ЛЕЙЛА ФАДЕЛЬ, ВЕДУЩАЯ:

Генеральный почтмейстер Луи ДеДжой приостановил некоторые меры по сокращению расходов, из-за которых задерживалась доставка почты. Но не все порезы можно легко отменить. В последние недели почтовые служащие по всей стране были заняты демонтажом сложных машин для сортировки почты.И, как сообщает Фрэнк Моррис из членской станции KCUR, это может оставить прочный след в почтовой службе.

ФРАНК МОРРИС, УСТАВ: Центр обработки и распределения почтовой службы США здесь, в Канзас-Сити, представляет собой четырехэтажное здание, занимающее почти квартал. Грузовики заезжают в отсеки на первом этаже, заполненные несортированной почтой — чеками, карточками, рецептами. Эта почта сортируется в этом здании и отправляется обратно для доставки. Но этот перерабатывающий завод не такой надежный, как несколько дней назад.

АНТУАНЕТТА РОБИНСОН: Да, некоторые машины были вывезены отсюда. Они удалили — кажется, три, так называемые машины для сортировки штрих-кода с доставкой.

МОРРИС: Антуанетта Робинсон возглавляет местный американский союз почтовых рабочих в Канзас-Сити. Сортировочные машины, о которых она говорит, огромны, каждая почти размером с низкий вагон метро. И они сложные, они могут сортировать до 35 000 писем за час. И Робинсон говорит, что их отключили по всей стране.

РОБИНСОН: Вы знаете, это очень важно — удалять машины во время пандемии, когда все полагаются на почту. А теперь у нас есть люди, желающие проголосовать по почте. Эти машины — машины, которые будут обрабатывать их бюллетени.

МОРРИС: Почтовое отделение планировало остановить более 600 сортировочных машин, что составляет около 10% от его сортировочных мощностей по всей стране. А Далео Фриман, возглавляющий отделение Союза почтовых рабочих в Кливленде, говорит, что план, как он понимал его в мае, состоял в том, чтобы просто законсервировать машины, отключить их от сети и завернуть в брезент.Но он говорит, что это изменилось, когда в июне к власти пришел новый генеральный почтмейстер Луи ДеДжой.

ДАЛЕО ФРИМАН: Сначала их накрыли брезентом, потом разобрали, а потом вытащили обратно. Готово.

МОРРИС: Выложите обратно на асфальт в непогоду. Есть основания для сдачи в слом некоторых сортировочных машин. Объем так называемой плоской почты, которая проходит через них, только с марта снизился на 30%. И, конечно же, это следует за длительным сокращением количества карточек, писем и журналов, пересылаемых по почте.

Этим летом почта двигалась вяло, отчасти из-за недавних сокращений ДеДжоя, в том числе строгих ограничений на сверхурочную работу и жестких графиков доставки. В уведомленном почтовом отделении говорится, что замедление может привести к остановке доставки и даже к аннулированию некоторых бюллетеней, отправленных по почте. Это побудило демократов обвинить администрацию Трампа в попытке склеить почту перед выборами. Штаты выстроились в суд. Такие политики, как конгрессмен Эмануэль Кливер, демократ из Миссури, получили серьезное обвинение.

ЭМАНУЭЛЬ КЛИВЕР: Почтовое отделение набирает 90 плюс одобрение.Знаете, я не уверен, что в 90-х годах были опросы из филе филе и лобстера.

МОРРИС: И вчера генерал почтмейстер уступил место. Луи ДеДжой приостановил меры по сокращению расходов, по крайней мере, до выборов. Почтовое отделение не согласилось бы дать интервью для этой истории, но в письменном заявлении было обещано, что часы работы розничной торговли не изменятся, сверхурочная работа будет восстановлена, а оборудование для обработки почты останется на месте. Неясно, сколько машин уже разобрано и вывезено.Это тоже не самая насущная проблема. Президент Американского союза почтовых рабочих Марк Димондштейн говорит, что USPS понесла огромные убытки во время пандемии и теперь нуждается в 25 миллиардах долларов.

МАРК ДАЙМОНДШТЕЙН: Если его не решить, то в почтовом отделении буквально в начале следующего года, по прогнозам, закончатся деньги.

МОРРИС: Палата представителей собирается проголосовать в субботу по вопросу о чрезвычайном финансировании почтового отделения, хотя неясно, будет ли действовать Сенат. Президент Трамп, который долгое время критиковал почту и голосование по почте, в разное время как поддерживал, так и выступал против увеличения финансирования.Если почтовое отделение в конечном итоге получит запрашиваемые деньги, вероятно, новые сортировочные машины не будут в его списке покупок. Для новостей NPR я Фрэнк Моррис из Канзас-Сити.

(ЗВУК «ИСТОЧНИКА» TYCHO)

Авторские права © 2020 NPR. Все права защищены. Посетите страницы условий использования и разрешений на нашем веб-сайте www.npr.org для получения дополнительной информации.

стенограмм NPR создаются в срочном порядке Verb8tm, Inc., подрядчиком NPR, и производятся с использованием патентованного процесса транскрипции, разработанного NPR.Этот текст может быть не в окончательной форме и может быть обновлен или изменен в будущем. Точность и доступность могут отличаться. Авторитетной записью программирования NPR является аудиозапись.

Объективов в аренду | Блог

Предоставлено Canon USA

Lensrentals.com, 2016

Сегодня вышли камеры Canon 5D Mk IV, и я уверен, что к обеду на YouTube появятся распакованные видео. Мы с Аароном тоже решили сделать сообщение о распаковке.Под распаковкой мы, конечно же, подразумеваем разборку. Если вы хотите провести сравнение, вы можете взглянуть на нашу старую (2012 г.) разборку 5D Mk III или недавнюю разборку 5D.

Юристы хотели бы, чтобы я упомянул, что, хотя мы (часто) делаем это невероятно простым и увлекательным, вы не должны делать это самостоятельно. Если при повторной сборке вы оставите небольшую течь, то когда вы вставите аккумулятор обратно, дым выходит из камеры. Важно не допускать попадания дыма в камеру. Доверьте нам это, потому что у нас есть опыт.Каждый раз, когда мы позволяем дыму выходить из камеры, она больше никогда не работает. И ваша гарантия будет недействительной.

Ожидания

Честно говоря, мы не ожидали много сюрпризов внутри Canon 5D Mark IV. Снаружи он выглядит так же, как Canon 5Ds и Canon 5Dsr, которые очень похожи на Canon 5D III. Мы ожидали найти какие-то новые чипы внутри, потому что, ну, камера делает что-то новое, для чего нужны новые чипы. И, конечно же, как и любая другая камера, когда-либо созданная на протяжении всей истории, в этой «улучшена защита от атмосферных воздействий».Конечно, он не настолько улучшен, чтобы гарантия покрывала ущерб от воды, но все же на это стоит обратить внимание. По крайней мере, нам обычно нравится открывать камеры Canon, потому что инженерные решения всегда хорошо продуманы и обычно красивы. И мы из тех парней, которые ценят внутреннюю красоту.

