opti-4CN субстрат и комплекты обнаружения
Колориметрическое обнаружение HRP с 4CN уже предлагает очень низкий фон и обнаружение
чувствительность около
500 пг антигена. Opti-4CN от Bio-Rad
kit увеличивает эту чувствительность обнаружения до 100 пг. Opti-4CN доступен как
предварительно смешанный набор субстратов или в сочетании с антителом, конъюгированным с HRP, при обнаружении
комплект.
усиленный Субстрат Opti-4CN и наборы для обнаружения основаны на запатентованной HRP-активируемой амплификации. реагенты от Bio-Rad.Эти наборы позволяют колориметрическое обнаружение до 5 пг, сопоставление или даже превышающая чувствительность, достигаемую радиометрической и некоторой хемилюминесценцией системы, но без затрат или времени на разработку блотов в темной комнате.
Обнаружение хемилюминесценцииХемилюминесценция возникает, когда химический субстрат катализируется ферментом, например как AP или HRP, и производит свет как побочный продукт [см. рисунки выше].Световой сигнал могут быть захвачены на рентгеновской пленке или с помощью устройства формирования изображения с зарядовой связью (ПЗС), такого как Система ChemiDoc XRS + и ChemiDoc MP System . Эта технология легко адаптируется к существующим процедурам вестерн-блоттинга, поскольку хемилюминесценция использует конъюгированные с ферментом антитела для активации светового сигнала.Методы блокировки и промывки знакомы.
Преимущества хемилюминесцентного вестерн-блоттинга по сравнению с другими методами — скорость и чувствительность (см. таблицу ниже). Этот метод идеален для ПЗС-изображений, для которых типичное время экспозиции блотов составляет от 5 секунд до 5 минут, в зависимости от от чувствительности субстрата. Это большое улучшение по сравнению с 125 I системы, которым может потребоваться до 48 часов для экспонирования пленки.Обнаружение протеина вниз к суммам фемтограмм возможно с этими системами. Это более чувствительно, чем большинство колориметрические системы и сопоставимы с радиоизотопным детектированием. Чувствительность обнаружения зависит от аффинности белка, первичного антитела, вторичного антитела и Субстрат HRP и может варьироваться от образца к образцу.
Системы обнаружения хемилюминесценции
| Метод обнаружения | Подложка | Чувствительность обнаружения | Параметры продукта | Преимущества | Недостатки |
| Хемилюминесцентный HRP | |||||
| Immun-Star HRP | Люминол | 1 & ndash; 3 стр. | Конъюгаты | Короткая (30 секунд) выдержка | Азид подавляет активность ферментов |
| & nbsp; | & nbsp; | субстрат HRP | Продолжительность сигнала 6 & ndash; 8 часов | & nbsp; | |
| & nbsp; | & nbsp; | Наборы для иммуноблоттинга | Совместим с ПВДФ и нитроцеллюлозой | ||
| Рабочий раствор стабилен в течение 24 часов при комнатной температуре | |||||
| Immun-Star WesternC | Люминол | Фемтограмма | Конъюгаты | Продолжительность сигнала до 24 часов | Азид подавляет активность ферментов |
| Оптимизирован для устройств формирования изображений ПЗС | |||||
| Высокая чувствительность | |||||
| Хемилюминесцентный AP | |||||
| AP Immun-Star | CDP- звездочка | 10 стр. | Конъюгаты | От 30 секунд до 5 минут | Эндогенная фосфатаза активность может привести к ложным срабатываниям |
| Подложка AP | Продолжительность сигнала до 24 часов | ||||
| Наборы для иммуноблоттинга | Блот можно активировать повторно | ||||
Безопасность — еще одно преимущество хемилюминесцентного обнаружения.У него нет проблемы безопасности, связанные с обнаружением изотопов, такие как воздействие на персонал радиация, высокие затраты и экологические проблемы.
Иммун-Стар и трейд; Наборы для хемилюминесценции
Наборы Immun-Star
включают субстрат CDP-Star (активируется AP) или люминол (активируется HRP)
и производят сильный сигнал как на нитроцеллюлозе, так и на ПВДФ.Световой сигнал генерируется
с наборами Immun-Star не только обеспечивает быстрое воздействие, но и длится столько же, сколько и
24 часа ( Immun-Star & trade;
AP Kits ) после первоначальной активации блота.Эти кляксы можно реагировать с помощью
свежий субстрат, даже через несколько недель после исчезновения сигнала. Их также можно раздеть
и переодевались несколько раз.
Набор для хемилюминесценции Immun-Star WesternC разработан для использования с Точность Плюс протеин и торговля; WesternC и торговля; стандарты и системы визуализации ПЗС.Это предлагает чувствительность на уровне фемтограммы и совместимость с любыми антителами, конъюгированными с HRP (см. Рисунок ниже). Обеспечивается высокая интенсивность сигнала, оптимизированная для визуализации на ПЗС-матрице.
Обнаружение антигена и точность Стандарты Plus Protein WesternC с использованием хемилюминесцентного детектора Immun-Star WesternC комплект .Белки и 5 мкл белковых стандартов (дорожка 1) и серия разведений из E. coli клеточный лизат (дорожки 2 & ndash; 6) подвергали электрофорезу на 4 & ndash; 20% Критерий и торговля; гель и перенесен на нитроцеллюлозную мембрану. Блот зондировали с антителом, специфичным для слитых белков GST, за которым следует вторичный конъюгированный с HRP антитело и конъюгат StrepTactin-HRP.После 5-минутной инкубации в Immun-Star Решение для обнаружения WesternC, блот визуализировали на тепловизоре ChemiDoc XRS + в течение 5 секунд.
Обнаружение флуоресценцииПри обнаружении флуоресценции первичное или вторичное антитело, меченное флуорофором. используется при иммунодетекции.Источник света возбуждает флуорофор и излучаемый флуоресцентный сигнал фиксируется камерой для получения окончательного изображения. Во флуоресценции фотон высокой энергии (hv ex ) возбуждает флуорофор, заставляя его уйти основное состояние (S 0 ) и перейти в состояние с более высокой энергией (S ‘ 1 ). Часть этой энергии рассеивается, позволяя флуорофору войти в расслабленное возбужденное состояние. состояние (S 1 ).Излучается фотон света (hv ex ), возвращающий флуорофор в основное состояние. Испускаемый фотон имеет более низкую энергию (большую длину волны) из-за рассеивания энергии в возбужденном состоянии.
При использовании детектирования флуоресценции учитывайте следующие оптические характеристики. флуорофоров для оптимизации сигнала:
- Квантовый выход — эффективность испускания фотонов после поглощения. фотона.Процессы, которые возвращают флуорофор в основное состояние, но не в результате испускания флуоресцентного фотона снижается квантовый выход. Флуорофоры с более высокими квантовыми выходами, как правило, ярче
- Коэффициент экстинкции — показатель того, насколько хорошо флуорофор поглощает свет определенной длины волны. Поскольку поглощение зависит от длины пути и концентрации (закон Бера) коэффициент экстинкции обычно выражается в см -1 M -1 .& nbsp; Как и в случае с квантовым выходом, флуорофоры с более высокими коэффициентами экстинкции являются обычно ярче
- Стоксов сдвиг — разница в максимальном возбуждении и длины волн излучения флуорофора. Поскольку некоторая энергия рассеивается, пока флуорофор находится в возбужденном состоянии, испускаемые фотоны имеют меньшую энергию (большую длину волны), чем свет, используемый для возбуждения.Большие стоксовы сдвиги минимизируют перекрытие между возбуждением и длины волн излучения, увеличивающие детектируемый сигнал
- Спектры возбуждения и испускания & mdash; спектры возбуждения графики интенсивности флуоресценции флуорофора в диапазоне возбуждения длины волн; Спектры излучения показывают длины волн излучения флуоресцирующей молекулы.Выберите флуорофоры, которые могут возбуждаться источником света в тепловизоре и которые имеют спектры излучения, которые могут быть зафиксированы прибором. При выполнении мультиплексного Вестерны, выбирайте флуорофоры с минимально перекрывающимися спектрами, чтобы избежать канала перекрестные помехи
Несколько флуорофоров, охватывающих широкий диапазон длин волн возбуждения и излучения. теперь доступны, в том числе на основе органических красителей (например, цианина и флуоресцеин), нанокристаллы полупроводникового материала и естественно флуоресцентные белки (например, фикобилипротеины, такие как фикоэритрин и аллофикоцианин).
Обнаружение флуоресценции (см. рисунок ниже) имеет ряд преимуществ по сравнению с другими методы:
- Мультиплексирование — использование нескольких и разноцветных флуорофоры для одновременного обнаружения нескольких белков-мишеней на одном блоте. При обнаружении нескольких белков с помощью флуоресцентного мультиплексного вестерн-блоттинга убедитесь, что флуоресцентные сигналы, генерируемые для каждого белка, можно дифференцировать.Использовать первичный антитела от разных видов хозяев (например, мыши и кролика) и вторичные антитела, которые перекрестно абсорбируются против других видов, чтобы избежать перекрестной реактивности. Используйте флуорофоры, конъюгированные со вторичными антителами с различными спектрами, чтобы они можно оптически отличать друг от друга, чтобы избежать перекрестной флуоресценции.
