Разобрать по составу составить: Страница не найдена

Содержание

Как разобрать по составу слова: поставить, составить, кусочек?

Глагол настоящего времени Летят образован от инфинитива Лететь и обладает личным окончанием -ЯТ: Летят-Лечу-Летим-Летишь-Летит. Отвечает он на вопрос Что делают? и является глаголом несовершенного вида.

Однокоренными словами оказываются: Лететь-Летчик-Полет-Отлет-Вылетать-Перелет-Долетался.

Следовательно корнем слова будет морфема ЛЕТ-.

Получаем: ЛЕТ-ЯТ (корень-окончание), основа слова: ЛЕТ-.

Чтобы разобрать по составу слово был, определю, что оно обозначает действие и отвечает на вопрос: что делал7

Это глагол в форме прошедшего времени. Это очень важно установить, так как от этого зависит морфемный разбор этого короткого, но довольно трудного для разбора слова.

Оно изменяемое:

человек был_ , жизнь был-а, озеро был-о, дети был-и.

Сравнив эти формы, укажу нулевое окончание в форме глагола мужского рода.

А теперь вспомню, что глаголы прошедшего времени образуются с помощью формообразующего суффикса -л- от основы инфинитива:

бы-ть - бы-л.

Значит, и корень сразу отыскался. Запишу состав слова в виде схемы:

бы-л_ корень/суффик/окончание.

У меня был ёжик, который по ночам топал, как полк солдат.

В данном случае нам нужно разобрать по составу слова: поживать и зимовье.

Слово поживать является глаголом. Глагол поживать отвечает на вопрос Что делать.

Слово поживать состоит из приставки по, корня жи, суффикса в, суффикса а и окончания ть. Слово поживать выстроено по схеме: приставка - корень - корень - суффикс - окончание, а именно по - жи - в - а - ть. Основой слова является пожива.

Слово зимовье является неодушевленным существительным среднего рода. Существительное зимовье в единственном числе отвечает на вопрос Что.

Слово зимовье состоит из корня зим, суффикса овь и окончания

е. Слово зимовье выстроено по схеме: корень - суффикс - окончание, а именно зим - овь - е. Основой слова является зимовь.

НЕУКЛЮЖИЙ. Это прилагательное, значит, изменяется, имеет окончание. Изменим его: неуклюжая, неуклюжих, неуклюж. В исходном слове окончание -ий. Подберем однокоренные слова, чтобы узнать корень: неуклюжесть, неуклюже. Получается, что корень - неуклюж-. Основа тоже неуклюж-. Так что в слове всего 2 морфемы.

Слов-корень ар-суффикс ик-суффикс нолевое окончание основа всё слово

К 105 - летию со дня рождения Алексея Петровича Маресьева.

Алексей Петрович Маресьев (1916-2001 г.) - легендарный лётчик Великой Отечественной войны. Он стал прототипом героя повести Б.Полевого "Повесть о настоящем человеке" и фильма "Повесть о настоящем человеке" (1948 г, там он - Мересьев).

18 изнурительных суток добирался раненный в ноги лётчик до линии фронта, к своим. Ноги воспалились, началась гангрена. Он был в таком тяжёлом состоянии, что его собирались везти в морг, но на пути встретился профессор и приказал везти на операционный стол.

Жизнь была спасена, но ноги - ампутированы в области голени (а ему - только 26). Невероятная сила духа, желание вновь вернуться в строй помогли совершить подвиг: без ног, на протезах научился не только ходить, но и управлять боевым самолётом! Уже после ампутации он смог сбить 7 вражеских самолётов. В августе 1943 года ему было присвоено звание Героя Советского Союза.

В июне 1943 года руководство Комиссии по истории Великой Отечественной войны АН СССР запланировало поездку научных сотрудников в расположение 3-й гвардейской истребительной авиационной дивизии с целью взять интервью у наиболее отличившихся летчиков-истребителей. Никто не мог предвидеть, что среди опрошенных будет Алексей Петрович Маресьев (1916-2001) - безногий летчик, будущий Герой Советского Союза. Сотрудники комиссии были первыми, кто подробно записал рассказ Маресьева о пережитом. Это документ потрясающей человеческой силы.

Стенограмма беседы с гвардии лейтенантом 63-го гвардейского истребительного авиаполка 3й гвардейской истребительной авиадивизии Маресьевым Алексеем Петровичем, 1916 года рождения. Кандидат в члены партии. Заместитель комэска. Награжден орденом Красного Знамени.

Беседу на одном из боевых аэродромов проводила научный сотрудник Комиссии Е.М. Грицевская, стенографировала О.В. Крауз.

ДО ВОЙНЫ. "НАТАСКАЛИ В АЭРОКЛУБ ГОРЮЧЕГО..."


"Родился я в семье крестьянина в г. Камышине Сталинградской области.В 8 лет пошел учиться, окончил школу 1-й ступени, во второй ступени проучился до 6-го класса, а потом перешел учиться в ФЗУ4 на лесном заводе. Там у меня работала мать и два брата. ФЗУ давало образование за семилетку. Учился я по специальности токаря по металлу. Проработал я по этой специальности на заводе до 34 года августа месяца, причем я все время работал и пытался поступить учиться дальше. Я учился без отрыва от производства на вечерних курсах рабфака при сельскохозяйственном институте, после его мог ехать учиться в этот институт. Но так как у меня не было никаких средств для того, чтобы там учиться, то я не закончил его 4 месяца, так как прочел в "Правде", что начинается прием в МАИ.

Я послал письмо, чтобы мне выслали правила приема, а на свое предприятие подал заявление, чтобы меня отпустили бы учиться. Но с производства меня не отпустили, и послали меня в ДВК строить г. Комсомольск. А я с 29 года был комсомольцем.

Приехали мы туда, нам сказали, что строительству нужен лес, и мы работали на лесозаготовках в тайге. За хорошую работу меня перевели работать по специальности, и я там вскоре стал работать уже механиком-дизельщиком на водном транспорте. И там я работал до 1937 г. июля месяца. Здесь меня призвали в Красную Армию. В Комсомольске я окончил без отрыва от производства аэроклуб. Очень интересно, как мы его кончали. Город только начинал строиться. Мы только устроили места, где можно было бы жить самим строителям. Я работал на водном транспорте, там было горючее, масло, бензин, а другой товарищ работал на авиационном заводе, и мы натаскали в аэроклуб горючего и вообще кто, что мог. Так мы учились и закончили аэроклуб.

После я попал в армию, на остров Сахалин, там я служил в пограничной авиации в пограничном отряде, работал мотористом, летать мне не давали, так как одному такому летчику дали полетать, а он поломал самолет. Но я дошел до командующего войсками, и он сказал: "Попробуйте дать, если он хорошо летает, то пусть летает". Пока меня стали проверять, командующий присылает специальное направление, что, если командир отделения соответствует требованиям, имеет образование семилетки, закончил аэроклуб и комсомолец, то послать его в военную школу. Меня вызвали и спросили, куда хочешь? Я сказал, что хочу в военную летную школу. И меня послали в Читу. Потом школу перевели в Батайск, и я ее там закончил.

Учеба мне давалась легко. За отличную технику пилотирования меня оставили работать инструктором, но я не хотел там оставаться, а хотел в часть. Но все же был оставлен инструктором в школе, где я и пробыл с 40 по 41 год август месяц. Закончил возить группу, выпустил всех своих курсантов и стали меня посылать дежурить в Ростов, т.е. давали мне вроде как боевую работу. Я взял и написал докладную записку, чтобы меня взяли на фронт. Однажды я дежурю на главном аэродроме, и меня вызывает командир звена. Встречает он меня словами: "До свиданья, до свиданья". Я говорю: "Что это за до свиданья?". - "А ты улетаешь". Оказывается, по моей докладной записке меня направили на фронт.

НАЧАЛО ВОЙНЫ. "РАБОТАЛИ ИСКЛЮЧИТЕЛЬНО ПО ШТУРМОВКАМ..."

6 августа 1941 г. несколько человек нас полетели на фронт. Попал я в 296 истребительный полк8 и начал воевать от Кировограда. Потом по мере отступления наших войск мы шли на Никополь, Запорожье. Как только мы прибыли на фронт, мы начали вести боевую работу. Работа была очень напряженная. Нашей группе пришлось работать самим и за техников, так как техники от нас немного отстали. Приходилось делать по 7-8 боевых вылетов в день. Работали мы на "И-16" исключительно по штурмовкам. Один раз у нас только была встреча пара на пару с "Мессершмиттами", но они, как обычно, боя не приняли.

После того, как мы поехали в Куйбышев на формирование, меня там перевели в другой полк командиром звена, и мы воевали на "Яках". Летчики у нас были молодые. С этим полком мы немного постояли под Москвой, здесь мы работали как бы на ПВО и одновременно тренировался летный состав. Тогда мы были в 580 полку. А потом уже в марте месяце 42 г. мы поехали на северо-западное направление, когда под Ст. Руссой была окружена немецкая 16 армия. Мы тогда работали на демянскую группировку.

Когда я пришел непосредственно на фронт, меня назначили помощником комэска. На Северо-Западном фронте мне пришлось повоевать 7 или 8 дней. Здесь в нашу задачу входило уничтожение транспортных самолетов, которые подбрасывали 16 армии боеприпасы и продовольствие. Мы их сбили за 8 суток три штуки. А потом меня самого подбили.

БОЙ. "И МЕНЯ ВЫБРОСИЛО ИЗ САМОЛЕТА..."

Подбили меня 4 апреля 42 г10. Пробили мне мотор. А я был над их территорией. Высота была метров 800. Я немного оттянул самолет на свою территорию, километров за 12, но там были леса и болота, и сесть было негде. Я и пошел садиться на лес, а там лес редкий и высокий и на лес садиться было очень трудно. Я прикрылся рукой, чтобы не удариться, может быть, думаю, жив останусь, так, чтобы глаза не выбило. Положил голову на руки, и здесь слева я увидел площадку. И здесь я сделал большую глупость. Я выпустил шасси, так как мне показалось, что там - площадка, но, когда я стал разворачиваться, то мотор остановился, и машина пошла книзу. Я только успел выровнять ее из крена, как лыжами самолет задел за макушку дерева, и получился полный скоростной капот, т.е. самолет перевернулся кверху колесами. Я был привязан ремнями, но их оторвало и меня выбросило из самолета. Так что я упал метров с 30, хотя точно не знаю. По-видимому, получилось так,что я упал на снег, а потом я покатился по дороге и ударился виском, и минут 40 я лежал без памяти. Потом, когда я очнулся, я чувствую что-то на виске, приложил руку - кровь, и висит лоскуток кожи. Я его хотел сначала оторвать, а потом чувствую, что кожа толстая и обратно ее приложил к пораненному месту. Кровь там запеклась, и все потом заросло.

От самолета осталась только одна кабина и хвост - все разлетелось в разные стороны. Я, вероятно, сильно ударился, так как вскоре у меня начались галлюцинации. Я очень хотел испортить мотор, вынимаю пистолет и начинаю стрелять по мотору. И мне кажется, что я не попадаю, я выстрелил одну обойму в пистолете, затем другую. Потом посмотрел опять в лес, и я вижу, что там стоят самолеты, стоят люди, я кричу, чтобы мне помогли, но потом смотрю - ничего нет. Посмотришь в другую сторону, опять то же самое, и потом снова все исчезает.

Я так и блудил. Шел, ложился, потом снова шел. Спал до утра в снегу. Один раз мне показалось совершенно ясно, что стоит дом, из дома выходит старик и говорит, что у нас здесь дом отдыха. Я говорю: "Помогите мне добраться". А он все дальше и дальше уходит. Тогда я подхожу сам, но ничего не вижу. Потом пошел в другую просеку, смотрю - стоит колодец, девушка гуляет с парнем, а то кажется, что девушка с ведрами идет. "Что несете?" - "Воду". Но воды мне не дала.

Я упал 12 километров от линии фронта, но никак не мог сообразить, где я, мне все время казалось, что я у себя на аэродроме или где-то близко. Смотрю, идет техник, который меня обслуживал, начинаю говорить ему: "Помоги выйти". Но никто ничего для меня не делает. И такая история со мной продолжалась суток 10-11, когда галлюцинация у меня прошла.

СПАСЕНИЕ. "ПОДХОДИТЕ! СВОЙ, ЛЕТЧИК!"

Раз я просыпаюсь утром и думаю, что мне нужно делать? Я уже был совершенно в здравом уме. Очень сильно я отощал, так как ничего все время не ел. И компаса у меня нет. Я решил идти на восток, уже по солнцу. Вижу и самолеты, которые летят к нам. Думаю, наткнусь, в конце концов, на какое-нибудь село, а потом меня доставят. Но я очень сильно отощал и идти не мог. Шел я так: выбрал себе толстую палку, поставишь ее и подтягиваешь к ней ноги, так и переставляешь их. Так я мог пройти максимум полтора километра в сутки. А потом трое суток опять лежал и спал. И сны такие снятся, что кто-то зовет: "Леша, Леша, вставай, там тебе припасена хорошая кровать, иди туда спать...".

Так я провел 18 суток без единой крошки во рту. Съел я за это время горсть муравьев и пол-ящерицы. Причем, я отморозил ноги. Я летел в кожанке и в унтах. Пока я ходил с места на место, в них попала вода, так как кругом уже таяло, а ночью было холодно, мороз и ветер, а в унтах вода, и я, таким образом, отморозил себе ноги. Но я не догадался, что ноги у меня отморожены, я думал, что не могу идти от голода.

Потом на 18-е сутки 27 апреля11 часов в 7 вечера я лег под дерево и лежу. В это время слышу сильный треск. Я уже понимал, что в лесу здесь людей не было, и я решил, что идет какой-нибудь зверь, учуял жертву и идет. У меня осталось два патрона в пистолете. Я поднимаю пистолет, поворачиваю голову, смотрю - человек. У меня здесь мелькнула мысль, что от него зависит спасение моей жизни. Я ему стал махать пистолетом, но так как я оброс и стал очень худым, то он, наверное, подумал, что это - немец. Тогда я бросил пистолет и говорю: "Идите, свои". Он подошел ко мне: "Ты чего лежишь?". Я говорю, что я подбит, летчик: "Есть ли здесь немцы?". Он говорит, что здесь немцев нет, так как это место в 12 км от линии фронта. Он говорит: "Пойдем со мной". Я говорю, что не могу идти. - "Но я тебя не стащу с этого места. Тогда ты не уходи с этого места, я его знаю и попрошу председателя колхоза, чтобы он за тобой прислал лошадь".

Часа через полтора слышу шум. Пришло человек восемь ребятишек 14-15 лет12. Слышу, шумят, а не знаю, с какой стороны. Потом они стали кричать: "Здесь кто-нибудь есть?" Я

крикнул. Тогда они подошли на расстояние метров 50. Тут я их уже увидел, и они меня увидели. Остановились. "Ну, кто пойдет?" - Никто не идет, боятся все. Потом один парнишка говорит: "Я пойду, только вы смотрите, если в случае чего, вы сразу бежите за народом, в деревню".

Не доходит до меня метров 10. А я худой, оброс, вид, наверное, был страшный. Он подошел поближе. Я реглан13 расстегнул, петлицы видно. Он подошел еще поближе и кричит: "Подходите! Свой, летчик!". Те подошли, смотрят. Спрашивают: "Почему ты такой худой?" Я говорю, что не кушал 18 суток. И тут они сразу: "Ванька, беги за хлебом! Гришка, за молоком!". И все побежали, кто куда.

Потом приехал еще старик14. Они положили меня на сани. Я положил старику голову на колени, и мы поехали. Оказывается, тот человек, который первый меня нашел, шел в обход, так как там было все заминировано.

Потом чувствую, что меня мальчик толкает:

- Дядя, а дядя, посмотри!

Я смотрю, подъезжаем к селу, поперек улицы что-то черное. Я говорю:

- Что это такое?

- А это весь народ вышел вас встречать.

И действительно, целая колонна стоит, а как въехали в село, получилась целая процессия. Старик остановился у своей хаты. Тут люди меня нарасхват. Одна говорит, давай его ко мне, у меня молочко есть, другая говорит, у меня есть яички, третья говорит - у меня тоже корова есть. Слышу шум. Тут старик говорит:

- Я за ним ездил и никому его не отдам. Жена, неси одеяло, отнесем его в избу.

Внесли в избу, начали тут с меня снимать одежду. Унты сняли, а брюки пришлось разрезать, так как ноги распухли.

Потом смотрю, опять народ идет: кто несет молоко, кто яички, третий еще что-то. Начались советы. Один говорит, что его нельзя много кормить, вот, один инженер из Ленинграда сразу очень много покушал и умер, другой говорит, что нужно только молоком поить. Положили меня на кровать, дают мне молока и белого хлеба. Я выпил полстакана молока, больше не хочу, чувствую, что сыт. Они говорят: "Кушай, кушай". А я не хотел больше. Но потом постепенно я стал есть.

Нашелся у них в селе какой-то лекарь, вроде фельдшера. Он посоветовал хозяевам вытопить баню и помыть меня. Все это они сделали. Вообще, очень хорошие люди оказались. Очень жалею, что не могу поддерживать с ними связь.

ВСТРЕЧА. "ЛЕШКА, НЕУЖЕЛИ ЭТО ТЫ?!"

Двое суток я там пробыл. Они сообщили в одну воинскую часть, и оттуда на следующий день приехал капитан. Он проверил мои документы и забрал меня к себе в часть. Мне сделали там согревающий компресс на ноги. Ноги были белые-белые, как стена. Я удивился и спросил, почему они такие белые. Мне сказали, что это отек от голода. Я спросил, не отморожены ли они? "Нет, нет, - говорят, - ничего". Но ходить я совершенно не мог.

Когда меня привезли в эту часть, а это был какой-то обозный отряд, туда пришел врач, и я до сих пор не могу понять, зачем он это сделал, и нужно ли было это делать, но он мне прописал выпить стакан водки и дали мне закусить только черным сухарем. Сначала, после того, как я выпил, все было ничего, а потом часов с двух ночи меня стало разбирать, и я начал, как говорится, "шухерить". Там сидела около меня одна девушка, потом был

капитан, так со мною не знаю, что делалось. Я ударил эту девушку, опрокинул стол, который стоял около меня, стал кричать: "Немцам не победить!". Потом меня уложили. Только успокоили, а через десять минут я опять начал кричать: "Заверните мне правую ногу, а то ее немцы возьмут!". Этот капитан рассказывал, что я кричал: "Умираю, дышать нечем!". Он испугался и пошел за врачом. Тот пришел и сделал мне укол в полость живота. Потом он спрашивает меня: "Ну, как, хуже или лучше стало?". Я отвечаю: "Не хуже и не лучше". - "Ну, хорошо, что не хуже, а лучшего ждать нечего".

Потом меня сразу же отвезли в передвижной госпиталь и там меня стали лечить нормально. Сделали мне там переливание крови, и я стал чувствовать себя немножко лучше. Стали мне делать согревающие марганцевые ванны. В первый день, когда меня привезли, мне говорят: "Садись на табуретку". Я, как только сел, чувствую, что не хватает мне воздуха. Они говорят опять: "Садись". Я говорю, что не могу. Они меня все же посадили на табуретку, а я с нее упал. Потом пришел врач, меня положили на стол и влили мне 400 грамм крови. Потом я говорю: "Я теперь сам могу вставать". Но меня переложили опять на кровать.

Пролечился я там дней 7-8, до 30 апреля. Мне говорят, что мы тебя отправим в глубокий тыл, в Свердловск. Но для этого нужно было попасть на Валдай, а оттуда ходили санитарные поезда. 30 апреля меня отправили на машине в Валдай. Туда я приехал часиков в шесть вечера. Только меня положили, минут 15 я пролежал, дали мне покушать рисовой каши. Начал я кушать, вдруг дверь открывается, входит человек и начинает кого-то искать глазами, смотрит по всем кроватям. Потом мы с ним встретились взглядом. Смотрю - командир эскадрильи, с которым я летал, сейчас Герой Советского Союза, Дегтяренко15.

- Лешка, неужели это ты?!..

Оказывается, он меня искал, так как из передвижного госпиталя сообщили в часть, что я там нахожусь, и он на другой день бросился меня искать... А я прямо заплакал, просто зарыдал, такая была встреча!

Он меня спрашивает: "Чего ты лежишь? Ты, может быть, есть хочешь, я тебе две плитки шоколада привез". Я ему говорю: "Я не могу, Андрей, я 18 дней ничего не кушал, я очень слаб". А он, оказывается, приехал за мной и хочет меня забрать. И мы, действительно, были с ним очень хорошие приятели, один без другого жить не могли. Но врач меня не отпускает, говорит, что меня отправят в глубокий тыл. Дегтяренко стал нервничать, ругаться: "Это мой летчик, я его заберу. Мы сами знаем, куда его направить для лечения!".

А он искал меня долго и все время - на самолете. Сначала он полетел туда, откуда им сообщили обо мне. А там меня уже не было. А ведь это не просто - прилетел и сел, как на аэродром, а площадка бывает километра за 3-4. Потом опять пришлось сюда лететь. А вылетел он в 7 часов утра, а дело было уже к вечеру. И он, в конце концов, меня забрал с горем пополам, посадил на самолет. Хотя мне и сделали вливание крови, но чувствовал я себя плохо. И только меня сажают в самолет, я теряю сознание. Здесь он говорит: "Я тебя везу, а ты, наверное, умрешь". Я говорю: "Давай, жми! Живого или мертвого, уж взялся, так вези!". Он посадил меня в кабину, привязал кое-как, и полетели мы в ту часть, где я воевал. Здесь все уже собрались, все было подготовлено для посадки. Правда, я не могу всего рассказать, так как я был в очень тяжелом состоянии, и на следующий день меня на санитарном самолете отправили в Москву.

ОПЕРАЦИЯ. "НА МОИХ ГЛАЗАХ ОТРЕЗАЛ НОГИ ЭТИМИ НОЖНИЦАМИ"

После уже врач мне рассказывала, что лечащий врач приходит и говорит, что он, т.е. я, наверное, жить не будет. Она пошла в кабинет и еще подумала, составлять ли историю болезни или не нужно. Решила подождать до прихода профессора Теребинского16. Когда он пришел, он тоже не питал надежд на то, что я буду жить. Меня положили в отдельную палату, стали наблюдать, как я себя чувствую. Палата была проходной, я жаловался на шум.

Тогда меня положили одного в палату, стали делать мне уколы для поддержания сердечной деятельности. Я не спал долго, мне стали делать уколы морфия. Я стал часика по четыре тогда спать. Все время спрашивали меня, как себя чувствую? Я говорю, что лучше. И здесь меня стали лечить основательно.

Необходимо было мне отрезать ноги. Они стали уже сами отходить: лежишь в кровати, потащишь, а суставы сами и расходятся.

Однажды пришел профессор, принесли меня в операционную, он взял стерильные ножницы и просто на моих глазах отрезал ноги этими ножницами. В некоторых местах, где были еще немного живые ткани, было больно, но вообще больно не было. Я спрашиваю: "Товарищ профессор, это вся операция?".

И так как я боялся операции, то он сказал, что немного еще подзаделаем и все. Но стали меня готовить ко второй операции. У меня получилось нагноение и нужно было, чтобы оно прошло. 22 июля мне сделали вторую операцию. Хотели мне сделать только спинномозговой укол, но этот наркоз на меня не подействовал. Укол местного обмораживания тоже не берет. Профессор даже удивляется, и тогда решили делать операцию под общим наркозом. Накрыли меня маской и стали поливать на нее эфир, я должен был дышать эфиром. Сестра мне посоветовала глубоко-глубоко дышать. Как только я глубоко вздохнул, мне сразу же ударило в голову, я махнул рукой, маску сбил, капля эфира попала мне в рот, меня стало тошнить. Профессор ругается на сестру: "Что же вы не можете удержать маску!". Опять наложили маску. Мне стало так нехорошо, я кричу: "Снимите, дайте мне хоть немножко пожить!". Сестры здесь плачут, профессор ругается. Ну, а потом мне немножко приподняли маску, я глотнул свежего воздуха, и все пошло, как следует.

После операции я проснулся со слезами. Ноги у меня очень болели.

ВЫПИСКА. "В КЛУБЕ Я БУДУ ТАНЦЕВАТЬ"

Вылечили меня, сняли мерку на протезы. 23 августа 42 г. мне принесли протезы, я начал ходить. Учился, дня 3 походил с костылями, потом только с одной палочкой дней пять походил.

Нужно сказать, что однажды мне сестра приносит журнал и говорит: "Леша, смотри, здесь есть статья об одном английском летчике, который, не имея обеих ног, продолжает летать"17.

Меня эта статья очень заинтересовала, и я попросил сестру вырвать для меня эти два листочка из журнала. Здесь у меня появилась какая-то уверенность, что и я могу летать.

После госпиталя я поехал в дом отдыха летного состава на месяц. Там я отдохнул, и началась у меня опять битва за летную жизнь.

В доме отдыха я разговаривал на эту тему с врачом, но он мне ничего не сказал, вроде мол, человек шутит и все. Потом туда приехала выездная экспертная комиссия ВВСКА18 под председательством бригврача Миролюбова. Я решил туда обратиться к нему, так как это была комиссия, которую я должен был проходить. И наш врач мне тоже посоветовал поговорить с ними. Прихожу туда, а хожу уже без палочки. Причем я уже научился танцевать. Я носил брюки на выпуск, тогда был в пижаме. Прихожу и говорю: "Доктор, я у вас, наверно, комиссию не буду проходить, но я бы хотел поговорить с вами. Я хочу летать".

Он на меня смотрит:

- Если вы летчик, то будете летать.

- Мне придется прямо вернуться в госпиталь, и я хочу заранее с вами поговорить.

- А что у вас такое?

- Я на обеих искусственных ногах.

- Да что вы говорите?!

Я прошелся. Он говорит:

- Нет, вы шутите. В самом деле?

Здесь мой врач стал уже улыбаться и говорит, что это действительно так.

- И летать хотите?

- Да.

- А ну, еще раз пройдите.

Я опять прошел. Потом я говорю:

- Если вы интересуетесь, как я владею протезами, то приходите сегодня в клуб, я там буду танцевать.

Иду вечером в клуб, смотрю, в клуб приходит вся комиссия. Я приглашаю девушку, иду танцевать. После танцев подхожу к своему доктору. Он говорит, что навряд ли комиссия заметила. Тогда я опять танцую. Они здесь уже меня увидели. Говорят: "Считайте, все наши голоса за вами. Приедете в госпиталь, хирург посмотрит, скажет свое веское слово, если все будет ничего, то пройдете".

КАБИНЕТЫ. "ВЫ ПРИШЛИ СЮДА ОЧКИ ВТИРАТЬ!"

Я приезжаю в госпиталь в Сокольники. Председатель комиссии там доктор Собейников. Они меня крутили, проверяли нервную систему, зрение. Особое внимание обратили на ноги.

