Семь достоинств The International 2022 — да, они были!

Признаться откровенно, изначально я планировал написать общий материал по The International 2022 по Dota 2 и в целом разобрать турнир и его организацию. Естественно, вырисовывался довольно мрачный материал с заголовком по типу «The International 2022 — худший TI в истории, как мы до такого докатились». В нем вновь пришлось бы рассказывать об утраченной атмосфере праздника и об умельцах из PGL, которые не могут настроить звук и установить звукоизолирующие кабинки, зато всегда способны уронить официальный стрим на финальной карте. А еще про отвратительный шоу-матч, плохой Battle Pass, провальный призовой фонд, отсутствие аналитиков на месте проведения, всего два дня на стадионе и еще кучу других проблем. Но обо всем этом мы и так неустанно писали на протяжении трех недель. Какой смысл очередной раз сетовать, как мы разочарованы The International и что турнир вышел будничным и не оправдал наших ожиданий? Да и поливать помоями PGL уже тоже надоело, все равно судьбу ТО в контексте Dota 2 будет определять исключительно Valve. Все проблемы и недочеты TI11 уже сотню раз пережеваны, так что, вместо того чтобы поднимать их в 101-й раз, давайте вспомним позитивные моменты этого The International. К сожалению, они не спасли турнир, но они были. И, возможно, в будущем некоторые из них станут подспорьем для чего-то более успешного. 

MATUMBAMAN сам по себе стал украшением турнира

Азиатская публика — огонь

Вот к кому точно не может быть претензий на The International 2022, так это к болельщикам. А ведь с ними на турнирах серии TI не всегда все так просто. Да, на прошлом чемпионате из-за ковидных ограничений их не было в принципе, но давайте вспомним TI9, тогда весь интернет жаловался на китайских фанатов, которые топили только за своих и почти потеряли интерес к финалу, когда PSG.LGD уступила Liquid. Я не считаю, что встречать гробовым молчанием хайлайт игрока, который только что уничтожил твой любимый клуб, плохо, но так или иначе это сказывается на общей зрелищности и атмосфере. Если копнуть еще глубже, то на предыдущих TI частенько бывали ситуации, когда во время плей-офф в зрительном зале хватало пустых мест, и это было заметно.  

В Сингапуре публика была крайне активной и позитивно настроенной ко всем участникам. А ведь команды из региона покинули турнир на первых стадиях плей-офф. Однако это не помешало местным фанатам топить за всех участников, а уж какую поддержку получал лично MATUMBAMAN — вообще отдельная история. В этом плане с точки зрения болельщиков ЮВА — действительно отличное место для TI (возможно, наравне с СНГ), особенно на фоне США, где интерес к Dota 2 значительно снизился. 

На самом деле на TI редко можно было увидеть такую заполняемость

Last Chance — отличный формат

Пожалуй, главное достижение Valve в этом году — возвращение к системе Wild Card и расширение ее до полноценного турнира. О том, что Last Chance — это круто, мы писали еще до старта этапа. По сути, мы получили дополнительный самостоятельный международный турнир с сильными командами и высокой мотивацией участников. Это было зрелищно, увлекательно и интересно и воспринималось уже как часть The International.  

Однако ключевой момент — мы получили две конкурентоспособные команды на основном этапе TI ( Team Secret и Team Liquid), которые в итоге вошли в топ-3. Имеющаяся система DPC мотивирует коллективы выступать на хорошем уровне весь сезон, а не «просыпаться» только к TI, и это действительно правильно. Однако это не значит, что на The International мы в итоге получим сильнейшие коллективы. Last Chance в этом плане несколько исправляет ситуацию, позволяя получить две дополнительные команды, которые сильны здесь и сейчас. 

Если бы не Last Chance, то мы бы не увидели и это грандиозное восхождение Secret с Puppey

К слову, возможно, если бы такой формат был в прошлом году, то Tundra Esports показала бы себя на TI куда раньше. В конце прошлого сезона коллектив был в отличной форме и очень тонко чувствовал мету. Неслучайно до TI ростер победил в финале ESL One Fall 2021 будущих финалистов чемпионата мира из PSG.LGD, а сразу после TI одолел и саму Spirit в решающем поединке на OGA Dota PIT для Европы.  

Last Chance определенно стоит сохранить и использовать в таком же виде в следующем сезоне и, возможно, даже расширить количество слотов с двух до четырех. Стоит отметить, что в комьюнити высказывалось мнение, что подобный подготовительный турнир — огромный (даже читерский) буст для его участников, которые имеют больше игровой практики и раньше адаптируются к мете, чем конкуренты, заранее отобравшиеся на TI. Да, команды из Last Chance действительно имеют небольшое преимущество, и на это стоило бы обратить внимание, начинайся TI сразу с плей-офф, а не с гигантского группового этапа из девяти матчей у каждой из команд. Ведь если девяти матчей группового этапа тебе недостаточно для адаптации и набора формы и ты продолжаешь искать оправдания, значит, вероятно, тебе не место на TI. Да и Tundra, во всех отношениях лучшая команда этого чемпионата мира, как-то не испытала проблем из-за того, что ее соперник по гранд-финалу начинал путь в Сингапуре с Last Chance. 

True Sight во время турнира 

На The International 2022 организаторы показали новую фичу (хотя слово «новая» уместно только в контексте Dota 2): они использовали на трансляциях повторы с записью тимспиков команд. Естественно, PGL и это в первый раз умудрилась сделать криво: запись была вставлена неожиданно, звук не был настроен, а зрители вообще не поняли, что происходит. Однако по ходу турнира использование фичи наладили (организаторы поняли, что стоит отключать звуковую дорожку лайва и давать отбивку True Sight) и она стала интересной деталью поединков, позволяющей посмотреть, как игроки оценивали ситуацию и реагировали на какие-то важные эпизоды в матче или как принимались те или иные решения.