- Динамический диапазон — в 10 раз больший динамический диапазон по сравнению с хемилюминесценцией. обнаружение и, следовательно, лучшая линейность в пределах обнаружения
- Стабильность & mdash; многие флуоресцентные молекулы стабильны в течение длительный период времени, позволяющий сохранять кляксы для последующего повторного отображения & ndash; часто через несколько недель или месяцев & ndash; без значительной потери сигнала.Наибольшая флуоресценция методы также совместимы с протоколами снятия изоляции и повторного зондирования при условии, что Блоты не должны высыхать между последовательными раундами обнаружения вестерн-блоттинга.
& nbsp;
Обнаружение мультиплексной флуоресценции серии двукратных разведений двух белков, GST (красный) и ингибитора трипсина сои (зеленый). Начальная концентрация составляла 500 нг каждого белка. Точность Плюс Белок и торговля; WesternC и торговля; стандарты использовались в качестве маркеров.
Другие методы обнаружения Биолюминесценция
Биолюминесценция — это естественное излучение света.
многими организмами.Биолюминесцентные системы различаются по структуре и функциям
ферменты и кофакторы, участвующие в процессе, а также механизм генерации света
реакции. Биолюминесценция также используется как метод обнаружения белков и нуклеиновых кислот.
кислоты на мембране.
Обнаружение биолюминесценции включает инкубацию мембраны (со связанным антиген-антитело-фермент комплекс) в биолюминогенном субстрате и одновременное измерение излучаемого света (см. рисунок ниже).Субстрат, участвующий в этом обнаружении система представляет собой производное на основе люциферина. Детектирование света осуществляется с помощью подсчета фотонов. камера и промокшие белки визуализируются в виде ярких пятен. Эта техника похожа на хемилюминесценцию по своей чувствительности и скорости обнаружения, но широко не используются, и некоторые биолюминогенные субстраты коммерчески доступны. ПВДФ является предпочтительной мембраной для обнаружения биолюминесценции, поскольку нитроцеллюлозные мембраны могут содержать вещества, подавляющие активность люциферазы.
Хемифлуоресценция
Хемифлуоресценция — это ферментативное превращение
подложки к флуоресцентному продукту (см. рисунок ниже).
Флуорогенные соединения (нефлуоресцентные или слабо флуоресцентные вещества, которые могут быть
преобразованы в флуоресцентные продукты) доступны для использования с широким спектром ферментов,
включая AP и HRP.Фермент отщепляет фосфатную группу от флуорогенного субстрата.
чтобы получить высоко флуоресцентный продукт. Флуоресценцию можно обнаружить с помощью флуоресценции.
имидж-сканер, такой как PharosFX System или ChemiDoc
Система МП . Хемифлуоресценция обеспечивает стабильный флуоресцентный продукт реакции, поэтому
пятна можно сканировать позже. Этот метод также совместим со стандартными
процедуры зачистки и повторного зондирования.
Авторадиография
Гамма-излучающий радиоизотоп 125 I
может использоваться для маркировки лизинов в иммуноглобулинах для радиометрического обнаружения антигенов
(см. рисунок ниже). Прямое иммунологическое обнаружение (с использованием
меченые вторичные антитела) всего 1 мкг точечного иммуноглобулина
с высокой удельной активностью 125 I. зонды.Помеченные радиоактивным изотопом пятна могут быть обнаружены
используя рентгеновскую пленку, метод, известный как авторадиография. Из-за связанных опасностей
с радиоактивно меченными конъюгатами популярность авторадиографии снижается в пользу
колориметрических и хемилюминесцентных методов.
Маркировка иммунным золотом
В методах обнаружения иммунного золота используются
меченные золотом вторичные антитела для обнаружения антигена.Поскольку этот метод имеет относительно
низкая чувствительность и непостоянный сигнал, методы усиления серебра аналогичны
к описанным для окрашивания общего белка коллоидного золота были разработаны как средство
усиления сигнала (см. рисунок ниже). При использовании серебра фон создается на
блот и чувствительность увеличиваются в 10 раз, что эквивалентно колориметрическому обнаружению AP
и в несколько раз более чувствительна, чем авторадиография.
Механизм обнаружения химического состава. При обнаружении биолюминесценции ( A ) сама ферментативная реакция испускает свет, в то время как в хемофлуоресценции ( B ) продукт реакции флуоресцентный.При авторадиографии ( C ) само вторичное антитело несет радиоактивную метку, а в маркировке иммунозолота ( D ) вторичные антитела помечены золотом, а сигнал усиливается осаждением серебра.
СсылкиБайер Э.А. и Вильчек М. (1980). Использование авидин-биотинового комплекса в качестве инструмента в молекулярная биология.Методы Biochem Anal 26, 1 & ndash; 45.
Блейк М.С. и др. (1984). Быстрый и чувствительный метод обнаружения конъюгированной щелочной фосфатазой анти-антитела на Вестерн-блоттинге. Anal Biochem 136, 175 & ndash; 179.
Чайет Л. и Вольф Ф. Дж. (1964). Свойства стрептавидина, биотин-связывающего белка производится Streptomyces. Arch Biochem Biophys 106, 1 & ndash; 5.
Гесдон Дж. Л. и др.(1979). Использование авидин-биотинового взаимодействия в иммуноферментных техники. J Histochem Cytochem 27, 1131 & ndash; 1139.
Хоукс Р. и др. (1982). Анализ точечного иммунного связывания для моноклональных и других антител. Anal Biochem 119, 142 & ndash; 147.
Хсу С.М. и др. (1981). Использование комплекса авидин-биотин-пероксидаза (ABC) в иммунопероксидазе методы: сравнение процедур ABC и немеченых антител (PAP).J Histochem Cytochem 29, 577 & ndash; 580.
Куриен Б.Т. и Скофилд Р.Х. (2003 г.). Белковый блоттинг: обзор. J Immunol методы 274, 1 & ndash; 15.
Цанг В.К. и др. (1985). Иммуноэлектротрансферный блот с ферментом (EITB). В ферментно-опосредованном Иммуноанализ. T.T. Ngo и H.M. Ленхофф, ред. (Нью-Йорк: Plenum Press), стр. 389 & ndash; 414.
Протоколы| Число | Описание | Параметры |
|---|---|---|
| 6216 | Состав буфера для обнаружения | Нажмите, чтобы загрузить |
| 6218 | Удаление пятен & amp; Репробирование | Нажмите, чтобы загрузить |
| 6219 | Иммунодетекция | Нажмите, чтобы загрузить |
В этом разделе представлен обзор различных методов обнаружения, используемых для визуализации белков после иммунодетекции.Теория, лежащая в основе нескольких широко используемых методов обнаружения вестерн-блоттинга, таких как колориметрические, хемилюминесцентные и флуоресцентные методы, а также других менее распространенных методов, таких как хемифлуоресценция, авторадиография и методы мечения иммунным золотом, освещена ниже.
Связанные темы : Отбор и разведение антител, удаление и повторное зондирование мембран и вестерн-блоттинг.
Содержание страницы
Мембранно-связанные белки обычно обнаруживаются с помощью вторичных антител, меченных радиоизотопами или коллоидным золотом, или конъюгированных с флуоресцентными молекулами (флуорофорами) или ферментом, таким как щелочная фосфатаза (AP) или пероксидаза хрена (HRP).В ранних системах блоттинга использовались реагенты, меченные 125 I, аналогичные тем, которые используются в радиоиммуноанализах. Эти системы обеспечивают чувствительные результаты, но особые проблемы обращения с реагентами 125 I и их утилизации препятствуют дальнейшему использованию этого метода. С тех пор был разработан ряд ферментных систем и реагентов для обнаружения.
Механизм обнаружения химии. В каждом методе вестерн-блоттинга детектируемый сигнал генерируется после связывания антитела, специфичного для интересующего белка.При колориметрическом обнаружении ( A ) сигнал представляет собой окрашенный осадок. При хемилюминесценции ( B ) сама реакция излучает свет. При обнаружении флуоресценции ( C ) антитело метят флуорофором.
Наиболее распространенные методы обнаружения используют вторичные антитела, конъюгированные с AP или HRP. В этих методах, когда добавляется ферментный субстрат, либо окрашенный осадок осаждается на блоте (колориметрическое обнаружение), либо образуется хемилюминесцентный или флуоресцентный продукт, и световой сигнал фиксируется на пленке или с помощью системы цифрового изображения (см. Рисунок выше. ).Вторичные антитела, конъюгированные с флуорофорами, набирают популярность и могут быть непосредственно визуализированы и захвачены совместимым имидж-сканером без необходимости в дополнительном жидком субстрате (см. Обнаружение флуоресценции).
Колориметрические системы HRP
Системы HRP имеют преимущество перед другими системами обнаружения в том, что как ферментный конъюгат, так и субстраты для колориметрического обнаружения являются экономичными. Наиболее распространенными субстратами для колориметрической HRP являются 4-хлор-1-нафтол (4CN) (Hawkes et al.1982) и 3,3′-диаминобензидин (DAB) (Tsang et al. 1985) (см. Рисунок ниже). Некоторыми ограничениями колориметрических систем обнаружения HRP являются пониженная чувствительность по сравнению с колориметрическими системами обнаружения AP, исчезновение пятен под воздействием света, ингибирование активности HRP азидом и неспецифическое окрашивание.