- Хочешь все-таки летать? На каких же самолетах?

Я говорю:

- Если попросишься на истребителях, то вы все равно не разрешите, тогда уже на "У-2".

Один доктор засмеялся:

- Добросовестно, - говорит.

Собрался у них консилиум. Один что-то говорит, другой говорит. Потом подзывают меня.

- Решили допустить к проверочным полетам на самолете "У-2".

- Ну, а если я покажу хорошие результаты, то буду считаться годным к летной работе на "У-2"?

- Ну, думаю, не совсем хорошо, но все-таки нужно согласиться.

Я пошел с этим решением в управление кадров ВВСК[А]. Прихожу туда, направляют меня к полковнику Вальчугину. Тот читает бумажку. А там написали и так, что не годен, ампутированы обе ноги. И в самом конце написали, что допущен к тренировочным полетам на "У-2". Полковник прочел, что не годен, и больше не читает.

- Вы что пришли?

- Хочу на летную работу.

- Вы же не годны.

Я говорю, что комиссия мне разрешила. Он тут: "Что мне комиссия, мы сами можем здесь разобраться, да и здесь написано, что не годен и всё!".

Я говорю:

- Вы прочтите, что дальше написано.

А он здесь схватился и пошел:

- У вас ног нет, а пришли сюда очки втирать.

Меня это страшно задело. Я говорю:

- Ноги у меня, товарищ полковник, есть, но ноги деревянные.

- Но вы летать не будете, как это можно!

Я говорю:

- Почитайте дальше, мне врачебная комиссия разрешила летать на "У-2".

- Что мне врачебная комиссия, мы все равно вас не допустим.

Тогда я стал с ним по-другому говорить.

- Товарищ полковник, я буду летать, только прошу вас не давать сразу заключения.

А он уже спрашивает, кем я работал, и собирается искать вакантную должность для меня.

- Я прошу вас еще раз - заключения не давать. Я дойду до маршала авиации.

- Он все равно вас не примет.

- Нет, примет.

Ну, он здесь еще сильнее раскричался.

- Кто вам разрешит?

Я говорю:

- Приду по всем правилам и попрошу разрешения. И летать я все-таки буду.

- Нет, вы летать не будете.

- Нет, буду.

- Вы ходить не умеете.

Я тогда набрался нахальства и говорю:

- Это дело не ваше, как я хожу. Раз врачи дали мне заключение, что я хорошо владею протезами, я имею право просить, чтобы меня назначили на проверку, как это здесь указано.

Он начал еще что-то кричать, но я тут уже вышел.

Там стоял какой-то майор. Он спрашивает:

- Это ты там так разговаривал? А что такое?

Я ему все рассказал.

- Ну, куда ты хочешь теперь идти?

Я говорю:

- Пойду к командующему, генерал-лейтенанту Новикову19.

- А у начальника отдела кадров ты был?

- Нет, не был.

- Сходи к нему, а то неудобно шагать через его голову.

И я решил пойти к начальнику отдела кадров. Прихожу к секретарю, тот докладывает, и начальник меня принимает. Как раз это был генерал-майор Орехов.

- В чем дело?

- Меня не устраивают на летную работу.

- Почему?

Я говорю, вот так и так, полковник Вальчугин отказывает. Приходит к нему Вальчугин. Он читает документы и говорит:

- Так вы без ног?

Я говорю:

- С искусственными ногами, товарищ генерал-майор.

- Нет, летать вы не будете, что вы, что вы!!!

- Почему, товарищ генерал?

- Так вы не сможете.

Тогда я вынимаю журнал и говорю:

- Вот, летают же люди, только англичане, почему же я не смогу?

Он прочел, отложил в сторону журнал:

Нет, - все-таки вы летать не будете.

- Товарищ генерал-майор, разрешите сказать.

- Говорите.

- Я летать буду.

- Вы - средний командир и должны слушать то, что вам говорит генерал.

- Я слушаю, но все-таки я летать буду.

- Зачем это надо?

- Во-первых, я многим еще могу помочь авиации, а во-вторых, это очень интересная вещь в авиации вообще.

- Ты подумал, как ты с этим справишься?

- Все обдумал.

Он попросил меня выйти, потом снова меня позвал.

- Ладно, - говорит, - попробуем.

Ну, думаю, если попробуем, то - всё. И, вот, единственный человек - этот генерал, который мне помог.

НАДЕЖДА. "НУ, ЛАДНО, ПОЛЕТАЕМ..."

Посылают меня в одну школу попробовать. Это в АССР, в Чувашию, в школу первоначального обучения20. Приезжаю туда. Принимает меня там начальник школы:

- Ну, ладно, - говорит, - полетаем.

А он ничего еще не знает и не догадывается. Назначают в такой-то день летать. А потом уже кто-то сказал, что я на искусственных ногах. Начальник меня вызывает и говорит:

- Вы, что, без обеих ног?!

- Да.

- Как же вы будете летать?

Я говорю:

- Поэтому меня и прислали к вам.

- А я даже и не разобрался. Ну, ладно, попробуем.

Дают мне летчика, Наумова, он меня проверяет на "У-2". На этом самолете нужна хорошая координация, нужно уметь чувствовать ногами. Проверил. Потом он говорит:

- У меня ноги замерзли, может быть, сам полетишь?

Дали мне 4 провозных полета. Приходит потом командир эскадрильи, тоже проверил и сказал, что не могу даже сказать, что у тебя искусственные ноги. Потом начальник школы полетел на "У-2". Проверил. Дают заключение, что годен во все виды авиации.

Когда я сел в самолет, я даже сам удивился, никогда не знал, что можно так летать без ног.

С таким заключением я приезжаю в Москву, в штаб МВО. Командующий генерал-майор Сбытов21 был занят, меня не принял. Ему докладывал обо мне заместитель его Белоконь. Белоконь приходит и говорит мне, что он сказал, что меня нельзя направить в истребительную авиацию, и чтобы я отдохнул. Я говорю:

- Мне все же хотелось бы летать на истребителях. Но если вы обещаете меня послать на истребитель, то я соглашусь пока полетать на "У-2". Я буду в Москве и буду вам надоедать.

- Ладно, - говорит, - устроим, устроим.

ПОБЕДА. "Я НЕ ПОЛОМАЮ СЕБЕ НОГИ!"

Послали меня в эскадрилью связи в Москву22. Там, правда, была хорошая работа, я отдохнул. Пробыл я там месяца три всего. Потом написал в МВО письмо, что чувствую себя хорошо, отдохнул, собрался с силами. Потом как раз та эскадрилья, в которой я был, принимала самолет от колхозников, и здесь был полковник Лякишев. Я своего командира эскадрильи попросил разрешения обратиться к нему. Он спрашивает меня:

- Вы писали командующему войсками?

- Писал.

- Какая-то резолюция там есть. Вас должны вызвать.

Я ждал-ждал, не дождался. Потом меня вызывает майор Ширяев и говорит, что командующий направляет вас в ЗАП в Иваново23. Я спрашив

- В истребительный?

- Да-да.

Я бросил все и стал готовиться. Поехал в Иваново. Там начали:

- Как это так, ты на "У-2" не умеешь летать.

- На "У-2" я летаю, - говорю, - у меня есть и заключение.

Но командир полка не решился сразу меня тренировать на истребителе. А получилось так, что у меня было вначале заключение относительно "У-2", а на истребитель меня уже послал сам генерал-майор Сбытов, но заключения врачей в отношении истребителей не было. Тогда командир полка говорит:

- Вам нужно пройти комиссию, и тогда я вас буду тренировать.

Я думаю, надо ехать в Москву на эту комиссию. Поехал в Москву. Приезжаю к тем же врачам. Собейников меня сразу узнал. Правда, когда я приехал из школы, я дал ему почитать заключение, и он очень удивился, что годен я во все виды авиации. И здесь он говорит:

- Нет, ничего не выйдет, на истребителе нельзя.

- Почему же, доктор?

- Там большие предпосылки к тому, что летчикам приходится садиться с парашютом. И ты поломаешь себе ноги.

Как раз в этом журнале описывался случай, как тот летчик прыгал с парашютом и поломал себе протезы. Потом он сделал себе протезы и летал дальше. Я говорю:

- Я не поломаю себе ноги, а поломаю протезы.

Говорили мы с ним, говорили, потом он говорит:

- Приходи завтра.

Прихожу на другой день, там сидит доктор Миролюбов. Он мне говорит:

- Давай поговорим по душам, что может с тобой получиться.

Я говорю:

- Если буду летать на истребителе, управлять я им сумею вполне, а, если с парашютом буду прыгать, то поломаю себе протезы.

- Я думаю, - говорит Миролюбов, - что ты поломаешь протезы и ушибешься, но управлять самолетом ты не сможешь.

А доктор Собейников сказал:

- Да, он поломает себе ноги, но управлять самолетом сможет.

И здесь у них получились разногласия. Я влез на стол, прыгнул и сказал: "Вот, так и получится!".

Наконец, Миролюбов склонился к тому, чтобы разрешить. Написал бумажку: разрешаем попробовать на самолете "УТИ-4", "ЯК-7".

ПОЛЕТ. "ГОДЕН НА ВСЕ ИСТРЕБИТЕЛИ"

Я думаю: ехать в тот полк, опять ничего не выйдет, так как там требовали, чтобы написали черным по белому, что разрешаем. Тогда я прихожу к майору Ширяеву и прошу, чтобы меня опробовали здесь. И я стал летать в Люберцах с майором Абзианидзе. Сделали мы с ним полет на "УТИ-4". Он говорит:

- Как себя чувствуешь?

Я говорю:

- Сижу, как в своей машине.

Он говорит:

- Я тоже ничего не могу против сказать.

В конце концов, написали заключение: годен на все истребители. Я с этим заключением - к врачам. Те читают и не верят. Я говорю: "Ну, что же теперь мне делать?". Они говорят: "Давайте начальника штаба этой части и летчика, с которым вы летали. Мы все соберемся и дадим окончательное заключение".

Я тогда пошел в отдел кадров просить, чтобы их затребовали в Москву. Они приехали на комиссию, и комиссия дала совместное заключение: разрешаем тренировочные полеты по специальному курсу обучения и, если покажет хорошие результаты, то считать годным в истребительную авиацию. И с этим заключением я поехал в ЗАП и там начал тренироваться. Окончил там курс нормально и попросил, чтобы меня отправили на фронт. Летал я там на "ЛА-5", "ЯК-7" и "УТ-2". До сих пор все идет нормально.

Все это получилось потому, что мне была сделана очень хорошо операция. Я помню еще в госпитале, я как-то в шутку спросил профессора: "Профессор, я летать буду?". Он сказал: "Это дело не мое, мое дело так тебя отремонтировать, чтобы ты через протезы все чувствовал бы". И действительно, где я ни прохожу комиссию, все удивляются, как хорошо сделана мне операция".

/Июль 1943 года./

Лечче — Венеция прогноз специалиста 20.05.21 — Родник Плюс — районная газета Чишминского района республики Башкортостан

Так как до 20-го мая еще есть время, то футболисты клубов Лечче и Венеция успеют восстановить силы, чтобы подойти в оптимальной форме к очному противостоянию. На футбольном поле игроки команд появятся в 19:30 по московскому времени. Эта встреча для соперников будет уже третьей только в рамках этого сезона, и в предыдущих двух команды обменялись домашними победами. Если же брать всю статистику данного противостояния, то в ней лучшие результаты имеет Лечче.

br>

Долгожданный футбольный матч, в котором соперниками будут команда Лечче и Венеция, начнется уже совсем скоро. Естественно, наши прогнозисты не смогли оставить такое спортивное событие без внимания, поэтому решили предложить свое видение развития событий в этом матче. Учитывая все кадровые перестановки, которые произошли в клубах в межсезонье, а также учитывая результаты матчей первых туров, мы полагаем, что фаворитами в этом противостоянии должны быть хозяева поля. И здесь мы полностью согласны с теми коэффициентами, которые предлагают букмекеры. Команда Лечче сейчас выглядит более сыгранной и более подготовленной, чем их соперники, тем более что команда Венеция прибыла на матч не в оптимальном составе. Так что, относительно победителя этого матча, то мы за хозяев поля. Учитывая, что в прошлом сезоне оба клуба действовали в атакующем стиле, и им удалось сохранить основной костяк исполнителей, и, самое главное – менеджеров, то в нынешнем сезоне команды тоже, скорее всего, будут играть в атакующий футбол. А это означает, что в сегодняшнем противостоянии мы увидим много атак, следовательно, будет много забитых голов, так что, общий тотал голов в этом матче мы советуем играть на больше. Неплохим предложением букмекеров нам видится ставка на то, что обе команды забьют в матче. Команда Лечче и команда Венеция всегда славились мощным нападением и полузащитой, а вот в обороне редко когда играют без ошибок.

СТАВКИ/КОЭФФИЦИЕНТЫ БУКМЕКЕРСКИХ КОНТОР НА МАТЧ Лечче — Венеция:

С каждым днем коэффициент 2.17 на то, что выиграет футбольный клуб Лечче, только падает. А ставить на победу ФК Венеция теперь намного выгоднее благодаря коэффициенту 3.56. На ничью принимаются ставки по котировке 3.28.

Прогноз на матч Лечче – Венеция (Чемпионат Италии, матч национального перевентсва, воскресенье, 20-го мая):Футбольный клуб Лечче получил от букмекеров на свою победу котировку 2.17, а по коэффициенту 3.56 можно сделать ставку на выигрыш ФК Венеция. По котировке [kefdrew] принимаются ставки на ничью.

История личных встреч

Команда Лечче в межсезонье провели серьезную кадровую политику, которая позволила клубу подписать ряд перспективных футболистов, которые, несомненно, должны усилить игру команды. Естественно, это ставит перед командами новые цели и задачи, так как руководство, вложив серьезные деньги в усиление клуба, хочет видеть результат. Команда Венеция слабо проявила себя на трансферном рынке. Скорее всего, это связано с тем, что у клуба ограниченный бюджет, да и все ключевые позиции закрыты футболистами, которые не первый сезон выступают в этой команде. Команда Венеция не ставит перед собой никаких значимых целей в турнирной таблице, поэтому фаворит этого противостояния очевиден. С другой стороны, есть шанс недооценки соперника, как уже было не раз в прошлом сезоне с футболистами команды Лечче, которые испытывали проблемы в тех матчах, где, казалось бы, должны уверенно побеждать. Однако сейчас другой случай, уже на старте сезона необходимо выйти в лидеры, и удерживать лидирующие позиции в турнирной таблице. Поэтому наставник будет настраивать своих подопечных то, чтобы они реализовывали все свои моменты в атаке, и внимательно действовали в обороне, не допуская ошибок. Конечно, гости в этом матче не питают иллюзий, однако клуб может упереться, так как имеет опытных и сыгранных защитников, да и на контратаках команда Венеция действовать умеет. Наши прогнозисты ждут здесь интересного противостояния, которое может стать еще более интересным, если хозяевам не удастся забить быстрый гол.

Поклонники футбола уже давно ожидают, когда 20-го мая на поле выйдут команды Лечче и Венеция. По московскому времени прямая трансляция данного поединка пройдет в 19:30. Интерес к данной встрече возникает еще и потому, что уже два года команды между собой не играли. А в последнем очном противостоянии команды разошлись миром, завершив встречу со счетом 3-3.

Предматчевый анализ и прогнозы букмекеров

Команда Лечче и команда Венеция – соперники, которые отлично знакомы с игрой друг друга, так как в каждом сезоне эти футбольные клубы встречаются неоднократно в очных противостояниях. И речь здесь идет не только о матчах чемпионата. Будучи клубами, которые в футбольной среде называют грандами мирового футбола, команда Лечче и команда Венеция принимают участие не только в матчах чемпионата страны, но и в кубковых баталиях, а также в известных и престижных клубных турнирах. Нередко пути этих команд пересекаются на самых важных стадиях турниров, поэтому менеджеры и футболисты – соперники, которые относятся друг к другу с уважением. Вообще, анализируя очередной матч команды Лечче и команды Венеция, наши эксперты стараются не трогать историю. В СМИ уже провели все возможные параллели в отношении этого противостояния, сравнили статистику лидеров команд в нынешнем сезоне и в целом, а также привели цифры, наглядно демонстрирующие силу одной и другой команды в историческом противостоянии. В своем анализе мы стараемся использовать цифры статистики текущего сезона, а также цифры статистики недавних противостояний между этими клубами. Все это позволяет нам получать интересную информацию, анализируя которую, мы составляем прогнозы на матч. Команда Лечче и команда Венеция – одни из претендентов на то, чтобы занять высокие места в чемпионате по итогам нынешнего сезона. Однако для этого футболистам обеих команд придется серьезно постараться, так как впереди у них много непростых соперников и сложных матчей. Ключом к успеху можно считать данное противостояние, так как победитель получит определенное преимущество в турнирной таблице. Именно поэтому оба клуба будут играть только на победу, что предполагает отличный матч, который мы рекомендуем не пропустить.

Очень много комплиментов в нынешнем сезоне звучит в адрес футболистов команды Лечче. Клуб действительно демонстрирует отличный футбол, добиваясь уверенных побед над своими соперниками. И это при том, что еще в прошлом сезоне клуб не показывал таких ошеломляющих результатов. Однако серия громких побед сделала свое дело, и в матче с футболистами команды Венеция хозяева поля идут фаворитами. По мнению экспертов нашего ресурса, такие котировки на победу команды Лечче в этом матче – не соответствуют действительности. Гости, пусть и расположились ниже своих соперников в турнирной таблице, команда, которая является крепким середняком с сыгранным составом. Возможно, что клуб и не хватает звезд с неба, однако футболисты команды Венеция способны упереться в каждом матче. Исходя из этого, наши эксперты полагают, что коэффициент, выставленный на победу хозяев поля – несколько завышен, поэтому мы рекомендуем делать ставки на фору команды Венеция, а более рисковые бетторы могут поставить на то, что гости не проиграют в этом матче. Общий тотал голов видится нам на меньше, так как команда Венеция редко позволяет своим соперникам забивать много голов, при этом, сами гости тоже не отличаются результативностью. Хозяева поля, пусть и будут действовать первым номером в этом матче, тоже будут играть с оглядкой на оборону, отсюда и получается, что ставка на тотал меньше в этом матче выглядит вполне надежной. Общий тотал желтых карточек и нарушений правил, мы рассматриваем на больше, так как игра будет преимущественно проходить в центре поля, поэтому оба клуба будут во всю использовать тактику мелкого фола для срыва атак соперника. Отсюда и общий тотал угловых тоже стоит играть на меньше, так как игра через центр не предполагает большого количества угловых в матче.

Лечче

Болельщики футбольного клуба Лечче уже смирились с тем, что он в последние годы постоянно перемещается между дивизионами. В начале сезона все также шло к тому, что команду ожидает понижение в классе, но после того, как был уволен главный тренер и на его место пришел опытный иностранный специалист, результаты команды постепенно стали улучшаться. Хозяева смогли выбраться из зоны вылета, а сейчас вообще идут десятыми, так что оторваться от аутсайдеров получилось уже на четырнадцать очков. В данный момент футбольный клуб Лечче вообще пребывает в великолепной форме, одержав три победы в последних четырех поединках, а также один раз сыграв вничью. Дома команда чаще выигрывает, чем проигрывает, а также новый тренер заставил игроков больше думать об обороне, так что существенно сократилось количество пропущенных мячей. Восстановились от повреждений сразу трое полузащитников, так что в лазарете остаются только центральный защитник и левый нападающий.

Венеция

После того, как в футбольном клубе Венеция два года назад поменялся главный тренер, был небольшой спад в игре, но постепенно команда начала показывать еще даже лучшие результаты при новом наставнике. В этом сезоне гости занимают шестую строчку в чемпионате, претендуя на путевку в еврокубки. Но, для этого нужно выиграть борьбу, в которую включилось еще четыре команды. Футболисты клуба Венеция показывают очень хорошую игру дома, а вот на выезде команда играет исключительно от обороны, из-за чего в гостях было тринадцать ничейных результатов в восемнадцати матчах. При этом, ФК Венеция проиграл на выезде только однажды, чем не могут похвастаться даже лидеры чемпионата. Уже семь туров гости не проигрывают, одержав три победы и четыре раза сыграв вничью. Команда имеет одну из лучших защит в чемпионате, ведь входит в тройку лидеров по количеству пропущенных мячей. У гостей нет длинной скамейки запасных, но в данный момент у команды и нет серьезных кадровых проблем, ведь травмирован только правый полузащитник, который уже больше месяца пребывает в лазарете.

Команда Лечче и команда Венеция, которые будут участвовать в ближайшем матче, являются представителями второй части турнирной таблицы. Эти клубы активно борются за то, чтобы сохранить прописку в чемпионате на будущий сезон. Судя по результатам, которые оба клуба продемонстрировали в текущем чемпионате, нельзя отдать предпочтение ни одной из команд. Вообще, в таких матчах, где обоим соперникам нужны очки, наиболее привлекательно выглядят ставки на пенальти и удаление. Здесь, в принципе, нет необходимости мониторить статистику рефери, так как само противостояние предполагает жесткую и бескомпромиссную борьбу на протяжении всего матча. Наши эксперты полагают, что счет матча вряд ли будет разгромным, скорее всего, кто-то из соперников победит с преимуществом в один мяч. Отсюда общий тотал забитых мячей в матче стоит играть на больше, так как ни одна из команд не отличается надежностью в защите. Общий тотал нарушений правил и желтых карточек тоже стоит играть на больше, так как оба клуба будут играть грубо независимо от счета на табло. Рефери будет вынужден реагировать на грубость и наказывать нарушителей правил желтыми карточками. Несмотря на то, что букмекеры несколько завысили тоталы, мы полагаем, что все равно стоит делать ставки на тотал больше. Угловых в этом матче вряд ли будет много, так как сам уровень команд не предполагает большое количество стандартов в этом матче. Относительно фаворита, скорее здесь фаворитами являются хозяева поля, но от ставок на исход этого противостояния мы рекомендуем воздержаться.

Игра завершится победой Лечче — 2.17, в игре будет ничья — 3.28, игра завершится победой Венеция — 3.56.

Нашим экспертам пришлось приложить немало усилий для того чтобы выбрать интересные ставки на матч команды Лечче и команды Венеция. Оба клуба сейчас идут, как говорится, ноздря в ноздрю в чемпионате, а это означает, что борьба между ними в очном матче будет очень напряженной. Первое, что бросается в глаза, это ставки на пенальти и удаление. В составах обеих команд достаточно футболистов, чьи нервы могут не выдержать в ответственный момент игры. Кстати, арбитр, который будет обслуживать матч, под стать самому противостоянию, этого рефери назначают, только на самые ответственные матчи, так как он не пасует перед трудностями и готов взять на себя ответственность при принятии судьбоносных решений. Относительно фаворита этого противостояния. Симпатии и статистика говорят о том, что наиболее вероятным исходом этого матча будет ничья, тем более, что в первом матче нынешнего сезона между этими клубами был зафиксирован ничейный результат. С того матча в игре команд не произошло существенных изменений, следовательно, ничья станет закономерным итогом этого противостояния. Конечно, те бетторы, кто не привык рисковать в ставках, могут взять производные ставки, к примеру, не проигрыш хозяев поля или гостей. Общий тотал матча, скорее всего, командам пробить не удастся, так как и одна, и другая команды обладают хорошей защитой. А вот нарушений и предупреждений в матче должно быть много, поэтому тотал этих параметров мы рекомендуем заиграть на больше. Еще нашим экспертам понравился общий тотал угловых на больше. Оба клуба много атакуют, причем атаки преимущественно проводят через фланги, а общий тотал угловых букмекеры предлагают небольшой, явно есть смысл попробовать заиграть.

«Лечче»

Внушительный отрыв от преследователей расслабил футбольный клуб Лечче, который начал слишком часто терять очки в последних матчах. В последних шести турах было одно поражение и два ничейных результата, а ведь до этого команда демонстрировала победную серию из пятнадцати туров. Такие потери очков не сильно повлияли на турнирное положение, ведь Лечче остается лидером чемпионата, а преимущество над второй строчкой хоть и уменьшилось, но все равно составляет десять очков. Все три матча, которые футбольный клуб Лечче не сумел выиграть, были на выезде, а на своем поле команда продолжает побеждать, и предпосылок к тому, что хозяевам в этом кто-то сможет помешать, пока нет. Лидер обладает одной из самых надежных линий обороны, а также великолепно играет в нападении, в среднем радуя своих болельщиков тремя мячами за игру. Серьезных кадровых потерь нет, ведь хоть и травмировано два опытных защитника, но они в этом сезоне выходили в основном на замену.

«Венеция»

В прошлом сезоне футбольный клуб Венеция выиграл чемпионский титул, но в этом сезоне речь о защите трофея даже не идет. У главного тренера начались проблемы со многими игроками основного состава, так что уже нет того сыгранного боевого коллектива, который всех громил в прошлом году. Гости занимают в чемпионате только четвертую строчку, а отставание от лидера настолько большое, что команде сейчас остается бороться только за то, чтобы не упустить свое место в еврокубках. Футбольный клуб Венеция одинаково играет как в родных стенах, так и в выездных матчах, а в этом сезоне гости разве что демонстрируют надежную игру в обороне, но результативность команды по сравнению с прошлым годом сильно упала. Недавно ФК Венеция выдал серию из восьми матчей без поражений, но в последнем туре команда неожиданно уступила на своем поле аутсайдеру, пропустив в свои ворота три безответных мяча. Единственная потеря гостей это левый нападающий.

Статистика и личные встречи

Наши эксперты постоянно мониторят линии букмекерских контор в поисках интересных матчей. Если рассматривать футбольные матчи с практической точки зрения, то составить прогноз можно на любой футбольный матч, независимо от того, к какому чемпиону он относится. Это может быть даже самая неизвестная лига третьесортного чемпионата. Однако наши эксперты занимаются тем, что прогнозируют исходы и статистику тех футбольных матчей, смотреть которые предпочитают все любители футбола. Матчи топ-чемпионатов, которые собирают целые стадионы преданных болельщиков, а также многомиллионную армию болельщиков у экранов телевизоров – вот настоящая страсть наших экспертов. Нельзя сказать, что прогнозировать легко – нет, это тяжелый труд, требующий концентрации и тщательно анализа многочисленных факторов, которые могут оказать влияние на результат матча, однако нам нравится заниматься своим делом и делиться своими трудами с любителями футбола. Сегодня мы решили разобрать матч, соперниками в котором будут команда Лечче и команда Венеция. Для обеих команд результат матча чрезвычайно важен, поэтому команды будут играть на встречных курсах, тем более что защита – не самая сильная сторона обеих команд. В текущем сезоне оба клуба сыграли большинство своих матчей на тотал больше, поэтому вряд ли в принципиальной игре они станут использовать защитную тактику, скорее всего, тренеры вновь будут играть в атакующий футбол, поэтому болельщиков ждет большое количество забитых мячей.