Просмотр таких эпизодов глазами игрока дает зрителю не только больше понимания ситуации и хода мыслей киберспортсменов, но и добавляет эмоциональной связи с командой. Это, естественно, идет в плюс зрелищности и драматизму турнира. Зрители и аналитики всегда гадают, как тот или иной момент в игре или поражение на карте скажется на коммуникации и атмосфере внутри коллектива. На TI11 мы получили возможность заглянуть на эту внутреннюю кухню, не дожидаясь выхода полноценного True Sight. Вот так, например, Puppey мотивировал и поддерживал своего керри перед началом третьей игры гранд-финала.  

Странно, почему к такой фиче Dota 2 пришла только сейчас, ведь она проста и гениальна одновременно. Очень хотелось бы увидеть ее не только на следующем The International, но и на мейджорах. 

Классная мета 

Игры на этом The International были идеальны в плане зрелищности, это касается как их средней продолжительности, так и насыщенности действиями. Несмотря на то что последние патчи несколько замедлили игру, это практически не замечалось. Команды действовали активно с первых минут, в мидгейме никто не запирался на своей половине, вместо этого всегда были ранние убийства Рошана, массовые сражения за вышки, частые выходы в «смоках» и прочее. 

К тому же мета The International 2022 не была статичной. Во время группового этапа мы пели дифирамбы Shadow Fiend, который был невероятно эффективен. Начался плей-офф, и герой сдулся: он проиграл почти во всех поединках, а потом и вовсе исчез из драфтов. На его место пришел Leshrac. Можно сказать: «Ну вот, новая имба, как скучно», однако ведь чемпион турнира ни разу не использовал этого героя! То есть главная имба TI оказывается не такой всесильной. Вместе с этим мы получили The International, где в мете есть Pudge, а это всегда дает +10 очков к зрелищности. А ведь еще в топ популярных героев попала Enigma, что само по себе круто: тут вам и драматизм от неудачных Black Hole, и камбэки после успешных. При этом у нас почти не было пассивных хард-керри, нацеленных на лейт, по типу Spectre, Medusa и Anti-Mage.

Твое лицо, когда все играют с имбой Leshrac, а твой мидер солит на Tusk

Пусть это и очень субъективно, но на этом The International далеко не во всех матчах была игра уровня TI, однако при этом стратегии и драфты коллективов всегда располагали к веселой и зрелищной «Доте», которая раскрывалась еще сильнее от большого количества ошибок. К тому же у многих команд хватало собственных уникальных наработок, добавляющих всему действу еще больше разнообразия. И в этом плане особняком стоит Tundra…

Tundra — OG образца TI9

Сразу оговорюсь: я не сторонник теорий заговоров и не разделяю веры во всякие сценарии на TI (и уж тем более в 322 от Xiao8 в прошлом году). Однако я понимаю, что подспорьем к возникновению подобных вещей стало то, что Team Spirit на TI10 не создавала впечатления неоспоримо лучшей команды турнира. Где-то коллективу откровенно повезло, хотя это и не умаляет его заслуг. В этом плане Spirit была похожа на OG времен TI8. А вот Tundra стала OG образца TI9 — и это здорово!

Да, многие наверняка больше сопереживали Puppey или MATUMBAMAN — победа любого из них создала бы классный сторилайн. Однако успех Tundra — это настоящая победа спортивной справедливости. Мы увидели команду, которая здесь и сейчас на голову сильнее абсолютно всех конкурентов. Ни одной проигранной серии за весь турнир и всего одна отданная карта в плей-офф — красноречивая статистика. Однако за этой статистикой стоит еще более интересный подход к игре и уникальные драфты. Tundra приехала в Сингапур играть в свою «Доту» и ни разу от нее не отступила. Shadow Fiend, Morphling, Leshrac, Pudge — коллективу было плевать на то, что популярно и работает у других, ведь у ростера был свой пул. Забавнее всего, что почти в каждом втором матче аналитики говорили, что соперник переиграл Tundra на драфте, а через 30 минут состав Saksa наглядно демонстрировал, как и почему его пик лучше. 

Лучшие герои Tundra на TI11. Кстати, как вам средний KDA у Naga Siren? Впечатляет, да?

При этом победа Tundra — это целиком командная заслуга. Очень долго все успехи ростера приписывались исключительно офлейнеру ростера 33, который считался главной звездой. Однако в Сингапуре все участники команды показали свой максимум. Nine вновь всех удивил нестандартными героями в центре, Оливер Skiter Лепко показал, что лучше него никто в мире не способен играть на Chaos Knight и Naga Siren, из которых он может выжать просто невероятный импакт. А Mirana от Sneyking — это же просто нечто! Да и Saksa с его умением выбрать момент для инициации на Tiny или идеальным исполнением на Hoodwink разве не тянет на звание лучшего игрока турнира? В той же самой степени, что и сам 33, который был полезен на любом офлейнере, даже если соперник во время драфта избавился от половины его пула.  

Господство Tundra в Сингапуре было неоспоримым как в игровом плане, так и в стратегическом. Возможно, именно поэтому коллектив так безэмоционально воспринял победу на The International. Команда просто не сомневалась в своей силе и уже чувствовала исход гранд-финала после первой карты, а может быть, и вообще до старта матча. Такая доминация, конечно, убивает интригу, но оставляет приятное чувство справедливости и логичности произошедшего.

Матчи по расписанию — реальность 

Да, поверить в такое спустя столько лет, кажется, просто невозможно. Однако оказалось, что матчи действительно можно начинать вовремя, а между картами и сериями не обязательно делать гигантские перерывы (здесь где-то флешбэком пронесся мейджор от WePlay). Но серьезно, за столько лет ни один турнирный оператор не сумел ни разу уложиться в свой же график и расписание, растягивая перерывы между играми и в итоге уходя глубоко в ночь. На The International 2022, даже когда речь шла о плей-офф, матчи исправно шли друг за другом, а перерывы были настолько короткими, что вы едва успевали сходить на кухню и заварить чай. И это при том, что у PGL опять была куча технических проблем с трансляцией, звуком на арене и прочим. По сути, мы столкнулись всего с одной серьезной задержкой — в матче OG и Liquid, когда Misha случайно покинул игру. 