Ферменты, такие как AP и HRP, превращают несколько субстратов в окрашенный осадок (см. Таблицу ниже). По мере того, как осадок накапливается на пятне, появляется цветной сигнал, который легко виден глазом на пятне.Ферментативную реакцию можно отслеживать и останавливать, когда желаемый сигнал превышает фон. Колориметрическое обнаружение проще в использовании, чем методы обнаружения на основе пленки, которые требуют проб и ошибок при определении подходящего времени экспонирования и используют дорогостоящие материалы, такие как рентгеновская пленка и химические вещества для фотолаборатории. Колориметрическое обнаружение считается методом средней чувствительности по сравнению с радиоактивным или хемилюминесцентным обнаружением.
Колориметрические возможности обнаружения с помощью HRP. DAB и 4CN — обычно используемые хромогенные субстраты для HRP. В присутствии H 2 O 2 HRP катализирует окисление субстрата до продукта, который виден на блоте. Слева реакция с DAB; справа, реакция с 4CN.
Колориметрические системы AP
Колориметрические системы AP используют растворимый 5-бром-4-хлор-3-индолилфосфат (BCIP) и нитросиний тетразолий (NBT) в качестве субстратов для получения стабильного продукта реакции, который не тускнеет (см. Рисунок ниже).АП можно легко инактивировать воздействием кислых растворов. Множественное зондирование одной и той же мембраны с помощью альтернативных зондов антител можно проводить с использованием субстратов, которые производят разные цвета, такие как синий и красный (Blake et al. 1984, Turner 1983, Kurien and Scofield 2003).
Колориметрическая проявка AP. В колориметрической системе АР катализирует субстраты BCIP и NBT с образованием окрашенного осадка, визуализирующего белок на вестерн-блоттинге. Сначала происходит дефосфорилирование BCIP с помощью AP с образованием промежуточного бромхлориндоксила.Затем индоксил окисляется NBT с образованием индигоидного красителя (пурпурный осадок). NBT также восстанавливается индоксилом, раскрывая тетразольное кольцо с образованием нерастворимого диформазана (синий осадок). Комбинация индигоидного красителя BCIP и нерастворимого формазана NBT образует осадок пурпурно-синего цвета.
Колориметрические и хемилюминесцентные блоты. Разведение слитого белка GST было иммунодетектировано с использованием моноклонального антитела, специфичного к GST, за которым следовало A , АР-конъюгированное вторичное антитело и субстрат BCIP / NBT для колориметрического обнаружения, или B , вторичное антитело, конъюгированное с HRP, и Хемилюминесцентный субстрат Immun-Star ™ WesternC ™ для хемилюминесцентного обнаружения.
Колориметрические системы обнаружения
| Обнаружение и подложка | |||||||
| Наборы для иммуноблоттинга | Комплекты | Сухой порошок | |||||
| Колориметрический HRP | 4CN | 500 стр. | фиолетовый | х | х | х | Быстрое проявление цвета, низкая стоимость, низкая фоновая активность ферментов |
| Колориметрический HRP | DAB | 500 стр. | Коричневый | х | Нерастворимый продукт, легко образует хелат с четырехокиси осмия.Чувствительность можно дополнительно повысить, добавив металлы | ||
| Колориметрический HRP | Opti-4CN ™ | 100 стр. | фиолетовый | х | Высокая чувствительность, немеркнущие цвета, низкий фон | ||
| Колориметрический HRP | Opti-4CN с усилителем | 5 стр. | фиолетовый | х | Наилучшая доступная чувствительность — соответствует хемилюминовой способности; комплект содержит все необходимые компоненты | ||
| Колориметрическая AP | BCIP / NBT | 100 стр. | фиолетовый | х | х | х | Высокая чувствительность |
Предварительно смешанный и индивидуальный колориметрический субстрат
Также доступны наборы предварительно смешанных ферментных субстратов и реактивы для проявления, включая порошковые реагенты для проявления цвета 4CN и DAB.Предварительно приготовленные наборы удобны и надежны, и они снижают воздействие опасных реагентов, используемых при окрашивании белковых блотов.
Immun-Blot ® Наборы для анализа
Наборы для анализа Immun-Blot предоставляют реагенты, необходимые для стандартного колориметрического определения HRP / 4CN или AP на вестерн-блотах, с дополнительным удобством предварительно смешанных буферов и ферментных субстратов. Кроме того, эти наборы содержат вторичные антитела, конъюгированные с HRP или AP. Все компоненты набора проходят индивидуальную проверку качества при применении блоттинга.В каждый комплект входит инструкция по эксплуатации с тщательно протестированным протоколом и руководством по поиску и устранению неисправностей, упрощающее иммунологическое выявление.
Opti-4CN ™ и усиленный Opti-4CN субстрат и комплекты для обнаружения
Колориметрическое обнаружение HRP с 4CN уже предлагает очень низкий фон и чувствительность обнаружения около
500 пг антигена. Комплект Opti-4CN от Bio-Rad повышает эту чувствительность обнаружения до 100 пг. Opti-4CN доступен в виде предварительно смешанного набора субстратов или в сочетании с антителом, конъюгированным с HRP, в наборе для обнаружения.
Амплифицированный субстрат Opti-4CN и наборы для обнаружения основаны на патентованных реактивах для амплификации, активируемых HRP, от Bio-Rad. Эти наборы позволяют колориметрическое обнаружение до 5 пг, что соответствует или даже превышает чувствительность, достигаемую с помощью радиометрических и некоторых хемилюминесцентных систем, но без затрат или времени, связанных с проявлением блотов в темной комнате.
Хемилюминесценция возникает, когда химический субстрат катализируется ферментом, таким как AP или HRP, и производит свет в качестве побочного продукта [см. Рисунки выше].Световой сигнал может быть записан на рентгеновскую пленку или с помощью устройства формирования изображения с зарядовой связью (CCD), такого как ChemiDoc XRS + System и ChemiDoc MP System. Эта технология легко адаптируется к существующим процедурам вестерн-блоттинга, поскольку хемилюминесценция использует конъюгированные с ферментом антитела для активации светового сигнала. Методы блокировки и промывки — знакомые процедуры.
Преимуществами хемилюминесцентного вестерн-блоттинга перед другими методами являются скорость и чувствительность (см. Таблицу ниже). Этот метод идеально подходит для получения изображений на ПЗС-матрице, время воздействия которых обычно составляет от 5 секунд до 5 минут, в зависимости от чувствительности подложки.Это большое улучшение по сравнению с системами 125 I, для экспонирования которых может потребоваться до 48 часов. С помощью этих систем возможно определение количества белка до фемтограмм. Это более чувствительно, чем большинство колориметрических систем, и сравнимо с радиоизотопным обнаружением. Чувствительность обнаружения зависит от аффинности белка, первичного антитела, вторичного антитела и субстрата HRP и может варьироваться от одного образца к другому.
Системы обнаружения хемилюминесценции
| Метод обнаружения | Подложка | Чувствительность обнаружения | Опции продукта | Преимущества | Недостатки |
| Хемилюминесцентный HRP | |||||
| Иммун-Стар HRP | Люминол | 1–3 стр. | Конъюгаты | Короткая (30 сек) выдержка | Азид подавляет активность ферментов |
| Субстрат HRP | Продолжительность сигнала 6–8 часов | ||||
| Наборы для иммуноблоттинга | Совместим с ПВДФ и нитроцеллюлозой | ||||
| Рабочий раствор, стабильный в течение 24 часов при комнатной температуре | |||||
| Иммун-Стар WesternC | Люминол | Фемтограмма | Конъюгаты | Продолжительность сигнала до 24 часа | Азид подавляет активность ферментов |
| Оптимизирован для ПЗС-изображений | |||||
| Высокая чувствительность | |||||
| Хемилюминесцентный AP | |||||
| Иммун-Стар AP | CDP- Звезда | 10 стр. | Конъюгаты | Экспозиция от 30 секунд до 5 минут | Активность эндогенной фосфатазы может приводить к ложноположительным результатам |
| AP подложка | Продолжительность сигнала до 24 часа | ||||
| Наборы для иммуноблоттинга | Блот можно реактивировать | ||||
Безопасность — еще одно преимущество хемилюминесцентного обнаружения.У него нет проблем безопасности, связанных с обнаружением изотопов, таких как облучение персонала радиацией, высокие затраты и экологические проблемы.
Наборы для хемилюминесценции Immun-Star ™
Наборы Immun-Star включают либо субстрат CDP-Star (активированный AP), либо люминол (активируемый HRP) и производят сильный сигнал как на нитроцеллюлозе, так и на PVDF. Световой сигнал, генерируемый наборами Immun-Star, не только обеспечивает быстрое воздействие, но и длится до 24 часов (наборы Immun-Star ™ WesternC ™ Chemiluminescence Kit и Immun-Star ™ AP) после начальной активации блоттинга.Эти блоты могут реагировать со свежим субстратом даже через несколько недель после исчезновения сигнала. Их также можно снимать и переодевать несколько раз.
Набор для хемилюминесценции Immun-Star WesternC разработан для использования со стандартами Precision Plus Protein ™ WesternC ™ и системами визуализации CCD. Он обеспечивает чувствительность на уровне фемтограмм и совместимость с любыми антителами, конъюгированными с HRP (см. Рисунок ниже). Обеспечивается высокая интенсивность сигнала, оптимизированная для визуализации ПЗС.