Итак, давайте открутим несколько шурупов !!!

Снятие корпуса

Это был первый сюрприз, который у нас был, и он продолжается на протяжении всей разборки. До сих пор камеры Canon демонтировали довольно просто: вы вынимаете винты, одна часть корпуса отрывается, и повторите то же самое для другой части корпуса.На этот раз мы сделали обычный первый шаг, сняв крышку портов ввода-вывода.

Lensrentals.com, 2016

Но не выскользнул. Затем выходят винты нижней пластины.

Lensrentals. com, 2016

Она расшаталась, но и не вышла. Отодвинул ручки и приступил к работе над передней панелью. Снова никакой радости. Все пластины расшатались, но не оторвались. А когда вы впервые разбираете камеру, вы не тянете за застрявшие предметы, потому что не знаете, во что они могут прилипнуть.

Lensrentals.com, 2016

Наконец, мы сняли одну вещь, которая оторвалась обычным способом; задняя крышка в сборе. Я уверен, что технические специалисты Canon уже читают это и смеются.

Lensrentals.com, 2016

После того, как мы немного осмотрелись, мы поняли, что в основном для снятия любой части корпуса, кроме задней части, вам нужно было снять большую часть корпуса, потому что Canon добавила множество пластиковых штифтов и защелок к различным частям корпуса. корпус, что делает его гораздо более взаимосвязанным, чем в предыдущих камерах.

Штифты под крышкой ввода / вывода. Lensrentals.com, 2016

Фиксирующие защелки вокруг нижней пластины. Lensrentals.com, 2016

Что это делает? Что ж, это, безусловно, укрепило бы оболочку, сделав ее более устойчивой к ударам и падениям. Это может (я не могу сказать наверняка) сделать уплотнения между различными частями более плотными и водонепроницаемыми. С моей точки зрения (но не вашей), работа с этой камерой станет более сложной и трудоемкой, но не настолько.

Говоря о водонепроницаемости, мы видели, как и в случае с Canon 7DII и Canon 5D, множество вспененных уплотнений вдоль дверей и стыков.

Lensrentals.com, 2016

Даже внутри кнопок есть очень толстые резиновые прокладки, куда бы вы ни посмотрели.

Lensrentals.com, 2016

Эта следующая часть может быть вам полезна. Была только одна область, где мы не видели никакой печати, кроме пластика на пластике.Это было в правом верхнем углу, где соединяются задняя и верхняя пластины. Между двумя красными линиями просто пластиковое уплотнение без прокладок. Он может быть полностью водонепроницаемым из-за давления между двумя пластинами кожуха. Но я мог бы заклеить его лентой, если бы собирался выходить под дождь. (Хорошо, как вы все знаете, я не беру фотоаппараты под дождем без пластиковых чехлов. Потому что мы каждую неделю списываем «погодоустойчивые» фотоаппараты за ущерб, нанесенный водой. Но я знаю, что вы, молодые люди, живете быстро и любите рисковать.)

Lensrentals.com, 2016

Хорошо, давайте посмотрим на внутренности

Ранее я упоминал, что у нас была снята задняя крышка. Внутри он очень похож на другие задние крышки Canon. Над кнопочной панелью и ЖК-дисплеем есть алюминиевые экраны. Шлейфы, перемещающиеся по ЖК-дисплею, сложнее, чем у других Canon, из-за дополнительной обработки сенсорного экрана.

Lensrentals.com, 2016

Мы немного разобрали заднюю часть, и вы можете видеть, что панель кнопок похожа на другие камеры серии 5, с добавлением новой кнопки выбора фокуса.Это одна из двух маленьких круглых медных пластин под (справа на рисунке) кнопкой наклона.

Lensrentals.com, 2016

После того, как все соединительные шлейфы были удалены, мы могли соскользнуть с большого жесткого главного шлейфа ЖК-дисплея, который на самом деле представляет собой почти печатную плату.

Lensrentals.com, 2016

И вот мы видим ЖК-дисплей. В основном это алюминиевый экран / скоба над ЖК-дисплеем с небольшим окошком с лентой, показывающим ЖК-дисплей. Снова мы увидели красивые резиновые уплотнители вокруг ЖК-панели.Мы не снимали его, потому что у нас еще нет запасного двустороннего скотча, чтобы убедиться, что он правильно приклеился, но, за исключением дополнительных подключений сенсорного экрана, он был похож на то, что мы видели раньше.

Lensrentals.com, 2016

Возвращаясь к остальной части камеры, мы видим пару интересных вещей на задней стороне камеры. Во-первых, к основной плате подключается больше шлейфов, чем к большинству других моделей. Во-вторых, нам было очень приятно увидеть толстый жесткий лист резины, покрывающий заднюю часть печатной платы (на самом деле он очень блестящий черный; свет придает ему серый и синий вид).Под ним вы можете увидеть алюминиевую экранирующую и защитную панель, которая закрывает микросхемы на стороне захвата печатной платы.

Lensrentals.com, 2016

Вы можете получить лучшее представление о том, насколько это лучше, чем старая непрочная вещь из вспененной ленты, с которой мы имели дело в Canon 5DIII на картинке ниже.

Lensrentals.com, 2016

Теперь, когда задняя, ​​нижняя и передняя панели не закреплены, мы можем снять панель крышки ввода-вывода, и вы сможете увидеть различные порты.

Lensrentals.com, 2016

Вот и было наше первое настоящее разочарование. Забегая вперед для ясности, порты USB и HDMI припаяны к основной плате. Только синхронизация вспышки и аудиопорты находятся на отдельной плате. Это означает (как часто бывает), когда кабель USB или HDMI сильно дергается, порт может оторваться от припоя к плате. Ремонт в данном случае представляет собой полную замену основной платы. Мы бы предпочли видеть эти порты на дополнительной плате, но понимаем, что это намного дешевле производить таким способом.Почти все SLR делают это, но я бы очень хотел, чтобы они закрепили порты или что-то в этом роде.

Lensrentals.com, 2016

Затем открылась дверца CF-карты. Обычно для этого достаточно вывернуть винты, и дверь соскользнет, ​​вам просто нужно быть осторожным, чтобы не повредить датчик положения двери. Однако в этой камере прямо под дверью есть изгиб, который хотел прилипнуть, когда мы его убрали. Никакого вреда не было, просто еще один случай, когда эту камеру немного сложнее разобрать, чем большинство.

Lensrentals.com, 2016

Затем мы сняли переднюю крышку. Это было намного сложнее, чем могло бы показаться, потому что Canon проложила некоторые соединительные кабели от передней крышки, по бокам камеры к задней печатной плате. Это один из тех моментов, «почему вы не делаете этого сами». Один хороший буксир и несколько важных деталей больше никогда не заработают.