TI11 в очередной раз доказал, какой стрим нужно выбирать

Общий уровень продакшена на этом The International в значительной мере уступал предыдущим годам. Довольно поредевший состав каста и отсутствие студий аналитики на месте проведения чемпионата также сказались на итоговом продукте. Однако даже с ограниченными ресурсами можно сделать качественный контент, ну или как минимум достойный. И это получилось только у англоязычной студии. И если вы выбрали именно ее стрим для просмотра The International 2022, то ваше общее впечатление от турнира должно быть чуть выше, чем у зрителей русскоязычной трансляции. Англоязычные кастеры подготовили действительно крутой контент для зрителей. Здесь вам и тот самый мем про «RIP MATUMBAMAN», и серия роликов с харизматичным PyrionFlax. Ну а уж про короткометражку о жизни саппортов и говорить излишне — она гениальна!

И суть не только в роликах, но и в подаче материала, в общей атмосфере в студии. Англоязычные кастеры на протяжении всего турнира пытались создать у зрителя чувство праздника, развеселить его, чем-то удивить. Даже типичные кринж-моменты, как, например, когда Tsunami пинал голографические изображения непикнутых героев, а Sheepsticked изображала Meepo, выглядели мило и душевно. Не в обиду русскоязычным кастерам, но они, складывается впечатление, давно преисполнились своей значимостью и как будто считают, что само их появление в кадре — это уже праздник для зрителя, а дальше и стараться не нужно. И на этом фоне самоотдача англоязычных коллег действительно воодушевляет. Они не использовали эфирное время TI для перепалок и споров друг с другом или ласкания своего эго и перечисления прошлых заслуг, вместо этого они пытались сделать все возможно для зрителя. И в этом плане англоязычная студия продолжает развиваться с каждым турниром, постепенно внедряя новые лица. Но, конечно, главное — это возвращение на TI11 одного старого, но многими любимого лица — 2GD, того самого кастера, которого шесть лет назад послал Габен, отлучив его от профессиональной Dota 2. 

The International 2022 в Сингапуре стал еще одним серьезным аргументом в пользу англоязычного стрима, показав, что даже в тяжелых условиях местные кастеры готовы сделать праздник и шоу. Да и, в конце концов, почему бы не подучить английский? 

***

Пожалуй, то, каким скомканным, немного нелепым и порой будничным получился The International 2022, вполне логично, учитывая прошедший год. Отмененный первый мейджор, неполноценный второй, впопыхах состряпанная лига для СНГ, абсурдный перерасчет баллов… Этот сезон в целом, мягко говоря, был далек от идеала, и TI11 стал кульминацией этой череды неудач и ошибок. Однако все-таки куда приятнее будет запомнить этот The International благодаря крутой игре Tundra, невероятному пути MATUMBAMAN и Puppey через Last Chance до финального дня, безумному матчу Entity — RNG и прочим ярким деталям. А что касается недочетов и проблем TI 2022… Нам остается надеяться, что Гейб учтет ошибки этого турнира, а заодно прекратит сотрудничество с PGL, и через год мы увидим The International, о котором мечтали. 

2. Укажите правильную последовательность предложений, чтобы получился текст ( : 6)1.3.5,4,2,6O 2.4.6,3,6,12,6,5,4,3,12.6.5.1,4,3​

Русский язык

ДобротаПротивЗла   ·   28.04.2021 11:29

Ответов: 1 Показать ответы

6 Обсудить

Ответы

Ответ разместил: Андрей18888

10.03.2019 18:48

водопровод-воды, звонит-звонкий, столяр-стол, премированный-премия, начала-начать, добела-белый, просверлит-сверла, на торте-торт, порты-порт, прожитый-жить, -среды, исповедание-ведать, без стекол-стекольщик, сливовый-слива, плесневеть-плесень, запломбировать-пломба. 

Ответ разместил: watchdogs3

10.03.2019 18:48

шли по лесу два товарища. набрели в лесу на большую рощу.прямо за рощей начиналась густая лесная чаща.в траве друзья наблюдали за множеством насекомых,ужи грелись на солнышке.один из товарищей упал в яму и закричал.

Ответ разместил: ulia1717ulia

10.03.2019 18:48

внизу обрыва мерно и широко шумел прибой.

 

однородные члены: мерно и широко

Ответ разместил: Joyli67

10.03.2019 18:48

Прибил(к чему? ) дат. пад.

Другие вопросы по Русскому языку

.(Напишите, какой, по вашему, станет школа(улица, село, город и т. п.) через десять-двадцать лет.(5-7 предложений! ))….

Русский язык

28.02.2019 03:20

4 ответ(ов)

Открыть

2508sanya

.(Вновгороде жил добрый молодец по имени садко. и были у него гусли звонкие, яровчатые. заиграет он -и боярин знатный, и купец богатый, все слушают гусляра. найди словосочетание су…

Русский язык

28.02.2019 15:40

4 ответ(ов)

Открыть

lenaguceva

Разобрать по состау слова ; лисонька, коровушка. …

Русский язык

01.03.2019 01:50

3 ответ(ов)

Открыть

AngelinaMois

Предложение со словами пшеница , жена, жатва , справедливость , парень, охранять , один, пусть, легко, заботиться и человечность…

Русский язык

01.03.2019 08:40

2 ответ(ов)

Открыть

volkovaw

Небольшое сочинение на тему : » письмо другу»…

Русский язык

01.03.2019 11:30

3 ответ(ов)

Открыть

tttyadoyan235

Мне нужно сочинение на тему «почему слова тройка, пятёрка, миллион — это существительные»?…

Русский язык

01.03.2019 21:40

3 ответ(ов)

Открыть

Tasher3tapora

Написать 10 сложноподченённые предложения…

Русский язык

02.03.2019 06:10

4 ответ(ов)

Открыть

samira2314

Разобрать предложения по членам предложения. 1.однажды утром я пошел гулять.2. я видел как машина свернула влево. 3.утром всегда холодно. 4.однажды я видел белку. 5.чудесно иметь д…

Русский язык

02.03.2019 06:50

3 ответ(ов)

Открыть

leramilver

Нужно составить предложения по схемам: 1) подлежащее сказуемое подлежащее. 2) подлежащее сказуемое подлежащее и подлежащее….