Обнаружение антигена и стандартов Precision Plus Protein WesternC с использованием набора для хемилюминесцентного обнаружения Immun-Star WesternC .Белки и 5 мкл белковых стандартов (дорожка 1) и серии разведений лизата клеток E. coli (дорожки 2–6) подвергали электрофорезу на 4–20% геле Criterion ™ и переносили на нитроцеллюлозную мембрану. Блот анализировали антителом, специфичным для слитых белков GST, а затем вторичным антителом, конъюгированным с HRP, и конъюгатом StrepTactin-HRP. После 5-минутной инкубации в растворе для обнаружения Immun-Star WesternC блот визуализировали на имидж-сканере ChemiDoc XRS + в течение 5 секунд.
При обнаружении флуоресценции во время иммунодетекции используется первичное или вторичное антитело, меченное флуорофором.Источник света возбуждает флуорофор, и излучаемый флуоресцентный сигнал фиксируется камерой для получения окончательного изображения. При флуоресценции фотон высокой энергии (hv ex ) возбуждает флуорофор, заставляя его покинуть основное состояние (S 0 ) и перейти в состояние с более высокой энергией (S ‘ 1 ). Часть этой энергии рассеивается, позволяя флуорофору перейти в расслабленное возбужденное состояние (S 1 ). Излучается фотон света (hv ex ), возвращающий флуорофор в основное состояние.Испускаемый фотон имеет более низкую энергию (большую длину волны) из-за рассеивания энергии в возбужденном состоянии.
При использовании детектирования флуоресценции учитывайте следующие оптические характеристики флуорофоров для оптимизации сигнала:
- Квантовый выход — эффективность испускания фотона после поглощения фотона. Процессы, которые возвращают флуорофор в основное состояние, но не приводят к испусканию флуоресцентного фотона, снижают квантовый выход.Флуорофоры с более высоким квантовым выходом обычно ярче
- Коэффициент экстинкции — показатель того, насколько хорошо флуорофор поглощает свет определенной длины волны. Поскольку поглощение зависит от длины пути и концентрации (закон Бера), коэффициент экстинкции обычно выражается в см -1 M -1 . Как и в случае квантового выхода, флуорофоры с более высоким коэффициентом экстинкции обычно ярче
- Стоксов сдвиг — разность максимальных длин волн возбуждения и излучения флуорофора.Поскольку некоторая энергия рассеивается, когда флуорофор находится в возбужденном состоянии, испускаемые фотоны имеют меньшую энергию (большую длину волны), чем свет, используемый для возбуждения. Большие стоксовы сдвиги минимизируют перекрытие между длинами волн возбуждения и излучения, увеличивая обнаруживаемый сигнал
- Спектры возбуждения и излучения — Спектры возбуждения представляют собой графики интенсивности флуоресценции флуорофора в диапазоне длин волн возбуждения; Спектры излучения показывают длины волн излучения флуоресцирующей молекулы.Выберите флуорофоры, которые могут возбуждаться источником света в тепловизоре и которые имеют спектры излучения, которые может регистрировать прибор. При выполнении мультиплексных вестернов выбирайте флуорофоры с минимально перекрывающимися спектрами, чтобы избежать перекрестных помех каналов
В настоящее время доступно несколько флуорофоров, охватывающих широкий диапазон длин волн возбуждения и излучения, в том числе некоторые на основе органических красителей (например, цианина и флуоресцеина), нанокристаллов полупроводникового материала и естественно флуоресцентных белков (например, фикобилипротеинов, таких как фикоэритрин и аллофикоцианин. ).
Обнаружение флуоресценции (см. Рисунок ниже) имеет ряд преимуществ по сравнению с другими методами:
- Мультиплексирование — использование нескольких флуорофоров разного цвета для одновременного обнаружения нескольких целевых белков на одном блоте. При обнаружении нескольких белков в мультиплексном флуоресцентном вестерн-блоте убедитесь, что флуоресцентные сигналы, генерируемые для каждого белка, можно дифференцировать. Используйте первичные антитела от разных видов хозяев (например, мыши и кролика) и вторичные антитела, которые перекрестно абсорбируются против других видов, чтобы избежать перекрестной реактивности.Используйте флуорофоры, конъюгированные со вторичными антителами с различными спектрами, чтобы их можно было оптически отличить друг от друга, чтобы избежать перекрестной флуоресценции
- Динамический диапазон — В 10 раз больший динамический диапазон по сравнению с обнаружением хемилюминесценции и, следовательно, лучшая линейность в пределах обнаружения
- Стабильность — Многие флуоресцентные молекулы стабильны в течение длительного периода времени, что позволяет сохранять блоты для последующего повторного отображения — часто через несколько недель или месяцев — без значительной потери сигнала.Большинство методов флуоресценции также совместимы с протоколами стриппинга и повторного зондирования при условии, что блоты не высыхают между последовательными раундами детектирования вестерн-блоттингом
Мультиплексное флуоресцентное обнаружение серии двукратных разведений двух белков, GST (красный) и ингибитора трипсина сои (зеленый). Начальная концентрация составляла 500 нг каждого белка. Стандарты Precision Plus Protein ™ WesternC ™ использовали в качестве маркеров.
Биолюминесценция
Биолюминесценция — это естественное излучение света многими организмами.Системы биолюминесценции различаются по структуре и функциям ферментов и кофакторов, участвующих в процессе, а также по механизму реакций генерации света. Биолюминесценция также используется как метод обнаружения белков и нуклеиновых кислот на мембране.
Обнаружение биолюминесценции включает инкубацию мембраны (со связанным комплексом антиген-антитело-фермент) в биолюминогенном субстрате и одновременное измерение излучаемого света (см. Рисунок ниже). Субстрат, задействованный в этой системе обнаружения, представляет собой производное люциферина.Детектирование света выполняется с помощью камеры для подсчета фотонов, и промокшие белки визуализируются в виде ярких пятен. Этот метод похож на хемилюминесценцию по своей чувствительности и скорости обнаружения, но он широко не используется, и на рынке имеется мало биолюминогенных субстратов. PVDF является предпочтительной мембраной для обнаружения биолюминесценции, поскольку мембраны из нитроцеллюлозы могут содержать вещества, ингибирующие активность люциферазы.
Хемифлуоресценция
Хемифлуоресценция — это ферментативное превращение субстрата во флуоресцентный продукт (см. Рисунок ниже).Флуорогенные соединения (нефлуоресцентные или слабо флуоресцентные вещества, которые могут превращаться в флуоресцентные продукты) доступны для использования с широким спектром ферментов, включая AP и HRP. Фермент отщепляет фосфатную группу от флуорогенного субстрата с получением продукта с высокой флуоресценцией. Флуоресценцию можно обнаружить с помощью флюоресцентного имидж-сканера, такого как PharosFX System или ChemiDoc MP System. Хемифлуоресценция обеспечивает стабильный флуоресцентный продукт реакции, поэтому блоты можно сканировать позже.Этот метод также совместим со стандартными процедурами снятия изоляции и повторного зондирования.
Авторадиография
Гамма-излучающий радиоизотоп 125 I можно использовать для мечения лизинов в иммуноглобулинах для радиометрического обнаружения антигенов (см. Рисунок ниже). Прямое иммунологическое обнаружение (с использованием меченых вторичных антител) всего 1 мкг точечного иммуноглобулина возможно с высокой специфической активностью 125 I. Помеченные радиоактивным изотопом пятна могут быть обнаружены с помощью рентгеновской пленки, метода, известного как авторадиография.Из-за опасностей, связанных с радиоактивно меченными конъюгатами, популярность авторадиографии снижается в пользу колориметрических и хемилюминесцентных методов.
Immunogold Labeling
В методах обнаружения иммунного золота для обнаружения антигена используются вторичные антитела, меченные золотом. Поскольку этот метод имеет относительно низкую чувствительность и сигнал непостоянен, методы усиления серебра, аналогичные описанным для окрашивания общего белка коллоидного золота, были разработаны в качестве средства усиления сигнала (см. Рисунок ниже).При использовании серебра на блоте создается фон, и чувствительность увеличивается в 10 раз, что эквивалентно колориметрическому обнаружению AP и в несколько раз более чувствительно, чем авторадиография.
Механизм обнаружения химии. При детектировании биолюминесценции ( A ) сама ферментная реакция излучает свет, тогда как при хемифлуоресценции ( B ) продукт реакции флуоресцирует. В авторадиографии ( C ) вторичное антитело само несет радиоактивную метку, а при маркировке иммунным золотом ( D ) вторичное антитело метится золотом, а сигнал усиливается осаждением серебра.
Байер Э.А. и Вильчек М. (1980). Использование авидин-биотинового комплекса как инструмента в молекулярной биологии. Методы Biochem Anal 26, 1–45.
Blake MS et al. (1984). Быстрый и чувствительный метод обнаружения антител, конъюгированных с щелочной фосфатазой, на Вестерн-блоттинге. Анальная биохимия 136, 175–179.
Chaiet L и Wolf FJ (1964). Свойства стрептавидина, биотин-связывающего белка, продуцируемого Streptomyces. Arch Biochem Biophys 106, 1–5.
Guesdon J-L et al.(1979). Использование авидин-биотинового взаимодействия в иммуноферментных методах. J. Histochem Cytochem 27, 1131–1139.