Лечче — Венеция. Прогноз на футбол (20.05.21)

Для наших экспертов оказалось несколько необычной линия, которую мы увидели на матч команды Лечче и команды Венеция. Наши эксперты ожидали увидеть фаворитами матча хозяев поля, так как команда Лечче остро нуждается в очках, так как ведет борьбу за верхние строчки турнирной таблицы. А вот футболистам команды Венеция очки практически не нужны, так как, даже при самых радужных раскладах, гости все равно покинут высший дивизион чемпионата из-за финансовых проблем. Исходя из этого, фаворита этого противостояния очевиден, однако, видимо букмекеры не полностью владеют информацией, если предлагают подобные коэффициенты. Мы рекомендуем в этом матче делать ставки не только на победу хозяев поля, но и на то, что команда Лечче пробьет фору, заявленную букмекерами. Общий тотал голов в матче мы рассматриваем на больше, так как хозяева поля активно играют на своем стадионе, предпочитая действовать первым номером и держать ворота соперников в напряжении. Да и гости могут отвечать результативно, поэтому общий тотал в матче мы рекомендуем играть на больше. Нарушений и желтых карточек мы видим много, так как между собой эти команды всегда играют грубо, нередко получают и красные карточки. Но сегодня мы ограничимся только ставкой на тотал больше желтых карточек и фолов. Угловые в нынешнем сезоне команда Лечче и команда Венеция практически не подают. Несмотря на то, что букмекеры предложили правильный тотал угловых в своих линиях, наши эксперты все равно рекомендуют играть его на меньше.

Для экспертов нашего ресурса нет простых матчей для прогнозирования, таких, глядя на названия соперников в которых, мы бы могли безошибочно сказать, кто победит, а кто проиграет. Футбол – это такой вид спорта, где шанс на победу есть у каждый команд. Футбол – это командная игра, и здесь успех зависит от слаженных действий всех членов команды, даже тех, которые сидят на скамейке запасных, ведь им предстоит выйти на поле в любой момент игры, и важно, чтобы они гармонично вписались в коллектив. В этом состоит заслуга менеджера, который должен подгонять футболистов, как шестеренки в отлично работающем механизме. Отличная работа такого механизма возможна лишь в том случае, если все мелкие детали будут отлично взаимодействовать между собой на благо всего механизма. Когда такое происходит в футболе, то команда практически непобедима, так как партнеры знают, что смогут подстраховать друг друга, а менеджер уверен в своих футболистах как тех, которые находится на поле, так и тех, которым предстоит на него выйти. Так что, предсказывать можно лишь на основании анализов, так как каждый клуб – это отдельный механизм и его необходимо тщательно изучить, прежде чем вынести свой вердикт.

По мнению спортивных экспертов, в футбольном поединке Лечче — Венеция победа хозяев является самым очевидным исходом, так что на него можно смело делать ставку.

Лечче – Венеция: статистика и история личных встреч

Букмекеры не всегда правильно прогнозируют футбольные матчи. Точнее, линия на основные события футбольного матча в букмекерских конторах практически всегда правильная, однако букмекеры предлагают на футбол ряд дополнительных ставок, среди которых ставки на статистику. Видимо, в силу того, что основная масса бетторов предпочитает делать ставки на исход, букмекеры больше внимания уделяют составлению этой линии, мало обращая внимания на линию дополнительных ставок и статистики. По мнению наших экспертов, именно в этой части линии и скрыто все самое ценное. Как показывает практика, прогнозировать основные исходы футбольных матчей довольно непросто, даже если между собой встречаются лидер чемпионата и аутсайдер. Букмекеры грамотно закладывают в линию все статистические и другие факторы, сопутствующие этому матчу, поэтому ничего более-менее приличного с преимуществом в сторону бетторов, в такой линии уже не найти. Однако тщательный анализ помогает находить интересные ставки на статистику. Что позволяет нашим экспертам прогнозировать футбольные матчи, даже с участием грандов современного футбола. К примеру, тщательно изучив статистические данные матча, в котором сыграет команда Лечче и команда Венеция, мы смогли найти несколько интересных ставок, которые позволят наслаждаться просмотром футбола, и дадут возможность неплохо заработать. Мы думаем, что матч должен получиться интересным, поэтому рекомендуем не пропустить это противостояние.

http://evolvegame.ru/cat1-412736-sparks-zhen-liberty-zhen-prognoz-professionala-20-05-21/

Разбор предложения и слов по составу

В русском языке, в практической его части, существует большое количество самых разных разборов: от разбора слова, словосочетания до разбора предложения. Ни один диктант или контрольная работа не обходится без них. Объяснить это достаточно просто: при выполнении того или иного разбора проверяются базовые знания по предмету, будь то фонетика, морфология, синтаксис или пунктуация.

Как же быть ученику, ведь количество этих разборов достаточно большое и все они такие разные? А сколько знаний нужно, чтобы грамотно их делать!

По этому поводу можно сказать только одно: не нужно драматизировать. Все разборы в русском языке можно систематизировать, разобраться в их алгоритме (последовательности), и тогда на протяжении всего обучения в школе каждый ученик будет успешен.

Давайте рассмотрим порядок некоторых из них.

Фонетический разбор слова

  1. Выписать слово.
  2. Определить, сколько в слове слогов.
  3. Определить, на какой слог падает ударение.
  4. Дать характеристику каждого звука:
  • гласные - ударные,
  • безударные;
  • согласные - звонкие или глухие, твёрдые или мягкие.
  1. Указать, какой буквой обозначены звуки.
  2. Определить, сколько в слове букв и звуков.

Образец:

Дальний - 2 слога (1-ый ударный)

д-[д]- согл., зв., тв.

а-[а]- гл., уд.

л-[л`]- согл., зв., мягк.

ь-[-]

н-[н`]- согл., зв., мягк.

и-[и]- гл., безуд.

й-[й`]- согл, зв., мягк.

7 букв, 6 звуков

Разбор слова по составу

Подарки

  1. Выписать слово.
  2. Найти окончание (для этого нужно изменить форму слова, изменяемая его часть и будет окончанием: подарки - подарок, подарка, подарку; в данном случае - окончание - и).
  3. Выделить основу слова (это часть слова без окончания, в данном случае подарки).
  4. Найти корень (для этого нужно подобрать несколько однокоренных слов и определить их общую часть: подарки-дарить, дарёный, одаривать, дар, в данном случае корень - дар-).
  5. Найти приставку (для этого нужно сравнить данное слово с однокоренными словами с разными приставками или без них: подарки-одарить, надарить, дарить, приставка в данном случае по-).
  6. Найти суффикс (для этого нужно подобрать несколько однокоренных слов с разными суффиксами или без него: подарки - подарочки, подарить, в данном случае суффикс -к-).

Состав слова подарки: приставка по-, корень -дар-, суффикс -к-, окончание -и.

Разбор простого предложения по составу грамматической основы

По наличию главных членов простые предложения делятся на двусоставные и односоставные.

Грамматическая основа двусоставных предложений состоит из двух главных членов предложения - подлежащего и сказуемого, например: Белая берёза под моим

окном принакрылась снегом, точно серебром. (С. Есенин).

В односоставных предложениях грамматическая основа состоит из одного главного члена - подлежащего или сказуемого. В зависимости от этого они бывают назывными или глагольными.

Назывные - это односоставные предложения с одним главным членом - подлежащим. Например: Зима! Крестьянин, торжествуя, на дровнях обновляет путь (А.Пушкин).

В глагольных односоставных предложениях главный член - сказуемое. В зависимости от формы сказуемого все глагольные односоставные предложения делятся на определённо-личные (сказуемое - глагол в форме 1-го и 2-го лица), неопределённо-личные (сказуемое -глагол в форме 3-го лица мн. ч.), обобщённо-личные (сказуемое - глагол в форме 2-го лица, чаще всего это пословицы и поговорки), безличные (предложение со сказуемым, при котором нет и не может быть подлежащего).

Образец разбора: гл. 3 л.

За рекой косили. (Предложение повествовательное, невосклицательное, односоставное, неопределённо-личное, распространённое).

Разбор предложения по составу (второстепенные члены предложения)

По наличию или отсутствию второстепенных членов предложения простые предложения - двусоставные и односоставные делятся на нераспространённые и распространённые.

Нераспространённые простые предложения в своём составе имеют только главные члены предложения. Например: Катятся ядра, свищут пули ...(А.Пушкин).

Распространённые простые предложения имеют второстепенные члены предложения. Например: Весело сияет месяц над селом (И.Никитин).

При характеристике предложения обязательно указывается: распространённое предложение или нераспространённое (см. пример выше).

Разбор предложения по наличию или отсутствию необходимых членов предложения

Иногда в предложении могут отсутствовать какие-либо члены предложения, но смысл предложения понятен из контекста. Такие предложения называются неполными.

Пример полных предложений: С запада надвигалась дождевая туча. Постепенно темнело.

Пример неполного предложения: Товарищ шёл в библиотеку, а я - в бассейн. В данном случае во втором простом предложении пропущен глагол "шёл", но смысл предложения абсолютно понятен из предыдущего. При характеристике неполного предложения на этот факт обязательно указывается.

Возникающие решетки клатрина спонтанно разбираются без достаточного количества адаптерных белков

ВВЕДЕНИЕ

В клетках структуры, покрытые клатрином, собираются в связанные с мембраной точки 1 , которые переходят к продуктивным пузырькам только примерно в половине случаев 2 , в противном случае они разбираются. Наблюдается, что эти структуры содержат по крайней мере ~ 20 клатрин 1 ; они динамические 3 и нестабильные? Было показано, что многие белки настраивают частоту и вероятность разборки в этих переходных структурах 1,2,4,5 , но ни один из этих белков не является физическим движителем разборки.Оборудование без покрытия клатрином , способное проводить разборку 6,7 , редко встречается в созревающих структурах с клатриновым покрытием 8,9 . Таким образом, остается фундаментальный вопрос: что физически стабилизирует структуры, покрытые клатрином, от разборки и в какой степени? Ответ на этот вопрос поможет установить, при каких условиях ранние структуры, покрытые клатрином, развиваются в продуктивные пузырьки. Здесь наше моделирование набора и сборки клатрина на мембранах воспроизводит кинетические данные in vitro , подтверждая модель, которая затем устанавливает, как ключевые параметры плотности адаптера, отношения объема к площади (V / A) и концентрации клатрина определяют кинетику и критические зародыши покрытых клатрином структур на мембранах.

Эксперименты in vitro показали, что структуры, покрытые клатрином, могут надежно собираться на мембранах с клатрином и минимальным набором компонентов, требуя цитозольного адаптера, который локализует клатрин на мембране, и участков связывания мембраны, которые локализуют адаптеры на мембране, что физиологически является незаменимым липидом PI (4,5) P 2 10–12 . Кроме того, in vitro клатрин собирает как плоские, так и везикулярные решетки, точно так же, как наблюдается in vivo 13,14 .Однако в ходе этих экспериментов не выяснилось, какая стехиометрия клатрина, адаптеров и площади мембраны определяет переход от нестабильной к стабильной клатриновой оболочке, поскольку все изученные условия свидетельствуют о равновесных, высокостабилизированных решетках. Даже когда концентрации компонентов сравнимы с сообщенными значениями in vivo и , соотношение V / A обычно на несколько порядков выше, чем в клетках, что может значительно повысить стабильность ассоциированных с мембранами комплексов 15 . In vivo эксперименты предоставили более подробное представление о динамике зарождения клатриновой оболочки и отпочкования 3,16 , но о количестве факторов, которые, как известно, вносят вклад в опосредованный клатрином эндоцитоз в клетках, включая ферментативную активность 17,18 , делает невозможным оценку критического ядра клатрина и адаптеров, устойчивых к разборке. Состав успешных продуктивных пузырьков 19 демонстрирует, что разнообразие составов адаптеров и рецепторов приводит к продуктивному почкованию, и цель нашего исследования состоит в том, чтобы установить минимальные критерии стабильного зарождения и роста, зависящие от концентрации адаптеров, из равновесия.

Кинетические измерения предоставили мощную переменную для оценки как моделей, так и механизмов сборки раствора в различных образующих волокна 20,21 , агрегировании 22,23 и системах формирования капсида 24 . В недавних кинетических экспериментах Саркар и Пукайдил 25 предоставили понимание не только начальных условий, которые могут способствовать формированию стабильной решетки клатрина на мембранах, но и ограничений скорости роста, в то время как предыдущие биохимические эксперименты ограничивали относительную свободную энергию клатрин-клатрина . 26 и клатрин-адаптер 27 взаимодействий.В кинетических экспериментах использовались начальные условия, которые снова приводили к стабильным решеткам, и не могли проверить требования для стабильных и нестабильных решеток. Чтобы оценить размер и скорость стабильных ядер, которые могут возникнуть в клетке, нам нужно имитировать более низкое соотношение V / A клетки, воссоздав эти эксперименты in silico в новых условиях, которые сложно экспериментально. Большим преимуществом микроскопического пространственного моделирования здесь является то, что вместо того, чтобы требовать экспериментов с множеством различных концентраций, чтобы подогнать уравнения скорости к данным 23 , наши явные физические модели жестко ограничивают подмножество констант скорости, которые могут количественно определять данные .

Моделирование сыграло важную роль в понимании принципов сборки, покрытой клатрином, но еще не охарактеризовало кинетику сборки из-за проблем с захватом молекулярной структуры на мезоскопической длине (мкм) и времени (минуты) в масштабах. Мы достигаем этого с помощью недавно разработанного программного обеспечения реакции-диффузии с разрешенной структурой 28 , которое фиксирует грубую молекулярную структуру 29 для многокомпонентных систем в 3D 30 , 2D 31 и переходе между 32 .Критически, уменьшение размеров или изменение пространства поиска и динамики, которое сопровождает переходы от 3D к 2D 33 , строго учтено в нашей модели, что будет количественно влиять на стабильность 15 и кинетику 34 этапов сборки. Наша модель производит энергетику клатриновых клеток, аналогичную чисто статистическим механическим моделям 35–39 , хотя этим моделям не хватает временного разрешения и молекулярных деталей. Наша модель создает структуры, аналогичные предыдущим пространственным симуляциям в решении 40–42 , но с включенной мембраной эти симуляции были слишком дорогими, чтобы охарактеризовать экспериментальную кинетику 43 .Здесь мы оцениваем энергетический баланс образования изогнутой клетки и изгиба мембраны, определяя минимальную энергетическую форму мембраны, совместимую с изогнутыми клетками для раствора. Подобно другим подходам 44–46 , мы динамически не связываем сборку клетки с образованием пузырьков. Тем не менее, мы обладаем уникальной способностью фиксировать кинетику локализации и сборки на мембране, отслеживая сборку плоской решетки, что согласуется с наблюдаемым ранним ростом 13 . Наша модель обеспечивает отправную точку для выхода за рамки непространственных кинетических моделей 47,48 или моделей с силовой балансировкой 49 и включает важные структурные детали, которые обязательно повлияют на упаковку, механику и реконструкцию адаптеров и груза в везикулы.Важно то, что наше моделирование предоставляет подробную информацию о каждом мономере клатрина и структуре более высокого порядка, поскольку они развиваются во времени и пространстве. Используя концепции классической теории нуклеации, мы можем таким образом количественно оценить критические ядра как функцию плотности адаптеров, показывая, что при фиксированной концентрации клатрина минимальная плотность адаптеров необходима для запуска нуклеации и продолжения роста с соответствующими физиологическими скоростями ( ~ 60 с). .

МОДЕЛЬ

Наша модель предназначена для воспроизведения количественной кинетики недавно измеренной сборки клатрина на мембранах 25 путем фиксации грубой структуры тримера клатрина и его адаптивного белка, констант диффузии белков (и мультибелков), скоростей, описывающих все парные белок-белковые взаимодействия, а также концентрации и соотношение V / A в эксперименте.Каждый жесткий тример клатрина содержит 3 участка для связывания другого клатрина, расположенных так, чтобы образовывать плоскую или изогнутую шестиугольную решетку в зависимости от угла α «складки» ветвей относительно оси z (рис. 1). Каждый тример также содержит 3 сайта для связывания адаптеров. Каждый адаптер содержит один сайт для клатрина и один сайт для связывания мембранного липида. Когда две молекулы связываются через свои определенные сайты взаимодействия, они принимают заранее заданную ориентацию относительно друг друга, образуя либо плоскую гексагональную решетку ( α, = 90 °), либо сферическую клетку ( α > 90 °), с обоймой, состоящей из шестиугольников, пятиугольников и несовершенных контактов из-за жесткости тримеров 28 .Масштаб длины белков выбирается в соответствии с известным размером решетки клатрина 50 с межцентровым расстоянием 17 нм. Исключенный объем (рис. 1) важен для предотвращения перекрытия решеток, поскольку они диффундируют в 3D или 2D, что, как мы проверили, не повлияло на кинетику (рис. S1A).

Рис. 1. Модель реакции-диффузии с разрешенной структурой для набора и сборки клатрина на мембранах фиксирует структуру, валентность и исключенный объем.

Тримеры клатрина инициализируются в растворе, но связываются с адапторными белками, локализованными на поверхности.Связывание клатрина с адаптерами только один раз на поверхности согласуется с поведением AP-2 10 . Адаптерные белки могут связывать определенные липиды на поверхности мембраны при инициализации в растворе. Несвязанные клатрин-клатриновые сайты исключают друг друга с радиусом σ = 5 нм (синие кружки) и клатриновые адаптеры с σ = 1 нм. Во все времена моделирования, центры масс (ЦМ) на тримерах исключают СОМ других тримеров при σ = 10 нм (фиолетовые кружки).

Мы зафиксировали несколько параметров на основе эксперимента, описанного здесь.Мы используем фиксированные константы диссоциации 120 мкм для клатрина-клатрина (без адаптера) 26 и 25 мкм для клатрин-адаптера 27 . Экспериментальное соотношение V / A составляет 991 мкм (методы) с концентрацией клатрина 80 нМ 25 . Объем нашего моделирования имеет плоскую SA размером 1 мкм 2 , для чего потребуется высота 991 мкм. Чтобы сохранить такое же соотношение V / A без распространения огромного избытка раствора клатрина, мы вместо этого используем высоту 1 мкм и поддерживаем постоянную (стохастически колеблющуюся) концентрацию [Cla] до = 80 нМ (48 копий) в растворе (рис. .2A и см. Методы SI). Это предполагает, что общая концентрация клатрина в растворе не изменяется по мере того, как клатрин накапливается на мембране, что верно с очень хорошим приближением: <5% от общего клатрина попадает на мембрану через 100 секунд. Для кинетического моделирования наша мембрана моделируется как плоская поверхность, а отдельные участки связывания на поверхности моделируются неявно 32 . Неявные адаптеры имеют высоту 4 нм, что обеспечивает точную кинетику связывания с мембраной, что подтверждается изменением временного шага моделирования (рис.S1B) и простой системой без клатрин-клатриновой реакции (рис. S1C). Мы оцениваем транспортные свойства по Эйнштейну-Стоксу, с D Cla = 13 мкм 2 / с, D R, Cla = 0,03 рад 2 / с, D ap = 25 мкм 2 / с, D R, ap = 0,5 рад 2 / с, D липид = 0,5 мкм 2 / с и D R, липис = 0,01 рад 2 / с, чтобы позволить связанным комплексам вращаться на поверхность. Диффузия замедляется по мере роста комплексов в соответствии с Эйнштейном-Стоксом 29 .

Рис. 2. Моделирование реакции-диффузии с разрешенной структурой кинетики сборки клатрина на мембранах воспроизводит эксперимент in vitro .

A) Моделирование имитировало экспериментальные условия из опубликованной работы Pucadyil et al 25 , где флуоресценцию клатрина на мембранных канальцах измеряли во времени. Постоянная (колеблющаяся) концентрация раствора клатрина (80 нМ) поддерживалась посредством обмена с резервуаром большого объема. B) Данные флуоресценции, усредненные по множеству канальцев, показаны черным цветом.Экспериментальные данные были нанесены на график в единицах числа копий на мкм 2 , а не в произвольных единицах, путем обнуления смещения (вычитаемого из 300) и изменения масштаба по высоте на 1,7. Результат модели показан синим цветом (среднее значение по 4 траекториям моделирования). C) Снимки одной траектории моделирования в разные моменты времени. D) Макроскопические масштабы времени (время запаздывания τ и начальная скорость роста E * k - см. Уравнение 1) при изменении параметров модели в таблице 1 вместе с подгонками (уравнения 2 и 3).

Параметры, которые мы изменили для оптимального воспроизведения эксперимента, сведены в Таблицу 1.Мы позволяем варьировать относительные скорости включения и выключения клатрин-клатрин ( k CLA-CLA ) и клатрин-адаптера ( k AP-CLA ). Наш клатрин-клатрин K D усиливается, когда клатрин связан с адаптером, что давно известно из эксперимента 51 . Таким образом, мы уменьшаем свободную энергию Δ G + ap 2 = Δ G coop + Δ G coop с использованием Δ G coop значений в диапазоне −1.От 1 до -3 k B T , где k B - постоянная Больцмана, а T - температура. Мы сохраняем скорость выхода клатрина-клатрина неизменной и ускоряем скорость включения на f coop = exp (–Δ G coop / k B T ). Наша модель учитывает изменения в скоростях, которые сопровождают локализацию на двумерной мембране 52 , которая компактно определяется одной молекулярной шкалой длины, h . Мы протестировали значения h = 1-100 нм, порядок величины шкалы длин молекулярного клатрина.Введем энергию деформации Δ G деформацию для образования замкнутых многоугольников (шестиугольников или пятиугольников). Когда решетка клатрина образует замкнутый шестиугольник (или пятиугольник), диссоциация единственной связи клатрин-клатрин не высвобождает мономер или фрагмент. Отношение скорости повторного связывания к скорости отсоединения определяется выражением, где Δ G CC - разность свободной энергии несвязанной пары клатрина 28 . Термин exp просто для парной реакции, где C 0 - стандартная концентрация состояния (1M), что дает коэффициент повторного связывания 8.3 × 10 3 или 9,2 × 10 4 для клатрин-клатриновых связей без и с адаптерной связкой, соответственно. Гораздо более высокие скорости повторного связывания делают шестиугольники очень устойчивыми к диссоциации. Таким образом, термин exp снижает стабильность шестиугольника по сравнению с 6 идеальными связями (для Δ G деформация > 0). Мы ожидаем этого по нескольким причинам, потому что клатрин - гибкая молекула, которая образует различные решетки и клетки. Образование двух связей для замыкания шестиугольника / пятиугольника может вызвать упругую деформацию клатрина, снижая его стабильность.Некоторые решетки in vivo , особенно плоские решетки, также образуют весьма несовершенные «шестиугольники», которые явно имеют плохо выровненные контакты 53 , что способствует менее стабильной и более динамичной решетке. При значении деформации Δ G , равном +6,9 k B T , свободная энергия гексагонального 6-мера соответствует прочности 5,4 идеальных связей, а не 6, тогда как 6-мер в расширенном конформация содержит 5 связей. Наконец, плотность адаптеров (? AP ) в моделировании in vitro рассматривается как переменный параметр, потому что, хотя плотность сайтов связывания мембраны была известна (0.0746 / nm 2 ), мы не ожидаем, что на всех этих сайтах будут задействованы адаптеры. Для K D в диапазоне от 1 до 10 мкм 54 между хелатором и His-тегированным адаптером (присутствует при 200 нм) 25 , у нас будет ~ 0,0014-0,012 / нм 2 адаптеров на поверхности до втекает клатрин, который мы используем в качестве ограничения для параметра плотности адаптера. Мы отмечаем, что в экспериментах in vitro присутствует только бета-отросток AP-2, и мы предполагаем, что он остается связанным с мембраной на протяжении всего моделирования.В «физиологических условиях» мы позволяем белку AP-2 обратимо связываться с мембраной и предотвращаем связывание этого полноразмерного AP-2 с клатрином в растворе, поскольку связывание ингибируется до локализации на мембране 10 .

Таблица 1.

Различные параметры в модели и оптимальные значения для воспроизведения экспериментальной кинетики

РЕЗУЛЬТАТЫ

Количественное согласие, установленное между моделированием и

in vitro кинетикой

Моделирование роста решетки клатрина (см. Рис.2A) воспроизводят экспериментальную кинетику в эквивалентных условиях (рис. 2B). Основными характеристиками кинетики являются время задержки ( τ ) и наклон начального роста ( k × E ), которые следуют из приблизительного выражения для мембраносвязанного клатрина, [CLA] mem ( т ):

Математически отставание в начальном росте объясняется ступенчатой ​​функцией Хевисайда H, которая равна нулю до τ и единице после него. Расчетные масштабы времени [ τ , 1/ k ] = [13 с, 121 с] полностью согласуются с экспериментальными [11 с, 107 с].Геометрия эксперимента ( V / A ) и размер предела решетки клатрина [CLA] mem от до ~ 5000 клатрин / мкм 2 ( ~ 201 нм 2 на тример). Как в эксперименте, так и в моделировании, насыщение клатрина на поверхности, таким образом, является результатом потери доступной площади поверхности, а не потери сайтов связывания адаптеров. Быстрый рост после начального отставания - признак сотрудничества. Здесь клатрин связывает адаптеры, увеличивая скорость его ассоциации с другим клатрином.Уменьшение геометрического пространства поиска после связывания с мембраной (уменьшение размеров) еще больше увеличивает скорость.

Кооперативность как размерного уменьшения, так и связывания адаптера необходимы для воспроизведения экспериментальной кинетики

Эксперименты установили, что как только клатрин связывает адаптерные белки, его сродство к другим клатринам увеличивается 51 . Основываясь на нашем моделировании, где K D без адаптера фиксируется 26 , мы видим, что сходство с адаптером увеличивается на ~ 2.4 k B T , что обеспечивает более быстрое и стабильное связывание. Кроме того, как только клатрин локализуется на поверхности, он связывает дополнительные адаптеры или клатрины с двумерной константой скорости 15 , с масштабом длины 30 нм, определенным путем сравнения с экспериментальной кинетикой (см. Моделирование), что сопоставимо с радиусом клатрина. Оба источника кооперативности вносят значительный вклад в быстрый рост на поверхности (рис. 2D).