Гибкий кабель, с которого Аарон снимает ленту, и небольшой белый провод внизу, проходят от передней крышки через порты ввода-вывода к печатной плате в задней части.Lensrentals.com, 2016

Но после того, как они были отцеплены, сразу же сдвинулась передняя часть.

Lensrentals.com, 2016

А теперь у нас есть хороший взгляд на переднюю часть камеры.

Lensrentals.com, 2016

Это мотор зеркала вон там, под EOS с левой стороны. Вот посмотрим поближе.

Lensrentals.com, 2016

Наконец-то нам удалось снять верхнюю часть.Снизу он выглядит почти так же, как и любая другая верхняя сборка, и мы научились на долгом мучительном опыте не разбирать их, если в этом нет крайней необходимости. В общем, если что-то не так с верхним узлом, вы просто заменяете верхний узел.

Сверху открывается прекрасный вид на пентапризму. Опять же, мы не разбираем их и далее. Если вы это сделаете, придется провести много согласований и калибровок.И нет, я понятия не имею, для чего написано или инициалы.

Lensrentals.com, 2016

Хорошо, вернемся к основной части камеры. Выкрутив несколько винтов, мы можем потянуть защитные кожухи из алюминиевого и резинового листов за одно целое, обнажив печатную плату.

Lensrentals.com, 2016

К плате со всех сторон подключено множество шлейфов. Они толще и сложнее, чем предыдущие камеры, и во многих случаях используются толстые «запрессованные» разъемы вместо простых гибких кабелей.

Lensrentals.com, 2016

По сути, пришлось открутить множество соединений и удалить несколько винтов, прежде чем мы смогли вынуть основную плату. Также был очень большой разъем для крепления из-под платы, который вы можете увидеть здесь, прямо над SD-картой. Кардридер SD, как это обычно бывает, припаян к плате. Больше ничего интересного на обратной стороне платы не было.

Lensrentals.com, 2016

Под тем местом, где была печатная плата, теперь мы видим печатную плату датчика изображения, а справа от нее — сборку CF-карты.Вы можете видеть отражения от прозрачного пластикового экрана над печатной платой датчика.

Lensrentals.com, 2016

Если вы присмотритесь к датчику в сборе, вы увидите три специальных винта, по одному с обеих сторон видоискателя и внизу. Эти регулировочные винты используются для выравнивания датчика так, чтобы он находился точно в той же плоскости, что и крепление объектива.

Lensrentals.com, 2016

На этом не очень хорошем виде сбоку видно, что это простая регулировка натяжения пружины винтом.

Lensrentals.com, 2016

Следующее, что мы хотели сделать, это удалить сборку CF-карты. Изогнутые штифты CF случаются с некоторой частотой, и это обычный ремонт. Мы уже видели, что просто разобрать камеру, чтобы их можно было обнажить, было бы утомительно. Удаление сборки CF на самом деле оказалось более сложной задачей. Обычно на этом этапе для снятия блока CF достаточно просто вынуть пару винтов и отсоединить шлейф (крышка CF-карты была снята ранее).В этом случае нам сначала пришлось снять пластину замка батарейного отсека.

Lensrentals.com, 2016

А потом смог снять CF в сборе. Как только он вышел, мы увидели, почему нам пришлось снять дверной замок: узел CF также содержит датчик закрытия батарейного отсека (перед большим пальцем Аарона). Ничего особенного, просто разные, и ну, мы действительно заменяем сборки CF изрядно.

Lensrentals.com, 2016

Последней частью, которую мы сняли, была нижняя пластина, просто потому, что мы хотели увидеть, насколько она прочна.Стоит отметить, что даже кольцо штатива имеет красивую резиновую прокладку.

Lensrentals. com, 2016

А когда пластина отрывается, она, как видите, довольно толстая и крепкая. У многих фотоаппаратов здесь очень тонкие металлические пластины.

Lensrentals.com, 2016

Теперь, заглянув под камеру, мы можем увидеть платы постоянного тока и другие платы питания, но не более того. Мы действительно не видели причин разбирать зеркальный бокс и снимать батарейный отсек, поэтому решили уйти, пока были впереди.

Lensrentals.com, 2016

Итак, что все мы узнали сегодня?

Ну что ж, посмотрим. Защита от атмосферных воздействий на Canon 5d Mark IV выглядит довольно надежной, хотя вы знаете мое мнение о погодных условиях в целом. Корпус камеры имеет блокирующую конструкцию с большим количеством шпилек и зажимов и большим количеством винтов, чем у предыдущих камер Canon. Это немного затрудняет проникновение, но я уверен, что это увеличивает общую прочность снаряда. Это могло бы сделать его более устойчивым к погодным условиям, если бы детали были скреплены более плотно, но я не могу сказать наверняка.

Здесь больше микросхем, больше и более тяжелых разъемов, перемещающих электроны с платы на плату, чем даже в камерах Canon 5D. Это имеет смысл, потому что здесь много нового: сенсорный ЖК-экран, двухпиксельная технология, Wi-Fi, GPS, список можно продолжить. Однако одна вещь, которую на самом деле не уловили на фотографиях, — это то, что внутри камеры больше воздуха, чем мы привыкли видеть. Есть пустые места, которые не забиты электроникой. Другими словами, эта камера, вероятно, могла бы быть немного меньше, но Canon хотела сохранить тот же форм-фактор.

по крайней мере такая же надежная, как и у последних моделей 5-й серии, и лучше, чем у Canon 5DIII, каким и должен быть. С прокладкой кабелей в разные стороны немного сложнее, чем в предыдущих камерах Canon, но это никак не повлияет на работу. Это может немного затруднить ремонт. И я, как всегда, разочарован тем, что порты HDMI и USB припаяны к основной плате. Их довольно много отрывают на каждой камере, сделанной таким образом (а это большинство камер, не предназначенных для видео).С другой стороны, замена основной платы может быть ненамного дороже, чем замена дополнительной платы.

В целом, это была интересная разборка с изрядным количеством новых причуд и настроек, а не довольно простое обновление, которого я ожидал.

Роджер Чикала и Аарон Клос

Lensrentals.com

Сентябрь, 2016

Потому что люди до сих пор настаивают на том, чтобы спрашивать или строить предположения: да, камера собрана заново.Да, все работает нормально. Нет, на этой неделе он не выйдет в прокат, мы попросим некоторых ребят снимать его, пока они сами пишут о его использовании. Но после этого он будет сдан в аренду.

Автор: Роджер Чикала

Я Роджер и основатель Lensrentals.com. Меня называют здесь одним из оптических ботаников, и в свободное время я с удовольствием снимаю коллимированный свет через объективы микроскопа с 30-кратным увеличением. Когда я делаю реальные снимки, мне нравится использовать что-то другое: средний формат, или Pentax K1, или Sony RX1R.

Как разобрать и собрать ноутбук

Разборка и сборка портативного компьютера позволит вам заменить компоненты, очистить систему или утилизировать внутренние компоненты портативного компьютера.