Hawkes R et al. (1982). Анализ точечного иммунного связывания для моноклональных и других антител. Анальная биохимия, 119, 142–147.
Hsu SM et al. (1981). Использование комплекса авидин-биотин-пероксидаза (ABC) в методах иммунопероксидазы: сравнение процедур ABC и немеченых антител (PAP). J. Histochem Cytochem 29, 577–580.
Куриен Б.Т. и Скофилд Р.Х. (2003).Белковый блоттинг: обзор. J Immunol Methods 274, 1–15.
Цанг В.К. и др. (1985). Иммуноэлектротрансферный блот с ферментом (EITB). В иммуноферментном иммуноанализе. T.T. Ngo и H.M. Ленхофф, ред. (Нью-Йорк: Plenum Press), стр. 389–414.
| Номер | Описание | Скачать |
|---|---|---|
| 5881 | Улучшенный мультиплексный флуоресцентный вестерн-блоттинг, ред. A | Нажмите, чтобы загрузить |
| 2895 | Руководство по белковому блоттингу, версия C | Нажмите, чтобы загрузить |
| 3179 | Флуоресцентные наночастицы для вестерн-блоттинга, Rev A | Нажмите, чтобы загрузить |
| 5809 | Визуализация хемилюминесцентных вестерн-блотов: сравнение цифровых изображений и рентгеновской пленки, Rev A | Нажмите, чтобы загрузить |
| 5723 | Увеличьте пропускную способность вестерн-блоттинга с помощью мультиплексной флуоресцентной детекции, Rev B | Нажмите, чтобы загрузить |
Перенос и окрашивание белков вестерн-блоттингом
Визуализация белков в гелях
Визуализация белков на этой стадии полезна для определения того, мигрировали ли белки равномерно и равномерно.Используйте краситель для меди, если вы планируете переносить разделенные белки на мембрану, поскольку окрашивание кумасси необратимо. Используйте краситель Кумасси на гелях после переноса только для проверки эффективности переноса, или если вы не планируете переносить и просто хотите наблюдать результаты разделения SDS-PAGE.
Краситель Кумасси
Как только выключить питание, разделенные полосы белка начнут диффундировать (они легко растворяются в водном растворе).Чтобы предотвратить диффузию белков, обработайте гель 40% дистиллированной водой, 10% уксусной кислотой и 50% раствором метанола, в результате чего почти все белки осаждаются (становятся нерастворимыми).
Для визуализации фиксированных белков поместите гель в ту же смесь воды / уксусной кислоты / метанола, но с добавлением 0,25% по весу кумасси бриллиантового синего R-250. Инкубируйте от 4 ч до ночи при комнатной температуре на шейкере. Перенесите гель (сохраните смесь красителей, ее можно использовать многократно) в смесь 67.5% дистиллированной воды, 7,5% уксусной кислоты и 25% метанола поместите на шейкер и замените свежей промывочной смесью до тех пор, пока не будет удален избыток красителя.
Пятно не связывается с акриламидом и вымывается (остается прозрачный гель). Однако он остается прочно связанным с белками в геле, и они приобретают темно-синий цвет.
Медное пятно
Кратковременно промойте только что подвергнутые электрофорезу гели в дистиллированной воде (максимум 30 секунд), а затем перенесите в раствор 0.3 M CuCl 2 в течение 5–15 мин. Кратковременно промойте гели в деионизированной воде и рассмотрите их на фоне темного поля. Белки появляются в виде прозрачных зон на полупрозрачном синем фоне. Гели можно полностью удалить путем повторной промывки в 0,1–0,25 М Трис / 0,25 М ЭДТА, pH 8,0. Переместите гель в чашку с буфером для переноса, прежде чем продолжить перенос в соответствии с инструкциями производителя устройства для переноса.
Перенос
Подробные инструкции по процессу переноса можно найти на веб-сайтах производителей переносных устройств, и они будут различаться в зависимости от системы.Однако принцип во всех случаях один и тот же. Подобно тому, как белки с электрическим зарядом (обеспечиваемым связанным с ними SDS) могут проходить через гель в электрическом поле, так и белки могут переноситься в электрическом поле из геля на прочную основу, мембрану, которая «промокает» белки от геля. Ранние методы основывались на диффузии; блоттинг в электрическом поле теперь является стандартом.
Перенос может производиться мокрой или полусухой системой. Влажный перенос менее подвержен сбоям из-за высыхания мембраны и особенно рекомендуется для больших белков.Для обоих видов переноса мембрану помещают рядом с гелем. Они зажаты между абсорбирующими материалами, а сэндвич зажат между твердыми опорами для поддержания плотного контакта между гелем и мембраной.
При влажном переносе гель и мембрана зажаты между губкой и бумагой (губка> бумага> гель> мембрана> бумага> губка), и все они плотно прижимаются друг к другу, чтобы гарантировать, что между гелем и мембраной не образуются пузырьки воздуха. Сэндвич погружают в буфер для переноса, к которому прикладывается электрическое поле.Отрицательно заряженные белки перемещаются к положительно заряженному электроду, но связываются мембраной, не позволяя им продолжать движение.
Стандартный буфер для влажного переноса такой же, как 1x Трис-глициновый буфер, используемый в качестве буфера для прогрева геля, но без SDS и с добавлением метанола до конечной концентрации 20%. Для белков крупнее 100 кДа рекомендуется включать SDS в конечной концентрации 0,1%.
При полусухом переносе сэндвич, состоящий из бумаги> геля> мембраны> бумаги, смоченной буфером для переноса, помещается непосредственно между положительным и отрицательным электродами (катодом и анодом соответственно).Что касается влажного переноса, важно, чтобы мембрана находилась ближе всего к положительному электроду, а гель — к отрицательному.
Доля Триса и глицина в буфере для переноса не обязательно такая же, как при влажном переносе; обратитесь к протоколу производителя устройства. Стандартный рецепт: 48 мМ Трис, 39 мМ глицин, 0,04% SDS, 20% метанол.
Доступны два типа мембран: нитроцеллюлоза и ПВДФ (положительно заряженный нейлон). Выбор остается личным, и оба работают очень хорошо.Мембраны из ПВДФ требуют тщательной предварительной обработки: отрежьте мембрану до нужного размера, затем погрузите ее в метанол на 1-2 мин. Инкубируйте мембрану в ледяном буфере для переноса в течение 5 мин. Неспособность уравновесить мембрану в ледяном буфере для переноса вызовет усадку при переносе и искаженную картину переноса.
Перенос больших и малых белков
Баланс SDS и метанола в буфере для переноса, размер белка и процент геля могут влиять на эффективность переноса.Следующие модификации будут способствовать эффективному переносу:
Крупные белки (> 100 кДа)
- Для крупных белков перенос из геля может быть очень медленным, так же как они медленно перемещаются в геле во время разделения. При блоттинге большого количества белка обязательно анализируйте образцы в геле с низкой концентрацией, 8% или меньше. Они будут очень хрупкими, поэтому обращайтесь с ними осторожно.
- Крупные белки склонны осаждаться в геле, затрудняя перенос. Добавление SDS до конечной концентрации 0.1% в буфере передачи будет препятствовать этому. Метанол имеет тенденцию удалять SDS из белков, поэтому снижение процентного содержания метанола до 10% или менее также защитит от осаждения.
- Снижение процентного содержания метанола в буфере для переноса также способствует набуханию геля, что облегчает перенос крупных белков.
- Метанол необходим только при использовании нитроцеллюлозы. При использовании ПВДФ метанол можно полностью удалить из буфера для переноса, и он необходим только для активации ПВДФ перед сборкой сэндвича из геля / мембраны.
- Выберите влажный перенос в течение ночи при 4 ° C вместо полусухого переноса.
Малые белки (<100 кДа)
- SDS препятствует связыванию всех белков с мембранами с мембранами, но малым белкам больше, чем большим. Если интересующий вас белок мал, исключите SDS из буфера для переноса.
- Поддерживайте концентрацию метанола на уровне 20%.
Следующая ссылка обсуждает гель и буферную систему, которая позволяет переносить белки размером до 500 кДа:
Bolt MW and Mahoney PA (1997).Высокоэффективный блоттинг белков различного размера после электрофореза в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия. Anal Biochem , 247, 185–92.
Другие наконечники для переноса:
- Не прикасайтесь к мембране пальцами; вместо этого используйте пинцет. Масла и белки на пальцах будут препятствовать эффективному переносу и создавать грязные пятна.
- После размещения геля и мембраны между бумагой пузырьки воздуха между гелем и мембраной можно удалить, раскатав их валиком, пипеткой или пробиркой на 15 мл, или собрав бутерброд в чашке с буфером для переноса, чтобы предотвратить образование пузыри в первую очередь.
- Убедитесь, что бумага и мембрана обрезаны до того же размера, что и гель. Большие выступы могут препятствовать прохождению тока через мембрану при полусухом переносе.
- Куриные антитела имеют тенденцию связывать PVDF и другие мембраны на основе нейлона, что приводит к высокому фону. Переход на нитроцеллюлозную мембрану должен помочь уменьшить фоновое окрашивание.
Визуализация белков в мембране с помощью Ponceau Red
Для проверки успешности переноса промойте мембрану в TBST.Развести бульон Ponceau Red 1: 100. Ложа состоит из 2% Ponceau S в 30% трихлоруксусной кислоте и 30% сульфосалициловой кислоте.