Русский язык

02.03.2019 09:10

2 ответ(ов)

Открыть

ivanovali0109

Написать несколько примеров по разбору словосочетание…

Русский язык

02.03.2019 12:40

2 ответ(ов)

Открыть

Klininoolp

Морфологический разбор слова пережгло…

Русский язык

02.03.2019 17:20

4 ответ(ов)

Открыть

moxley00

Сочинение на тему портретный очерк мамы…

Русский язык

02.03.2019 21:50

2 ответ(ов)

Открыть

Емсимася

Еще вопросы

Самые популярные сегодня

Создание статьи MLA с цитатами и библиографией

Если вы учитесь в колледже и пишете исследовательские работы, то, скорее всего, вы основываете свое форматирование на этом, Справочнике MLA для авторов научных статей .

Теперь, когда я говорю «исследовательские статьи», я в основном имею в виду статьи по английскому языку, литературе, истории, политологии.0004, вероятно, является наиболее распространенным, и его легко придерживаться при использовании Microsoft Word.

Позвольте мне показать вам, как это сделать.

Я здесь с начальным экраном, справа, где он предлагает вам всевозможные забавные шаблоны на выбор.

Я собираюсь найти ключевое слово MLA , а затем нажать Enter, и поехали.

У нас есть исследовательская работа в стиле MLA , хорошо? Я собираюсь открыть это через секунду.

Есть еще APA здесь, хорошо.

Это также полезно, если ваш профессор хочет, чтобы вы использовали это руководство или этот справочник, но MLA — это тот, который мы собираемся использовать сегодня.

Я дважды щелкну по нему и открою. И это всего лишь шаблон, верно? Вы, наверное, уже делали шаблоны.

Выберите поля и заполните их. Я вставил сюда номер моего курса, English Composition 100.

Теперь, смотрите, я сделал орфографическую ошибку.

На самом деле, когда я спросил группу профессоров колледжей, что их больше всего раздражает. Удивительно, но самым важным было то, что студенты не используют проверку орфографии.

Итак, если вы видите красную волнистую линию, щелкните ее правой кнопкой мыши и замените ее правильным написанием.

Другая особенность проверки орфографии заключается в том, что люди используют ее, но не проявляют осторожности при замене предлагаемых слов нужными. Итак, используйте проверку орфографии и используйте ее осторожно.

Хорошо.

Дата. Вы можете продолжить, и вы можете выбрать эту маленькую стрелку Content Control здесь и выбрать дату выполнения.

Дата автоматически форматируется в формате в стиле MLA , так что сначала день, месяц, а потом год, хорошо? Эта небольшая автоматизация для вас происходит на протяжении всего этого шаблона. Это великолепно.

Например, у вас есть однодюймовое поле слева, которое, согласно MLA , должно быть вашим левым полем.

У вас есть однодюймовое поле справа. У вас есть запас в один дюйм сверху.

Перед заголовком у вас поле в полдюйма, хорошо? Это все заранее создано для вас и готово к использованию, хорошо?

Нет необходимости вводить это вручную и строить все эти поля вручную.

И затем в шаблоне есть всякие замечательные инструкции по особенностям вашей статьи, хорошо? Я собираюсь ввести заголовок здесь: «О зомби в американской художественной литературе». Хорошо, и я удалю подзаголовок. Мне это не нужно. А так просто идите и читайте инструкцию.

Делайте первое и последнее слова заголовка и все основные слова прописными.

Мне нравится делать это быстро. Я выбираю строку, нажимаю Shift+F3, пока не получу начальные прописные буквы для каждого слова, а затем прохожу здесь и снимаю заглавные буквы. слова здесь, как союзы и предлоги.

Ладно, поехали. Так что используйте этот шаблон. Это настоящее благо. Это настоящее сокровище. Если вы продолжите читать здесь, это даст вам больше деталей, например, для котировок более четырех строк используйте стиль Quote здесь.

Хорошо, для длинных цитат, содержащих более одного абзаца — скажем, есть очень длинная цитата, состоящая из двух или трех абзацев — используйте стиль Длинная цитата . Это действительно хороший материал.

У вас есть готовая таблица со всем форматированием, что и MLA рекомендует, и у вас даже есть такие вещи, как эта диаграмма и заголовок здесь с номером рисунка, что полезно.

Структура и организация актиновых филаментов — клетка

Основным белком цитоскелета большинства клеток является актин, который полимеризуется с образованием актиновых филаментов — тонких гибких волокон диаметром примерно 7 нм и длиной до нескольких микрометров (). Внутри клетки актиновые филаменты (также называемые микрофиламентами) организованы в структуры более высокого порядка, образуя пучки или трехмерные сети со свойствами полутвердых гелей. Сборка и разборка актиновых филаментов, их сшивание в пучки и сети и их ассоциация с другими клеточными структурами (такими как плазматическая мембрана) регулируются множеством актин-связывающих белков, которые являются критическими компонентами актинового цитоскелета. Актиновые филаменты особенно многочисленны под плазматической мембраной, где они образуют сеть, обеспечивающую механическую поддержку, определяющую форму клетки и обеспечивающую движение клеточной поверхности, что позволяет клеткам мигрировать, поглощать частицы и делиться.

Рисунок 11.1

Актиновые филаменты. Электронная микрофотография актиновых филаментов. (С любезного разрешения Роджера Крейга, Медицинский центр Массачусетского университета.)

Сборка и разборка актиновых филаментов

Актин был впервые выделен из мышечных клеток, в которых он составляет примерно 20% от общего клеточного белка, в 1942 г. Хотя актин первоначально Считается, что он исключительно участвует в сокращении мышц, но в настоящее время известно, что он является чрезвычайно распространенным белком (обычно от 5 до 10% от общего белка) во всех типах эукариотических клеток. У дрожжей есть только один ген актина, но высшие эукариоты имеют несколько различных типов актина, которые кодируются разными членами семейства генов актина. У млекопитающих, например, есть по крайней мере шесть различных генов актина: четыре экспрессируются в различных типах мышц и два экспрессируются в немышечных клетках. Однако все актины очень похожи по аминокислотной последовательности и сохраняли высокую консервативность на протяжении всей эволюции эукариот. Дрожжевой актин, например, равен 90% идентичны по аминокислотной последовательности актинам клеток млекопитающих.