Это общее руководство, которое охватывает наиболее распространенную конфигурацию портативных компьютеров. Однако производители ноутбуков различаются, и некоторые элементы могут быть немного в другом месте или подключены по-другому.Как правило, процесс заключается в том, чтобы удалить компоненты, к которым вы можете добраться в первую очередь, при этом сначала необходимо отсоединить все кабели от компонента. Поскольку в ноутбуках мало места, также очень мало провисания кабелей, легко растянуть кабели или повредить разъем, если не отсоединить кабель перед попыткой извлечения компонента.

Если вы собираетесь восстановить портативный компьютер, важно задокументировать, где находится каждый компонент, какие кабели к нему подключены и где сохраняется провисание кабеля.Сфотографируйте каждый шаг, чтобы собрать ноутбук в конце процесса. Внимательно следите за винтами и за тем, куда они идут, так как на одном компоненте можно использовать винты разных размеров и типов. Чтобы уменьшить возможные путаницы, снова вставьте винты в отверстия, из которых они были получены, или заклейте винты лентой рядом с соответствующим отверстием на компоненте.

Вам понадобится небольшая отвертка с крестообразным шлицем и, возможно, плоская отвертка, в зависимости от марки вашего ноутбука.Чтобы избежать статического электричества, наденьте браслет ESD или прикоснитесь к неокрашенному металлическому предмету, чтобы снять накопившееся статическое электричество. Если вы отойдете от своего рабочего места, особенно если вы идете по ковру, снова прикоснитесь к неокрашенному куску металла, прежде чем продолжить работу.

Выключите компьютер, отсоедините его от сети и извлеките аккумулятор, переместив ползунок блокировки в положение разблокировки.Будет еще один ползунок, переместите его в указанном направлении, затем вытяните аккумулятор. Нажмите кнопку питания и удерживайте не менее пяти секунд, чтобы разрядить оставшееся электричество в системе.

Снимите задние панели, открутив все имеющиеся винты. Обязательно посмотрите под резиновыми ножками и за наклейками на предмет скрытых винтов. Если вы собираетесь собирать ноутбук, расположите крышки так, чтобы потом можно было снова установить их на нужные места.

Многие компоненты будут доступны сразу после снятия крышек. Как правило, сначала можно извлечь накопитель, память и карту беспроводной связи.

Отсоедините кабели, затем извлеките накопитель. Иногда производители ноутбуков не предоставляют разъем для ленточных кабелей, вместо этого сам кабель зажимается в компоненте. В этом случае необходимо открыть зажим с помощью отвертки с плоским жалом и отсоединить ленточный кабель.Накопитель может быть вкручен — если есть винты, удалите их, отслеживая, куда идет каждый.

Извлеките модули памяти, нажав пальцами или лопаткой на зажимы, удерживающие каждый модуль на месте. Модуль поднимется под углом 30 градусов, и вы сможете его снять. Не прикасайтесь к золотым контактам на модуле. Если вы не собираете компьютер заново, узнайте, как можно эффективно использовать старую память.

Маленькая позолоченная крышка рядом с картой беспроводной связи — это антенна беспроводной связи. Подденьте его плоской отверткой, затем извлеките карту беспроводной сети, используя зажимы, похожие на модули памяти.

Следующим шагом будет снятие крышки шарнира и клавиатуры. Некоторые производители используют винты на крышке шарнира, некоторые — нет. Если есть винты, они могут быть внутри снятой аккумуляторной батареи или на крышке шарнира.Проверьте и удалите все винты, затем попытайтесь приподнять крышку шарнира. Иногда есть небольшая выемка, которая упрощает это. Пластина должна легко откручиваться, если сопротивление более чем небольшое, еще раз проверьте винты. Затем полностью снимите крышку шарнира.

Выверните винты под крышкой шарнира, чтобы снять клавиатуру. Если клавиатура не хочет двигаться, когда вы поднимаете ее вверх и вперед, проверьте наличие дополнительных винтов.

Не вытягивайте ленточный кабель под клавиатурой при снятии клавиатуры.Он будет удерживаться на пластиковом шарнире. Поднимите петлю пальцами или пластиковой лопаткой.

Удалите все остальные кабели под клавиатурой. Разъемы перемещаются вверх или вперед. Если на кабеле есть небольшая пластмассовая заглушка, его просто вытаскивают.

Чтобы снять экран ноутбука, отсоедините антенный кабель и кабель для передачи данных ЖК-дисплея, соединяющий область, в которой находится клавиатура, с нижним краем экрана.

Выверните винты, которыми дисплей крепится к области петель.Они могли быть на задней панели дисплея или внутри, где была клавиатура. Осторожно снимите дисплей в сборе.

На экране удалите черные резиновые прокладки вокруг экрана, чтобы получить доступ к дополнительным винтам. Удалите подушечки ногтями, агрессивные инструменты могут порвать подушечки. Выкрутите все найденные винты. Отодвиньте переднюю крышку экрана от задней части. Если вы чувствуете сопротивление, поищите винт, который вы могли пропустить.

Чтобы снять экран, открутите очень маленькие винты сбоку от ЖК-экрана. Не касайтесь задней части экрана. Теперь вы можете получить доступ к инвертору люминесцентных ламп.

Раздвиньте корпус в нижней части ноутбука.

Снимите сенсорную панель и продолжайте выкручивать винты и отсоединять кабели, прикрепленные к материнской плате. Не обязательно выкручивать все винты на материнской плате, некоторые из них крепят компоненты материнской платы к материнской плате.Некоторые производители помечают винты для снятия материнской платы буквой или стрелкой.

После того, как винты были вывернуты, материнская плата должна выйти без сопротивления. Если есть сопротивление, проверьте, есть ли другие винты.

Чтобы собрать портативный компьютер, выполните каждый шаг в обратном порядке. Убедитесь, что разъемы надежно закреплены, кабели не перекручены и не растянуты, а все винты вставлены в правильные отверстия. Обычно рекомендуется чередовать затяжку винтов на детали, чтобы избежать ее растрескивания. Для ленточного кабеля клавиатуры более светлая сторона идет вверх, чтобы предотвратить перекручивание кабеля.

Разобрать и собрать ноутбук — настоящее достижение. Поздравляю!