Время запаздывания контролируется скоростью прилипания клатрина к поверхности

На рисунке 2D черным цветом показана чувствительность τ запаздывания к шести основным параметрам модели (см. Таблицу 1).Данные моделирования демонстрируют четкие тенденции, которые хорошо согласуются с упрощенной моделью, суммированной по двум временным шкалам, первая из которых представляет локализацию клатрина в мембране, а вторая - зарождение клатрин-клатриновых контактов: где f coop = exp (–Δ G coop / k B T ) и коэффициент размерности DF = V / A / h . [ CLA ] навалом - концентрация клатрина в растворе. Упрощенная модель отставания τ показана черной пунктирной линией на рис.2D. Параметры упрощенной модели определяются путем подбора всех результатов моделирования (включая рис. 2–3), так что она описывает как in vitro, , так и физиологические симуляции ниже (рис. S2, методы SI, таблица S2). Зависимость τ запаздывания от скоростей и концентраций аналогична полупериоду 55 или среднему времени первого прохождения 34 , изменяющемуся обратно пропорционально скорости x концентрации в обоих условиях. Однако существует нелинейная зависимость от фактора размерности ( DF ) и упругой деформации клатриновой решетки (Δ G деформация ).Вероятно, это связано с тем, что некоторые клатрины связываются непосредственно с клатрином из раствора, минуя кооперативные механизмы, обеспечиваемые уменьшением размеров. Зарождение зародышей на поверхности также меньше зависит от общего объема, так как сифонирует лишь небольшое количество клатрина. В этих моделях in vitro время локализации клатрина на мембране составляет около 40% задержки (первый член в уравнении 2) и, как и ожидалось, наиболее чувствительно как к скорости связывания клатрина с адаптером, так и к плотность переходника на мембране.Зарождение клатриновой структуры (второй член) требует, чтобы несколько клатринов локализовались в одном положении, что ограничено в первую очередь низкой концентрацией клатрина (0,08 мкм).

Рис. 3. Клатриновые решетки с физиологически подобной геометрией не могут собраться, пока концентрация адаптера не достигнет 0,6 мкМ.

A) Кинетика самого большого узла клатриновой решетки быстрее и достигает больших размеров с увеличением концентрации адаптера. Все модели содержат клатрин 0,65 мкм. Б) Время запаздывания и темпы роста следуют простым формулам (2 и 3).C) Время задержки медленнее в этих геометрически физиологических моделированиях и ограничено по скорости рекрутированием клатрина на мембрану с гораздо меньшим количеством сайтов связывания адаптеров, чем in vitro . D) Размер самых больших решеток увеличивается с переходниками, переходя от маленьких решеток к большим на 0,8 мкм (черные квадраты). На данный момент стехиометрия клатрин: адаптер достигла 1: 1 (оранжевые кружки).

Кинетика роста контролируется в основном набором из адаптеров

На рисунке 2D красным цветом показана чувствительность начальной скорости роста k × E к параметрам в таблице 1.Как и в случае τ , упрощенная модель, мотивированная кинетикой действия массы, в большинстве случаев достаточно хорошо соответствует данным (рис. 2D, красная пунктирная линия):

Этот начальный быстрый рост наиболее чувствителен к первому члену (пропорциональному k AP-CLA ), учитывающему привлечение клатрина в адаптеры. Рост дополнительно усиливается совместно из-за 2D взаимодействий между контактами как тример-тример клатрина, так и контактов клатрина-адаптера. Варьируя h = k on, 3D / k on, 2D при фиксированном V / A показывает чувствительность к DF (рис. 2D), указывая на то, что 2D-связывание необходимо для управления экспериментальной скоростью роста.

Как ни странно, более высокая свободная энергия деформации Δ G деформация замедляет время задержки, но увеличивает скорость роста , тогда как все другие параметры вызывают коррелированное замедление отставания и роста. Увеличение штрафа за деформацию дестабилизирует замкнутые гексагональные структуры, способствуя разборке, которая замедляет зарождение (τ отставание ), как и следовало ожидать. Однако рост ускоряется из-за увеличения выборки динамических и неупорядоченных структур с большим количеством «липких концов» или свободных ножек (1 свободная ножка / тример в шестиугольнике, 1.33 свободная нога / тример в удлиненном 6-мере), который быстрее набирает дополнительный клатрин.

AP-2 сам по себе недостаточен для зарождения решеток в клеточных условиях

Чтобы охарактеризовать зародышеобразование в более физиологических условиях, мы уменьшаем соотношение V / A с 991 мкм до 1 мкм, что характерно для клетки HeLa, и увеличиваем концентрации тримеров клатрина до 0,65 мкМ 56 (Методы). Стабильные решетки не образуются при физиологических концентрациях АР-2 (0,2 мкМ 56 , см. Рис.3А). По сравнению с системой in vitro значительно сниженное значение V / A приводит к гораздо более низкой плотности AP-2 на мембране ( ~ 120 мкм -2 по сравнению с 9000 мкм -2 ). Большинство клатриновых ансамблей представляют собой димеры и мономеры со стехиометрией 2 клатрин: 1 АР-2, которая слишком мала, чтобы вызвать кооперативность, необходимую для образования зародышей. При такой концентрации клатрина для фазы задержки и роста необходимо соотношение клатрина и адаптера ~ 1: 1 (достигается при 0.7-0,8 мкм адаптера). Равновесные флуктуации являются наибольшими в этой точке, что указывает на переход в росте решетки (рис. S3). Увеличенный AP-2 зарождает более крупные решетки с более коротким временем задержки и более быстрым ростом (рис. 3B).

Уравнение 2 показывает, что время задержки значительно увеличивается при низких концентрациях AP-2. При небольшом количестве сайтов связывания AP-2 локализация клатрина на мембране ограничивает скорость (рис. 3C). Скорость роста значительно ниже, чем у in vitro , где только небольшое количество клатрина набирается на площадь поверхности 2 мкм в секунду (рис. 3B).И здесь несколько доступных AP-2 ограничивают привлечение клатрина на поверхность. Рекрутирование клатрина клатрином также замедлилось из-за чувствительности скорости роста к DF в стабилизации клатрин-клатриновых контактов на поверхности. Мы отмечаем, что рекрутирование AP-2 в липиды не является ограничивающим в этих моделированиях, так как покрытие PI (4,5) P 2 составляет ~ 20000 мкм -2 (1%), а скорость Связывание АР-2 с липидами происходит быстро, 0,3 с -1 мкМ -1 (Таблица S2).

Сборка решеток преодолевает начальный барьер с последующим небольшим повышением стабильности во время роста

Отслеживание размера решетки в процессе моделирования позволяет количественно оценить их относительную вероятность во время роста в единицах кТ , - ln p obs ( n; t ), (рис. 4A), а равновесная свободная энергия для всех размеров решетки - ln p ( n ). При равновесии и для более высоких концентраций адаптеров мы наблюдаем бимодальное распределение - либо очень большие решетки, либо совокупность маленьких решеток n < ~ 25 (рис.4А, В). Это примечательный результат, поскольку он демонстрирует, что даже при более высокой концентрации адаптера, после того, как большая часть раствора клатрина и адаптера концентрируется в единую структуру с покрытием, оставшийся клатрин образует небольшие кластеры, которые не устойчивы к разборке. Следовательно, образование стабильных клатриновых решеток может локально истощать ресурсы, необходимые для зарождения дополнительных стабильных сайтов. Фаза роста сборки (рис. 4А-желтый) дополнительно показывает, как даже после преодоления начального барьера для зародышеобразования решетки демонстрируют аналогичную стабильность в широком диапазоне размеров, что указывает на динамическое ремоделирование (рис.4А, 4Б). За этой плоской областью следует устойчивая яма, которая смещается больше и углубляется по мере того, как система уравновешивается до максимальных размеров решетки, с последней «стенкой», которая предотвращает дальнейший рост. Эта стенка возникает из-за недостаточного количества адаптеров для стабилизации роста на периферии решетки.

Рис. 4. Решетки клатрина сталкиваются с первоначальным препятствием для роста, при этом стабильный размер достигается только после значительного роста.

A) Вероятность наблюдения клатриновых решеток размером n может быть преобразована в подобную энергии метрику -ln (P ( n )), которая в состоянии равновесия является истинной свободной энергией.Первоначальный барьер для плато зарождения, за которым следует плоская область, в которой структуры имеют сравнимую вероятность. Фаза роста (желтая) представляет собой образцы решеток промежуточных размеров, в то время как в состоянии равновесия видны только маленькие и большие кластеры. Полная траектория обозначена зеленым цветом. [AP2] = 1,6 мкм. B) Чтобы количественно оценить конец начального барьера для роста (n 1 ) и начало стабилизированного роста (n 2 ), мы определяем плато при постоянном -ln (P (n)), которое определяет эти перехватов для каждой траектории (Методы).C) С увеличением концентрации адаптера стабилизируются более крупные решетки. D) Критический размер, при котором плато барьера составляет ~ n 1 = 25, независимо от концентрации адаптера. За областью плато следует лунка, которая начинается с n 2 и увеличивается с переходниками. (Вставка) Время прохождения первого барьера следует обратно пропорционально концентрации адаптера τ obs ∝ 1 / [ AP2 ], с константой пропорциональности 1 / [0,026 μ M -1 с -1 ].

Концентрация адаптера контролирует время достижения наблюдаемого ядра, но не его размер

По мере увеличения концентрации адаптера свыше 0,7 мкм мы наблюдаем, что по всей траектории начальный барьер для зарождения переходит в сплющенную область с аналогичной решеткой. размер n 1 ~ 25 клатрина для всех концентраций адаптера (рис. 4C – 4D). Этот начальный барьер важен, потому что меньшие решетки склонны к разборке (рис. S3C). Существует более поздний переход, когда начинает формироваться устойчивая яма, при n 2 , которая явно смещается в сторону более крупных решеток по мере увеличения концентрации адаптера (рис.4С). Эти два размера решетки, которые ограничивают сплющенную область, которая возникает во время роста, полностью согласуются с размерами решеток, которые определяют области равновесия (рис. 4D) (методы). Таким образом, во всех фазах остается барьер для зародышеобразования, который в значительной степени не зависит от концентрации адаптеров, тогда как максимальный размер решеток растет. Мы действительно наблюдаем некоторые особенности в более плоской, более шумной промежуточной области по всей траектории, где небольшой барьер может существовать при более высоком размере решетки (n ~ 40-70).Это указывает на то, что во время роста решетки, которые находятся примерно на полпути к стабильному размеру, наблюдаются реже всего и действительно имеют короткое время жизни (рис. S3). Дополнительные адаптеры также значительно ускоряют время, необходимое для достижения «критического» ядра, причем время примерно пропорционально обратной концентрации адаптера (рис. 4D-вставка).

Размер наблюдаемых нами «критических» зародышей показывает, что даже после образования множества (8–10) шестиугольников (вставка на рис. 4A) решетка все еще может самопроизвольно разрушиться.В частности, при временных масштабах меньше, чем время, необходимое для достижения этого критического размера, который даже для адаптера 1,6 мкм составляет ~ 30 с, решетки демонстрируют значительный объем динамического ремоделирования. Большая часть роста и сжатия происходит за счет мономеров (рис. S3B), и когда решетка действительно меняет размер, вероятности диссоциации тримеров или добавления одного сравнимы до достижения предела максимального размера (рис. S3C). При изменении концентрации клатрина размер изначально стабильных ядер действительно изменяется, указывая на то, что именно общий доступный клатрин контролирует начальный барьер для нуклеации при наличии достаточного количества адаптеров (рис.S4).

Сборка в растворе менее кооперативна, чем на мембране, несмотря на повышенную стабильность изогнутых структур.

Приведенное выше моделирование отслеживало плоские решетки клатрина на плоской поверхности. Однако в растворе клетки изогнуты 51 , что указывает на то, что изогнутые клетки более устойчивы при отсутствии внешних ограничений мембраны. Недавние эксперименты также количественно показали, что сборка клатрина более стабильна на более сильно изогнутых поверхностях, демонстрируя выигрыш в энергии, который сопровождает изогнутые клатриновые контакты 57 .В соответствии с этими наблюдениями, когда мы используем одни и те же энергетические и кинетические параметры для моделирования образования изогнутой клетки в растворе, мы видим минимальную сборку (рис. 5). Это показывает, что общая энергия решетки на мембране слабее, чем в растворе, либо потому, что она плоская, либо потому, что она изогнута, но ее стабильность снижается из-за сил изгиба мембраны. Увеличивая свободную энергию связи клатрин-клатриновых контактов, что согласуется с повышенной стабильностью изогнутой решетки в растворе, и уменьшая штраф за деформацию шестиугольников или пятиугольников, мы видим рост сборки.Этот выход сборки зависит от концентрации адаптера, что согласуется с экспериментами in vitro по формированию клетки, управляемой адаптером-пептидом, в растворе 51 , и демонстрирует значительно меньшую кооперативность, чем на мембране, из-за отсутствия уменьшения размеров. Благодаря стабилизации связей на ~ 2k B T и уменьшению гексагональной деформации на 2,3k B T, наша сборка клетки относительно хорошо согласуется с экспериментами in vitro и (рис.S5) 51 . По нашим оценкам, в результате деформации связей и гексагональной решетки изогнутая решетка имеет дополнительные 3-4 k B Тл свободной энергии на тример (Таблица S1), доступная для выполнения работы с плоской мембраной, то есть для ее изгиба. . В дальнейшем мы будем называть эту величину «свободной энергией кривизны клатрина».

Рис. 5. Сборка изогнутой клетки в растворе требует дополнительной стабилизации, которая сопоставима с энергией изгиба мембраны

A) Клатриновые клетки с имеющимися адаптерами не образуются в растворе (черные точки), при использовании той же модели, что и на мембране (белые кружки) .При дополнительной стабилизации через клатрин-клатриновые связи (ΔG) и снижении деформации (ΔG штамм ) начинают формироваться клетки раствора (красный и синий). Б) Энергия изгиба мембраны на тример клатрина при увеличении размеров n криволинейных решеток. Более сильно изогнутые клетки ( α, = 98 °) требуют больше энергии на тример для изгиба мембраны. Энергия мембраны пропорциональна модулю изгиба, где мы используем 20 k B T в соответствии с измерениями на плазматической мембране 58 .

Стоимость изгиба мембраны может быть, по крайней мере, частично компенсирована стабильностью изогнутой решетки

При формировании изогнутой клетки на мембране образование изогнутой клетки должно сочетаться с изгибом мембраны, и здесь мы гармонично связали наши собранные изогнутые клетки с моделью деформируемой мембраны 59 , который следует за гамильтонианом Хельфриха 60 (вставки на рис. 5B) (методы). Энергии мембран, представленные на фиг. 5B, показывают, что упругая энергия мембраны и свободная энергия кривизны клатрина сопоставимы (3-4 k B T), что указывает на то, что изогнутые ямки близки по устойчивости к плоской решетке.Для плоской решетки на мембране напряжена именно клатриновая решетка, при этом мембрана находится в состоянии покоя. Когда образуется ямка, нагрузка на решетку снижается, но увеличивается стоимость изгиба мембраны. Обратите внимание, что мы не ожидаем, что изогнутая, связанная с мембраной клатриновая решетка восстановит стабильность изогнутых клеток раствора из-за сил, приложенных к ней деформированной мембраной. Таким образом, изогнутые энергии сборки изменяются на мембранах, что наблюдалось в крупнозернистой модели клатрина 43 .Этот баланс напряжений является основой для использования отдельных скоростей для изогнутых решеток в растворе по сравнению с ожидаемыми значениями на мембране, которые в этом случае будут более похожи на значения для плоских решеток. Наши расчеты также демонстрируют, как стоимость энергии изгиба изменяется в зависимости от кривизны везикулы. Для более крупных везикул требуется больше клатрина, но общая кривизна ниже, что приводит к более низким затратам энергии изгиба на клатрин (рис. 5B).

Обсуждение

Наша модель предсказывает, что возникающие решетки клатрина на мембранах нестабильны до тех пор, пока не будет присутствовать ~ 25 клатрина, при физиологических параметрах 0.65 мкм клатрина и V / A = 1 мкм. Наша оценка порога устойчивости очень похожа на размеры абортивных структур в ячейках 1 . Минимальным требованием для преодоления этого барьера для образования зародышей структур на мембране является достаточная концентрация адаптерных белков, которые могут связывать клатрин с мембраной, позволяя сборке совместно извлекать выгоду из повышенной (управляемой адаптером) стабильности и уменьшения размеров. Физиологические концентрации одного АР-2 недостаточны для рекрутирования достаточного количества клатрина для спонтанного образования мембраносвязанной клетки.Следовательно, участие других адаптеров необходимо для запуска зародышеобразования. Наша модель показывает, как in vitro в условиях с концентрацией белка in vivo и не определяют переход между нестабильным и стабильным ростом решетки, в значительной степени из-за нефизиологического отношения V / A. Наше кинетическое моделирование и теоретический анализ позволяют нам преодолеть геометрический разрыв между in vitro, и in vivo; наша модель предсказывает, что для одного типа адаптера для обеспечения продуктивного зарождения и роста за ~ 60 секунд (среднее время образования пузырьков) требуется по крайней мере 1.Адаптеры на 6 мкм. Для этого также требуется достаточное количество липидных популяций, которые могут запускать эффективное связывание с мембраной, с более медленными скоростями связывания липидов или уменьшенными популяциями, в конечном итоге замедляющими как задержку, так и скорость роста. Наши результаты ясно демонстрируют, что спонтанная разборка покрытых клатрином структур на мембранах может происходить естественным путем даже через относительно длительные периоды времени (многие секунды). Как свидетельствуют наши результаты равновесия, накопление большей части клатрина в отдельные структуры также истощает локальные популяции клатрина и адаптеров, оставляя оставшийся клатрин способным образовывать только небольшие и временные структуры (рис.4).

Моделируя только один тип адаптера для рекрутирования клатрина на мембрану, мы смогли построить прогностические формулы того, как микроскопические переменные изменяют макроскопическое отставание и время роста, даже если мы варьировали концентрацию клатрина, концентрацию липидов, систему геометрия, изменения в кооперативности (рис. S6) или скорости связывания липидов (рис. S7). Однако у in vivo, есть несколько типов адаптеров или дополнительных белков, которые могут связывать клатрин с мембраной 61 .Хотя наша модель предсказывает, как адаптеры с более быстрой или более медленной кинетикой связывания будут изменять макроскопический рост, способность многих из этих белков связываться друг с другом 62 создает перекрестное связывание, которое будет стабилизировать эти белки на поверхности мембраны 15 . Увеличивая локальную плотность сайтов рекрутирования клатрина, мы прогнозируем, что это перекрестное связывание будет способствовать зарождению стабильных решеток при более низких концентрациях, чем это происходит для одного типа адаптеров. Кинетика связывания дополнительных взаимодействий также может быть значительно более динамичной, чем у AP-2; белки FCho1 и eps15 образуют кластеры с AP-2, которые помогают инициировать сайты образования покрытых клатрином структур в клетках, и все же как FCHo1, так и eps15 в значительной степени отсутствуют в завершенных пузырьках, указывая на быстротечность их клатриновых контактов 63–65 .Поведение этих дополнительных типов адаптерных белков согласуется с нашим прогнозом модели, что AP-2 нуждается в помощи для зарождения стабильных решеток, и в будущей работе мы рассмотрим, как явное перекрестное связывание может повысить локальные концентрации, чтобы управлять зародышеобразованием и ростом во времени и пространстве. . Важно отметить, что модель и программное обеспечение имеют открытый исходный код, поэтому их можно сразу применить и изменить с помощью дополнительных экспериментальных данных (методов).

Ограничением нашей модели является сборка клатринового покрытия, которая динамически не связана с ремоделированием мембраны с образованием сферических пузырьков.Однако наши энергетические расчеты с использованием собранных нами клатриновых структур и модели деформируемой мембраны демонстрируют, что энергия на клатрин, необходимая для изгиба мембраны, сопоставима со свободной энергией кривизны клатрина. Таким образом, наша модель предсказывает, что энергия плоских решеток на мембранах и изогнутых клеток на изогнутых мембранах имеет аналогичный масштаб, хотя и чувствительна к жесткости мембраны и дополнительным механизмам образования кривизны. Дополнительная индукция искривления, вызванная адапторными белками (например,грамм. вставка амфипатической спирали и BAR домены 66 ) д. помогать ремоделировать мембрану, тем самым уменьшая работу, требуемую только от решетки клатрина. Кинетика изгиба мембраны вряд ли будет ограничивать скорость, учитывая медленные временные шкалы рекрутирования клатрина и относительно быструю динамику ремоделирования, наблюдаемую при отпочковывании мембран 67 . Кинетика поздней сборки клетки может быть изменена из-за почкования, однако, из-за уменьшения периметра клатриновой решетки в изогнутой клетке, когда размер выходит за пределы диаметра пузырьков ( ~ 150 нм).Хотя это не повлияет на ранний рост и преодоление барьера зародышеобразования, закрытие везикулы включает сужение периметра, что сокращает сайты для рекрутирования клатрина, но увеличивает контакты, образующиеся в среднем на клатрин. Моделирование кинетики спаренной сборки и ремоделирования будет в конечном итоге важно для выделения событий формирования продуктивных пузырьков и возможно для типов моделей, используемых здесь.

Сборка клатриновой оболочки, изучаемая здесь, имеет много общих фундаментальных свойств с различными биологическими путями, включая этапы сборки вируса 67–-69 и агрегации белка 70 , где мы ожидаем аналогичной чувствительности к мембранной или поверхностной (воздух / вода) локализации и геометрия.Наша работа здесь предсказывает, как сборка и агрегация могут происходить на поверхностях с более слабой энергией взаимодействия или значительно меньшим числом копий, чем это необходимо для зарождения структур в растворе. Локализация на поверхности обеспечивает дополнительную шкалу времени, которая может замедлить зародышеобразование, что может помочь избежать кинетических ловушек 71 для повышения выхода в разработанных системах 72,73 . Добавление мембраны обеспечивает контрольную переменную для экспериментальной количественной оценки кинетики взаимодействия, где мы показали здесь, как визуализация рекрутирования на поверхности 25 может быть эффективной наблюдаемой для различения механизмов сборки.Затем можно использовать ферментативный контроль состава мембраны для запуска разборки, чтобы изучить скорость отсоединения 28 . В целом, используемый здесь подход на основе скорости 28 предлагает ценную платформу для механистического и прогнозного моделирования самосборки, как в равновесии, так и вне его.

NSF-опосредованная разборка комплексов SNARE на пути и вне пути и ингибирование комплексином

Благодарим вас за отправку вашей статьи «NSF-опосредованная разборка комплексов SNARE на пути и вне пути и ингибирование комплексином» на рассмотрение eLife .Вашу статью рецензировали три рецензента, рецензент-редактор и Вивек Малхотра в качестве старшего редактора и рецензента №2. Следующее лицо, участвовавшее в рассмотрении вашей заявки, согласилось раскрыть свою личность: Юнли Чжан (Рецензент №1).

Ваша рукопись была оценена тремя экспертами, и после обширных консультаций мы решили предложить редакцию, которая затрагивает следующие основные проблемы. Большинство проблем требует переписывания текста, чтобы выделить предостережения и способы их решения экспериментальным путем, если это возможно.

Существенные изменения:

1) Хотя анализ дает новое представление о времени жизни собранных и разобранных состояний белков SNARE под действием NSF, в статье часто опускается молекулярное объяснение отдельных состояний и событий их перехода или делаются выводы, которые напрямую не подтверждаются представленные данные. Например, остается необъяснимым, почему αSNAP влияет не только на разборку, но и на кинетику процесса сборки (рис. 3I, J).Этот вопрос следует прояснить и обсудить. Есть ли эксперимент, который может решить эту проблему? Если нет, то поясните пожалуйста?

2) Кроме того, авторы показывают, что добавление комплексина специфически сокращает время жизни состояния с низкой эффективностью FRET без изменения времени пребывания с высоким FRET. Последний отражает срок службы собранного комплекса SNARE. Тем не менее, авт. Заключают, что комплексин ингибирует NSF-опосредованную кинетику разборки комплекса SNARE, что, по-видимому, противоречит представленным данным.Более того, они предполагают, что действие комплексина может приводить к неполной разборке SNARE, но не предоставляют доказательств для состояний промежуточной эффективности FRET, наблюдаемой при разборке бинарных комплексов (например, Рис. 7). В самом деле, результаты скорее подтверждают мнение, что complexin специфически облегчает сборку тройных SNARE комплексов без изменения кинетики разборки. Пожалуйста, объясни.

3) В этом контексте примерная кривая, показанная на Рисунке 6B (10 мкМ Cpx WT), показывает состояние с высоким FRET, которое часто прерывается подобными шипам низкими отклонениями FRET, не оказывая влияния на частотное распределение времени пребывания с высоким FRET. (Рисунок 6E).Здесь также важно отметить, что в рукописи нет информации о важных ограничениях, используемых в анализе, таких как определение пороговых значений переходных состояний, отношение сигнал / шум и т. Д. Пожалуйста, объясните.

4) В контексте наблюдаемой конкуренции между комплексином и вариантами SNAP за связывание с тройным комплексом SNARE, авторы предполагают, что чувствительный к кривизне C-концевой домен комплексина может секвестировать белок в везикулы, таким образом эффективно увеличивая SNAP: комплексин. молярное соотношение - благоприятный сценарий для разборки комплекса SNARE.Однако предыдущие исследования показали, что ассоциация комплексина с пузырьками увеличивает его «эффективную» концентрацию в месте действия (Wragg et al., 2013) и что везикулярная локализация белка является предпосылкой для его ингибирующего действия (например, Gong et al. ., 2016). Таким образом, неясно, почему авт. Предполагают, что именно связывание комплексина с мембраной способствует разборке и слиянию SNARE, опосредованным αSNAP. Пожалуйста, проясните этот момент.

5) В своей рукописи авторы последовательно цитируют White et al., 2018, рукопись готовится, даже для некоторых из их основных выводов. Хотя часто бывает полезно упомянуть подтверждающие доказательства для подкрепления выводов, сделанных в статье, рецензенты или читатели не могут определить значимость этой ссылки, поскольку она еще не опубликована. Пожалуйста, ограничьте цитирование этой неопубликованной работы.

6) Рукопись полностью лишена какого-либо статистического анализа. Кроме того, часто остается неясным, определялись ли средние по всему количеству состояний времени жизни, по эпохам регистрации или по количеству независимых экспериментов, последнее было бы наиболее достоверным.Для нормально распределенных параметров естественный разброс (определяемый как стандартное отклонение / среднее значение = коэффициент вариации) увеличивается с увеличением амплитуды сигнала, чего нет на рис. 3C, H. Пожалуйста, объясните это явление. Новые статистические данные должны быть представлены в соответствующих подписях к рисункам или в основной части текста.

7) Короткоживущие состояния с низким FRET часто наблюдаются во многих экспериментальных условиях: при высоких концентрациях NaCl, при низких концентрациях αSNAP и в присутствии мутантного αSNAP или 10 мкм комплексина.Авторы интерпретировали эти состояния как частично дизассемблированные состояния SNARE или неудачную дизассемблировку. Хотя такая интерпретация разумна, возможно альтернативное объяснение. Эти кратковременные состояния просто вызваны быстрой повторной сборкой SNARE после полной разборки SNARE? Пожалуйста, объясните это.