Трехмерные структуры как отдельных молекул актина, так и актиновых филаментов были определены в 1990 году Кеннетом Холмсом, Вольфгангом Кабшем и их коллегами. Отдельные молекулы актина представляют собой глобулярные белки из 375 аминокислот (43 кДа). Каждый мономер актина ( глобулярный [G] актин ) имеет сайты тесного связывания, которые опосредуют взаимодействия «голова к хвосту» с двумя другими мономерами актина, поэтому мономеры актина полимеризуются с образованием филаментов 9.

0003 (нитчатый [F] актин ) (). Каждый мономер повернут на 166 90 103 o 90 104 филаментов, которые поэтому имеют вид двухцепочечной спирали. Поскольку все актиновые мономеры ориентированы в одном направлении, актиновые филаменты имеют четкую полярность, а их концы (называемые плюс-минус-концами) различимы друг от друга. Эта полярность актиновых филаментов важна как для их сборки, так и для установления уникального направления движения миозина относительно актина, как будет обсуждаться далее в этой главе.

Рисунок 11.2

Сборка и структура актиновых филаментов. (A) Мономеры актина (G-актин) полимеризуются с образованием актиновых филаментов (F-актин). На первом этапе образуются димеры и тримеры, которые затем растут за счет добавления мономеров к обоим концам. (B) Структура (подробнее…)

Сборка актиновых филаментов может быть изучена in vitro путем регулирования ионной силы растворов актина. В растворах с низкой ионной силой актиновые филаменты деполимеризуются до мономеров.

Затем актин спонтанно полимеризуется, если ионная сила увеличивается до физиологического уровня. Первым этапом полимеризации актина (называемым нуклеацией) является образование небольшого агрегата, состоящего из трех мономеров актина. Затем актиновые филаменты могут расти за счет обратимого добавления мономеров к обоим концам, но один конец (плюс-конец) удлиняется в пять-десять раз быстрее, чем минус-конец. Мономеры актина также связывают АТФ, который гидролизуется до АДФ после сборки филамента. Хотя АТФ не требуется для полимеризации, мономеры актина, с которыми связан АТФ, полимеризуются легче, чем те, с которыми связан АДФ. Как обсуждается ниже, связывание и гидролиз АТФ играют ключевую роль в регуляции сборки и динамического поведения актиновых филаментов.

Поскольку полимеризация актина является обратимой, филаменты могут деполимеризоваться путем диссоциации субъединиц актина, что позволяет при необходимости разрушать филаменты актина (). Таким образом, между мономерами актина и филаментами существует кажущееся равновесие, которое зависит от концентрации свободных мономеров.

Скорость включения мономеров актина в филаменты пропорциональна их концентрации, поэтому существует критическая концентрация мономеров актина, при которой скорость их полимеризации в филаменты равна скорости диссоциации. При этой критической концентрации мономеры и нити находятся в очевидном равновесии.

Рисунок 11.3

Обратимая полимеризация мономеров актина. Полимеризация актина представляет собой обратимый процесс, в котором мономеры как связываются с концами актиновых филаментов, так и диссоциируют от них. Скорость диссоциации субъединицы ( k _off

) не зависит от концентрации мономера, (подробнее…)

Как отмечалось ранее, два конца актиновой нити растут с разной скоростью, при этом мономеры присоединяются к быстрому -растущего конца (плюсового конца) в пять-десять раз быстрее, чем медленно растущего (минусового) конца. Поскольку АТФ-актин диссоциирует менее легко, чем АДФ-актин, это приводит к разнице в критической концентрации мономеров, необходимых для полимеризации на двух концах. Эта разница может привести к явлению, известному как беговая дорожка , иллюстрирующая динамическое поведение актиновых филаментов (). Чтобы система находилась в общем устойчивом состоянии, концентрация свободных актиновых мономеров должна быть промежуточной между критическими концентрациями, необходимыми для полимеризации на положительном и отрицательном концах актиновых филаментов. В этих условиях происходит чистая потеря мономеров с отрицательного конца, которая уравновешивается чистым добавлением к положительному концу. Беговая дорожка требует АТФ, при этом АТФ-актин полимеризуется на положительном конце филаментов, а АДФ-актин диссоциирует на отрицательном конце. Хотя роль беговой дорожки в клетке неясна, она может отражать динамическую сборку и разборку актиновых филаментов, необходимых клеткам для движения и изменения формы.

Рисунок 11.4

Беговая дорожка. Минус-концы актиновых филаментов растут медленнее, чем плюс-концы. Эта разница в скорости роста отражается в разнице в критической концентрации мономеров для добавления к двум концам нити. Актин, связанный с АТФ (подробнее…)

Следует отметить, что некоторые препараты, используемые в клеточной биологии, действуют путем связывания с актином и воздействия на его полимеризацию. Например, цитохалазины связываются с плюс-концами актиновых филаментов и блокируют их удлинение. Это приводит к изменениям формы клеток, а также к ингибированию некоторых типов клеточных движений (например, клеточного деления после митоза), указывая на то, что для этих процессов необходима полимеризация актина. Другой препарат, фаллоидин, прочно связывается с актиновыми филаментами и препятствует их диссоциации на отдельные актиновые молекулы. Фаллоидин, меченный флуоресцентным красителем, часто используется для визуализации актиновых филаментов с помощью флуоресцентной микроскопии.

Внутри клетки как сборка, так и разборка актиновых филаментов регулируются актин-связывающими белками (). Оборот актиновых филаментов внутри клетки примерно в 100 раз быстрее, чем in vitro , и этот быстрый оборот актина играет критическую роль в различных клеточных движениях. Ключевым белком, ответственным за разборку актиновых филаментов внутри клетки, является кофилин

, который связывается с актиновыми филаментами и увеличивает скорость диссоциации мономеров актина с минус-конца. Кроме того, кофилин может разрезать актиновые филаменты, генерируя больше концов и дополнительно усиливая разборку филаментов.