Наблюдение за нековалентными путями сборки и разборки шаперонного комплекса MtGimC с помощью масс-спектрометрии

Реферат

Мы проанализировали недавно описанную архейную GimC / префолдин гомолог, названный MtGimC, с помощью электрораспыления нанопотока в сочетании с время пролета MS.Молекулярная масса комплекса из Methanobacterium thermoautotrophicum соответствует хорошо определенный гексамер из двух субъединиц α и четырех субъединиц β. Диссоциация комплекса в газовой фазе выявляет четвертичный расположение двух центральных субъединиц, как α, так и четырех периферических β субъединицы. Создав устройство с терморегулируемым нанопотоком, мы проверили термостабильность комплекса по МС. Результаты этих экспериментов демонстрируют, что значительная часть Гексамер MtGimC остается неповрежденным в условиях с низким содержанием соли при повышенных температуры.Этот вывод подтверждается данными спектроскопии КД. которые показывают, что при физиологических концентрациях соли комплекс остается стабильным при температуре выше 65 ° C. Масс-спектрометрические методы были разработаны для мониторинга в реальном времени сборки MtGimC гексамер из составляющих его субъединиц. Используя эту методологию, масс-спектры, записанные на протяжении всего эксперимента показал отсутствие каких-либо значительно заселенных промежуточных продуктов, демонстрируя, что процесс сборки очень кооперативный.Взятый в совокупности эти данные показывают, что комплекс устойчив при повышенных температуры, подходящие для его гипертермофильного хозяина, и демонстрируют, что путь сборки ведет исключительно к гексамеру, который, вероятно, будет структурной единицей in vivo .

Сворачивание актина и тубулинов в клетке зависит от согласованного действия как минимум двух комплексы молекулярных шаперонов, в том числе шаперонин группы II TRiC и GimC / префолдин (1–4). GimC сотрудничает с TRiC в vivo и из-за одновременного присутствия обоих комплексов в эукариот и архей (1, 2, 5) было высказано предположение, что GimC может представлять собой общий кофактор шаперонинов группы II (2), то есть в отличие от кофактора GroES / Hsp10, ассоциированного с группой I-шаперонины, такие как GroEL / Hsp70 (6, 7).Все эукариоты исследовали так обладают в общей сложности шестью генами GIM (для « G ены I не участвуют в микротрубочке M . биогенез »), и было обнаружено, что соответствующие белки собираются в комплекс, который связывает вновь синтезированный неродной актин и тубулины (4) и могут служить для переноса этих субстратов на TRiC (2, 3). Недавно архейный аналог GimC из Methanobacterium thermoautotrophicum , MtGimC, было обнаружено, что подавляют агрегацию неродных белков in vitro и стабилизировать их для последующего сворачивания шаперонинами (5).MtGimC — это собран из двух высокоспиральных белковых компонентов, MtGimα и MtGimβ, которые представляют два общих класса белков Gim (5).

В настоящем исследовании мы использовали комбинированный подход MS и CD для исследовать стехиометрию, четвертичную структуру и стабильность MtGimC. Связь ионизации электрораспылением (ESI) с времяпролетные масс-анализаторы значительно увеличили отношение массы к заряду. ( м / z ) диапазон, достижимый MS (8). Вместе с тщательный контроль экспериментальных параметров, особенно режим давления после процесса ESI и во время ускорения ионов в масс-спектрометре, эти методы позволили анализ крупных белковых комплексов, включая GroEL и бактериальные рибосомы (9–13).Теперь мы расширяем разработанную методологию, чтобы исследование нековалентных комплексов методом МС для изучения термического стабильность комплекса MtGimC. Реализация интерфейса нанопотока включающий термоэлектрическое устройство, способное нагревать нанопоток игла, а также нагрев сушильного газа гарантирует, что оба комплекса в растворе и на границе раздела электроспрея поддерживаются на определенные температуры до 70 ° C. Кроме того, мы описываем эксперименты предназначен для наблюдения за процессом сборки комплекса MtGimC с его составные субъединицы.Такие сборочные процессы сложно контролировать, в первую очередь потому, что скорость сборки часто быстрая, а обнаружение каких-либо интермедиатов сложно (14). MS, однако, похоже, предлагает беспрецедентная возможность контролировать сборку макромолекулярные комплексы, потому что ионы, полученные из водного раствора могут быть записаны в течение нескольких миллисекунд после их формирование (15) и времяпролетный анализ позволяют разрешить промежуточные виды, различающиеся единичными белковыми субъединицами даже крупными сборки (11).Кроме того, получение масс-спектров в реальном времени. позволяет наблюдать зависящие от времени изменения молекулярной массы. Мы тут описать применение такого подхода к мониторингу сборки процесс гексамера MtGimC из его изолированных компонентов в водной среде. буфер при pH 8,0.

Материалы и методы

Белковый препарат.

MtGimC очищали, как описано ранее (5), и заменяли буфер. в 10 мМ ацетат аммония при pH 8.0, чтобы получить конечную концентрацию 15 мкМ с использованием концентраторов Centricon c-100 (Amicon). Для В экспериментах по сборке образцы заменили буфер на 10 мМ аммоний. ацетата, pH 8,0, с использованием колонок PD-10 (Pharmacia). Молярные соотношения (1: 2) MtGimα / MtGimβ инкубировали при 37 ° C перед смешиванием, чтобы получить конечная концентрация 20 мкМ.

MS.

Если не указано иное, все спектры были записаны при комнатной температуре. на масс-спектрометре Q-ToF или LCT (Micromass, Манчестер, Великобритания) с источником ионизации Z-спреем, с использованием боросиликата с золотым покрытием иглы, приготовленные в домашних условиях, как описано ранее (16).Давление в квадрупольной области, а также конусном и капиллярном напряжениях были оптимизированы для каждого эксперимента, как указано в подписях к рисункам. Спектры были откалиброваны с помощью CsI и mass lynx версии 3.1. (Micromass) использовался для обработки данных.

CD.

экспериментов с CD на приборе Jasco (Easton, MD) J-720. спектрополяриметр с использованием кварцевых кювет с длиной пути 1 мм и 20 мМ натрий-фосфатный буфер, pH 8,0, если не указано иное.Тепловой Эксперименты по разворачиванию проводились путем нагрева со скоростью 3 мин / ° C.

Результаты и обсуждение

Массы и стехиометрия MtGimα, MtGimβ и MtGimC.

Масс-спектры двух изолированных субъединиц MtGimα (15,698,9 Да) и MtGimβ (13862,7 Да), полученная при нормальном рабочем давлении времяпролетный масс-спектрометр подтверждает их соответствующие массы, как показано в Таблице 1. Тогда как MtGimβ было обнаружено, что он является мономерным при всех используемых условиях МС, применение в условиях низкой энергии за счет увеличения давления в промежуточном области спектрометра (10) дает две серии пиков для MtGimα, соответствующий по массе мономеру MtGimα и другой к его димеру.Из этих двух димерная форма оказывается наиболее предпочтительный вид в самых мягких условиях, открытие, которое хорошо согласуется с результатами сшивки и гель-фильтрации эксперименты, показывающие, что MtGimα существует преимущественно в виде димера в решение (5).