Инкубируйте на мешалке в течение 5 минут, затем тщательно промойте водой до тех пор, пока вода не станет прозрачной и полосы белка не станут четко очерченными. Мембрану можно полностью удалить путем многократной промывки в TBST или воде. При использовании мембраны PVDF повторно активируйте мембрану метанолом, затем снова промойте TBST.
ТБС 10x
Для 1 л;
24.23 г Trizma HCl
80,06 г NaCl
Растворить в 800 мл дистиллированной воды
pH до 7,6 с HCl
Долить до 1 л
TBST
Для 1 л;
100 мл TBS 10x
900 мл дистиллированной воды
1 мл Твин 20
Твин 20 очень вязкий и прилипает к кончику ваших мерных пипеток. Убедитесь, что вы добавили нужное количество моющего средства в буфер Трис. Дозировать 10% раствор легче, чем неразбавленный Твин 20.
Блокирование мембраны
Блокирование мембраны предотвращает неспецифическое фоновое связывание первичных и / или вторичных антител с мембраной (которая обладает высокой способностью связываться. белки и, следовательно, антитела).
Традиционно используются два блокирующих раствора: обезжиренное молоко или BSA (фракция V по Кону). Молоко дешевле, но не рекомендуется для изучения фосфопротеинов; молоко содержит казеин, который является фосфопротеином, вызывая высокий фон, потому что фосфоспецифические антитела обнаруживают казеин, присутствующий в молоке.
Некоторые антитела по неизвестным причинам дают более сильный сигнал на мембранах, заблокированных БСА, в отличие от молока. Ознакомьтесь с примечаниями по применению в техническом описании, если есть конкретные инструкции о том, как заблокировать мембрану.
Чтобы приготовить 5% раствор молока или BSA, взвесьте 5 г на 100 мл TBS с буфером Tween 20 (TBST). Хорошо перемешайте и профильтруйте. Отсутствие фильтрации может привести к появлению пятен, где крошечные темные зерна будут загрязнять пятно во время проявления.
Инкубируйте 1 час при 4 ° C при перемешивании. После инкубации промыть в течение 5 с в TBST.
Инкубация с первичным антителом
Буфер для инкубации
Разведите антитело в TBST в предложенном разведении.Если в таблице данных нет рекомендованного разбавления, попробуйте диапазон разбавлений (1: 100–1: 3000) и оптимизируйте разбавление в соответствии с результатами. Слишком большое количество антител приведет к образованию неспецифических полос.
В некоторых лабораториях принято инкубировать в блокирующем буфере, в то время как в других лабораториях инкубируют антитела в TBST без блокирующего агента. Результаты варьируются от антитела к антителу, и вы можете обнаружить, что имеет значение либо использование неблокирующего агента в буфере антител, либо тот же агент, что и блокирующий буфер.
Если высокий фон не является проблемой, некоторые антитела производят гораздо более сильный сигнал, если их разводить в буфере с низкими концентрациями (0,5–0,25%) молока или BSA, или вообще без них.
Время инкубации
Время может варьироваться от нескольких часов до ночи (редко более 18 часов) и зависит от аффинности связывания антитела с белком и количества белка. Мы рекомендуем более разбавленные антитела и более длительное время инкубации, чтобы гарантировать специфическое связывание.
Температура инкубации
Предпочтительно холодная. При инкубации в блокирующем буфере в течение ночи обязательно инкубируйте при 4 ° C, иначе произойдет загрязнение и, следовательно, разрушение белка (особенно фосфогрупп).
Рекомендуется перемешивание антитела для обеспечения адекватного гомогенного покрытия мембраны и предотвращения неравномерного связывания.
Инкубация со вторичным антителом
Промойте мембрану несколько раз в TBST при перемешивании, 5 минут или более на промывку, чтобы удалить остаточное первичное антитело.
Буфер для инкубации и разведение
Разведите антитело в TBST в предлагаемом разведении. Если в таблице данных нет рекомендованного разведения, попробуйте диапазон разведений (1: 1000–1: 2,0000) и оптимизируйте разведение в соответствии с результатами. Слишком большое количество антител приведет к образованию неспецифических полос. Вы можете инкубировать вторичное антитело в блокирующем буфере, но снижение фона может происходить за счет более слабого специфического сигнала, предположительно потому, что блокирующий белок препятствует связыванию антитела с целевым белком.
Время и температура инкубации
1–2 часа при комнатной температуре при перемешивании.
Какой конъюгат?
Мы рекомендуем вторичные антитела, конъюгированные с пероксидазой хрена (HRP). Вторичные антитела, конъюгированные с щелочной фосфатазой (ЩФ), менее чувствительны и не рекомендуются.
Методы проявления
Наборы для обнаружения
Для антител, конъюгированных с HRP, в качестве субстратов традиционно используются наборы повышенной хемилюминесценции (ECL).Мы предлагаем субстраты из HRP с различными пределами обнаружения.
Рентгеновские пленки
Автоматические проявители рентгеновских пленок широко используются и просты в использовании. Помните, что переэкспонированная пленка не подходит для анализа, так как невозможно определить относительное количество белка. Передержанные пленки показывают полностью черные полосы без контраста и / или многочисленные неспецифические полосы.
Цифровые изображения
Новое поколение проявителей пленки — это устройства с камерой внутри корпуса, устраняющие необходимость в темной комнате.Камера обнаруживает хемилюминесценцию, исходящую от мембраны, преобразовывая сигнал в цифровое изображение для быстрого анализа с помощью программного обеспечения, поставляемого с детектором.
В настоящее время в продаже имеется ряд машин. В авангарде следующего поколения находятся системы, в которых не используются антитела, конъюгированные с HRP (т. Е. Хемилюминесценция). Например, анализаторы STORM обнаруживают флуоресценцию вторичных антител, конъюгированных с флуорохромом. Система инфракрасного изображения Odyssey обнаруживает инфракрасную флуоресценцию.
Пятнистая линия Энди Уорхола — Музей Энди Уорхола
Об искусстве
Рисунок Уорхола Французский образ — одна из многих иллюстраций обуви, которые он создал с помощью линейного рисунка, известного как техника пятнистых линий. Уорхол впервые экспериментировал с пятнистой линией, когда еще учился в колледже Технологического института Карнеги (ныне Университет Карнеги-Меллона). Он продолжал разрабатывать эту технику в своей коммерческой работе в Нью-Йорке на протяжении 1950-х годов.Размытая линия позволила Уорхолу создать множество иллюстраций на одну и ту же тему. Этот тип производства позволил ему предложить клиентам несколько идей, чтобы повысить шансы на то, что один из его рисунков будет выбран для окончательной рекламы.
Blotted line объединяет рисунок с базовой гравюрой. Уорхол начал с того, что скопировал карандашный рисунок на лист невпитывающей бумаги, например кальке. Затем он прикрепил этот лист бумаги ко второму листу более впитывающей бумаги, склеив их края вместе с одной стороны.Перьевой ручкой Уорхол закрасил небольшой участок нарисованных линий. Затем он перенес чернила на второй лист, сложив его вдоль петли и слегка прижав или «промокнув» две бумаги вместе. Результатом стали пунктирные, ломаные и тонкие линии, характерные для иллюстраций Уорхола. Уорхол часто раскрашивал свои промокшие штриховые рисунки акварельными красками или накладывал сусальное золото.
Точки обзора
Еще одна причина, по которой ему так понравилась [техника промокательной линии] [была], что, имея мастер-рисунок, с помощью которого вы делали свою кляксу, вы могли продолжать промокать, перерисовывать и промокать каждый раз и делать дубликаты изображений.
Ассистент Уорхола по коммерческому искусству Натан Глюк в Patrick S. Smith,
Искусство и фильмы Энди Уорхола , 1986
Совершенно верно, что он мог рисовать что угодно и очень и очень быстро. И поэтому мы его много использовали.
Художественный руководитель Тина С. Фредерикс в Патрике С. Смите,
Уорхол: Беседы о художнике , 1988
Мы с Энди начали беспрецедентную по тем временам кампанию. Каждое воскресенье в New York Times мы публиковали полные страницы, полстраницы.И это было ярким событием для И. Миллера и для Энди. Это расширило его аудиторию до такой степени, что никакая передовая статья журнала не могла бы этого сделать. В море крошечных изображений, которые были на страницах «Таймс», эти смелые фантастические блокбастеры были необычайно эффективны. Рекламы возродили и возродили бренд I. Miller, и из безвкусного, затхлого, затхлого, пыльного, вдовствующего заведения он превратился в стильный торговый центр для дебютанток.
Арт-директор Джеральдин Штутц, аудиогид выставки, созданный Antenna audio
в сотрудничестве с Музеем Энди Уорхола и Художественной галереей Онтарио
Заключение
Попросите учащихся повесить свои рисунки рядом с исходным материалом.На отдельном листе бумаги попросите учащихся указать, что они решили включить и приукрасить, и что они решили исключить из исходного источника в своих окончательных иллюстрациях. Используя шкалу оценок от 1 до 5 (пять — высшая оценка), попросите учащихся оценить привлекательность иллюстраций их продуктов. Студенты должны написать одно или два предложения, объясняющих их оценку. Обсудите с классом, какие рисунки удаются, а какие нет и почему.
добавочный номер
Если есть время, сделайте серию рисунков из одного и того же исходного изображения с изменениями цвета, декора и воздействия.
Радуга раскраски — Пакет действий
Поделиться — это забота!
У нас есть для вас несколько прекрасных бесплатных печатных изданий; раскраски радуги и некоторые другие листы деятельности на основе радуги. Карли Райт создала их, используя ключевые темы своей книги «Радужные кляксы». Еще одно эксклюзивное занятие для KiddyCharts, которое поможет играть и учиться вместе с детьми.
Это спонсируемый пост, содержащий партнерские ссылки Amazon
У нас есть несколько различных занятий для вас, пока вы читаете книгу — всего шесть разных листов для вас в пакете заданий:
- Два поиска по словам,
- Три радужные раскраски, чтобы вы могли практиковаться в рисовании всеми цветами радуги, и, наконец,
- Страница действий, взятая непосредственно из книги, где вы можете выбрать свое любимое Радужное пятно, чтобы рисовать и раскрашивать!
Не забудьте взглянуть на песню The Rainbow Blots, пока изучаете эти листы?
Как всегда — мы поделимся с вами мероприятиями, прежде чем предложим загрузку, чтобы вы могли точно знать, что вы получаете заранее.
Радуга раскраски: Представляем радужные кляксы
Наша первая страница — это небольшое введение в персонажей «Радужных пятен»; Почему бы вашим детям не раскрасить их все, как в книге, или не проявить немного творчества с цветами радуги?
Развлекайтесь с радужными кляксами
На этой радужной раскраске показаны радужные кляксы, которые немного развлекаются с некоторыми вещами, окрашенными в цвет радуги. Можете ли вы, дети, заметить их и немного рассказать вам о них? Может быть, они тоже могут раскрасить их правильными цветами и сопоставить их с персонажем Радужных пятен?
Раскраска над радугой
Это последняя из имеющихся у нас для вас радужных раскрасок. На ней изображена радуга, чтобы ваши дети могли попрактиковаться в понимании цветов радуги по-настоящему.
Радуга Кляксы Wordsearch 1
Первый из наших поисков слов на радужную тематику, который поможет закрепить понимание цветов радуги у детей.
Радуга Кляксы Wordsearch 2
Это второй лист, который у нас есть для книги, чтобы улучшить понимание и понимание цветов радуги. Мы надеемся, что они оба понравятся вам, дети.
Создайте своего собственного персонажа Rainbow Blots
Нашим последним заданием из книги является задание «Сделай свой собственный». Детям предлагается сделать свое собственное радужное пятно и поделиться им в листе задания.Почему бы не побудить их дать волю своему воображению и цвету?
Мы действительно надеемся, что вам понравятся эти занятия, которые мы собрали для вас в книге «Радужные кляксы» — если вы хотите узнать об этом немного больше. Вот автор, Карли, читает это вслух своей дочери:
<< Чтобы загрузить этот пакет занятий - нажмите на круглое изображение ниже >>
Спасибо, что пришли к нам, и обязательно посмотрите книгу Карли «Радужные кляксы», которая помогает научить детей цветам радуги в правильном порядке, новым, веселым и увлекательным способом.
В книге представлена новая песня о цветах радуги, которая поможет детям легко и с радостью разучить радугу.
Если вы ищете другие интересные занятия для детей, не забудьте подписаться на нашу рассылку новостей….
У нас также есть некоторые другие цветные задания на сайте, на которые стоит обратить внимание.
Как всегда, существует множество других замечательных идей для создания радуги и развлечения с цветами, так почему бы не взглянуть на некоторые из них?
Нам нравятся все эти идеи и эта задача — и мы надеемся, что вы тоже.До встречи на сайте скоро,
Елена
Приколите на потом!
линий и цветов — Блог о живописи, рисовании, набросках, иллюстрации, комиксах и другом изобразительном искусстве
Miss May Miles , Hubert von Herkomer
Я не видел оригинала этой картины, но мой опыт сравнения художественных изображений в сети с их оригиналами — в случае картин, которые я, , видел лично, — создает у меня впечатление, что какой-то благонамеренный, но заблуждающийся человек попутно увеличил насыщенность цвета, вероятно, думая, что это сделает изображение более привлекательным.Я взял на себя смелость скорректировать цвет изображения до того, что, как мне кажется, было бы более естественным намерением художника.
Этот портрет баварского / британского художника конца XIX века Хуберта фон Херкомера кажется мне наглядным примером направления взгляда на одну область картины.
Более темные оттенки по краям картины создают эффект виньетки; в котором яркие / ценные формы ее лица, рук и кистей выделяются из областей стены позади нее с низкой насыщенностью / низкой цветностью, создавая поразительный эффект.Это подчеркивается темной формой ее платья, у которой почти нулевой цветовой тон и нулевое значение.
Лицо женщины близко к горизонтальному центру композиции; остальной части ее фигуры нет. Она смотрит прямо на зрителя взглядом, который можно рассматривать либо как привлекательный, либо как конфронтационный, возможно и то, и другое. Ее руки направлены внутрь в направлении шеи и лица, как и подлокотник стула и большая складка на покрывале.
Темный цвет ее платья и темные волосы, подчеркнутые еще более затемненным проходом в стене позади нее, образуют своего рода темный ореол вокруг ее лица.Цветы над ее правой рукой перекликаются с более мелкими аналогами в ее волосах, еще больше усиливая эффект обрамления.
Узоры обоев и складки обложки кружатся вокруг нее, как будто попали в гравитационное поле.
Среди всего этого точечные блики в ее зрачках сияют, как далекие маяки. Цвет ее глаз кажется зеленоватым, что еще больше подчеркивает румяный оттенок ее кожи.
Как может зритель, стоящий перед этой картиной, не сразу и неотразимо привлечь внимание к лицу женщины, а точнее, к ее глазам?
Вестерн-блоттинг (иммуноблот): гель-электрофорез на белки
Вестерн-блоттинг (также называемый иммуноблоттингом) — это метод, используемый для анализа отдельных белков в смеси белков (например, иммуноблоттинг).г. клеточный лизат). При вестерн-блоттинге (иммуноблоттинге) смесь белков применяется для гель-электрофореза в матрице-носителе (SDS-PAGE, нативный PAGE, изоэлектрическое фокусирование, 2D-гель-электрофорез и т. Д.) Для сортировки белков по размеру , заряду , или другие различия в отдельных белковых полосах. Затем разделенные белковые полосы переносятся на мембрану-носитель (например, нитроцеллюлозу, нейлон или ПВДФ). Этот процесс называется блоттингом . Белки прикрепляются к мембране по той же схеме, что и были разделены из-за взаимодействия зарядов.Затем белки на этом иммуноблоте становятся доступными для связывания антител с целью обнаружения.
Антитела используются для обнаружения белков-мишеней при вестерн-блоттинге (иммуноблоттинг). Антитела конъюгированы с флуоресцентными или радиоактивными метками или ферментами , которые дают последующую реакцию с нанесенным реагентом, приводящую к окрашиванию или излучению света, что позволяет обнаруживать.
Термин вестерн-блоттинг основан на игре слов.Саузерн-блоттинг, который представляет собой метод обнаружения конкретных последовательностей ДНК, назван в честь Эда Саузерна, который первым описал эту процедуру. Вестерн-блот (иммуноблот), а также нозерн-блот (для обнаружения РНК) играют на значении этого названия.
Различные типы гель-электрофореза белков
Можно выбрать один из различных типов гель-электрофореза белков в зависимости от критериев, по которым белки должны быть разделены. Некоторые часто используемые электрофоретические методы: SDS-PAGE, native-PAGE и изоэлектрическое фокусирование.
СТРАНИЦА SDS:
Это денатурирующий метод, поскольку он обрабатывает белки анионным детергентом SDS (додцилсульфатом натрия). Этот процесс разрушает вторичную и третичную структуру. Кроме того, SDS связывает белки и, таким образом, покрывает их химические заряды, что приводит к образованию одинаково отрицательно заряженных белков. Следовательно, следующее разделение происходит исключительно по размеру полипептидных цепей в полиакриламидном геле.
Рекомендуемый буфер SDS-PAGE и комплекты
Продукт
Заявка
Кат.№
Кол-во
Цена
Приложение SDS
Кат.№ ABIN925558
Кол-во 100 мл
Цена 355,63 €
Приложение SDS
Кат.№ ABIN925557
Кол-во 1 л
Цена 375,13 €
Приложение SDS
Кат.№ ABIN925562
Кол-во 1 л
Цена 339,13 €
Приложение DB, WB
Кат.№ ABIN1574309
Кол-во 1 упаковка
Цена 327,78 €
Приложение SDS
Кат.№ ABIN1113031
Кол-во 5 мл
Цена 378,63 €
Заявка
Кат.№ ABIN5706407
Кол-во 1 л
Цена 492,13 €
Приложение WB
Кат.№ ABIN6720448
Кол-во 1 комплект
Цена 375,63 €
Приложение WB
Кат.№ ABIN412579
Кол-во 50 мл
Цена 329,19 €
Приложение DB, WB
Кат.№ ABIN769944
Кол-во 1 упаковка
Цена 228,63 €
Приложение WB
Кат.№ ABIN2669832
Кол-во 50 мл
Цена 368,08 €
СТРАНИЦА:
Нативные, развернутые и неденатурированные белки можно разделить с помощью этого метода.Этот метод позволяет отделить белки, недоступные для других методов. Одним из примеров может быть разделение модифицированных и немодифицированных белков одного и того же типа (например, фосфорилированное или нефосфорилированное состояние белка). Нативный PAGE можно также использовать для подтверждения биологически релевантных конформаций, таких как ди-, три- или тетрамерные формы белков (в отличие от SDS-PAGE, который разделяет индивидуальные и денатурированные пептидные цепи). Этот метод также может обнаруживать различные комплексы разных белков.