Рисунок 11.5

Влияние актин-связывающих белков на оборот филаментов. Кофилин связывается с актиновыми филаментами и увеличивает скорость диссоциации мономеров актина (связанных с АДФ) с минус-конца. Кофилин остается связанным с мономерами АДФ-актина, предотвращая их повторную сборку. их реинкорпорация в нити. Однако другой актин-связывающий белок, профилин , может обратить вспять этот эффект кофилина и стимулировать включение мономеров актина в филаменты. Профилин действует, стимулируя обмен связанного АДФ на АТФ, что приводит к образованию мономеров АТФ-актина, которые диссоциируют от кофилина и затем становятся доступными для сборки в филаменты. Другие белки ( Arp2/3, белки ) могут служить сайтами зародышеобразования для инициации сборки новых филаментов, поэтому кофилин, профилин и белки Arp2/3 (а также другие актин-связывающие белки) могут действовать вместе, способствуя образованию новых филаментов. быстрый оборот актиновых филаментов и ремоделирование актинового цитоскелета, что необходимо для разнообразных клеточных движений и изменений формы клеток. Как и следовало ожидать, активности белков cofilin, profilin и Arp2/3 контролируются множеством клеточных сигнальных механизмов (обсуждаемых в главе 13), позволяющих должным образом регулировать полимеризацию актина в ответ на стимулы окружающей среды.

Организация актиновых филаментов

Отдельные актиновые филаменты собраны в два основных типа структур, называемых актиновыми пучками и актиновыми сетями, которые играют разные роли в клетке (). В пучках актиновые филаменты сшиты в плотно упакованные параллельные массивы. В сетях актиновые филаменты слабо сшиты в ортогональные массивы, которые образуют трехмерные сети со свойствами полутвердых гелей. Формирование этих структур регулируется множеством актин-связывающих белков, которые сшивают актиновые филаменты по разным схемам.

Рисунок 11.6

Актиновые пучки и сети. (A) Электронная микрофотография пучков актина (стрелки), выступающих из актиновой сети (стрелки), лежащей в основе плазматической мембраны макрофага. Пучки поддерживают выступы клеточной поверхности, называемые микрошипами или филоподиями (см. (подробнее…)

Все актин-связывающие белки, участвующие в сшивании, содержат по крайней мере два домена, которые связывают актин, что позволяет им связывать и сшивать два разных актиновых филамента. Природа ассоциации между этими филаментами затем определяется размером и формой сшивающих белков (см. ).Белки, которые сшивают актиновые филаменты в пучки (наз.0003 связывающие актин белки ) обычно представляют собой небольшие жесткие белки, которые заставляют филаменты плотно прилегать друг к другу. Напротив, белки, которые организуют актиновые филаменты в сети, имеют тенденцию быть большими гибкими белками, которые могут сшивать перпендикулярные филаменты. Эти сшивающие актин белки, по-видимому, представляют собой модульные белки, состоящие из родственных структурных единиц. В частности, актин-связывающие домены многих из этих белков сходны по структуре. Они разделены спейсерными последовательностями, которые различаются по длине и гибкости, и именно эти различия в спейсерных последовательностях ответственны за различные свойства перекрестного связывания различных актин-связывающих белков.

Существует два структурно и функционально различных типа пучков актина, включающих разные белки, связывающие актин (). Пучки первого типа, содержащие близко расположенные актиновые филаменты, выстроенные параллельно, поддерживают выступы плазматической мембраны, такие как микроворсинки (см. и ). В этих пучках все филаменты имеют одинаковую полярность, плюс-концы которых прилегают к плазматической мембране. Примером связывающего белка, участвующего в формировании этих структур, является 9.0003 fimbrin , который был впервые выделен из микроворсинок кишечника, а затем обнаружен в поверхностных проекциях самых разных типов клеток. Фимбрин представляет собой белок размером 68 кД, содержащий два смежных актин-связывающих домена. Он связывается с актиновыми филаментами как мономер, удерживая две параллельные филаменты близко друг к другу.

Рис. 11.7

Белки, связывающие актин. Актиновые филаменты связаны в два типа пучков различными белками, связывающими актин. Фимбрин имеет два смежных актин-связывающих домена (ABD) и сшивает актиновые филаменты в плотно упакованные параллельные пучки, в которых (далее…)

Рисунок 11.15

Электронная микрофотография микроворсинок. Микроворсинки (стрелки) эпителиальных клеток кишечника представляют собой пальцевидные выступы плазматической мембраны. Они поддерживаются пучками актина, закрепленными в плотной области коры, называемой терминальной паутиной. (Fred E. (подробнее…)

Рисунок 11.16

Организация микроворсинок. Коровые актиновые филаменты микроворсинок сшиты в плотно упакованные пучки фимбринами и виллинами. Они прикреплены к плазматической мембране по всей своей длине латеральными ответвлениями. , состоящий из миозина I и кальмодулина (далее…)

Второй тип актиновых пучков состоит из филаментов, которые расположены более свободно и способны к сокращению, например актиновые пучки сократительного кольца, которое делит клетки на две части после митоза. Более рыхлая структура этих пучков (которые называются сократительными пучками ) отражает свойства сшивающего белка α-actinin . В отличие от фимбрина, α-актинин связывается с актином в виде димера, каждая субъединица которого представляет собой белок массой 102 кДа, содержащий единственный сайт связывания актина. Следовательно, филаменты, сшитые α-актинином, разделены большим расстоянием, чем сшитые фимбрином (40 нм вместо 14 нм). Увеличенное расстояние между филаментами позволяет моторному белку миозину взаимодействовать с актиновыми филаментами в этих пучках, что (как обсуждается позже) позволяет им сокращаться.

Актиновые филаменты в сетях удерживаются вместе большими актин-связывающими белками, такими как филамин (). Филамин (также называемый актин-связывающим белком или ABP-280) связывает актин в виде димера из двух субъединиц по 280 кДа. Актин-связывающие домены и домены димеризации находятся на противоположных концах каждой субъединицы, поэтому димер филамина представляет собой гибкую V-образную молекулу с актин-связывающими доменами на концах каждого плеча. В результате филамин образует поперечные связи между ортогональными актиновыми филаментами, создавая рыхлую трехмерную сеть. Как обсуждается в следующем разделе, такие сети актиновых филаментов лежат под плазматической мембраной и поддерживают поверхность клетки.