8) Авторы предположили, что при низкой концентрации αSNAP «непродуктивные всплески низкой эффективности FRET могут быть следствием только частично занятого второго сайта α-SNAP» (подраздел «Снижение концентрации αSNAP снижает активность разборки»).Спайки вызваны связыванием только одного αSNAP? Авторы ясно показали, что комплексы SNARE содержат множество сайтов связывания для αSNAP. Связывание αSNAP с разными сайтами и разная стехиометрия связывания могут приводить к разным путям разборки и кинетике. Перепишите текст, чтобы лучше объяснить данные с оговорками, которые помогут решить эту проблему.

9) Что касается разборки t-SNARE, на рисунке 7B показаны быстрые конформационные переходы t-SNARE. Неясно, насколько NSF способствует этим переходам, потому что комплексы t-SNARE сами по себе демонстрируют быстрые переходы (Weninger et al., 2008). Может быть полезно сравнить трассировки FRET с зависимой от NSF разборкой и без нее. Вдобавок, NSF, по-видимому, не значительно увеличивает популяции состояний с низким FRET (развернутые состояния t-SNARE), особенно для конструкции CC2 (сравните Рисунок 7E и Рисунок 7 - приложение к рисунку 1C). Напротив, промежуточное состояние кажется отдельным состоянием, вызванным NSF. NSF только частично разбирает комплекс t-SNARE? Можно ли это проверить экспериментально?

10) Анализ разборки SNARE проводили на поверхности мембраны.Известно, что αSNAP связывает мембраны, что может значительно ускорять скорость разборки SNARE с помощью NSF (Winter et al., 2009). Однако в разделе «Обсуждение» можно предположить, что связывание с мембраной не играет важной роли в этом анализе. Способствует ли связывание с мембраной активности NSF, о которой сообщается в этой работе? Если связывание с мембраной важно, это можно проиллюстрировать на некоторых диаграммах, например на рис. 6А. Пожалуйста, обратитесь к этому, улучшив объяснение и переделав рисунок 6A.

11) Авторы показали доказательства того, что две молекулы αSNAP связываются с интерфейсом между синтаксином и VAMP2, что очень интересно.Доказательства согласуются с недавними наблюдениями, что αSNAP стабилизирует застегивающийся на молнию комплекс SNARE (Ma et al., 2016), а Sec17 способствует слиянию мембран (Zick et al., 2015). Однако тот факт, что NSF разбирает все комплексы SNARE, неправильно собранные комплексы SNARE и комплексы t-SNARE (с нарушенным интерфейсом), указывает на определенную пластичность связывания между комплексами αSNAP и SNARE, включая стехиометрию связывания и сайт (Vivona et al., 2013). Пожалуйста, обсудите эту функцию.

Рецензент № 1:

Это одна из самых интересных статей о кинетике разборки SNARE, которую я когда-либо читал, от NSF.В этой статье Brunger et al. сообщили о новом тесте для точного обнаружения динамической разборки SNARE с помощью NSF и спонтанной повторной сборки SNARE. Используя конструкцию SNARE, которая объединяет три нейрональных белка SNARE в один полипептид, они могли обнаруживать повторяющуюся NSF-зависимую разборку одного комплекса SNARE с помощью передачи энергии флуоресценции одной молекулы (smFRET). Этот анализ показал много важных открытий: (1) Две молекулы αSNAP связываются с каждым комплексом SNARE, в отличие от четырех молекул αSNAP, о которых ранее сообщалось для комплекса SNARE, содержащего SNAP-25 без его линкерной области.(2) Высокая концентрация NaCl и низкая концентрация αSNAP снижают скорость разборки. (3) Комплексин ослабляет разборку SNARE. (4) NSF эффективно разбирает комплексы t-SNARE и неправильно собранные комплексы SNARE. Данные элегантны, хорошо представлены, четко описаны и подтверждают основные выводы.

Рецензент № 2:

Авторы представляют количественный анализ для измерения динамики сборки и разборки SNARE. Данные высокого качества и важны для всестороннего понимания слияния мембран, опосредованного SNARE.Открытия авторов проясняют важный вопрос, касающийся функции комплексинов в реакции сборки SNARE. Данные авторов хорошо показывают, что комплексины конкурируют с одной из двух молекул αa-SNAP в комплексе SNARE и конкурируют с разборкой, опосредованной NSF.

Выводы относительно просты и заслуживают публикации в eLife .

Рецензент № 3:

Рукопись Choi et al. рассматривает роль АТФазы NSF в разборке тройного и бинарного комплекса SNARE, используя эксперименты с резонансным переносом энергии флуоресценции одиночных молекул (smFRET).Авт. Разработали новую экспериментальную установку для наблюдения за множественными раундами сборки SNARE и их NSF-опосредованной разборкой путем ковалентного связывания отдельных белков SNARE с гибкими линкерами. Таким образом, рукопись выстраивается в ряд важных вкладов за последние годы, посвященных изучению механизма рециклинга SNARE-комплекса, опосредованного NSF (Ryu et al., 2015; Zhao et al., 2015).

Рукопись Choi et al. Показывает, что разборка одиночных тройных комплексов SNARE чувствительна к ионной силе среды, концентрации кофактора NSF αSNAP и к мутациям в αSNAP, которые маскируют его электростатическое взаимодействие с отрицательными поверхностными зарядами на поверхности Комплекс SNARE.(См. Также Zhao et al., 2015.)

Более того, авт. Сообщают, что комплексин 1 снижает разборочную активность NSF зависимым от концентрации образом с очень короткоживущими низкими пиками FRET (отражающими диссоциированное состояние белков SNARE) при высокой концентрации комплексина 1 (10 мкМ). Сравнивая наложенные структуры комплекса α-SNAP / SNARE со структурами комплексов комплексин / SNARE, авторы постулировали, что комплексин может конкурировать с αSNAP за взаимодействие комплекса SNARE.

Хотя большинство экспериментов выполнено хорошо, у меня все еще есть существенные проблемы, которые следует решить перед рассмотрением для публикации.

1) Хотя анализ дает новое представление о времени жизни собранных и разобранных состояний белков SNARE под действием NSF, в статье часто опускается молекулярное объяснение отдельных состояний и событий их перехода или делаются выводы, которые напрямую не подтверждаются представленные данные. Например, остается необъяснимым, почему αSNAP влияет не только на разборку, но и на кинетику процесса сборки (рис. 3I, J). Этот вопрос следует прояснить и обсудить.

Более того, авт. Показывают, что добавление комплексина специфически укорачивает время жизни состояния с низкой эффективностью FRET без изменения времени пребывания с высоким FRET. Последний отражает срок службы собранного комплекса SNARE. Тем не менее, авт. Заключают, что комплексин ингибирует NSF-опосредованную кинетику разборки комплекса SNARE, что, по-видимому, противоречит представленным данным. Кроме того, они предполагают, что действие комплексина может приводить к неполной разборке SNARE, но не предоставляют доказательств состояний промежуточной эффективности FRET, наблюдаемых при разборке бинарных комплексов (например,грамм. Рисунок 7). В самом деле, результаты скорее подтверждают мнение, что complexin специфически облегчает сборку тройных SNARE комплексов без изменения кинетики разборки.

В этом контексте иллюстративная кривая, показанная на рисунке 6B (10 мкМ Cpx WT), показывает состояние с высоким FRET, которое часто прерывается подобными шипам низкими отклонениями FRET без влияния на частотное распределение времени пребывания с высоким FRET (Рисунок 6E). Здесь также важно отметить, что в рукописи нет информации о важных ограничениях, используемых в анализе, таких как определение пороговых значений переходных состояний, отношение сигнал / шум и т. Д.

2) В контексте наблюдаемой конкуренции между комплексином и вариантами SNAP за связывание с тройным комплексом SNARE, авторы предполагают, что чувствительный к кривизне С-концевой домен комплексина может секвестировать белок в везикулы, таким образом эффективно увеличивая SNAP: комплексин. мольное соотношение - благоприятный сценарий для разборки комплекса SNARE. Однако предыдущие исследования показали, что ассоциация комплексина с пузырьками увеличивает его `` эффективную '' концентрацию в месте действия (Wragg et al., 2013) и что везикулярная локализация белка является предпосылкой его ингибирующего действия (например, Gong et al., 2016). Таким образом, неясно, почему авт. Предполагают, что именно связывание комплексина с мембраной способствует разборке и слиянию SNARE, опосредованным αSNAP. Авторам следует прояснить этот момент.

3) В своей рукописи авторы постоянно цитируют White et al., 2018, рукопись в стадии подготовки, даже для некоторых из своих основных выводов. Хотя часто бывает полезно упомянуть подтверждающие доказательства для подкрепления выводов, сделанных в статье, рецензенты или читатели не могут определить значимость этой ссылки, поскольку она еще не опубликована.Таким образом, ограничение цитирования этой неопубликованной работы может быть разумным.

4) Рукопись полностью лишена какого-либо статистического анализа. Кроме того, часто остается неясным, определялись ли средние по всему количеству состояний времени жизни, по эпохам регистрации или по количеству независимых экспериментов, последнее было бы наиболее достоверным. Для нормально распределенных параметров естественный разброс (определяемый как стандартное отклонение / среднее значение = коэффициент вариации) увеличивается с увеличением амплитуды сигнала, чего нет на рисунке 3.C, H. Авторы должны объяснить это явление. Новые статистические данные должны быть представлены в соответствующих подписях к рисункам или в основной части текста.

https://doi.org/10.7554/eLife.36497.040

Асбест

С 200 г., DEMOLICIONES FT S.L. был признан R.E.R.A. (Регистр предприятий с асбестовыми рисками) для осуществления разборки фиброцементных плит.

Мы имеем право демонтировать крыши, водостоки, водосточные трубы, трубопроводы, склады и любой другой объект, который может содержать в своем составе асбест.

Мы располагаем автокраном, оборудованным вакуумной аспирацией для обработки пластин. Наши рабочие должным образом упаковывают материал и перевозят на наших транспортных средствах на свалку, уполномоченную для обработки этих остатков.
Наша страховая компания занимается измерением содержания фиброцемента в воздухе на нашем рабочем месте, наблюдая за здоровьем наших сотрудников, измеряя риск воздействия асбеста, а также организует курсы по предотвращению производственных рисков в этом секторе.

ЧТО ТАКОЕ АСБЕСТ?
Асбест представляет собой смесь гидратированных силикатных волокон, вредных для здоровья и не обнаруживаемых невооруженным глазом. ЗАКОНОДАТЕЛЬСТВО R, D, 396/2006.
LEGISLACI? "NR, D, 396/2006

ВАЖНОСТЬ ЕГО ПОВТОРНОЙ ОБРАБОТКИ
Без надлежащей обработки постоянный контакт с волокнами фиброцемента через вдыхание мелких частиц, плавающих в воздухе, может быть очень вредным для здоровья. поскольку частицы начинают оседать в легких, провоцируя такие заболевания, как затрудненное дыхание, асбестоз и рак.

МЕТОДОЛОГИЯ РАБОТЫ

1º Реализация плана безопасности специально для асбеста.
2º Представление этого плана компетентным органам по труду для утверждения.
3º Ожидание благоприятного разрешения перед началом работы (максимум 45 дней без ответа, согласно R.D. можно начать работу посредством процедуры молчания).
4º Анализ и измерение асбеста, которые должны быть выполнены страховой компанией перед началом, во время и после завершения разборки.
5º Установка блока предотвращения загрязнения (DECOM), чтобы гарантировать не только качество, но и здоровье наших сотрудников, работающих над удалением асбеста.
6º Выполнение работ в соответствии с указанными профилактическими мерами в Плане безопасности.
7º Сотрудники, выполняющие работу, должным образом обучены и специализируются на выполнении отступлений от асбеста? »Они постоянно проходят курсы, которые расширяют, а также освежают их знания по предмету.
8º Средства индивидуальной защиты (средства индивидуальной защиты) специально предназначены для этого типа работ: одноразовые костюмы, маски с защитой от твердых частиц, перчатки и т. Д.
9º Асбестовые плиты будут загружены и транспортированы на авторизованные свалки с предоставлением соответствующего сертификата по завершении с указанием количества и происхождения.


Реальный Decreto 2006

Гистерезис самосборки / разборки наночастиц, состоящих из малорастворимых коротких эластиноподобных полипептидов | Journal of Nanobiotechnology

Как объяснено в разделе «Методы», массовая концентрация использовалась для нормализации количества ELP в каждом образце отчасти из-за технических ограничений.Хотя это позволяло эквивалентные количества пентамеров ELP присутствовать в образцах с одинаковой массовой концентрацией, это не учитывает влияние молярности. Таким образом, соображения молярности могут быть использованы для объяснения некоторых наблюдаемых поведений, когда массовая концентрация не может.

Имея всего 20 повторов аминокислотной последовательности VPGLG, L20 ELP является самой короткой конструкцией, исследованной с относительно гидрофобным лейцином в положении гостевой аминокислоты. Вообще говоря, концентрация L20 действительно влияла на размер частиц, образующихся выше температур перехода.При концентрации 0,05 или 0,10 мг / мл размер частиц достигал максимума примерно 650 нм во время нагревания перед уменьшением до примерно 500 нм в диаметре. Было обнаружено, что при 0,10 мг / мл это уменьшение диаметра частиц при нагревании, а также обратное при охлаждении было статистически значимым (p <0,0001). Увеличение концентрации L20 до 0,50 или 1,0 мг / мл приводило к образованию агрегатов микронного размера, которые не были стабильными в растворе и не реолюбилизировались при охлаждении.Концентрация ELP может иметь некоторое влияние на температуру перехода, поскольку она варьируется от 15 до 20 ° C в зависимости от условий образца, но четкой тенденции с этим набором данных не было, возможно, из-за температурного разрешения программы DLS 5 ° C . Растворение частиц L20 не наблюдалось ни при одной из протестированных концентраций, что означает, что система демонстрирует некоторый значительный гистерезис в диапазоне 15–20 ° C, хотя его нельзя полностью количественно определить. Диаметр этих частиц был одинаковым для образцов DLS и TEM.То, что L20, независимо от концентрации, размера частиц или стабильности, не подвергалось разборке, серьезно ставит под сомнение фундаментальное предположение, что все фазовые изменения ELP обратимы и что они полностью разбираются при охлаждении. Необратимое осаждение L20 также наблюдалось при исследовании стабильности разбавления, поэтому начальное осаждение на основе концентрации не отменяется разбавлением образца. Это отличается от наблюдений, сделанных в этом исследовании для V40 при идентичной обработке разбавлением, а также не согласуется с турбидиметрическим анализом разбавлений, выполненным на частицах, состоящих из повторов экзонов эластина 20–24 [28].Это свойство необратимого осаждения также наблюдалось во время обычных очисток L20. Очистка L20 на основе обратного температурного цикла с использованием стандартных процедур приводила к постоянно осажденным образцам, когда концентрации ELP были> 0,40 мг / мл. Кроме того, было обнаружено, что исходные растворы L20 при этих высоких концентрациях содержат агрегаты микронного размера сразу после оттаивания (данные не показаны). Эти необратимые осадки могут быть успешно реолюбилизированы только путем минимизации времени, в течение которого они нагреваются выше их Tt во время очистки, и обработки образцов ультразвуковой обработкой на льду.Нет никаких доказательств того, что поверхностный заряд играет роль в образовании крупных агрегатов L20, поскольку значения дзета-потенциала для системы выше температуры ее перехода находились в диапазоне -10,5 мВ.

Увеличение длины ELP с 20 до 40 повторов приводит к некоторым различиям в температурном отклике ELP и поведении сборки. Было показано, что концентрация L40 влияет на размер частиц как в фазе нагрева, так и в фазе охлаждения. Во время фазы нагрева средний размер частиц увеличивался с ~ 350 до 650 нм по мере увеличения концентрации ELP, в то время как во время охлаждения средний размер оставался в диапазоне 400-450 нм в диапазоне тестируемых концентраций.Ни разу не наблюдались частицы микронного размера. Об этом также можно судить, сравнивая измерения размера частиц при 50 ° C. Для L40 диаметры для нагрева и охлаждения хорошо согласуются, в отличие от случаев, когда образец подвергался осаждению (то есть L20 и V40). На Tt также влияла концентрация ELP. При 0,05 мг / мл L40 претерпел переход при 20 ° C, но при 0,10–1,0 мг / мл ELP переходил при 15 ° C. Для всех образцов наблюдался гистерезис температуры перехода сборки / разборки.Поскольку образцы 0,50 и 1,0 мг / мл не полностью разобрались при охлаждении, численное значение не может быть определено. Для образцов 0,05 и 0,10 мг / мл значения гистерезиса составили ~ 15 и 10 ° C соответственно. Поскольку более концентрированные образцы не разбирались, может существовать зависимость растворения системы L40 от концентрации. Диаметры частиц, измеренные с помощью ПЭМ, согласуются с результатами DLS для идентичных условий. Дзета-потенциал L40 при нагревании выше его Tt обнаруживал некоторую концентрационную зависимость, при этом образцы с более низкой концентрацией имели более сильные заряды.Тестирование стабильности разведения не показало однозначно дробление частиц, хотя увеличение значений PDI при разведении 0,05 и 0,10 мг / мл предполагает, что возможна нестабильность при дальнейшем разбавлении. Эта нестабильность при разбавлении не согласуется с поведением любого из других протестированных здесь ELP. В то время как исследования стабильности частиц ELP при разбавлении сильно отсутствуют в литературе, Osborne et al. сообщили, что конструкция ELP, состоящая из повторов 20–24 экзонов эластина, демонстрирует растворение частиц при разбавлении с использованием турбидиметрических методов, хотя степень разбавления не сообщается [28].Поведение ELP L40 при разбавлении, по-видимому, находится между результатами, сообщенными Осборном, и результатами, полученными здесь с использованием родственных конструкций L-серии.

Конструкции L80 самоорганизуются при нагревании до 10–15 ° C с образованием частиц диаметром от 200 до 600 нм, причем как Tt, так и размер частиц зависят от концентрации ELP. Более низкие концентрации обычно приводили к более мелким частицам, хотя нагревание раствора 1,0 мг / мл до температуры выше 35 ° C приводило к статистически значимому (p <0,0001) уменьшению размера частиц с ~ 500 до ~ 320 нм.После охлаждения диаметр частиц имел тенденцию оставаться постоянным, и при достижении 5 ° C каждая испытанная концентрация L80 демонстрировала полную разборку. Концентрационная зависимость наблюдалась для температуры перехода L80 во время сборки, но не разборки. При 0,05 и 0,10 мг / мл Tt составляла 15 ° C, а при более высоких концентрациях Tt снижалась до 10 ° C. Гистерезис наблюдали при всех условиях образца, за исключением 1,0 мг / мл, со значением в диапазоне от 5 до 10 ° C. Данные о поверхностном заряде и стабильности при разбавлении предполагают, что в целом это была стабильная конструкция без тенденции к выпадению в осадок или дестабилизации при разбавлении.Результаты ПЭМ подтверждают размеры, определенные с использованием других методов, в том, что L80 представляет собой сферическую, электронно-плотную частицу, которая была хорошо диспергирована и не склонна к агрегации.

ELP L160 был самой большой протестированной конструкцией (77 кДа), и в целом концентрация L160, по-видимому, оказывает некоторое влияние на диаметр частиц, образующихся при нагревании. Образцы с более низкими концентрациями ELP образовывали частицы меньшего диаметра при нагревании со средним диаметром в диапазоне 250–300 нм для 0.05 и 0,10 мг / мл и диаметры в диапазоне 500–600 нм для более концентрированных образцов. Эту же тенденцию можно наблюдать для размеров частиц при охлаждении образцов. Как и в случае с другими конструкциями, некоторое статистически значимое (p <0,0001) уменьшение диаметра частиц наблюдалось для образца 1,0 мг / мл при нагревании выше 35 ° C. При концентрации 0,50 мг / мл L160 образовывал частицы при нагревании до 10 ° C. Диаметр частиц оставался постоянным и составлял ~ 200 нм, пока температура образца не достигла 25 ° C, после чего диаметр частиц постоянно увеличивался до максимального значения ~ 625 нм.Охлаждение образцов L160 до 5 ° C привело к очень небольшому изменению диаметра частиц до тех пор, пока разборка не наблюдалась при 5 ° C для всех концентраций ELP. В отличие от других конструкций ELP, каждый из образцов L160 действительно демонстрировал полную разборку при охлаждении независимо от концентрации. Концентрация явно повлияла на сборку Tt для этой системы. Температуры перехода составляли от 10 до 20 ° C, причем более концентрированные образцы имели более низкие температуры перехода. Гистерезис наблюдался при 0,05 и 0.10 мг / мл, а величина гистерезиса находилась в диапазоне от 5 до 10 ° C. Значения дзета-потенциала для этой конструкции выше ее Tt находились в диапазоне от -10 до -16 мВ, что предполагает, что эти частицы должны быть коллоидно стабильными. Это была единственная конструкция, которая показывала большее значение дзета-потенциала при 37 ° C по мере увеличения концентрации L160. Кроме того, разбавление образца частиц L160 от 1,0 до 0,05 мг / мл не привело к каким-либо значимым колебаниям диаметра или большим стандартным отклонениям, указывающим на снижение стабильности частиц.Электронная микроскопия соответствовала наблюдениям, сделанным с помощью других методов, в том, что частицы при 35 ° C и 0,10 мг / мл примерно соответствовали наблюдениям DLS и приводили к образованию сферических, электронно-плотных и хорошо диспергированных структур. Предыдущие исследования показали, что однородная интенсивность, наблюдаемая для всех ELP L-серии, указывает на формирование мицеллоподобной структуры [37].

ELP V40 претерпевает фазовый переход при нагревании до 30–35 ° C, при этом образцы с более высокой концентрацией требуют меньшего нагрева для получения отклика.При превышении температуры перехода V40 образовывал частицы размером от 200 нм до микрон в диаметре. Изображения ПЭМ показали, что V40 не был таким электронно-плотным, как лейцин-содержащие ELP, что может указывать на то, что гидрофобность гостевой аминокислоты влияет на плотность упаковки. Предыдущие исследования показали, что плотность упаковки собранных ELP выше их Tt может зависеть от фазового перехода отдельных блоков в блок-сополимере ELP, концентрации соли в растворе и распределения гидрофильных и гидрофобных гостевых аминокислот в мультиблок-сополимере [27, 38, 39].Приведенные здесь результаты предполагают, что роль гидрофобности гостевой аминокислоты в гомополимерах ELP может быть еще одним направлением, с помощью которого можно конструировать плотность упаковки частиц ELP для нужд конкретных приложений. Хотя для этой системы не было четкой взаимосвязи между концентрацией ELP и диаметром, было очевидно, что при концентрациях 0,50 и 1,0 мг / мл очень быстро образовывались очень большие агрегаты, и осаждение наблюдалось после того, как образцы были нагреты до 50 ° C. Это согласуется с несоответствием диаметров образцов при 50 ° C во время нагрева и охлаждения.Хотя это осаждение соответствует поведению L20, в отличие от L20 осадки V40 повторно растворяются при охлаждении до 5 ° C, и видимое осаждение больше не наблюдается. То, что эта конструкция легко реолюбилизируется, согласуется с ее наблюдаемым поведением во время очистки. Процедуры обратного температурного цикла позволили осаждать и повторно растворять V40, как и L40, L80 и L160. При 0,05 мг / мл размер частиц V40, по-видимому, непрерывно увеличивался при нагревании образца, и при охлаждении наблюдали обратное.Из всех протестированных образцов V40 0,10 мг / мл больше всего напоминали лейцин-содержащие ELP во время его температурного тренда. При сборке этот образец образовывал структуры диаметром 400–500 нм, которые значительно (p <0,0001) уменьшались в размерах до ~ 175 нм при нагревании до 45 ° C. Как также наблюдалось при 0,05 мг / мл, это поведение было обратным во время охлаждения образца. Оказалось, что независимо от концентрации образца или размера частиц и растворимости, охлаждение V40 до 5 ° C привело к полной ресолюбилизации ELP, хотя большие значения гистерезиса наблюдались для 0.10 мг / мл и особенно 0,05 мг / мл V40. По сравнению с лейцин-содержащими ELP, V40 имел более низкие общие значения дзета-потенциала. Выше температуры перехода V40 имел только дзета-потенциал около -6,5 мВ, который не изменялся в зависимости от концентрации образца. Это значение заряда достаточно низкое, чтобы осаждение пробы не было неожиданным, хотя осаждение наблюдалось только для более концентрированных проб в течение периодов тестирования проб до 3 часов. Как и в случае с L20, кажется, что поверхностный заряд - не единственный фактор, который способствует развитию агрегатов микронного размера и последующему осаждению ELP.V40 также продемонстрировал дальнейшее необычное поведение по сравнению с другими тестируемыми конструкциями, когда исследовали его стабильность при разведении. Эта конструкция изначально имела диаметр чуть более 1 мкм при 1,0 мг / мл и постепенно уменьшалась в размере с разбавлением до конечного размера около 300 нм при 0,05 мг / мл, причем первое разведение приводило к значительному уменьшению диаметра частиц ( р <0,0001). Дальнейшее разбавление может привести к наблюдениям, согласующимся с ранее исследованными ELP [28]. Ни одна другая конструкция не продемонстрировала такого большого уменьшения диаметра.Интересно, что в отличие от L20, который выпадал в осадок во время этой процедуры, разбавление V40, по-видимому, обращало вспять рост агрегатов и предотвращало их осаждение, поскольку для этой конструкции не наблюдалось видимого осаждения. Это может быть связано с легкостью, с которой осажденный V40 может реолюбилизироваться простым охлаждением, а L20 - нет.