Расчетные и измеренные массы неповрежденного комплекса и продукты диссоциации MtGim C

Очищенный MtGimC, проанализированный в условиях низкой энергии, дает серия зарядовых состояний, соответствующая массе 86 909.8 ± 17 Da (рис.1 a ). Эта масса соглашается скважина с замерами общей массы MtGimC по размеру исключения хроматографией (83,7 ± 8 кДа) (5) и согласуется только с одним возможная комбинация двух типов белковых субъединиц: гексамер содержащий две копии MtGimα и четыре копии MtGimβ (MtGimα ₂ MtGimβ ₄ ), что дает рост до расчетной массы 86 848,6 Да. Хотя в целом стехиометрию двух субъединиц можно определить с помощью седиментации равновесное центрифугирование, оно по-прежнему представляет собой сложную задачу. с использованием традиционных биохимических методов для устранения возможности микроскопические структурные неоднородности белковых комплексов присутствует в растворе, как видно в случае гетероолигомерных шаперонин TriC (17).Напротив, на основе точности Приведенные здесь данные МС указывают на возможность того, что гексамеры MtGimC содержат различная стехиометрия субъединиц может быть полностью исключена.

Диссоциация MtGimC, вызванная столкновением, из раствора при 15 мкМ концентрация в 10 мМ ацетате аммония при pH 8,0. и были записаны на том же образце с использованием конусных напряжений от 50 В до 150 В, как указано. a показывает серию состояний заряда неповрежденный комплекс.Увеличение конусного напряжения, как указано в b – d приводит к разрушению гексамера и наблюдение за пентамерным видом MtGimα ₂ MtGimβ ₃ . Соответственно, мономерный MtGimβ можно наблюдать на м / z значениях ниже 3000. В d дальнейшие продукты диссоциации присутствует при очень низкой интенсивности: мономерный MtGimα m / z 1,000–3,000 и олигомеры конституция α ₁ β ₄ , α ₁ β ₃ , α ₂ β ₂ и α ₁ β ₂ м / z 5 000–8 000.Давления 8,7 × 10 ⁻⁶ и 7,1 × 10 ⁻⁸ Па использовались в источнике и анализаторе, соответственно, и было приложено капиллярное напряжение 1650 В.

Расположение подразделений в MtGimC.

Для исследования четвертичной архитектуры неповрежденного комплекса и, в частности, чтобы оценить, взаимодействуют ли две субъединицы MtGimα непосредственно внутри MtGimC, мы частично разрушили комплекс внутри газовая фаза. Этот эксперимент основан на предыдущих исследованиях рибосом. и олигомерный молекулярный шаперон GroEL, которые показали, что полученные продукты диссоциации могут предоставить доказательства относительно расположение субъединиц внутри интактного комплекса (10, 11). Запуск из условий, оптимизированных для наблюдения за неповрежденным MtGimC, мы сначала диссоциировал комплекс за счет увеличения энергии столкновения, достигаемой за счет повышение напряжения конуса и поддержание давления в пределах массы постоянная спектрометра. Наиболее заметная серия пиков, индуцированных такой процесс происходит между м / z значениями 5000 и 8000 и соответствует по массе пентамеру MtGimα ₂ MtGimβ ₃ .На низком м / z значений, вторая серия пиков, соответствующий мономерному MtGimβ, можно увидеть (рис. b — d ). Дальнейшее увеличение конусного напряжения приводит к большей относительной интенсивности пиков, отнесенных к пентамер. Наблюдаемая потеря одной молекулы MtGimβ в качестве начальной стадия диссоциации предполагает, что эти субъединицы расположены в периферийные позиции в MtGimC, тем самым облегчая их селективное высвобождение при увеличении энергии столкновения.

В дополнение к пентамеру MtGimα ₂ MtGimβ ₃ , а количество продуктов диссоциации можно наблюдать при очень низкой интенсивности в этих спектрах (рис. 1 d ). Однако под высокой энергией условиях, использованных в этом эксперименте, возможность того, что субъединица перегруппировки могут происходить в газовой фазе, генерируя такие малоинтенсивные виды, полностью исключить нельзя. Эксперименты были поэтому выполняется, в котором как энергии столкновения, так и режимы давления в масс-спектрометре были выбраны для максимального увеличения Популяция малых олигомерных продуктов диссоциации (рис.2 а ). В этих условиях основные виды, наблюдаемые в масс-спектрах, можно отнести к отдельные субъединицы MtGimα и MtGimβ. Однако пики, соответствующие к ряду олигомерных видов, в том числе из тетрамера (MtGimα ₂ MtGimβ ₂ ), самый густонаселенный олигомер и два низкоинтенсивных тримера (MtGimα ₂ MtGimβ ₁ и MtGimα ₁ MtGimβ ₂ ). В отсутствие тримера (MtGimβ ₃ ) и наблюдение пиков, происходящих от димера MtGimα при интенсивностях составляет от 5 до 10% высоты пика MtGimβ (рис.2 b ) дают самосогласованный набор продуктов диссоциации, совместим с моделью, предложенной ранее для MtGimC. В этой модели Предполагается, что две субъединицы MtGimα образуют структурное ядро ​​около субъединицы MtGimβ организованы с образованием интактного MtGimC (рис. 2 с ) (5).

Низкомолекулярные продукты диссоциации MtGimC. ( a ) Диссоциация MtGimC после разведения 1: 25 в вода раствора пробы, использованная для получения спектров на рис.1. Расширение региона с 2000 до 5000 m / z демонстрирует наличие тетрамер, MtGimα ₂ MtGimβ ₂ , и два тримера, MtGimα ₂ MtGimβ ₁ и MtGimα ₁ MtGimβ ₂ . Капилляр и конус напряжения были установлены на 1750 В и 150 В соответственно, а давление 1,9 × 10 ⁻⁵ и 7,1 × 10 ⁻⁷ Па составляли записано в источнике и анализаторе. ( b ) Димер MtGimα образуется как продукт диссоциации MtGimC в условиях, когда сильно дестабилизируют комплекс.Данные были записаны на 1 мкМ образец в 10 мМ ацетате аммония, pH 8,0. Конусное и капиллярное напряжения 100 В и 1480 В соответственно, а анализатор давление 7,8 × 10 ^-8 Па. ( c ) Предлагаемая модель структуры MtGimC (5).

Термическая стабильность MtGimC.