Рисунок 11.8

Актиновые сети и филамины. Филамин представляет собой димер двух больших (280 кДа) субъединиц, образующих гибкую V-образную молекулу, которая сшивает актиновые филаменты в ортогональные сети. Карбоксиконцевой домен димеризации отделен от аминоконцевого (подробнее…)

Ассоциация актиновых филаментов с плазматической мембраной

Актиновые филаменты сильно сконцентрированы на периферии клетки, где они образуют трехмерную сеть под плазматической мембраной (см. ). Эта сеть актиновых филаментов и связанных с ними актин-связывающих белков (называемая клеточной корой) определяет форму клетки и участвует во множестве действий клеточной поверхности, включая движение. Таким образом, ассоциация актинового цитоскелета с плазматической мембраной играет центральную роль в клеточной структуре и функции.

Красные кровяные тельца (эритроциты) оказались особенно полезными для изучения как плазматической мембраны (обсуждается в следующей главе), так и коркового цитоскелета. Основным преимуществом эритроцитов для этих исследований является то, что они не содержат ядра или внутренних органелл, поэтому их плазматическая мембрана и связанные с ней белки могут быть легко выделены без загрязнения различными внутренними мембранами, которыми изобилуют другие типы клеток. Кроме того, в эритроцитах человека отсутствуют другие компоненты цитоскелета (микротрубочки и промежуточные филаменты), поэтому кортикальный цитоскелет является основным фактором, определяющим их отличительную форму в виде двояковогнутых дисков.

Рисунок 11.9

Морфология эритроцитов. Сканирующая электронная микрофотография эритроцитов, показывающая их двояковогнутую форму. (Omikron/Photo Researchers, Inc.)

Основным белком, составляющим структурную основу коркового цитоскелета эритроцитов, является актин-связывающий белок спектрин, который родственен филамину (). Спектрин эритроцитов представляет собой тетрамер, состоящий из двух различных полипептидных цепей, называемых α и β, с молекулярной массой 240 и 220 кДа соответственно. Р-цепь имеет один актин-связывающий домен на амино-конце. Цепи α и β связываются латерально, образуя димеры, которые затем соединяются друг с другом, образуя тетрамеры с двумя актин-связывающими доменами, разделенными примерно 200 нм. Затем концы спектриновых тетрамеров связываются с короткими актиновыми филаментами, образуя спектрин-актиновую сеть, которая формирует кортикальный цитоскелет эритроцитов. Основная связь между спектрин-актиновой сетью и плазматической мембраной обеспечивается белком, называемым 9. 0003 анкирин , который связывается как со спектрином, так и с цитоплазматическим доменом распространенного трансмембранного белка, называемого полосой 3. Дополнительная связь между спектрин-актиновой сетью и плазматической мембраной обеспечивается белком 4.1, который связывается со спектрин-актиновыми соединениями как а также узнавание цитоплазматического домена гликофорина (еще одного распространенного трансмембранного белка).

Рисунок 11.10

Структура спектрина. Спектрин представляет собой тетрамер, состоящий из двух α- и двух β-цепей. Каждая β-цепь имеет один актин-связывающий домен (ABD) на амино-конце. И α-, и β-цепи содержат множественные повторы α-спирали (подробнее…)

Рисунок 11.11

Ассоциация коркового цитоскелета эритроцитов с плазматической мембраной. Плазматическая мембрана связана с сетью тетрамеров спектрина, сшитых короткими актиновыми филаментами в ассоциации с белком 4.1. Спектрин-актиновая сеть связана (подробнее…)

Другие типы клеток содержат связи между корковым цитоскелетом и плазматической мембраной, подобные тем, которые наблюдаются в эритроцитах. Белки, родственные спектрину (неэритроидный спектрин также называют fodrin ), анкирин и белок 4.1 экспрессируются в широком диапазоне типов клеток, где они выполняют функции, аналогичные описанным для эритроцитов. Например, семейство белков, родственных белку 4.1 ( белков ERM ), связывает актиновые филаменты с плазматическими мембранами многих различных типов клеток, а родственный спектрину белок филамин (см. плазматическая мембрана тромбоцитов. Другим представителем этой группы спектриновых белков является 9.0003 дистрофин , представляющий особый интерес, поскольку он является продуктом гена, ответственного за два типа мышечной дистрофии (дистрофию Дюшенна и болезнь Беккера). Эти Х-сцепленные наследственные заболевания приводят к прогрессирующей дегенерации скелетных мышц, и пациенты с более тяжелой формой заболевания (мышечная дистрофия Дюшенна) обычно умирают в подростковом возрасте или в начале двадцатых годов. Молекулярное клонирование гена, ответственного за это заболевание, показало, что он кодирует крупный белок (427 кДа), который либо отсутствует, либо является аномальным у пациентов с мышечной дистрофией Дюшенна или Беккера соответственно. Последовательность дистрофина также указывает на то, что он родственен спектрину, с одним актин-связывающим доменом на его амино-конце и мембраносвязывающим доменом на его карбокси-конце. Подобно спектрину, дистрофин образует димеры, которые связывают актиновые филаменты с трансмембранными белками плазматической мембраны мышечной клетки. Эти трансмембранные белки, в свою очередь, связывают цитоскелет с внеклеточным матриксом, который играет важную роль в поддержании стабильности клеток во время мышечного сокращения.