Систематический анализ ELP при различных концентрациях позволяет выполнить деконволюцию влияния различных параметров на поведение ELP в более широком контексте.Было показано, что концентрация влияет на образование и разборку частиц в ответ на изменения температуры. Например, степень гистерезиса, наблюдаемая для тестируемых ELP, становится больше по мере уменьшения концентрации ELP (таблица 1). Дзета-потенциал ELP при 5 ° C, что ниже их температур перехода, проявлял некоторую тенденцию к увеличению величины по мере увеличения концентрации образца, и это было особенно очевидно при 1,0 мг / мл. Эта закономерность не наблюдалась для тех же ELP при температурах выше их точек сборки.При 37 ° C три конструкции не проявляли никаких изменений в заряде (L20, L80 и V40), L160 увеличивался с концентрацией, а L40 уменьшался в дзета-потенциале по мере увеличения концентрации. Исследование пяти протестированных конструкций ELP на основе концентрации раствора привело к двум различным группам поведения: ELP, которые были склонны к преципитации (L20 и V40), и ELP, которые не преципитировали (L40, L80 и L160). ELP, которые действительно выпали в осадок, продемонстрировали ранее описанный сдвиг температуры перехода в связи с концентрацией, где более высокая концентрация приводила к более низкой Tt.Эта группа ELP также показала зависящее от концентрации осаждение, когда при концентрациях ELP ниже 0,50 мг / мл не образовывались частицы диаметром более 1 мкм, и осаждение не наблюдалось ни визуально, ни предполагалось по результатам DLS. Результаты ПЭМ использовали для подтверждения образования агрегатов микронного размера для образцов с концентрацией 1,0 мг / мл и субмикронных частиц с концентрацией 0,10 мг / мл, когда образцы нагревали выше их Tt. Независимо от подготовки образца все частицы имели примерно сферическую форму.L20 был электронно-плотным и хорошо диспергированным, в то время как V40 казался менее плотным. Не наблюдалось, чтобы концентрация независимо влияла ни на тенденцию, ни на температуру, при которой L20 и V40 разбирались, а также, по-видимому, не было зависящего от концентрации размера частиц при концентрациях, при которых не происходило осаждение. Подмножество конструкций ELP, которые не осаждались (L40, L80 и L160), имели различные ответы, зависящие от концентрации. Как отмечалось ранее, по мере увеличения концентрации образца Tt этого подмножества ELP снижается [5, 30, 32].Разборка этих конструкций, по-видимому, не зависела от концентрации образца и наблюдалась при 5 ° C для всех образцов. Вообще говоря, более концентрированные образцы имели тенденцию формировать конструкции большего диаметра, и эта взаимосвязь была более выражена при нагревании образцов, а не при их охлаждении. Концентрированные растворы ELP также имели тенденцию демонстрировать профили размеров при нагревании с более динамичным поведением: области, где размер плато или увеличивался с различной скоростью. Для L80 и L160 это даже привело к статистически значимому уменьшению диаметра частиц при концентрации 1.0 мг / мл. ПЭМ подтвердил измерения DLS при 0,10 мг / мл и 35 ° C, и для всех неосаждающихся конструкций наблюдались сферические, хорошо диспергированные и электронно-плотные частицы.

Таблица 1 Сводные данные о поведении ELP при сборке и разборке при нагревании и охлаждении, наблюдаемые с DLS в 1X PBS pH 7,4 с нагревом и охлаждением с шагом 5 ° C

Путем сравнения откликов L20, L40, L80 и L160 при эквивалентной массе концентрациях, было выяснено влияние длины цепи для гидрофобных коротких ELP.В соответствии с предыдущими сообщениями в литературе, температуры перехода уменьшались с увеличением длины цепи, при этом все остальные параметры оставались постоянными [5]. Один из наиболее интересных результатов заключался в том, что длина цепи может влиять на размер и стабильность частиц, образующихся в растворе, и что зависимость между длиной цепи и размером частиц является обратной. Было обнаружено, что более длинные ELP образуют частицы меньшего диаметра, когда при одинаковых массовых концентрациях между образцами имеется равное количество пентапептидных последовательностей ELP.Связь между длиной цепи ELP и диаметром частиц и ролью количества пентапептидов ELP по сравнению с количеством молекул ELP ранее никогда не исследовалась в литературе. Более длинные ELP, по-видимому, легче разбираются при охлаждении по сравнению с более короткими конструкциями, при этом ресолюбилизация L20 не наблюдается ни в одном из текущих тестируемых условий, что ограничивается более низкой чувствительностью к массе прибора DLS. Отсутствие наблюдаемой ресолюбилизации L20 здесь можно объяснить относительно высокой молярностью образцов L20 по сравнению с более длинными конструкциями ELP.Некоторый гистерезис присутствовал во время охлаждения образца с большими расхождениями между температурами сборки и разборки для более коротких ELP. Результаты стабильности разведения предполагают, что более длинные ELP имеют тенденцию сохранять свой размер лучше, чем более короткие, хотя осаждение L20 во время теста на разведение ограничивает диапазон длин, которые могут быть успешно протестированы таким образом. Не было заметной взаимосвязи между длиной цепи ELP и поверхностным зарядом, независимо от температуры образца, а также не было корреляции между длиной и поведением ELP в ответ на охлаждение.Все диаметры конструкции оставались стабильными до охлаждения до 5 ° C. Было обнаружено, что L20 обычно образует более крупные частицы и, при высоких концентрациях, структуры микронного размера, которые осаждаются из раствора. L40, L80 и L160, состоящие из идентичных, но более длинных последовательностей, стабильно образовывали частицы субмикронного диаметра без каких-либо проблем со стабильностью раствора в течение 3-х часовых измерений. Наблюдения с помощью ПЭМ согласуются с размерами, измеренными с помощью DLS, и подтверждают мнение о том, что длина цепи показывает обратную зависимость от размера частиц для лейцин-содержащих ELP.

Сравнение ответов L40 и V40 может быть использовано для экстраполяции обобщений относительно влияния гостевых аминокислотных остатков. Очевидно, что более гидрофильный V40 имел более высокий Tt, чем L40. В целом это согласуется с предсказаниями, описанными в предыдущей литературе, хотя есть некоторые вариации из-за разной длины тестируемых ELP [31]. Также наблюдалось, что V40 образует значительно более крупные частицы при нагревании по сравнению с L40. Настолько, что V40 даже упал на 0.50 и 1,0 мг / мл, в то время как L40 образовывал субмикронные частицы без наблюдаемых проблем со стабильностью во время ~ 3-часового тестирования температурного тренда. При концентрациях, при которых осадки не вызывали беспокойства, L40, как правило, при нагревании представлял собой частицы более постоянного размера. При охлаждении размеры V40 напоминали размеры, измеренные во время соответствующих тенденций размеров нагрева, в то время как частицы L40 имели относительно постоянный диаметр с резким изменением размера при ~ 5 ° C. V40 также имел большие значения гистерезиса, чем L40, когда осадки не наблюдались, с разницей до 25 ° C для V40 и только 15 ° C для L40.Не наблюдалось четкой взаимосвязи между размером частиц и гостевым аминокислотным остатком. На дзета-потенциал собранных частиц, который находится при 37 ° C, действительно влияет аминокислота-гость, причем более гидрофобный L40 демонстрирует более сильный отрицательный заряд при всех концентрациях по сравнению с V40. Анализ ПЭМ показал, что конструкция V40 была менее электронно-плотной, чем L40, что означает, что большая гидрофобность может приводить к более плотной упаковке цепей ELP [27].

Систематический анализ семейства ELP с изменяющейся гидрофобностью гостевой аминокислоты и / или длиной цепи при нескольких эквивалентных концентрациях в диапазоне температур позволил провести деконволюцию влияния этих различных параметров образца на поведение и характеристики сборки частиц.Эта информация может быть широко применена к разработке всех будущих материалов на основе ELP, а также может быть использована для расширения возможностей существующих конструкций ELP. Это новое семейство гидрофобных ELP вело себя в соответствии с ранее опубликованными наблюдениями относительно эффектов химии гостевых аминокислот, длины цепи и концентрации на температуры перехода сборки ELP. Разборка и гистерезисное поведение этого семейства ELP бросают вызов обобщению, что ELP типа VPGXG разбираются и повторно растворяются при охлаждении.Систематические эксперименты показали, что длина цепи, концентрация и гидрофобность гостевой аминокислоты могут влиять на эту необратимую сборку. Было показано, что на поверхностный заряд систем влияет состояние растворимости ELP, которое контролируется температурой, а также гидрофобностью гостевой аминокислоты. Более гидрофобное гостевое месторасположение может привести к большей плотности молекул ELP на частицу, о чем свидетельствуют плотности электронов, наблюдаемые в ПЭМ. На размер частиц ELP влияла концентрация образца, причем более высокие концентрации связаны с более крупными частицами и, в некоторых случаях, с образованием и осаждением агрегатов микронного размера.Более концентрированные образцы также показали больший динамический диаметр при нагревании, а образцы с концентрацией 1,0 мг / мл показали значительное уменьшение диаметра при нагревании. Длина цепи также играла роль: более короткие цепи приводили к более крупным частицам в целом и большей склонности к осаждению. Осаждение ELP наблюдали для двух отдельных конструкций и потенциально зависело как от гидрофобности гостевой аминокислоты, так и от длины цепи. Более гидрофобные гостевые аминокислоты могут обеспечить большую стабильность более коротких последовательностей ELP и также могут привести к менее обратимому образованию частиц и / или осаждению в зависимости от концентрации образца.Гистерезис наблюдался во всех образцах и, из-за его связи с Tt, варьировался в зависимости от концентрации ELP. Кроме того, было обнаружено, что гистерезис более выражен в целом для конструкций с более короткой длиной цепи. Было обнаружено, что эти короткие ELP не разбираются так же надежно, как их более длинные аналоги, при этом концентрация образца также влияет на измеримую ресолюбилизацию. Гистерезис редко наблюдался в других системах ELP, с конструкциями, состоящими из эластиновых экзонов 20-24 или из поперечно сшитых валинсодержащих микрогелей ELP, оба проявляющих незначительный гистерезис (<Δ10 ° C) поведение [28, 40].Выраженный гистерезис ~ 15 ° C наблюдался для полученного из VPAVG ELP при 32,1 мг / мл, при этом структурные исследования показали, что дополнительная метильная группа на третьей аминокислоте вызвала меньшее связывание воды с белком при нагревании выше его перехода. температура, которая стабилизировала частицы и препятствовала их повторному растворению [41,42,43]. Возможно, что аналогичный механизм ответственен за гистерезис, наблюдаемый для некоторых лейцин-содержащих ELP, о которых сообщается здесь, поскольку эти конструкции также содержат дополнительную метильную группу и приводят к более гидрофобной последовательности в целом, хотя для демонстрации этого потребуются дальнейшие исследования.Этот механизм также может быть ответственным за необратимую сборку, наблюдаемую здесь, поскольку выраженный гистерезис 15–20 ° C наряду с низкими температурами перехода к нагреву мог привести к температуре перехода разборки ниже точки замерзания воды и рабочей температуры прибора DLS. Новые испытания стабильности при разбавлении показали, что предварительно сформированные частицы ELP, состоящие из более длинных цепей, были более стабильными при изотермическом и изотоническом разбавлении. Химический состав гостевых аминокислот также может влиять на стабильность разведения, поскольку большее количество гидрофобных остатков демонстрирует меньшие вариации в диаметре.

Роли температуры и концентрации на поведение ELP систематически не анализировались, и результаты, представленные здесь, в дополнение к руководящим принципам проектирования, представленным выше, предполагают, что существующие конструкции ELP могут использоваться для образования частиц различного диаметра, в зависимости от условий раствора. и температурные процедуры. Это может быть находчивый и рентабельный способ расширения использования отдельных конструкций ELP без обращения к дальнейшим модификациям последовательности.

don% 27t разобрать - итальянский перевод - Linguee

дон ' t разобрать

macbook-covers.net

Non smontare

macbook-covers.net

Don t разобрать , r ep air или реорганизовать [...]

товара.

webshop.nedis.lu

n smontare, rip ara re o mo difficare [...]

il prodotto.

webshop.nedis.lu

Don t разобрать f o r винт по любой причине [...]

D, который является частью клапана регулировки давления моторного масла.

betamotor.it

N on smontare per n essu n mo ti vo la [...]

vite D, что является частью интегрированной вальволы регулятора давления олио мотора.

betamotor.it

Благодаря фильтру SC

[...] система очистки y o u don ' t hav e t o разобрать 907 907 [...]

чистит их как в обычных пылесосах.

klindex.it

Grazie al sistema di

[...] Pulizia Filri SC n on o cco rre smontare i f ilt ri p er pulirli come [...]

avviene nei normali aspiratori.

klindex.it

Sosta Aerea », показанная на футуристическом фестивале« Мостра аэрофотографии и сценографии », организованном Galleria Pesaro в 1931 году, а в следующем году в Galleria de la Reinassance в Париже под названием« Бесконечная вертикаль », имеет прямое отношение к поэтике: насколько можно судить по оставшимся фотографиям, Мунари создал атмосферу приостановки и ступора в этой работе, которая, однако, служит строгим конструктивным инструментом, для которого структурное единство, основанное на преимущественно геометрических формах, явно позволяет визуальным и функциональным идентичность единичных элементов композиции быть

[...]

выделено до такой степени, что чувствуется

[...] способность y t o разобрать a n d собрать [...]

дано целиком, то что на

[...]

год спустя будут проверены экспериментальные модели скульптуры путешествий и непрерывных структур.

munart.org

Più direttamente partecipe della poetica appare invece «Sosta aerea», esposta alla Mostra futurista di aeropittura e di sketchografia allstita dalla Galleria Pesaro nel 1931 e l'anno seguente alla Galerie de la Renaissance titolo di Parigi con ila Возможна дедурская фотография с римангоно, Мунари, реалицца в quest'opera una atmosfera di sospensione e di stupore servendosi però di Strumenti Rigorosamente costruttivi, per cui l'unità strutturale, l'unità strutturale, l'unità strutturale, l'unità strutturale, l'unità strutturale, l'unità l'unità strutturale, l'unità strutturale, l'ontementemente sumeravemeravisés Функциональные возможности отдельных элементов делла

[...]

composizione, al punto che si ha

[...] l'impressione di pote r scomporre e rico mp orre l'insieme [...]

Così приходят si verificherà pi tari

[...]

con i modelli sperimentali delle sculture da viaggio e delle strutture continue.

munart.org

Клиент гарантирует и заявляет, что ни Клиент, ни какой-либо

[...]

Авторизованный пользователь должен перепроектировать,

[...] декомпилировать , o r дизассемблировать a n y материал [...]

принадлежит ActivTrades (включая, без

[...]

, любое программное обеспечение, используемое ActivTrades для предоставления Сервиса электронной торговли), или для создания его производных продуктов.

activtrades.co.uk

22. Гарантированная клиентура и ее клиентура

[...]

qualsiasi utente autorizzato può decodificare,

[...] de-comp il are o de- Assemblare qu al siasi materiale [...]

собственника ActivTrades (включая,

[...]

может быть ограничено, любое программное обеспечение, используемое ActivTrades для платформы обслуживания электронной торговли, или для создания операционной системы, производной от системы.

activtrades.it

Если утечка происходит между буртиком и

[...] край ri m , разобрать t h e покрышка, сделать [...]

убедитесь в отсутствии порезов и проколов и повторите сборку.

campagnolo.com

Se la perdita si verifica tra il tallone ed il

[...] bordo d el cerc hio smontate il pneum at ico, [...]

проверить, что не ci siano tagli o forature e ripetete l’installazione.

campagnolo.com

Никогда не пытайтесь t t o разобрать , r ep air, или изменить [...]

станок.

rolanddg.co.uk

Non te ntare ma i d i smontare, rip ara re o mo difficare [...]

la macchina.

rolanddg.it

31.3 Кроме того, если суд решит, что работа по настоящему Соглашению или любая его часть нарушает патенты третьих лиц или запрещает их полное или частичное использование, то Подрядчик будет обязан предоставить Заказчику возможность продолжить использование работы или ее частей или изменять работу или ее части, чтобы не нарушать авторских прав - при обеспечении соблюдения договора

[...]

требования и аналогичные стандарты

[...] производительность - o r t o разобрать t h e нарушает патент [...]

запчастей и вернуть Заказчику их

[...]

цена покупки, однако Клиент имеет право на возмещение ущерба.

acciaiterni.com

31.3 Inoltre, nel caso in cui la sentenza dovesse стабильный, che la Fornitura o parti di essa costituiscano violazione di brevetti altrui e ne venisse proibito l'uso parziale o totale, l'Appaltatore avrà l'obbligo di Committere di Grado ad usare detta Fornitura o le parti di essa immuni di violazione, o di modificare, fatto salvo il rispetto dei Requisiti contrattuali ed a parità di "performance", la Fornitura o le

[...]

партия в свободном доступе

[...] violazi на e, o di smontarle e rimbo rs are alla [...]

stessa il prezzo di acquisto, comunque risarcendo i danni subiti.

acciaiterni.it

Для достижения этой цели спецификации требовали простого пакета программного обеспечения, которое было бы легко использовать «неметрологам», и измерительного устройства, которое было бы не только точным и универсальным, но и способным [...]

позволяет проводить трехмерный контроль непосредственно на машине

[...] без необходимости г т o разобрать т h e часть.

hexagonmetrology.fr

Per raggiungere questo obiettivo, le specifiche richiedevano un semplice pacchetto software semplice da usare for i non-metrologi e un dispositivo di misura che non era solo precision e универсальный,

[...]

ma che avrebbe permesso di eseguire verifiche tridimensionali direttamente sulla

[...] macch в и sen za dov er smontare il pe zzo .

hexagonmetrology.it

На M ov e , don t удалить пустой [...] Папки

не позволяют Retrospect стирать пустые папки после копирования, проверки и

[...]

удалил файлы в них.

download.retrospect.com

Non el imin ar e le cartelle [...]

vuote durante lo spostamento comporta la mancata cancellazione delle cartelle vuote dopo la copia,

[...]

la Verifica e l'eliminazione dei file al loro interno.

download.retrospect.com

За исключением случаев, прямо разрешенных в любом применимом лицензионном соглашении или прямо разрешенных действующим законодательством, отменяющих любое из следующих ограничений, вы соглашаетесь с тем, что не будете продавать, сдавать в аренду, одалживать, передавать, передавать, изменять, адаптировать, переводить,

[...]

подготовить производные работы из, декомпилировать,

[...] обратный двигатель ee r , разобрать o r a t попытка получить [...]

исходный код из Программного обеспечения.

usa.autodesk.com

Salvo nella misura in cui sia espressamente previsto da un Contratto di licenza pertinente, o Salvo ove espressamente autorizzato dalle leggi pertinenti in deroga a una o più delle restrizioni di seguito illustrate, l'utente s Vendegna, nostreggi impegna , cedere, modificare, adattare, tradurre, utilizzare на

[...]

realizzare opere derivate, decompilare,

[...] расшифровка если icare , разобрать i l Sof tw не [...]

Cercare di individualuarne il codice sorgente.

usa.autodesk.com

Легкий доступ, бескаркасный защитный кожух со съемными дверцами -

[...]

Все двери, включая переднюю и заднюю

[...] стеклянный поддон el s , разобрать i n s econds, and [...]

вместе с основанием из нержавеющей стали,

[...]

позволяет легко и быстро чистить.

dmx.ohaus.com

Facile accesso, paravento privo di telaio con finestre rimuovibili - Tutte le porte, включая

[...]

le finestre frontale e posteriore,

[...] insieme все a pias tra inferiore in acci ai o inossidabile, [...]

Возможности легкого и быстрого обжига и пулита.

dmx.ohaus.com

При отсутствии отдельного лицензионного соглашения Продавца Покупателю предоставляется неисключительная, непередаваемая лицензия на использование предоставленного Продавцом программного обеспечения или встроенного ПО только в форме объектного кода и исключительно в сочетании с

[...]

Товаров, предоставленных Продавцом, без прав на

[...] сублицензия, discl os e , разобрать , d ec ompile, reverse [...]

или иным образом модифицировать программное обеспечение или прошивку.

литература.рок ... lautomation.com

In assenza di un contratto a parte del venditore, all'acquirente viene garantita un'autorizzazione non esclusiva, без передачи всего программного обеспечения или микропрограммы продавца в единственной системе, чтобы сформировать код, полученный и уплаченный за предоставление любых товаров,

[...]

Senza il Diritto di Concedere

[...] sottolicenze , di di vul gar e, smontare, d eco mpi lare, e ffettuare [...]

операции обратного инжиниринга

[...]

или модифицировать альтернативный режим программного обеспечения или прошивки.

литература.рок ... lautomation.com

Конечный пользователь не имеет права изменять, переводить, реверсировать

[...] инженер, декомпилировать e o r разобрать t h e программное обеспечение или [...]

любая его часть или попытка иным образом

[...]

для получения исходного кода или создания на его основе производных работ.

media.olivetti.com

L’utente finale non potrà modificare,

[...]

tradurre, sottoporre a reverse engineering,

[...] deco mp ilare o дизассемблер il soft wa re o [...]

parti dello stesso o tentare diversamente

[...]

производных и производных кремов.

media.olivetti.com

Do n o t разобрать o r m odify трансивер [...]

по любой причине.

images.kenwood.eu

N на smontare o m odi fic are il ricetrasmettitore [...]

за nessun motivo.

Кенвуд.это

Do n o t разобрать , c ru sh, прокол, [...]

закоротить внешние контакты или цепи, выбросить в огонь или воду либо подвергнуть аккумуляторную батарею

[...]

до температур выше 0 ° C (140 ° F).

htcdriver.com

N на smontare, f ora re, o co rt ocircuitare [...]

i contatti esterni, gettare nel fuoco o nell’acqua, o esporre il pacco batteria

[...]

- температура выше 0 ° C (140 ° F).

htcdriver.com

Этот процесс взаимосвязи и конвергенции между всеми общедоступными архивами обеспечил бы более исчерпывающую интерпретацию данных об иностранном населении в Италии, но t w e don ' t знать, когда усилия дадут желаемый результат, особенно потому, что преследуемые цели сложны, а трудности значительны.

emnitaly.it

Этот процесс интерконнессии и конвергенции из всех архивов публичных фаворитов имеет самую большую историю присутствия страны в Италии, не является датой, которая должна быть сделана для того, чтобы найти или изменить или на или . Complessi gli obiettivi da raggiungere e notevoli le difficoltà.

emnitaly.it

Не пытайтесь t t o разобрать , a lt er или напрямую [...]

припаиваем аккумулятор.

ricoh.com

N на c erca re di smontare, al te редко o s al dare direttamente [...]

la batteria.

ricoh.com

Вы не имеете права, ни для себя, ни для аффилированных лиц, ни для каких-либо третьих лиц, а также не разрешаете каким-либо конечным клиентам (i) продавать, сублицензировать, назначать или передавать любое программное обеспечение, оборудование или любую документацию, относящуюся к Автономным услугам,

[...]

, за исключением случаев, разрешенных настоящим Соглашением;

[...] (ii) разобрать il e , разобрать , o r реконструировать [...]

или скопируйте любое оборудование, программное обеспечение или

[...]

документации, относящейся к автономным службам; (iii) удалять из любого оборудования, программного обеспечения или документации, относящейся к Автономным услугам, любой язык или обозначение, указывающее на их конфиденциальный характер или права собственности Dell или ее поставщиков на такие элементы.

dell.com

Non siete autorizzati, né per vostro conto né per conto di qualunque vostra affiliata o soggetto terzo, e non dovrete consentire a qualunque client final di (i) vendere, condere in sublicenza, cedere or trasferire qualunque document, apparecchiatura, apparecchiatura Автономный, залп на количество согласия

[...]

dai termini del presente Contratto;

[...] (ii) dec om pilar e, disassemblare o effet tu are retroanalisi [...]

di, o riprodurre qualunque

[...]

apparecchiatura, программное обеспечение или документ с автономными службами; (iii) rimuovere da qualunque apparecchiatura, программное обеспечение или документирование, созданное с помощью автономных сервисов, качественно разработанное или разработанное, что не является индексом, созданным или созданным собственными средствами Dell или dei suoi fornitori nei confronti di tali articoli.

dell.com

14. Идеи Зеленой книги о кодексах поведения вызвали наибольшее количество вопросов и вызвали самые высокие уровни o f « don » t знает », вероятно, из-за их новизны и потому, что они были лишь кратко набросаны в документе.

eur-lex.europa.eu

14. Sono le idee del Libro Verde in materia di codici di condotta ad aver suscitato il maggior number di domande ed i risposte i ndecise, вероятно, a causa della loro novità e perbo il fatto che erano abtemen документ.

eur-lex.europa.eu

В отношении нового закона об изменении закона

[...]

Закон об освобождении от уплаты налогов 1929 г.,

[...] новая поправка en t s don ' t al ter [...]

характер помощи как предоставляемые преимущества

[...]

по схеме остаются неизменными, при этом временно ограничивая количество бенефициаров теми, кто не получает определенных дивидендов, подлежащих пониженному налогообложению за пределами Люксембурга.

eur-lex.europa.eu

Per quanto riguarda la nuova legge che modifica la

[...]

normativa relativa alle «холдинг 1929 г.

[...] esenti », gl i исправить ame nt i non a lt era no la n atura di [...]

«aiuto esistente», poiché lasciano

[...]

неизменных и выгодных в соответствии с режимом, pur limitando temporaneamente il numero di Beneficiari a coloro, che percepiscono Dividndi soggetti a small imposizione fiscale fuori dal Lussemburgo, in misura inferiore ad una certa entity.

eur-lex.europa.eu

Ленты накладываются на целевые части тела с использованием различных методов для следующих целей: для уменьшения боли (напряженные или поврежденные мышцы), для расслабления или стимуляции мышц (в случае мышечной боли, хронической боли, например, в шее и спине, травмах ), износ суставов (артрит), искусственные суставы (протезы), вывихи, переломы, колено прыгуна, колено бегуна, трудности с пальцами ног (вальгусная деформация большого пальца стопы),

[...]

Растяжение связок голеностопного сустава, лечение рубцов (из них

[...] стать мягче a n d don t нарушить движение [...]

столько), хронические инфекции (например,

[...]

локоть гольфиста, теннисный локоть), коррекция неправильной осанки, сколиоза, плоскостопия, надколенника и т. Д., А также лимфатическая техника для уменьшения отеков, предотвращения гематомы, улучшения кровообращения и лимфообращения и увеличения пространства между кожей и мышцами.

сава-отелей-курортов.com

Le bende adesive si Applicano sulle zone target, utilizzando tecniche different il cui obiettivo è: diminuire il dolore (muscoli tesi e lesionati), rilassare o optimolare il muscolo (nei dolori muscolari - dolori cronici al collo e alla schiena), caso di articolazioni consumate (artrosi), articolazioni Искусственные (эндопротезы), lussazioni, fratture, ginocchio del corridore e del saltatore, alluce valgo (hallux valgus), caviglie slogate, per il

[...]

trattamento di cicatrici (le cicatrici diventano

) [...] più e la stich e e danno men o fas ti dio durante [...]

i movimenti), infiammazioni croniche

[...]

(примеры: gomito del golfista, gomito del tennista), per la correzione della postura, in caso di scoliosi, piedi piatti, rotula… La tecnica linfatica è impiegata per diminuire il gonfiore, gli ematomi, per miglioraf linea per aumentare lo spazio tra l'epidermide e il muscolo.

sava-hotels-resorts.com

Не роняйте и не пытайтесь t t o разобрать t h e product.

загрузкиs.industrial.omron.eu

Non far cadere o cer care d i разобрать i l prod otto .

загрузки.industrial.omron.eu

Датой покупки является: 1) дата, указанная в наших записях, если вы приобрели Продукт непосредственно у нас, 2) дата, указанная в гарантии

[...] Регистрационная карточка

, которую просим отправить на номер

[...] us, или 3) если y o u don t вернуть гарантию [...]