As M. thermoautotrophicum — гипертермофил, выращивающий оптимально при 65 ° C, воздействие повышенных температур на структура MtGimC. Путем анализа температуры зависимость эллиптичности КД в дальнем УФ-диапазоне при 222 нм, изолированные Димер MtGimα оказался очень устойчивым к термической денатурации. (Рис.3 a ) со средней точкой перехода (значение T _м ) 78,1 ± 0,8 ° C для образца 2 мкМ. Напротив, изолированные Было обнаружено, что MtGimβ денатурирует при гораздо более низкой температуре (46,9 ± 1 ° C) (Рис.3 a ). Интересно, что термическое разворачивание Кривая гексамера MtGimC содержит две переходные области (рис.3 b ). Высокотемпературный переход зависит от белка концентрация, указывающая на диссоциацию олигомерных видов (18). Значения T _m этого перехода коррелируют именно с таковыми для разворачивания димера MtGimα при идентичные концентрации (рис. 3 c ). Напротив, T _м значение низкотемпературного перехода не не совпадают в точности с данными для любой из отдельных субъединиц. Однако в исследованном диапазоне концентраций этот переход оказался при значительно более высокой температуре, чем это зарегистрировано только для MtGimβ.И снова переход ознаменовал концентрационная зависимость, указывающая на диссоциацию олигомерного разновидность. Предположительно, это переход всего комплекс или результат диссоциации и разворачивания MtGimβ субъединицы, высвобождая ядро ​​MtGimα, которое впоследствии разворачивается на более высокая температура. Эта интерпретация хорошо согласуется с эксперименты по гель-фильтрации, проводимые при 20 ° C и 50 ° C, демонстрируя структурную целостность MtGimC на высшем температура (не показана).Причина искажения низкотемпературный разворачивающийся переход MtGimC из симметричной формы (Рис. 3 b ), однако, еще предстоит установить. Учитывая структурная целостность MtGimC при высокой температуре, такое поведение может хорошо указывают на частичную потерю структурной компактности в неповрежденном комплекс по отоплению. Для сравнения: структурная пластичность неразрушенные олигомеры были продемонстрированы в функции нескольких комплексы молекулярных шаперонов, включая GroEL (19, 20), GroES (21, 22), и α-кристаллин (23).

Термическое разворачивание MtGimα, MtGimβ и MtGimC, контролируемое CD в 222 нм. ( a ) Термическое разворачивание изолированных MtGimα и Субъединицы MtGimβ отображаются как фракции, сложенные и подогнанные к двухуровневый переход, как описано ранее (26). Последующее охлаждение нагретых образцов приводили к кривым одинаковой формы и соответствовали аналогичным значениям T _m (не показаны). ( b ) Термическое разворачивание 1,2 мкМ MtGimC показано как температурная зависимость эллиптичности средней массы остатка (Θ _MRW ) на 222 нм.Изменение концентрации KCl от 0 M (1), 0,2 M (2), 0,4 M (3) и 0,6 M (4) смещает Т _м значения денатурации MtGimC до более высоких температур. Тогда как высокотемпературный переход можно описать моделью двух состояний, середина искаженного низкотемпературного перехода составляла определяется аппроксимационными линиями, соответствующими температуре зависимости Θ _MRW свернутого комплекса (F) и промежуточный (I), как показано на графике. Температура, при которой наблюдается Θ _MRW пересекает третью линию (M), представляющую Средняя точка между F и I использовалась в качестве температуры денатурации.В искаженная форма и значения T _m не изменились при использовании Tris- или буферные системы на основе ацетата аммония, или более медленные скорости нагрева. В низкотемпературный переход необратим, так как охлаждение производит кривая рефолдинга, характерная для кооперативного процесса и, относительная к разворачивающемуся переходу уменьшено значение T _м (48,3 ± 1,5 ° С). ( c ) Концентрационная зависимость середины переходов кривых плавления MtGimC и MtGimα в отсутствие соли.Значения T _m как нижнего, так и нижнего высокотемпературный переход T _м значения MtGimC равны концентрационно-зависимый (▾, низкотемпературный переход; ▿, высокотемпературный переход). Концентрация зависимость высокотемпературного перехода соответствует зависимости MtGimα, □.

Для исследования термостабильности комплекса методом МС был проведен термический Создано устройство нанопотока, позволяющее надежно регулировать температура раствора, содержащего MtGimC.Как нанопоток было подсчитано, что капли содержат в среднем одну молекулу на капля (24), возможна повторная сборка комплекса из его диссоциированные субъединицы из-за испарительного охлаждения процесс ионизации (25) можно эффективно не учитывать. При температурах ниже 60 ° C на MtGimC приходится более 50% всего ионного интенсивность, свидетельствующая о том, что более половины комплекса остается нетронутым в этих условиях (рис. 4). На при повышении температуры до 70 ° C относительная интенсивность сигнал, приписываемый интактному MtGimC, уменьшается, а сигнал продуктов диссоциации увеличивается.При температуре от 50 до 70 ° C, все еще ниже температуры плавления димера MtGimα, MtGimα проявляется как мономер и димер, предположительно отражая устойчивость последнего в решении (5). MtGimβ наблюдается как мономер, а также как димер и тример. Последние, вероятно, представляют собой агрегированные или неправильно свернутые виды, происходящие из денатурированных MtGimβ присутствует при высоких температурах. Поэтому данные CD и MS поддерживают модель, в которой ассоциация MtGimα с MtGimβ с формы MtGimC стабилизирует комплекс субъединиц MtGimβ против термическая денатурация.

Термическая диссоциация MtGimC с помощью МС. Спектры MtGimC были записаны. при температурах, указанных на графике, с использованием аликвот из такое же решение с идентичными настройками спектрометра. Пики соответствующие до неповрежденного MtGimC появляются от 4000 до 5000 m / z и представляют собой наиболее интенсивные ряды зарядовых состояний в спектрах, записанных при низкой температуре. От при повышении температуры MtGimC диссоциирует в растворе, образуя различных видов, включая MtGimβ, доминирующую серию на м / z значения ниже 2000, и α ₂ , β ₂ , β ₃ между м / z 2000 и 5000. Последние два виды наблюдались при температурах выше Т _м г. MtGimβ и, по-видимому, представляют собой агрегированные виды. Для каждого спектра MtGimC (12 мкМ) помещали в основной корпус боросиликатного стекла. капилляра и инкубируют в терморегулируемом зонде. Зонд включает термоэлектрическое устройство с платиновым резистивным датчиком и прямое релейное управление с обратной связью с точностью до ± 0,1 ° C (M.A.T., неопубликованная работа). Каждый образец был уравновешен желаемым температура в течение 15 мин.По истечении этого времени подходящее противодавление было прикладывается для подачи образца на кончик капилляра, а напряжение применяется для начала процесса электрораспыления нанопотока. Температура в источнике нанопотока, а противоточный сушильный газ поддерживается таким же, как и решение, достигается за счет потока газообразный азот (140 л / ч) через коллектор с терморегулятором. Капиллярные и конусные напряжения были установлены на 1400 В и 120 В, а давление 2,35 × 10 ^-8 Па было зафиксировано в анализатор.Каждый спектр на рисунке представляет собой сумму 10 Шаги сбора данных 5 с. ( Врезка ) Доля комплексное присутствие рассчитывалось из суммы интенсивности ионов, отнесенных к комплексу, относительно общего количества ионов в каждом спектров. Это значение выражается в процентном содержании иона. интенсивность комплекса при 22 ° C, установленная на 100% на основе его популяция в идеальных условиях, как показано на рис. 1 а .

Обнаружение, что эксперименты по термической диссоциации приводят к полному нарушение комплекса без потери отдельных субъединиц, предполагает высокую степень структурной кооперативности MtGimC.Такой кооперативность имеет значение с точки зрения населения в vivo интактного MtGimC относительно его изолированных субъединиц. В в частности, это указывает на то, что гексамер, вероятно, будет единственным виды, присутствующие в условиях, когда комплекс стабилен. Решение известны такие условия, как ионная сила или присутствие сахаридов существенно изменить стабильность белка внутри клетки относительно пробирки (18). Выбирая ионную силу как единицу репрезентативного фактора, мы исследовали влияние увеличения от концентрации хлорида калия на стабильность MtGimC (рис.3 b ). Добавление, например, 0,2 М KCl сдвигает средняя точка перехода от 58,3 ± 1,2 ° C до 68,2 ± 1,2 ° C, значение выше оптимальной температуры роста М. Ашхабад . Взятые вместе, эти данные ясно указывают на то, что что MtGimα ₂ MtGimβ ₄ гексамер является стабильной структурной единицей в условиях, которые могут имеет отношение к функционированию этого комплекса in vivo .

Наблюдение за сборкой MtGimC в реальном времени.

В дополнение к исследованиям термической диссоциации MtGimC мы также исследовали сборку комплекса из его составных частей. субъединицы. Для этого растворы, содержащие изолированные субъединицы, были смешивали при 37 ° C с получением молярного отношения 1: 2 MtGimα / MtGimβ и были немедленно проанализированы. Масс-спектры, записанные в разное время точек, использовались для отслеживания изменений массы в зависимости от времени. различных видов (рис. 5). Первое спектр был записан через 80 с, необходимое эффективное мертвое время в процедуре смешивания и ввода пробы.В настоящее время, очевидны ряды зарядовых состояний, соответствующие по массе MtGimβ мономеру и мономеру и димеру MtGimα. В записанных спектрах 130 с после этапа смешивания, однако, серия широких высоких m / z пиков можно увидеть с молекулярной массой соответствующий неповрежденному MtGimC. После 205 с только очень низкий пики интенсивности найдены для MtGimα, а пики отнесены к неповрежденный комплекс теперь намного выше по интенсивности, чем назначенный MtGimβ.Спустя 265 с спектр показывает, что основные виды в растворе присутствует MtGimC. Действительно, никакие другие виды не обнаруживаются. в любом из спектров, открытие, которое подразумевает, что сборка Комплекс MtGimC не продвигается через стабильные промежуточные соединения, и это такие частицы, если они образуются, быстро превращаются в гексамер.

Масс-спектры, записанные для смеси MtGimβ / MtGimα 2: 1 при температуре различные временные интервалы после смешивания двух субъединиц. Каждый след представляет собой среднее значение пяти 5-секундных шагов сбора данных и было нормализовано согласно общему количеству ионов в каждом спектре.В капиллярное напряжение было установлено на 1400 В с конусным напряжением 90 В. давление анализатора было записано как 1,3 × 10 ⁻⁷ Па. эксперимент был повторен пять раз, чтобы подтвердить воспроизводимость процесс сборки.

Выводы

MtGimC представляет собой гексамер, состоящий из двух белковых субъединиц, представляющих два класса белков GIM. Класс α состоит из двух эукариотических членов. (5), результат, который совпадает с наблюдением, что MtGimC содержит два белковые субъединицы этого класса.Соответственно, класс β есть представлен четырьмя белками у эукариот (5) и встречается в виде четырех подразделений внутри MtGimC, утверждая, что базовая архитектура GimC эволюционно сохраненный. Наблюдаемая картина продуктов диссоциации генерируется MS, согласуется с моделью для MtGimC, в которой MtGimα образует димерное ядро ​​с двумя субъединицами MtGimβ, связанными с каждым MtGimα субъединица (рис.2 c ) (5).

Высокая стабильность димера MtGimα и наличие четырех α / β контакты, но только одно взаимодействие α / α оба согласуются с экспериментальным наблюдением, что потеря одна субъединица MtGimβ является первичной и действительно доминирующей диссоциацией шаг.На основании его термической стабильности, выявленной с помощью CD и MS, мы пришли к выводу, что интактный гексамер MtGimC, скорее всего, представляет один структурная единица внутри термофильного хозяина M. Ашхабад . Сборка MtGimC из изолированных субъединиц в гексамерный комплекс согласуется с кооперативным процессом что отражает очень благоприятную ассоциацию шести белковых субъединиц. В более общем плане, это исследование подчеркивает способность МС исследовать не только стехиометрия мультипротеиновых комплексов, но также пути сборка и разборка взаимодействующих субъединиц в макромолекулярных комплексы.

Благодарности

Эта работа является вкладом Оксфордского центра молекулярных исследований. Наук, которая поддерживается Биотехнологией и биологической Совет по научным исследованиям, Совет по медицинским исследованиям и инженерное дело и Совет по исследованиям в области физических наук. М.Ф. спасибо Сесил Роудс Доверие к стипендии. МАТ. и A.A.R. благодарны за поддержку от CBD и Zeneca Pharmaceuticals, соответственно. M.R.L. признает стипендия Европейской организации молекулярной биологии.Исследование C.M.D. частично поддерживается Wellcome Trust. C.V.R. Королевский Научный сотрудник Университета Общества.

Сноски

• ↵ † М.Ф. и M.A.T. внес равный вклад в эту работу.

• ↵§ Кому следует адресовать запросы на перепечатку. Электронное письмо: Кэролр bioch.ox.ac.uk.

• Эта статья была отправлена напрямую (дорожка II) к Офис PNAS.

• См. Комментарий на странице 14025.

• Статья перед печатью опубликована в сети: Proc. Natl. Акад. Sci. США , 10.1073 / pnas.240326597.

• Статья и дата публикации находятся на www.pnas.org/cgi/doi/10.1073/pnas.240326597

• Авторские права © 2000, Национальная академия наук. Дом и кухня

  Разборные кухонные ножницы из нержавеющей стали

  Маленькие и средние рыбы плавают стайкой, так что вы можете выловить много рыбы.

  В такой ситуации трудно использовать нож для лечения по одному.

  Мы рекомендуем кухонные ножницы Select 100.

  Отличительная форма клинка

  Самая уникальная особенность этих ножниц — лезвия двух разных размеров.

  Одна сторона острая, поэтому вы можете вставить его в небольшие отверстия. Отлично подходит для ловли мелкой рыбы.

  Лезвие также имеет зазубренное лезвие, что снижает вероятность скольжения и ловли рыбы.

  Драгоценная толщина клинка

  При разделке мелкой рыбы и обращении с ней можно порезать кожу и кости.

  Когда вы это делаете, трудно думать, что оно недостаточно прочное, если у вас тонкое лезвие.

  Таким образом, эти ножницы имеют нужную толщину, поэтому вам не о чем беспокоиться.

  Легко наносимая ручка

  Это тоже ключевая особенность.

  Маленькие ручки не позволяют использовать большее усилие и не подходят для работы с рыбой.

  Вот почему кухонные ножницы SELECT100 имеют форму ручки, которая хорошо ложится в руку даже взрослым мужчинам, что делает их чрезвычайно простыми в использовании.