Разделение с использованием нативного PAGE зависит от ряда параметров, таких как заряд , размер и трехмерная структура белка. Подходящий буфер необходим для поддержания трехмерной укладки белка. Применимость буфера зависит от изоэлектрической точки и зарядов белка.
Изоэлектрическая фокусировка:
Этот метод основан на том факте, что белок имеет определенный заряд при определенных значениях pH. В зависимости от pH кислотные и основные функциональные группы способствуют увеличению или уменьшению общего заряда белка.Изоэлектрическая точка определяется как точка, в которой общий заряд молекулы равен нулю, потому что в молекуле имеется равное количество отрицательных и положительных зарядов.
Специальные градиентные гели необходимы для изоэлектрической фокусировки, так как pH изменяется от кислого до основного по градиенту внутри геля. Благодаря электрическому заряду, связанному с гелем, белок перемещается в точку в геле, где заряд геля равен заряду белка, а общий заряд равен нулю, т.е.е. изоэлектрическая точка. Следовательно, этот метод используется для разделения белков по их зарядам, а также для определения изоэлектрической точки целевого белка. Разделение происходит из-за заряда белка или количества основных и кислотных групп, содержащихся в белке.
Вышеупомянутые методы гель-электрофореза белков также можно комбинировать для разделения белков. Выбор методов зависит от конкретных требований эксперимента.
Блоттинг
После разделения смеси белков полипептидные полосы переносятся на мембранный носитель.Для этого к гелю прикрепляется мембрана, и этот так называемый сэндвич переносится в камеру для электрофореза. Возможно, что часть SDS вымывается, и белок снова частично перестраивается, то есть восстанавливает свою 2D- и 3D-структуру. Однако приложенный электрический заряд заставляет белки перемещаться из геля вертикально в направлении, в котором они двигались в геле, на мембрану. Таким образом, полосы белка связываются с мембраной. «Промокшие» полосы теперь доступны для дальнейшей обработки (например,г. для обнаружения специфических белков со специфическими антителами).
Иммунодетекция
Идентификация специфических антител возможна после разделения и блоттинга белков. Специфические антитела (моно- или поликлональные) связываются со «своей» полосой белков. Неспецифически связывающиеся антитела удаляют промыванием буферами, содержащими детергент. Кроме того, неспецифические связывающие карманы могут быть заблокированы перед добавлением специфических антител.
Обычно сначала применяются первичные антитела, которые затем распознаются вторичным антителом.Вторичное антитело конъюгировано с красителем, радиоактивностью или ферментом для обнаружения. Для этой цели также используются конъюгированные с биотином антитела.
Рекомендуемые блокирующие буферы и буферы для лизиса для вестерн-блоттинга
Продукт
Заявка
Кат.№
Кол-во
Цена
Приложение CLy, IP, RIA, WB
Кат.№ ABIN925563
Кол-во 50 мл
Цена 358,63 €
Приложение WB
Кат.№ ABIN5706395
Кол-во 50 мл
Цена 315,13 €
Приложение IP, WB
Кат.№ ABIN5706373
Кол-во 15 мл
Цена 477,13 €
Заявка BR, Lbl, WB
Кат.№ ABIN925618
Кол-во 500 мл
Цена 274,32 €
Иногда может быть выгодным использование поликлональных первичных антител, поскольку такие антитела распознают несколько эпитопов, в отличие от моноклональных антител, которые имеют ограниченную аффинность связывания.После иммунодетекции можно удалить антитело с мембраны для дальнейшего анализа с другими антителами (например, для обнаружения других специфических антител из исследуемой смеси белков).
Затем проводят анализ вестерн-блоттинга с использованием различных систем визуализации (например, люминесценции, цветовой реакции, авторадиографии).
Идентификация интересующего белка с помощью вестерн-блоттинга зависит, среди прочего, от его молекулярной массы.С этой целью электрофоретически разделенные белки в образце сравнивают со стандартом молекулярной массы известного состава.
Рекомендуемые маркеры и контроли для вестерн-блоттинга
Продукт
Заявка
Кат.№
Кол-во
Цена
Приложение SDS, WB
Кат.№ ABIN2868254
Кол-во 500 мкл
Цена 345,46 €
Приложение SDS, WB
Кат.№ ABIN2868250
Кол-во 500 мкл
Цена 359,43 €
Приложение SDS, WB
Кат.№ ABIN2868252
Кол-во 500 мкл
Цена 352,44 €
Приложение SDS, WB
Кат.№ ABIN2868518
Кол-во 500 мкл
Цена 345,46 €
Приложение SDS, WB
Кат.№ ABIN2868520
Кол-во 500 мкл
Цена 345,46 €
Приложение FACS, IsoC, IHC, ELISA, WB
Кат.№ ABIN376844
Кол-во 1 мг
Цена 255,95 €
Приложение SDS, WB
Кат.№ ABIN925595
Кол-во 200 мкл
Цена 324,13 €
Приложение ELISA, IHC, WB
Кат.№ ABIN5633221
Кол-во 5 мг
Цена 491,76 €
Приложение ELISA, IHC, WB
Кат.№ ABIN5633227
Кол-во 10 мг
Цена 393,89 €
Приложение IsoC, ELISA, WB
Кат.№ ABIN964336
Кол-во 2 мг
Цена 525,13 €
Приложение IsoC, ELISA, WB
Кат.№ ABIN964381
Кол-во 1 мг
Цена 544,26 €
Приложение IsoC, ELISA, WB
Кат.№ ABIN5633245
Кол-во 10 мг
Цена 448,26 €
Почему вестерн-блоттинг (иммуноблоттинг)?
Метод вестерн-блоттинга (иммуноблоттинг) имеет различные преимущества по сравнению с другими иммуносорбентными анализами (ISA), такими как, например, ELISA.
Вестерн-блоттинг (иммуноблоттинг) расширяет идею ELISA, позволяя разделить белковые смеси по размеру, заряду и / или конформации. Описанный метод стриппинга позволяет обнаруживать несколько мишеней, в отличие от ELISA, где может быть обнаружен только один белок. Поскольку гель-электофорез белков разделяет белки на полосы, можно определить размер целевого белка / полипептида. Также возможно (полу) количественно определить интересующий белок, запустив внутренний количественный стандарт параллельно с образцами в геле.Аналогичным образом можно сравнить содержание белка в образцах («образец A содержит больше белка, чем образец B»).
Недостатком вестерн-блоттинга (иммуноблоттинга) является то, что он требует много времени (по сравнению с ИФА) и требует большого опыта экспериментатора. Кроме того, это требует оптимизации экспериментальных условий (т. Е. Выделения белка, буферов, типа разделения, концентрации геля и т. Д.).
Существует множество различных типов и методов вестерн-блоттинга (иммуноблоттинга).Следовательно, он охватывает самые разные темы и приложения.
Кляксы для детей и малышей
Искусство рисования кляксами настолько просто, насколько это возможно, и самое замечательное то, что вся семья может принять участие.
Если вы можете промокнуть краску и сложить лист бумаги, у вас есть все, что нужно, чтобы сделать это произведение искусства, и возможности безграничны с точки зрения выбора краски и цвета бумаги.
Искусство, которое можно повесить в любом месте дома!
Если вы украсите свой дом произведениями искусства своего ребенка, он почувствует себя еще более его частью.Секрет успеха в том, чтобы проявить смелость и действовать! Дети смелы. Они повсюду вешают свои работы, и мы тоже должны!
Все, что вам нужно для этого занятия, — это прочная художественная бумага, краска и пластиковые ложки! Просто включите свое воображение и получайте удовольствие!
Что вам понадобится:
- Строительная бумага
- Краска
- Ложки пластиковые
Шаг 1. Возьмите припасы
- Достаньте художественную бумагу, краску и пластиковые ложки.
- Подготовьте покрасочную станцию. Залейте краску отдельного цвета в каждый лоток для краски. Положите старую газету и приготовьте влажную ткань для легкой уборки!
- Сложите бумагу пополам.
Шаг 2. Добавьте краску
- Попросите ребенка развернуть бумагу и разложить ее.
- Помогите им взять совок краски и нанести каплю на правую сторону листа.
- Возьмите ложку краски другого цвета и нанесите ее рядом с краской первого цвета.Повторите то же самое с 3-м цветом.
- Ничего страшного, если цвета накладываются друг на друга, но постарайтесь держать это подальше от края бумаги, чтобы он не брызгал сбоку!
Шаг 3. Нажмите и разгладьте
- После того, как вы закончите рисовать на бумаге, сложите бумагу и помогите ребенку прижать ее руками.
- Попросите их двигать руками вперед и назад, разглаживая бумагу.