регистрационная карта, 120 дней после

[...]

дата, когда Продукт был продан дилеру, у которого вы купили Продукт, как указано в наших записях.

welchallyn.com

Сбор данных - это: 1) данные, специфичные для архива, связанные с продуктом, и статистическое получение прямого сбора, 2) специфические данные для регистрации

. [...]

garanzia che chiediamo all'utente di inviarci o

[...] 3) se l 'uten te non re stitu is ce la [...]

scheda di registrazione della garanzia, 120

[...]

года, чтобы получить данные о поставках продуктов, которые были получены от продажи продуктов, пришли в архив документов.

welchallyn.com

Не закорачивайте аккумулятор

[...] клеммы или ча rg e , разобрать , d ef orm под давлением, [...]

или сжечь аккумулятор.

загрузкиs.industrial.omron.eu

Non Cortocircuitare i terminali della

[...] batteria , né c ari car e, smontare, d efo rma re so tt o pressione [...]

o bruciare la batteria.

загрузкиs.industrial.omron.eu

Вы соглашаетесь не воспроизводить и не копировать иным образом,

[...] изменить, разобрать il e , разобрать , r ev erse инженер [...]

или создавать производные работы любой части

[...]

Продукта, и не может передавать или распространять его в любой форме и для любых целей, кроме случаев, предусмотренных обязательными законами.

images.kenwood.eu

L'utente acetta di non riprodurre, copiare,

[...] modificare, deco mp ilare , disassemblare, decod if icare [...]

né di creare altro materiale basato sul

[...]

prodotto e di non trasferire o distribuire il prodotto con alcun mezzo e per qualsiasi scopo, salvo nella misura in cuiò sia agreement dalla legge.

images.kenwood.eu

Техническое обслуживание и ремонт архитектурного чугуна

КРАТКИЕ СВЕДЕНИЯ

Деталь из чугуна, нуждающаяся в очистке и покраске.Фото: любезно предоставлено организацией New York Landmarks Conservancy.

Джон Г. Уэйт, AIA, Исторический обзор Марго Гейл

Сохранение чугунных архитектурных элементов, в том числе целых фасадов, в последние годы привлекает все большее внимание, поскольку коммерческие районы признаны за их историческое значение и оживлены. В данном справочнике представлены общие рекомендации по подходам к сохранению и реставрации исторического чугуна.

Это фрагмент полихромного чугунного фасада в Петалуме, Калифорния, 1886 год (О'Коннелл и Льюис, Architectural Iron Works, Сан-Франциско). Фото: Дон Мичем.

Чугун сыграл выдающуюся роль в промышленном развитии нашей страны в XIX веке. Чугунное оборудование заполнило американские фабрики и сделало возможным рост железнодорожных перевозок. Чугун широко использовался в наших городах для систем водоснабжения и уличного освещения.Как архитектурный металл, он сделал возможными новые смелые достижения в архитектурном дизайне и строительных технологиях, обеспечивая при этом богатство орнамента.

Этот древний металл, железный сплав с высоким содержанием углерода, был слишком дорогим, чтобы производить его в больших количествах до середины 18 века, когда новая технология печей в Англии сделала его более экономичным для использования в строительстве. Известный своей большой прочностью на сжатие, чугун в форме тонких негорючих столбов был использован в 1790-х годах на английских хлопчатобумажных фабриках, где пожары были обычным явлением.В Соединенных Штатах подобные тонкие колонны впервые были использованы в 1820-х годах в театрах и церквях для поддержки балконов.

К середине 1820-х годов в Нью-Йорке рекламировались одноэтажные железные витрины. Дэниел Бэджер, бостонский литейщик, который позже переехал в Нью-Йорк, утверждал, что в 1842 году он изготовил и установил первые железные ставни для железных витрин, которые обеспечивали защиту от краж и внешнего пожара. В грядущие годы и в 20-е годы практичная чугунная витрина станет популярной в городах от побережья до побережья.Это не только помогло выдержать нагрузку на верхние этажи, но и обеспечило большие витрины для демонстрации товаров и позволило естественному свету заливать интерьеры магазинов. Что наиболее важно, чугунные фасады стоили недорого и требовали небольшого труда на месте.

Неутомимым сторонником использования чугуна в зданиях был изобретательный житель Нью-Йорка, архитектор-самоучка Джеймс Богардус. Начиная с 1840 года, Bogardus превозносил свои достоинства: прочность, структурную стабильность, долговечность, относительную легкость, способность принимать практически любую форму и, прежде всего, огнестойкие качества, столь востребованные в эпоху серьезных городских пожаров.Он также подчеркнул, что процессы литья под давлением, с помощью которых из чугуна изготавливали элементы здания, полностью совместимы с новыми концепциями заводского изготовления, массового производства и использования идентичных взаимозаменяемых деталей.

В 1849 году Богардус создал нечто уникальное по-американски, построив первое здание с самонесущими многоэтажными железными стенами. Известный как Edgar Laing Stores, этот угловой ряд небольших четырехэтажных складов, которые выглядели как одно здание, был построен в нижнем Манхэттене всего за два месяца.Его задняя, ​​боковые и внутренние несущие стены были из кирпича; Каркас перекрытия состоял из деревянных балок и балок. Одна из чугунных стен была несущей, поддерживая деревянные балки перекрытия. Новшеством стали два уличных фасада из самонесущего чугуна, состоящие из нескольких частей - колонн, панелей, подоконников и пластин в дорическом стиле, а также некоторых накладных орнаментов. Каждый компонент фасадов был отлит индивидуально в песчаной форме в литейном цехе, обработан до гладкости, испытан на соответствие и, наконец, доставлен на запряженных лошадьми телегах на строительную площадку.Там их подняли на место, затем скрепили болтами и прикрепили к обычной конструкции из дерева и кирпича с помощью железных шипов и ремней.

Гробница семьи Слаттер в Мобиле, штат Алабама, состоящая из чугунного мавзолея и ограды, демонстрирует широкий спектр использования этого материала в XIX веке. Фото: Джек Э. Баучер, Коллекция HABS.

Второе возведенное здание с железным фасадом стало большим шагом вперед по сравнению с магазинами Laing Stores по размеру и сложности.Пятиэтажное здание газеты Sun в Балтиморе, начатое в апреле 1850 года Богардусом при участии архитектора Роберта Хэтфилда, было как с чугунным фасадом, так и с чугунным каркасом. В Филадельфии в 1850 году было начато строительство нескольких железных фасадов: здание Inquirer Building, Brock Stores и здание Penn Mutuai (все три были снесены). Отель «Св. Чарльз» 1851 года на Третьей улице, 60 с. Обрамление с чугунными колоннами, балками и фермами из кованого железа было широко видно в Нью-Йоркском Хрустальном дворце 1853 года.

Во второй половине XIX века Соединенные Штаты находились в эпоху огромного экономического и территориального роста. Использование железа в коммерческих и общественных зданиях быстро распространилось, и с 1849 года до начала века в городах по всей стране были возведены сотни зданий с железными фасадами. Выдающиеся примеры железных фасадов существуют в Балтиморе, Галвестоне, Луисвилле, Милуоки, Новом Орлеане, Филадельфии, Ричмонде, Рочестере (Нью-Йорк) и особенно в Нью-Йорке, где в одном только историческом районе Сохо Чугун есть 139 зданий с железными фасадами.К сожалению, большая часть железных фасадов по всей стране была снесена в ходе проектов реконструкции центра города, особенно после Второй мировой войны.

В дополнение к этому внешнему виду, многие общественные здания демонстрируют великолепные открытые внутренние изделия из железа, одновременно декоративные и структурные. Замечательные примеры сохранились по всей стране, в том числе Библиотека Пибоди в Балтиморе; Старое административное здание в Вашингтоне, округ Колумбия; здание Брэдбери в Лос-Анджелесе; бывший Капитолий штата Луизиана; бывшая ратуша в Ричмонде; Твидовое здание суда в Нью-Йорке; и столицы штатов Калифорния, Джорджия, Мичиган, Теннесси и Техас.И, конечно же, железо образует огромный купол Капитолия Соединенных Штатов, построенный во время Гражданской войны. Декоративный чугун также был популярным материалом в пейзаже: заборы, фонтаны со скульптурами, фонарные столбы, мебель, урны, беседки, ворота и ограды для кладбищенских участков. При таком широком спросе многие американские литейные заводы, которые занимались литьем деталей машин, банковских сейфов, железных труб или кухонных плит, добавили отделы архитектурного железа. Это потребовало от создателей моделей со сложными конструкторскими возможностями, а также со знанием усадки металла и других технических аспектов литья.Крупные компании включали Hayward Bartlett Co. в Балтиморе; Джеймс Л. Джексон, Cornell Brothers, J. L. Mott и Daniel D. Badger's Architectural Iron Works на Манхэттене; Hecla Ironworks в Бруклине; Вуд и Перо из Филадельфии; Лидс и Ко, Литейный завод Шекспира и Мильтенбергер в Новом Орлеане; Братья Уинслоу в Чикаго; и Джеймс МакКинни в Олбани, штат Нью-Йорк.

Чугун был предпочтительным металлом во второй половине XIX века. Это был не только огнестойкий материал в период крупных городских пожаров, но и большие фасады из чугуна можно было изготавливать с меньшими затратами, чем сопоставимые каменные фасады, а железные здания можно было возводить быстро и эффективно.Самый большой стоящий образец обрамления с чугунными колоннами и коваными балками - шестнадцатиэтажное здание Манхэттен в Чикаго, самый высокий небоскреб в мире, построенный в 1890 году Уильямом ЛеБароном Дженни. К этому времени, однако, сталь стала доступна на национальном уровне, стала более универсальной в структурном отношении и конкурентоспособной по цене. Его более широкое использование - одна из причин, почему строительство из чугуна уменьшилось на рубеже веков после того, как было так активно принято всего лишь пятьдесят лет назад. Тем не менее, чугун продолжал использоваться в значительных количествах для многих других структурных и декоративных целей даже в 20 веке: витрины; шатры; пролеты и большие оконные рамы для каркасных и кирпичных домов; уличная и ландшафтная обстановка, в том числе киоски метро.

XIX век оставил нам богатое наследие новых методов строительства, особенно строительства в совершенно новом масштабе, которое стало возможным благодаря использованию металлов. Первым из них был чугун, хотя период его интенсивного использования длился всего полвека. Теперь сохранившееся наследие чугунной архитектуры, большая часть которой продолжает находиться под угрозой, заслуживает новой оценки и соответствующих мер по сохранению и реставрации.

Что такое чугун?

Чугун - это сплав с высоким содержанием углерода (не менее 1.7% и обычно от 3,0 до 3,7%), что делает его более устойчивым к коррозии, чем кованое железо или сталь. Помимо углерода, чугун содержит различные количества кремния, серы, марганца и фосфора.

В расплавленном виде чугун легко разливается в формы, что позволяет создавать практически неограниченные декоративные и структурные формы. В отличие от кованого железа и стали, чугун слишком твердый и хрупкий, чтобы его можно было придавать молотком, прокаткой или прессованием. Однако, поскольку он более жесткий и более устойчивый к короблению, чем другие виды железа, он может выдерживать большие сжимающие нагрузки.Чугун относительно слаб при растяжении, однако не выдерживает растягивающей нагрузки без предварительного предупреждения.

Подступенки на этих чугунных ступенях украшены декоративным узором. Фото: файлы NPS.

Характеристики различных типов чугуна определяются их составом и методами плавки, литья и термообработки. Металлургические компоненты чугуна, влияющие на его хрупкость, ударную вязкость и прочность, включают феррит, цементит, перлит и графитовый углерод.Чугун с чешуйками углерода называется серым чугуном. «Серый излом», связанный с чугуном, вероятно, получил свое название из-за серого зернистого вида его сломанной кромки, вызванного наличием чешуек свободного графита, которые объясняют хрупкость чугуна. Эта хрупкость является важной отличительной характеристикой чугуна и мягкой стали.

По сравнению с чугуном кованое железо относительно мягкое, податливое, прочное, устойчивое к усталости и легко обрабатывается ковкой, гибкой и волочением.Это почти чистое железо с содержанием углерода менее 1% (обычно от 0,02 до 0,03%). Шлак варьируется от 1% до 4% и существует в чисто физической ассоциации, то есть не легирован. Это придает кованому железу характерную слоистую (слоистую) или волокнистую структуру.

Кованое железо можно отличить от чугуна несколькими способами. Кованые элементы обычно проще по форме и менее однородны по внешнему виду, чем чугунные элементы, и содержат следы прокатки или ручной работы.Чугун часто содержит линии кристаллизатора, оклады, дефекты отливки и отверстия для воздуха. Чугунные элементы очень однородны по внешнему виду и часто используются повторно. Чугунные элементы часто скрепляются болтами или винтами, тогда как детали из кованого железа склепываются или свариваются (термическая сварка) вместе.

Низкоуглеродистая сталь теперь используется для изготовления новых металлических изделий ручной работы и ремонта старых кованых элементов. Низкоуглеродистая сталь - это сплав железа с содержанием углерода не более 2%, который является прочным, но легко обрабатывается в виде блоков или слитков.Низкоуглеродистая сталь не так устойчива к коррозии, как кованое или чугунное.

Многие методы технического обслуживания и ремонта, описанные в Кратком описании, особенно относящиеся к очистке и покраске, потенциально опасны и должны выполняться только опытными и квалифицированными рабочими с использованием средств защиты, подходящих для данной задачи. Во всех случаях ремонта, кроме самого простого, лучше всего привлекать архитектора по консервации или реставратора зданий, чтобы он оценил состояние утюга и подготовил контрактную документацию на его обработку.

Как и любому проекту консервации, работе должен предшествовать обзор местных строительных норм и правил и норм по охране окружающей среды, чтобы определить, существуют ли какие-либо конфликты с предлагаемыми обработками. В случае возникновения противоречий, особенно в отношении методов очистки или лакокрасочных материалов, необходимо обсудить исключения или отклонения, либо принять альтернативные методы обработки или материалы.

Общие проблемы, с которыми сегодня сталкиваются чугунные конструкции, включают сильно заржавевшие или отсутствующие элементы, ударные повреждения, структурные разрушения, сломанные соединения, повреждение соединений и потерю анкеровки в кладке.

Окисление или ржавление происходит быстро, когда чугун подвергается воздействию влаги и воздуха. Минимальная относительная влажность, необходимая для стимулирования ржавления, составляет 65%, но этот показатель может быть ниже в присутствии коррозионных агентов, таких как морская вода, соленый воздух, кислоты, кислотные осадки, почвы и некоторые соединения серы, присутствующие в атмосфере, которые действуют как катализаторы в процессе окисления. Ржавчина ускоряется в тех случаях, когда архитектурные детали имеют карманы или щели для улавливания и удержания жидких коррозионных агентов.Кроме того, как только образуется пленка ржавчины, ее пористая поверхность действует как резервуар для жидкости, что, в свою очередь, вызывает дальнейшую коррозию. Если этот процесс не остановить, он будет продолжаться до тех пор, пока железо не будет полностью поглощено коррозией, не оставив ничего, кроме ржавчины.

Структурная трещина, зазоры в стыках между компонентами и большое отверстие, в котором отсутствует часть кронштейна консоли, - вот проблемы, очевидные в этом чугунном узле. Фотография: Ford, Powell & Carson.

Гальваническая коррозия - это электрохимическое действие, которое возникает, когда два разнородных металла взаимодействуют вместе в присутствии электролита, такого как вода, содержащая соли или ионы водорода.Тяжесть гальванической коррозии зависит от разницы потенциалов между двумя металлами, их относительной площади поверхности и времени. Если более благородный металл (более высокое положение в электрохимическом ряду) намного больше по площади, чем базовый или менее благородный металл, износ основного металла будет более быстрым и серьезным. Если более благородный металл намного меньше по площади, чем основной металл, ухудшение основного металла будет гораздо менее значительным. Чугун подвергается атакам и коррозии, когда он находится рядом с более благородными металлами, такими как свинец или медь.

Графитизация чугуна, менее распространенная проблема, происходит в присутствии кислотных осадков или морской воды. По мере коррозии железа остатки коррозии пористого графита (мягкого углерода) пропитываются нерастворимыми продуктами коррозии. В результате чугунный элемент сохраняет свой внешний вид и форму, но имеет более слабую конструкцию. Графитизация происходит там, где чугун долгое время оставался неокрашенным, или когда герметичные швы не выдерживали, а кислотная дождевая вода разъедала части с тыльной стороны.Проверка и идентификация графитизации осуществляется путем соскабливания ножом по поверхности, чтобы выявить крошку железа под ней. Когда происходит обширная графитизация, обычно единственным выходом является замена поврежденного элемента.

Отливки также могут иметь трещины или дефекты в результате недостатков исходного производственного процесса, таких как воздушные дыры, трещины и золы, или холодное закрытие (вызванное «замерзанием» поверхности расплавленного чугуна во время литья из-за неправильного или прерывистая заливка).Хрупкость - еще одна проблема, которая иногда встречается в старых чугунных элементах. Это может быть результатом чрезмерного содержания фосфора в чугуне или охлаждения во время процесса литья.

Прежде чем устанавливать надлежащую обработку чугунных элементов в здании или сооружении, необходимо оценить историческое и архитектурное значение и изменения собственности, а также ее нынешнее состояние. Если работа включает в себя нечто большее, чем обычное обслуживание, необходимо привлечь квалифицированного специалиста для разработки отчета об исторической структуре, в котором излагается историческое развитие объекта, документируется его существующее состояние, определяются проблемы ремонта и предоставляется подробный список рекомендуемых рабочих элементов. с приоритетами.С помощью этого процесса можно оценить значение и состояние чугуна и предложить соответствующие методы обработки. Для ограждений или отдельных компонентов здания, таких как фасад, следует придерживаться аналогичной, но менее обширной аналитической процедуры.

Прежде чем приступить к работе, необходимо хорошо понять природу и масштабы проблем с чугунными элементами. Если проблемы незначительны, например, коррозия поверхности, отслаивание краски или неудачная герметизация, владелец собственности может провести ремонт, работая напрямую со знающим подрядчиком.Если есть серьезные проблемы или серьезные повреждения чугуна, лучше всего заручиться услугами архитектора или консерватора, который специализируется на консервации исторических зданий. В зависимости от объема работ контрактные документы могут варьироваться от общих спецификаций до полных рабочих чертежей с аннотированными фотографиями и спецификациями.

Чтобы тщательно оценить состояние металлоконструкций, необходимо провести тщательный физический осмотр каждой секции железной конструкции, включая болты, крепежные детали и кронштейны.Обычно строительные леса или механический подъемник используются для тщательного осмотра чугунного фасада или других крупных сооружений. Удаление отдельных участков краски может быть единственным способом определения точного состояния соединений, металлических креплений, а также пересечений или щелей, в которых может скапливаться вода.

Исследование несущих элементов, таких как колонны и балки, позволит установить, работают ли эти компоненты так, как они были изначально спроектированы, или же картины напряжений были перераспределены.Области, которые подвергаются чрезмерной нагрузке, должны быть обследованы, чтобы установить, были ли они повреждены или были перемещены. Очевидно, что повреждение основного элемента конструкции необходимо идентифицировать и оценить; внимание не следует уделять только декоративным особенностям.

Состояние здания, строения или объекта; диагностика его проблем; и рекомендации по его ремонту должны быть записаны в виде чертежей, фотографий и письменных описаний, чтобы помочь тем, кто будет нести ответственность за его сохранение в будущем.

Независимо от того, требуются ли мелкие или серьезные работы, сохранение и ремонт исторических металлических конструкций является рекомендуемым подходом к консервации вместо замены. По возможности, все ремонтные и реставрационные работы должны быть обратимыми, чтобы модификации или обработки, которые могут оказаться вредными для долговременной сохранности утюга, можно было исправить с наименьшим повреждением исторических металлических конструкций.

Если речь идет о химическом удалении краски, важно тщательно спланировать последовательность работ и инспектировать архитектор или реставратор для обеспечения строгого соблюдения контрактных документов, чтобы свести к минимуму риск возникновения проблем.Фото: Раймонд М. Пепи, Building Conservation Associates.

В случае серьезного разрушения защитного покрытия и / или при сильной коррозии ржавчину и большую часть или всю краску необходимо удалить, чтобы подготовить поверхности для новых защитных покрытий. Доступные методы варьируются от физических процессов, таких как чистка проволочной щеткой и пескоструйная очистка, до очистки пламенем и химических методов. Выбор подходящей техники зависит от степени разрушения краски и коррозии, степени детализации поверхности и типа наносимого нового защитного покрытия.Местные законы по охране окружающей среды могут ограничивать выбор методов очистки и удаления краски, а также утилизации материалов.

Многие из этих методов потенциально опасны и должны выполняться только опытными и квалифицированными рабочими, использующими надлежащие средства защиты глаз, защитную одежду и другие условия безопасности на рабочем месте. Перед выбором процесса следует подготовить испытательные панели на очищаемом утюге, чтобы определить относительную эффективность различных методов.В процессе очистки, скорее всего, будут обнаружены дополнительные дефекты покрытия, трещины и коррозия, которые раньше не были очевидны.

Существует ряд методов, которые можно использовать для удаления краски и коррозии с чугуна: Ручное соскабливание, скалывание и чистка проволочной щеткой - наиболее распространенные и наименее дорогие методы удаления краски и легкой ржавчины с чугуна. Однако они не удаляют всю коррозию или краску так же эффективно, как другие методы.Опытные мастера должны выполнить работы, чтобы снизить вероятность того, что поверхности могут быть поцарапаны или повреждены хрупкие детали.

Пескоструйная очистка под низким давлением (обычно называемая абразивной очисткой или пескоструйной очисткой) часто является наиболее эффективным методом удаления чрезмерных отложений краски или значительной коррозии. Пескоструйная очистка является быстрой, тщательной и экономичной, и она позволяет очистить утюг на месте. Заполнитель может быть железным шлаком или песком; Медный шлак не следует использовать для обработки железа из-за возможности электролитических реакций.Некоторая резкость в совокупности выгодна тем, что придает металлической поверхности «зуб», что приводит к лучшей адгезии краски. Использование очень острого или твердого заполнителя и / или чрезмерно высокого давления (более 100 фунтов на квадратный дюйм) не требуется, и его следует избегать. Смежные материалы, такие как кирпич, камень, дерево и стекло, должны быть защищены от повреждений. Некоторые местные строительные нормы и правила и органы охраны окружающей среды запрещают или ограничивают сухую пескоструйную очистку из-за проблемы с переносом пыли по воздуху.

Влажная пескоструйная очистка более проблематична, чем сухая пескоструйная очистка чугуна, потому что вода мгновенно вызывает ржавчину поверхности и проникает глубоко в открытые швы. Поэтому, как правило, это не считается эффективным методом. Влажная пескоструйная очистка снижает количество переносимой по воздуху пыли при удалении сильных отложений краски, но удаление сточных вод, содержащих свинец или другие токсичные вещества, ограничивается экологическими нормативами в большинстве регионов.

Пламенная очистка металла от ржавчины с помощью специальной кислородно-ацетиленовой горелки с многопламенной головкой требует наличия специальных квалифицированных операторов, а также является дорогостоящей и потенциально опасной.Тем не менее, он может быть очень эффективным на железе со слабой и средней степенью коррозии. Обработка поверхности проволочной щеткой обычно необходима после очистки пламенем.

Химическое удаление ржавчины путем травления кислотой - это эффективный метод удаления ржавчины с металлических элементов, который можно легко удалить и отправить в цех для погружения в чаны с разбавленной фосфорной или серной кислотой. Этот метод не повреждает поверхность утюга при условии, что утюг нейтрализуется до уровня pH 7 после очистки.К другим химическим средствам удаления ржавчины относятся продукты на основе цитрата аммония, щавелевой кислоты или соляной кислоты.

Химическое удаление краски с использованием щелочных соединений, таких как хлористый метилен или гидроксид калия, может быть эффективной альтернативой абразивно-струйной очистке для удаления сильных отложений краски. Эти агенты часто доступны в виде гелей или паст замедленного действия. Поскольку они могут вызвать ожоги, необходимо надевать защитную одежду и очки. Химические вещества, нанесенные на негерметичный фасад, могут просочиться через щели и отверстия, что приведет к повреждению внутренней отделки здания и коррозии тыльной стороны железных компонентов.Остаточные следы чистящих составов на поверхности утюга, если их не нейтрализовать тщательно, могут в будущем привести к потере лакокрасочного покрытия. По этим причинам применение щелочных смывок для краски и кислотных очистителей в полевых условиях обычно не рекомендуется.

После любого из этих методов очистки и удаления краски только что очищенное железо следует немедленно покрасить антикоррозийной грунтовкой, прежде чем начнется образование новой ржавчины. Этот период времени может варьироваться от минут до часов в зависимости от условий окружающей среды.Если грунтование откладывается, любую образовавшуюся ржавчину на поверхности следует удалить чистой проволочной щеткой непосредственно перед грунтованием, потому что ржавчина препятствует хорошему сцеплению грунтовки с чугунной поверхностью и не позволяет грунтовке полностью заполнить поры металла. .

Самый распространенный и эффективный способ сохранить архитектурный чугун - сохранить защитное лакокрасочное покрытие на металле. Краска также может быть декоративной, если это исторически целесообразно.

Перед удалением краски с исторического архитектурного чугуна рекомендуется микроскопический анализ образцов исторической последовательности окраски. Этот процесс, называемый анализом серии красок, должен выполняться опытным реставратором архитектуры. Анализ позволит определить исторические цвета краски и другие условия, например, была ли краска матовой или глянцевой, был ли добавлен песок в краску для текстуры и было ли здание полихромным или мраморным.Традиционно многие чугунные элементы окрашивались под другие материалы, например, известняк или песчаник. Иногда элементы были искусственно окрашены, так что железо выглядело как мрамор с прожилками.

В этом здании использовалось сильное щелочное средство для удаления краски, которое, по всей видимости, не было должным образом промыто или нейтрализовано. Через несколько месяцев вновь нанесенная краска начала отслаиваться, и на утюге появились полосы ржавчины. Фото: Ким Лавджой.

Для приклеивания новых защитных покрытий необходима тщательная подготовка поверхности.С утюга необходимо удалить всю отслаивающуюся, отслаивающуюся и поврежденную краску, а также грязь и грязь, водорастворимые соли, масло и жир. На поверхности утюга может остаться старая, плотно приставшая краска, если она совместима с предлагаемыми покрытиями. Сохранение старой краски также сохраняет историческую последовательность окраски здания и позволяет избежать опасностей, связанных с удалением и утилизацией старой свинцовой краски.

Рекомендуется проконсультироваться со спецификациями производителя или у технических представителей, чтобы убедиться в совместимости между условиями поверхности, грунтовкой и финишным слоем, а также методами нанесения.