В отличие от однородной поверхности эритроцитов большинство клеток имеют специализированные области плазматической мембраны, которые образуют контакты с соседними клетками, тканевыми компонентами или другими субстратами (такими как поверхность чашки для культивирования). Эти области также служат местами прикрепления пучков актиновых филаментов, которые прикрепляют цитоскелет к областям клеточного контакта. Эти прикрепления актиновых филаментов особенно очевидны в фибробластах, поддерживаемых в тканевой культуре. Такие культивируемые фибробласты секретируют белки внеклеточного матрикса (обсуждаемые в главе 12), которые прилипают к пластиковой поверхности чашки для культивирования. Затем фибробласты прикрепляются к культуральной чашке посредством связывания трансмембранных белков (называемых интегринами) с внеклеточным матриксом. Места прикрепления представляют собой отдельные области (называемые фокальными спайками), которые также служат местами прикрепления больших пучков актиновых филаментов, называемых 9.0003 стрессовые волокна .

Рис. 11.12

Напряженные волокна и фокальные спайки. Флуоресцентная микроскопия фибробластов человека, в которых актиновые филаменты были окрашены флуоресцентным красителем. Стрессовые волокна представляют собой пучки актиновых филаментов, закрепленных в местах прикрепления клеток к (подробнее…)

Стрессовые волокна представляют собой сократительные пучки актиновых филаментов, сшитых α-актинином, которые закрепляют клетку и оказывают натяжение на субстрат . Они прикрепляются к плазматической мембране при фокальных спайках посредством взаимодействия с интегрином. Эти сложные и недостаточно изученные ассоциации могут быть опосредованы несколькими другими белками, в том числе талин и винкулин (). Например, и талин, и α-актинин связываются с цитоплазматическими доменами интегринов. Талин также связывается с винкулином, который, в свою очередь, взаимодействует с актином. Другие белки, обнаруживаемые в фокальных спайках, могут также участвовать в прикреплении актиновых филаментов, и комбинация этих взаимодействий может отвечать за сцепление актиновых филаментов с плазматической мембраной.

Рисунок 11.13

Прикрепление стрессовых волокон к плазматической мембране при фокальных спайках. Очаговые спайки опосредованы связыванием интегринов с белками внеклеточного матрикса. Стрессовые волокна (пучки актиновых филаментов, сшитых α-актинином) тогда (далее…)

Актиновый цитоскелет аналогичным образом прикрепляется к областям межклеточных контактов, называемым адгезивными соединениями (2). В слоях эпителиальных клеток эти соединения образуют непрерывную лентоподобную структуру (называемую адгезионным поясом ) вокруг каждой клетки, в которой нижележащий сократительный пучок актиновых филаментов связан с плазматической мембраной. Контакт между клетками в местах слипчивых соединений обеспечивается трансмембранными белками, называемыми кадгеринами, которые обсуждаются далее в главе 12. Кадгерины образуют комплекс с цитоплазматическими белками, называемыми 9.0003 катенины , которые связаны с актиновыми филаментами.

Рисунок 11.14

Прикрепление актиновых филаментов к слипчивым соединениям. Межклеточные контакты в соединениях адгезивов опосредуются кадгеринами, которые служат местами прикрепления пучков актина. В слоях эпителиальных клеток эти соединения образуют непрерывный пояс актина (подробнее…)

Выпячивания клеточной поверхности

Поверхности большинства клеток имеют разнообразные выпячивания или расширения, участвующие в клеточном движении, фагоцитозе, или специализированные функции, такие как поглощение питательных веществ. Большинство этих расширений клеточной поверхности основаны на актиновых филаментах, которые организованы либо в относительно постоянные, либо в быстро перестраивающиеся пучки или сети.

Наиболее хорошо охарактеризованными из этих основанных на актине выпячиваний клеточной поверхности являются микроворсинок, пальцевидных отростков плазматической мембраны, которые особенно многочисленны на поверхности клеток, участвующих в абсорбции, таких как эпителиальные клетки, выстилающие кишечник (). Микроворсинки этих клеток образуют слой на апикальной поверхности (называемый щеточной каймой ), который состоит примерно из тысячи микроворсинок на клетку и увеличивает открытую площадь поверхности, доступную для абсорбции, в 10–20 раз. Помимо их роли в абсорбции, специализированные формы микроворсинок, 9Стереоцилии 0003 слуховых волосковых клеток отвечают за слух, обнаруживая звуковые колебания.

Их обилие и простота выделения облегчили детальный структурный анализ кишечных микроворсинок, которые содержат плотно упакованные параллельные пучки из 20-30 актиновых филаментов (4). Филаменты в этих пучках частично сшиты фимбрином, белком, связывающим актин (обсуждавшийся ранее), который присутствует в поверхностных выступах различных типов клеток. Однако основным связывающим актин белком микроворсинок кишечника является 9.0003 villin, белок массой 95 кДа, присутствующий в микроворсинках только нескольких специализированных типов клеток, таких как клетки, выстилающие кишечник и почечные канальцы. По своей длине актиновые пучки микроворсинок прикрепляются к плазматической мембране латеральными ответвлениями, состоящими из кальцийсвязывающего белка кальмодулина в ассоциации с миозином I, который может участвовать в движении плазматической мембраны по актиновому пучку микроворсинок. В своей основе актиновые пучки закрепляются в богатой спектрином области актиновой коры, называемой терминальной паутиной, которая сшивает и стабилизирует микроворсинки.

В отличие от микроворсинок, многие поверхностные выпячивания представляют собой временные структуры, формирующиеся в ответ на внешние раздражители. Несколько типов этих структур отходят от переднего края движущейся клетки и участвуют в клеточной локомоции. Псевдоподии представляют собой отростки умеренной ширины, основанные на актиновых филаментах, сшитых в трехмерную сеть, которые отвечают за фагоцитоз и движение амеб по поверхности. Ламеллиподии представляют собой широкие листовидные отростки на переднем крае фибробластов, которые также содержат сеть актиновых филаментов. Многие клетки также расширяют микрошипы или filopodia , тонкие выступы плазматической мембраны, поддерживаемые пучками актина. Формирование и ретракция этих структур основаны на регулируемой сборке и разборке актиновых филаментов, как обсуждается в следующем разделе.

Рисунок 11.17

Примеры выступов клеточной поверхности, участвующих в фагоцитозе и движении. (A) Сканирующая электронная микрофотография, показывающая псевдоподии макрофага, поглощающего опухолевые клетки во время фагоцитоза. (B) Амеба с несколькими расширенными псевдоподиями.