Чтобы краска прилипла должным образом, металлические поверхности перед покраской должны быть абсолютно сухими. Если выбранная краска не предназначена специально для исключительных условий, окраску не следует проводить, если ожидается, что температура упадет ниже 50 градусов по Фаренгейту в течение 24 часов или когда относительная влажность превышает 80 процентов; Краску нельзя наносить, когда в воздухе туман, туман или дождь. Плохо подготовленные поверхности приведут к выходу из строя даже самых лучших красок, в то время как краски даже по умеренной цене могут быть эффективными, если их наносить на хорошо подготовленные поверхности.

Подбор красок и покрытий

Типы красок, доступных для защиты железа, резко изменились за последние годы из-за федеральных, государственных и местных нормативных актов, запрещающих или ограничивающих производство и использование продуктов, содержащих токсичные вещества, такие как хромат свинца и цинка, а также летучие органические соединения и вещества (ЛОС или ЛОС). Доступность типов красок варьируется от штата к штату, и производители продолжают изменять составы продуктов в соответствии с новыми правилами.

Традиционно красный свинец использовался в качестве антикоррозионного пигмента для грунтовки железа. Красный свинец имеет сильное сродство к льняному маслу и образует свинцовое мыло, которое становится прочной и эластичной пленкой, непроницаемой для воды, которая очень эффективна в качестве защитного покрытия для железа. По крайней мере, два медленно сохнущих финишных слоя на основе льняного масла традиционно использовались поверх красной свинцовой грунтовки, и эта комбинация эффективна на старых или частично изношенных поверхностях. Сегодня в большинстве регионов использование красок, содержащих свинец, запрещено, за исключением некоторых коммерческих и промышленных целей.

Сегодня алкидные краски очень широко используются и в значительной степени вытеснили содержащие свинец краски на основе льняного масла. Они сохнут быстрее масляной краски, имеют более тонкую пленку, но не так долго защищают металл. Алкидные антикоррозионные грунтовки содержат пигменты, такие как оксид железа, оксид цинка и фосфат цинка. Эти грунтовки подходят для ранее окрашенных поверхностей, очищенных ручным инструментом. Необходимо нанести не менее двух слоев грунтовки, а затем финишных слоев алкидной эмали.

Латексные и другие краски на водной основе не рекомендуется использовать в качестве грунтовки для чугуна, поскольку они вызывают немедленное окисление при нанесении на чистый металл.Краски из винил-акрилового латекса или акрилового латекса могут использоваться в качестве финишных покрытий поверх алкидных антикоррозионных грунтовок, но если грунтовочные покрытия нанесены неидеально или повреждены, латексная краска вызовет окисление железа. Поэтому рекомендуется использовать финишные алкидные покрытия.

На чугун можно наносить высокоэффективные покрытия, такие как грунтовки с высоким содержанием цинка, содержащие цинковую пыль, и современные эпоксидные покрытия, чтобы обеспечить более длительную защиту. Для этих покрытий обычно требуются очень чистые поверхности и особые условия нанесения, которые могут быть трудно достижимыми в полевых условиях на больших зданиях.Эти покрытия наиболее эффективно используются на элементах, которые были вывезены в магазин или недавно отлиты.

Одна из особенно эффективных систем заключалась в первом покрытии коммерчески очищенного пескоструйной очисткой железа грунтовкой с высоким содержанием цинка, затем нанесением эпоксидного основного покрытия и двумя финишными слоями уретана. Некоторые эпоксидные покрытия можно использовать в качестве грунтовки на чистом металле или наносить на ранее окрашенные поверхности в хорошем состоянии. Эпоксидные смолы особенно подвержены разложению под воздействием ультрафиолетового излучения и должны быть защищены более стойкими финишными покрытиями.Были проблемы с эпоксидными красками, которые наносились на железо в заводских условиях, где покрытия были порезаны перед установкой. Подкрашивание эпоксидных красок в полевых условиях очень сложно, если вообще возможно. Это вызывает беспокойство, поскольку железо, обнаженное дефектами основного покрытия, с большей вероятностью ржавеет, и потребуется более частое обслуживание.

Ключевым фактором, который следует учитывать при выборе покрытий, является разнообразие условий существующих и новых материалов в конкретном здании или сооружении.Для поверхностей с уже нанесенной краской может потребоваться одна грунтовка; другой - для недавно отлитого, подвергнутого химической очистке или пескоструйной очистки чугуна; и третий для окладов или материалов-заменителей; все три сопровождаются совместимыми финишными покрытиями.

Способы применения

Кисть - это традиционный и наиболее эффективный метод нанесения краски на чугун. Он обеспечивает хороший контакт краски с железом, а также эффективное заполнение ямок, трещин и других дефектов на металле.Использование краскопультов для нанесения краски экономично, но не всегда обеспечивает адекватное и равномерное покрытие. Для достижения наилучших результатов безвоздушные распылители должны использоваться опытными операторами. Чтобы полностью закрыть мелкие детали и добраться до углублений, может быть эффективным распыление грунтовочного слоя, используемое в сочетании с нанесением кистью.

Валики никогда не следует использовать для нанесения грунтовочного покрытия на металл, они эффективны для последующих слоев только на больших плоских участках. Внешний вид отделочных покрытий, наносимых распылением или валиком, не является исторически приемлемым, и его следует избегать на таких участках, как витрины магазинов, которые находятся под рукой.

При ремонте перил лестницы деревянную прокладку внутри перил потолка залили бетоном. Вода проникала через перила и вступала в реакцию с бетоном, ускоряя коррозию железа. Фотография: Джон Г. Уэйт.

Большинство архитектурных чугунов состоит из множества небольших отливок, собранных с помощью болтов или винтов. Стыки между частями были заделаны, чтобы вода не просачивалась внутрь и не вызывала ржавчину изнутри. Исторически швы часто заделывались белой свинцовой пастой и иногда подкладывались хлопковой или пеньковой веревкой; даже головки болтов и винтов были заделаны, чтобы защитить их от элементов и скрыть их от взгляда.Хотя иногда бывает, что старая конопатка находится в хорошем состоянии, она обычно крошится от выветривания, растрескивается в результате оседания конструкции или разрушается при механической очистке. Очень важно заменить поврежденную герметизацию, чтобы предотвратить проникновение воды. Для хорошей адгезии и рабочих характеристик предпочтительнее полиуретановый герметик архитектурного класса или традиционная белая свинцовая паста.

Вода, которая проникает в полые части чугунного архитектурного элемента, вызывает ржавчину, которая может стекать по другим архитектурным элементам.Вода может замерзнуть, что приведет к растрескиванию чугуна льдом. Трещины снижают прочность всего литейного узла и обеспечивают еще одну точку входа воды. Таким образом, важно, чтобы трещины были водонепроницаемыми, используя герметики или наполнители, в зависимости от ширины трещины.

Колонны из стекловолокна и алюминиевые капители были установлены, чтобы воспроизвести элементы орнамента на восточном фасаде театра Нью-Маркет в Портленде, штат Орегон. Фото: Уильям Дж. Хокинс, III.

Наполнители, содержащие частицы железа в связующем на основе эпоксидной смолы, могут использоваться для заделки поверхностных, неструктурных трещин и мелких дефектов в чугуне. Скорость теплового расширения одной только эпоксидной смолы отличается от скорости расширения железа, что требует добавления частиц железа для обеспечения совместимости и контроля усадки. Хотя отремонтированный кусок металла не имеет такой же прочности, как однородный кусок железа, отремонтированные эпоксидной смолой элементы все же обладают некоторой прочностью. Шпатлевки на основе полиэстера, такие как те, что используются для кузовов автомобилей, также являются приемлемыми заполнителями для небольших отверстий.

В редких случаях крупные трещины можно отремонтировать пайкой или сваркой специальными сварочными стержнями из никелевого сплава. Пайка или сварка чугуна в полевых условиях очень сложна и должна выполняться только очень опытными сварщиками.

В некоторых случаях можно произвести механический ремонт чугуна с помощью стальных стержней и винтов или болтов. В крайних случаях можно вырезать изношенный чугун и установить новый чугун с помощью сварки или пайки.Однако зачастую дешевле заменить изношенную чугунную секцию новой отливкой, чем сращивать или укреплять ее. Вышедшие из строя чугунные элементы конструкции необходимо либо укрепить железом и сталью, либо полностью заменить.

Западный фасад театра «Новый рынок» сохранил свои оригинальные черты из чугуна. Фото: Джордж Макмат.

Шаткую чугунную балюстраду или перила часто можно зафиксировать, затянув все болты и винты.Винты с зачищенной резьбой и сильно заржавевшие болты подлежат замене. Чтобы компенсировать коррозию металла вокруг отверстий для болтов или винтов, необходимо использовать новые болты из нержавеющей стали или винты большего диаметра. В крайних случаях может потребоваться нарезание резьбы в новых отверстиях.

Внутренние пустоты балясин, стоек, скульптур и других элементов не следует заполнять бетоном; это неправильное лечение, которое вызывает дополнительные проблемы. По мере затвердевания бетон дает усадку, оставляя пространство между бетоном и чугуном.Вода, попадающая в это пространство, не испаряется быстро, что способствует дальнейшей коррозии. Коррозия железа еще больше ускоряется щелочной природой бетона. Если чугунные элементы ранее были заполнены бетоном, их необходимо разобрать, удалить бетон и ржавчину, а внутренние поверхности загрунтовать и покрасить перед повторной сборкой элементов.

Замена чугунных компонентов часто является единственным практическим решением, когда такие элементы отсутствуют, сильно корродированы или повреждены, не подлежащие ремонту, или когда ремонт будет лишь незначительно полезен для продления срока службы железного элемента.

Иногда можно заменить мелкие декоративные, неструктурные элементы, используя целые участки оригинала в качестве шаблона отливки. Для больших секций необходимо будет изготовить новые образцы из дерева или пластика, размер которых немного больше исходного, чтобы компенсировать усадку чугуна во время литья (чугун сжимается примерно на 1/8 дюйма на фут по мере охлаждения жидкость в твердое тело). Иногда подходящую замену можно получить из существующих каталогов чугунолитейных заводов.Небольшие элементы можно отливать из чугуна по индивидуальному заказу на небольших местных литейных заводах, часто по стоимости, сопоставимой с аналогичными материалами. Крупные элементы и сложные модели обычно требуют навыков и оборудования более крупной фирмы, специализирующейся на копировании.

Процесс кастинга

Архитектурные элементы традиционно отливались в песчаных формах. Качество специальных песков, используемых на литейных заводах, чрезвычайно важно; в отличие от большинства песков они должны быть влажными.В литейных цехах есть свои формулы для песка и его примесей, таких как глина, которая делает песок связным даже при переворачивании формы.

Форма, состоящая из двух частей (с верхом и низом, или заглушка и тяга), используется для изготовления отливки с рельефом с обеих сторон, тогда как форма с открытым верхом дает плоскую поверхность с одной стороны. Для полых элементов требуется третий шаблон и форма для пустоты. Многие полые отливки состоят из двух или более частей, которые позже скрепляются болтами, привинчиваются или свариваются из-за трудности поддержания внутреннего сердечника между верхней и нижней песчаными формами во время процесса литья.

Формовочный песок уплотняется в колбы или формы вокруг рисунка. Затем колпачок поднимается, и рисунок удаляется, оставляя отпечаток рисунка в небольшой форме. Расплавленное железо, нагретое до температуры примерно 2700 градусов по Фаренгейту, выливается в форму и затем охлаждается. Затем формы снимают с отливки; перекрываются туннели к форме (литники) и стояки, позволяющие выпуск воздуха; а неровные края (называемые «заусенцами») на отливке шлифуются до гладкости.

Отливки загрунтованы заводской грунтовкой для предотвращения ржавчины, а затем раскладываются и предварительно собираются в литейном производстве для обеспечения надлежащего выравнивания и подгонки. Когда детали не подходят друг к другу, детали подвергаются механической обработке для удаления неровностей, вызванных заусенцами, или отбраковываются и повторно обрабатываются до тех пор, пока все литые элементы не будут соответствовать друг другу должным образом. Затем перед отправкой на строительную площадку наиболее крупные детали разбираются, а некоторые мелкие декоративные детали можно оставить в собранном виде.

Иногда бывает необходимо полностью или частично демонтировать чугунную конструкцию во время реставрации, если ремонт невозможно успешно провести на месте.Демонтаж должен производиться только под руководством архитектора-реставратора или реставратора архитектуры, имеющего опыт работы с историческим чугуном. Следует проявлять особую осторожность, поскольку чугун очень хрупкий, особенно в холодную погоду.

Демонтаж должен производиться в порядке, обратном порядку сборки, а повторный монтаж должен производиться, насколько это возможно, в точном порядке первоначальной сборки. Каждая часть должна быть пронумерована и снабжена ключами для записи рисунков. Когда работа должна выполняться в погодных условиях, связанных с шнуром, необходимо соблюдать осторожность, чтобы избежать разрушения металлических элементов из-за их неравномерного нагрева.

Как новые отливки, так и повторно использованные детали следует покрасить заводской грунтовкой на всех поверхностях. Все компоненты должны быть разложены и предварительно собраны, чтобы обеспечить правильное выравнивание и посадку. Многие оригинальные болты, гайки и винты, возможно, придется заменить аналогичными крепежными элементами из нержавеющей стали.

После сборки на месте стыки, которые исторически были заделаны, следует заполнить полиуретановым герметиком архитектурного качества или традиционной белой свинцовой пастой.Преимущество белого свинца в том, что он долговечен, хотя во многих областях его использование ограничено.

Обшивки

В некоторых случаях может потребоваться спроектировать и установить гидроизоляцию для защиты участков, уязвимых для проникновения воды. Облицовки необходимо проектировать и изготавливать с осторожностью, чтобы они были эффективными и ненавязчивыми по внешнему виду. Самый прочный материал для оклейки чугуна - нержавеющая сталь с терновым покрытием. Другие совместимые материалы: сталь с терновым покрытием и оцинкованная сталь; однако они требуют более частого обслуживания и менее долговечны.Медь и медь с свинцовым покрытием не рекомендуется использовать в качестве отливов при контакте с чугуном из-за проблем с гальванической коррозией. Гальванические проблемы также могут возникнуть при использовании алюминия, если присутствуют определенные типы электролитов.

В последние годы ряд металлических и неметаллических материалов использовался в качестве заменителей чугуна, хотя исторически они не использовались с чугуном. Наиболее распространены алюминий, эпоксидные смолы, армированный полиэстер (стекловолокно) и бетон, армированный стекловолокном (GFRC).Факторы, которые следует учитывать при использовании материалов-заменителей, рассматриваются в Записках по консервации 16, в которых подчеркивается, что «все средства ремонта изношенных исторических материалов или замены их идентичными материалами должны быть проверены, прежде чем переходить к материалам-заменителям».

Литой алюминий в последнее время используется вместо чугуна, особенно для декоративных элементов декора. Алюминий легче по весу, более устойчив к коррозии и менее хрупок, чем чугун.Однако, поскольку он не похож на чугун, его размещение в контакте с чугуном или рядом с ним может привести к гальванической коррозии, и поэтому его следует избегать. Особое внимание следует уделять нанесению лакокрасочных покрытий, особенно в полевых условиях. Часто бывает трудно добиться прочного покрытия после того, как исходная отделка не удалась. Поскольку алюминий слабее железа, требуется тщательный анализ всякий раз, когда алюминий рассматривается в качестве материала для замены конструкционных чугунных элементов.

Эта легкая колонна из стекловолокна на уровне улицы была повреждена в результате удара в течение нескольких лет после установки. Фотография: Building Conservation Associates.

Эпоксидные смолы представляют собой двухкомпонентные термоотверждающиеся смолистые материалы, которым можно придать практически любую форму. При формовании эпоксидная смола обычно смешивается с наполнителями, такими как песок, стеклянные шары или каменная крошка. Поскольку это не металл, гальванической коррозии не происходит. При смешивании с песком или камнем его часто называют эпоксидным бетоном или полимербетоном, что неверно, потому что в него не входят вяжущие материалы.Эпоксидные смолы особенно эффективны для воспроизведения небольших декоративных частей чугуна. Поскольку это не металл, гальванического воздействия не происходит. Эпоксидные элементы должны иметь защитное покрытие, защищающее их от разрушения ультрафиолетом. Они также горючие и не могут использоваться в качестве замены конструкционных чугунных элементов.

Армированный полиэстер, широко известный как стекловолокно, часто используется в качестве легкого заменителя исторических материалов, включая чугун, дерево и камень.В своей наиболее распространенной форме стекловолокно представляет собой тонкую жесткую многослойную оболочку, образованную путем заливки полиэфирной смолы в форму с последующим добавлением стекловолокна для армирования. Как и эпоксидные смолы, стекловолокно не вызывает коррозии, но подвержено разрушению под действием ультрафиолета. Из-за своего довольно хрупкого характера он не может использоваться в качестве замены конструктивных элементов, не может быть собран, как чугун, и обычно требует отдельной системы крепления. Он не подходит для мест, где он подвержен ударам, а также воспламеняется.

Бетон, армированный стекловолокном, известный как GFRC, похож на стекловолокно, за исключением того, что смолу заменяет легкий бетон. Элементы GFRC обычно изготавливаются в виде тонких панелей оболочки путем распыления бетона на формы. Обычно требуется отдельная система каркаса и крепления. Элементы GFRC легкие, недорогие и устойчивые к атмосферным воздействиям. Поскольку GFRC имеет низкий коэффициент усадки, формы можно изготавливать непосредственно из исторических элементов. Однако GFRC физически и химически сильно отличается от железа.Если он используется рядом с железом, он вызывает коррозию железа и будет иметь другую скорость поглощения влаги. Кроме того, невозможно добиться четкости деталей, характерной для чугуна.

Успешная программа техобслуживания - залог долговременной консервации архитектурного чугуна. Важны регулярные проверки и точный учет. Проверки, проводимые раз в два года, в идеале весной и осенью, включают выявление основных проблем, таких как недостающие элементы и трещины, а также мелких деталей, таких как неудачное уплотнение, поврежденная краска и поверхностная грязь.

Записи должны вестись в форме постоянного журнала технического обслуживания, в котором описываются текущие задачи технического обслуживания и указывается дата первого обнаружения проблемы, время ее устранения и метод лечения. Записи о покраске важны для выбора совместимых красок для подкраски и последующей перекраски. В журнале следует указать место проведения работ, а также тип, производителя и цвет краски. Та же самая информация должна быть собрана и записана для конопатки.

Поверхностные загрязнения можно смыть с хорошо окрашенного и заделанного чугуна водой под низким давлением. Неионные моющие средства можно использовать для удаления сильных или стойких загрязнений или пятен после тестирования, чтобы определить, что они не оказывают вредного воздействия на окрашенные поверхности. Густые отложения и остатки смазки можно удалить вручную. Для смывания остатков можно использовать воду и моющие средства или обезжиривающие средства, не содержащие едкого натра. Перед перекрашиванием необходимо удалить масло и смазку, чтобы новые покрытия прилипли должным образом.

Основная цель программы технического обслуживания - борьба с коррозией. Как только заметна ржавчина, ее следует аккуратно удалить и обновить защитное покрытие утюга на пораженном участке. Замена испорченной герметизации и ремонт или замена вышедших из строя окладов также являются важными профилактическими мерами технического обслуживания.

Успешная консервация чугунных архитектурных элементов и объектов зависит от точной диагностики их состояния и проблем, с которыми они связаны, а также от выбора соответствующих процедур ремонта, очистки и покраски.Часто возникает необходимость в капитальном ремонте отдельных элементов и узлов; в некоторых случаях необходимо тиражировать сильно поврежденные или отсутствующие компоненты. Долговременная консервация архитектурного чугуна зависит как от своевременного надлежащего ремонта, так и от соблюдения регулярного графика технического обслуживания.

Благодарности

Этот краткий обзор был разработан Центром технических услуг по сохранению New York Landmarks Conservancy в соответствии с соглашением о сотрудничестве со Службой технической сохранности Службы национальных парков и при частичном заключении Совета по искусству штата Нью-Йорк.За техническую помощь следует поблагодарить следующих лиц: Роберт Бэрд, компания «Историческое искусство и кастинг»; Уиллкокс Данн, архитектор и консультант по чугуну; Уильям Фоулкс, компания Mesick Cohen Waite Architects; Элизабет Фрош, Комиссия по сохранению достопримечательностей Нью-Йорка; Уильям Хокинс, III, FAIA, Макмат Хокинс Дортиньяк; Дж. Скотт Хауэлл, Робинсон Айрон Компани; Морис Шикер, Facade Consultants International; Джоэл Шварц, Металлургический завод Шварца и Шварца; и Дайана Уэйт, Mount Ida Press. Ким Лавджой был координатором проекта и редактором Conservancy; Чарльз Фишер был координатором проекта и редактором Службы национальных парков.

Настоящая публикация подготовлена ​​в соответствии с Законом о сохранении национального исторического наследия 1966 года с внесенными в него поправками, который предписывает министру внутренних дел разрабатывать и предоставлять информацию об исторических объектах. Служба технической сохранности (TPS), Служба национальных парков, готовит стандарты, руководства и другие образовательные материалы по ответственным методам сохранения исторических памятников для широкой общественности.

Октябрь 1991

Ашерст, Джон и Никола Ашерст с Джеффом Уоллисом и Деннисом Тонером. Практическая консервация зданий: English Heritage Technical Handbook: Volume 4 Металла. Олдершот, Хантс: Gower Technical Press, 1988.

Барсук, Дэниел Д., с новым вступлением Марго Гейл. Барсука Иллюстрированный каталог литой архитектуры . Нью-Йорк: Dover Publications, Inc., 1981; переиздание издания 1865 года, опубликованного Baker and Godwin, Printers, Нью-Йорк.

Гейл, Марго и Эдмунд В. Гиллон-младший. Литая архитектура в новом стиле. Йорк: фотографический обзор . Нью-Йорк: Dover Publications Inc., 1974.

.

Гейл, Марго, Дэвид В. Лук, AIA и Джон Г. Уэйт. Металлов в Америке Исторические здания: Часть I. Исторический обзор металлов : Часть II. Ухудшение и методы консервации металлов . Вашингтон.; Отдел помощи по сохранению, Служба национальных парков, Министерство внутренних дел США, 1980 год.

Хокинс, Уильям Джон III. Великая эра чугунной архитектуры в Портленд . Портленд, Орегон: Бинфорд и Морт, 1976.

Хауэлл, Дж. Скотт. «Архитектурный чугун: дизайн и реставрация». Журнал Ассоциации консервационных технологий . Том XIX, номер 3 (1987), стр. 5155.

Парк, Шарон С., AIA. Записки по консервации 16: Использование заменителя Материалы по экстерьерам исторических зданий .Вашингтон Д. К .: Сохранение Отдел помощи, Служба национальных парков, U. 5. Департамент внутренних дел, 1988.

Робертсон, Э. Грэм и Джоан Робертсон. Чугунное украшение: мир Обзор . Нью-Йорк: Watson-Guptill Publications, 1977.

Саутворт, Сьюзен и Майкл. Декоративные изделия из металла: иллюстрированное руководство к его дизайну, истории и использованию в американской архитектуре . Бостон: Дэвид Р. Годин, 1978.

Уэйт, Диана С. Декоративные изделия из металла: два века мастерства в Олбани и Трое, Нью-Йорк, . Олбани, Нью-Йорк: Mount Ida Press, 1990.

Антиапоптотические белки семейства Bcl-2 разбирают церамидные каналы - Университет Джона Хопкинса

TY - JOUR

T1 - Антиапоптотические белки семейства Bcl-2 разбирают церамидные каналы

AU - Siskind, Leah J.

AU - Feinstein , Лоуренс

AU - Yu, Tingxi

AU - Дэвис, Джозеф С.

AU - Jones, David

AU - Choi, Jinna

AU - Zuckerman, Jonathan E.

AU - Tan, Wenzhi

AU - Hill, R. Blake

AU - Hardwick, J. Marie

AU - Colombini, Marco

PY - 2008/3/14

Y1 - 2008/3/14

N2 - На ранней стадии митохондриально-опосредованного апоптоза внешняя мембрана митохондрий становится проницаемой для белков, которые при попадании в цитозоль, инициировать фазу выполнения апоптоза.Белки семейства Bcl-2 регулируют эту проницаемость, но молекулярный состав поры внешней мембраны митохондрий является предметом дискуссий. Ранее мы сообщали, что на физиологически значимых уровнях церамиды образуют стабильные каналы во внешних мембранах митохондрий, способные пропускать крупнейшие белки, которые, как известно, выходят из митохондрий во время апоптоза (Siskind, LJ, Kolesnick, RN, and Colombini, M. (2006) Mitochondrion 6, 118 -125). Здесь мы показываем, что белки Bcl-2 не требуются для церамида для формирования проницаемых для белков каналов во внешних мембранах митохондрий.Однако как рекомбинантный человеческий Bcl-xL, так и CED-9, гомолог Bcl-2 Caenorhabditis elegans, разбирают церамидные каналы во внешних мембранах митохондрий изолированных митохондрий из печени и дрожжей крысы. Важно отметить, что Bcl-xL и CED-9 разбирают церамидные каналы в определенной системе плоских фосфолипидных мембран без растворителей. Таким образом, разборка церамидных каналов, вероятно, является результатом прямого взаимодействия с этими антиапоптотическими белками. Мутанты Bcl-xL действуют на церамидные каналы, как и ожидалось, исходя из их способности быть антиапоптотическими.Таким образом, церамидные каналы могут быть одним из механизмов высвобождения проапоптотических белков из митохондрий во время фазы индукции апоптоза.

AB - На ранних стадиях апоптоза, опосредованного митохондриями, внешняя мембрана митохондрий становится проницаемой для белков, которые при попадании в цитозоль инициируют фазу выполнения апоптоза. Белки семейства Bcl-2 регулируют эту проницаемость, но молекулярный состав поры внешней мембраны митохондрий является предметом дискуссий. Ранее мы сообщали, что на физиологически значимых уровнях церамиды образуют стабильные каналы во внешних мембранах митохондрий, способные пропускать крупнейшие белки, которые, как известно, покидают митохондрии во время апоптоза (Siskind, L.J., Kolesnick, R. N., and Colombini, M. (2006) Mitochondrion 6, 118-125). Здесь мы показываем, что белки Bcl-2 не требуются для церамида для формирования проницаемых для белков каналов во внешних мембранах митохондрий. Однако как рекомбинантный человеческий Bcl-xL, так и CED-9, гомолог Bcl-2 Caenorhabditis elegans, разбирают церамидные каналы во внешних мембранах митохондрий изолированных митохондрий из печени и дрожжей крысы. Важно отметить, что Bcl-xL и CED-9 разбирают церамидные каналы в определенной системе плоских фосфолипидных мембран без растворителей.Таким образом, разборка церамидных каналов, вероятно, является результатом прямого взаимодействия с этими антиапоптотическими белками.

admin

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *