Сделать кляксу из трубочки на листок: техники рисования, конспект занятия + фото и видео — РОСТОВСКИЙ ЦЕНТР ПОМОЩИ ДЕТЯМ № 7

Содержание

Кляксография. Техника рисования — Кляксография — Мастерим вместе — Каталог статей

Маленькие дети любят оставлять на бумаге кляксы. Родители, недооценивая «шедевры» собственных детей, избавляются от непонятных рисунков. Но, оказывается, из оставленных клякс можно создать уникальный рисунок. Существует даже такая техника рисования — кляксография.

Кляксография относится к силуэтному искусству, но история возникновения фигуративной росписи восходит еще к Древней Греции. Изображения на амфорах раскрывают сцены мифологии, олимпийских игр и жизни богов Олимпа. Но наиболее популярным этот вид искусства стал в 18-19 веке. Многие художники начали работать в этой технике и создали огромное количество работ в этой технике. Такой была история возникновения техники рисования — кляксографии.

Рисунки, выполненные в технике кляксография – это уникальный способ заинтересовать детей рисованием, вызвать у них желание научиться данному виду изобразительного искусства и самим вспомнить детское время. Способ абсолютно не сложный, но очень увлекательный, развивающий не только навыки и способности к рисованию, но и фантазию, смекалку, усидчивость. Кляксография – это, пожалуй, один из самых необычных способов в рисовании. Более того, его принято считать нетрадиционной техникой, как, впрочем, и многие другие, где используется необычный для этой цели материал.

При помощи кляксографии хорошо получаются разнообразные растения, деревья разных видов и кустарники.

Положительные стороны кляксографии

В последнее время, данный вид рисования стал очень популярен. Случайное пятно, появившееся на бумажном листе из-за неосторожности, может иметь неповторимую структуру. Как бы вам не хотелось, такой узор больше не повторить. Добавив немного фантазии и креативности мышления, любую кляксу можно превратить в предмет животное или выдуманное существо.

Данный вид деятельности не имеет абсолютно никаких ограничений в возрасте. То есть, могут заниматься, как дети, так и взрослые.

Кляксография техника рисования

Необходимый инструмент

Для создания уникального рисунка необходимо подготовить следующий материал:

  • Художественную кисть. Желательно использовать жесткие кисточки. Порой дети, чтобы изобразить кляксу большого размера прибегают к помощи зубной щетки.
  • Краски. В этом виде искусства применяют только жидкую акварель. Если под рукой нет подходящих красок, то можно просто развести имеющуюся акварель водой. Кстати, необходимой для рисунка консистенцией обладает разноцветная тушь. Ее также можно использовать при рисовании.
  • Картон или лист белой бумаги.
  • Емкость для воды.
  • Ватные палочки.
  • Влажная тряпочка. Используется для удаления загрязнения с рук.

Этапы творческого процесса

Итак, кляксография техника рисования. С чего начать? Если вы новичок в этой области, то первоначально следует определиться с темой будущего рисунка. Здесь крайне важно направить мыслительную деятельность в нужное русло, говоря другими словами, задать направление. Сделав кляксу на листе бумаги, включите фантазию и попробуйте увидеть в ней очертания какого-либо предмета или живого существа. Может быть, перед вами расположилась удивительная планета или живописный подводный мир.

Создать рисунок с помощью кляксографии можно несколькими способами.

Наиболее распространенный — капельный метод.

Здесь потребуется широкая, объемная кисть. Ее следует тщательно напитать краской, и затем, расположив ее над листком бумаги начать разбрызгивать акварель. Если вы хотите чтобы капли оросили небольшой участок, постучите кисточкой о палец или руку. Когда же кистью просто встряхивают, область разбрызгивания увеличивается. Для точечного нанесения краски используют пипетку. Кстати, с ее помощью можно создать кляксу большого размера изобразив, таким образом, к примеру, солнце. Чаще всего при помощи такого способа кляксографии создают пейзажи.

 Во втором способе кляксографии используют метод растекания.

Для этого в угол листа с помощью кисти наносят большую кляксу. Важно, краска должна быть очень жидкой. Затем с помощью питьевой трубочки начинают раздувать краску по поверхности бумаги. Желательно направлять акварель в разные стороны. Теперь нужно присмотреться к полученному рисунку и дорисовать детали.

       Кляксография поможет детям поэкспериментировать с красками и весело провести время. В процессе рисования картинки, в которой используется техника кляксография, у  детей:

  • развивается глазомер и координация рук
  • развивается фантазия, творческое виденье и воображение,
  • отрабатываются навыки работы с красками, кистями,
  • дети учат передавать силуэты людей, растений и животных,
  • развивается старательность, внимательность, аккуратность.

Кляксы для детей. Игры с акварелью (Спецэффекты и «тайные фокусы»). Урок рисования: Кляксография

Энциклопедия клякс.

Клякса-натура тонкая гибкая и разнообразная.

Создать кляксу можно большим количеством способов.

Классическая круглая.

Капля капает с кисти расположенной вертикально над бумагой. Если слегка тряхнуть при этом рукой в вертикальной плоскости скорость падения туши на бумагу увеличится. От удара клякса сделается ажурной и приветливой. Чем больше кисть и больше капля, тем дороднее пятно.

Размашистая.

Если набрать на кисть тушь и стремительно махнуть ею над листом, двигая руку в горизонтальной плоскости, получим очень динамичную кляксу. Чем сильнее размах и больше лист, тем энергичнее пятно.

Подтёк.

Подтёк делаем так: после нанесения капли лист бумаги поднимаем вертикально. У капли совершенно естественно вырастают лапы и она стремиться утечь с листа.

Мохнатая.

Мохнатая клякса делается полусухой кистью. Если использовать плоскую синтетическую кисточку можно получить аккуратные пряди.

Если беличью, получим мягких пушистиков.

Симметричная.

Она делается так: складываем лист пополам. На одну из половин наносим кляксу. Закрываем её второй половинкой и прижимаем. Получившееся на развороте пятно сушим и пускаем в дело.

Живописная.

Если на стекло или другую гладкую поверхность капнуть тушь, а потом сверху прижать сверху лист гладкой бумаги получим пятно с разнообразными природными пейзажами. А они, как правило, очень живописны.

Витиеватая.

В тушь опускаем нитку. Помещаем её на одну половинку сложенного вдвое листа бумаги. Один кончик нити оставляем снаружи. Закрываем и двигаем нить внутри, потихоньку её вытягивая. Получаем изящную хрустальную кляксу.

Брызги.

Зубную щётку макаем в тушь и водим по любой ребристой поверхности над листом бумаги. Ребром может быть линейка, расчёска или даже крышечка от туши. С щетки на бумагу летит огромное количество мелких капелек (в том числе на всё вокруг включая наше лицо и руки).

Комета.

Если непросохшие пятнышки от набрызга размазать сухой кистью

получим стаю динамично спешащих клякс.

Ветвистая.

Если на классическую кляксу начать энергично дуть она станет обрастать веточками и в конце концов преобразуется либо в кустик, либо в дуб-колдун. Зависит от силы нашего дуновения.

Восковая.

Если нанести на лист бумаги восковой рисунок,

а сверху пройтись тушью получим сочетание рваных черно-белых пятен.

Ажурная.

На влажный гуашевый фон капнем тушью.

Получим ажурную кляксу с множеством ручек ножек и усиков.

Влажная.

По влажной поверхности листа, смоченного водой,

набрызгаем туши и получим кляксы с мягкими лепестками — щупальцами.

Соляная крапчатая.

Если на кляксу насыпать соли она сразу превратится в небо, а там глее упал кристаллик, образуется звёздочка. Подходит для рисования галактик.

Круглая с переливами.

Если в тушь добавить шампунь и выдуть на лист бумаги мыльный пузырь из этого раствора получим отменную круглую кляксу с ореолом мелких крапинок. Это в них пузырь превращается после того как лопнет. Однако ж нам он достанется во всей красе.

Рогатая.

Если подуть на этот лопнувший пузырь из трубочки получим кляксу с рожками.

Печатная.

Отпечаток можно сделать чем угодно.

Макнём в тушь палец и прижмём к бумаге. Мухе хочется в полёт!

Вот и получилась дюжина с хвостиком. Уверена, что есть ещё и другие.

Буду пополнять энциклопедию по мере познания удивительного мира диких клякс.

Надеюсь, кого-то вдохновит моя подборка!

Фантазию малышей безгранична, а вот владение техникой рисования чаще всего хромает. Именно кляксография может помочь детям рисовать даже то, что они рисовать совершенно не умеют. Малыши смогут дать волю своей фантазии и рисовать все, что подскажет им воображение. Детки смогут познакомиться с тем, что такое кляксография обычная, а еще бывает кляксография с трубочкой и кляксография с ниточкой.

Развивающие занятия для детей 3-5 лет (Кляксография)

Кляксография относится к силуэтному искусству, но история возникновения фигуративной росписи восходит еще к Древней Греции. Изображения на амфорах раскрывают сцены мифологии, олимпийских игр и жизни богов Олимпа. Но наиболее популярным этот вид искусства стал в 18-19 веке. Многие художники начали работать в этой технике и создали огромное количество работ в технике кляксографии. Такой была история возникновения такой техники рисования как кляксографии.

Но еще интересней, чем история кляксографии, являются занятия, где используется именно такая нетрадиционная техника рисования. Кляксография поможет детям поэкспериментировать с красками и весело провести время. Техника кляксографии состоит в использовании обычной капельки краски, в простонародье известной как кляксы. В процессе рисования у детей будут получаться очень неожиданные изображения, к которым можно будет нарисовать детали.

В процессе занятия в детском саду и рисования картинки, в которой используется техника кляксография, у детей:

  • развивается глазомер и координация рук
  • развивается фантазия, творческое виденье и воображение,
  • отрабатываются навыки работы с красками, кистями,
  • дети учат передавать силуэты людей, растений и животных,
  • развивается старательность, внимательность, аккуратность.

Акварель

Приведем в пример мастер-класс занятия, где будет использоваться кляксография для

рисования. Такой мастер-класс можно легко устроить для детей в детском саду, а рисунки малышей украсят группу или выставку.

Рисунок «Бабочка» при помощи акварели и кляксографии будет нарисовать очень просто. Просто согните листочек пополам и нанесите два крупных пятна акварельной краски на одну сторону листа около линии сгиба. Теперь согните листочек пополам. Когда вы раскроете листочек, у вас получатся очень красивые крылья бабочки с причудливыми узорами. Можно теперь дорисовать детали, такие как туловище, усики и рисунок готов. Такой мастер-класс легко использовать при проведении занятия для маленьких детей, так как такой способ рисования будет очень прост.

Карандаш

Конечно же, можно рисовать при помощи кляксографии и используя одновременно и краски и карандаши. Мы расскажем вам технику рисования при помощи трубочки. А этот раз мастер-класс будет посвящен тому, как нарисовать дерево.

Возьмите крупную кисточку и поставьте в уголке большую кляксу из коричневой акварельной краски. Теперь, возьмите полую трубочку для воды и начните раздувать краску в разных направлениях. У вас получатся веточки дерева. Пусть веточки просохнут, и тогда вы сможете взять карандаш и им дорисовать веточкам листья. Так дерево получится очень реалистичным.

Если у вас есть задумка нарисовать конкретное дерево, например, рябину, то есть хороший способ продолжить наш мастер-класс. Возьмите на занятия обычные палочки для ушей, они пригодятся для рисования ягодок рябины. Обмакните палочку в краску и нанесите аккуратную точку на бумагу. Это и будет ваша рябина, надеемся, вы помните, что дерево имеет плоды, которые растут кистями.

Мастер-класс. Выпуск 21 (Кляксография)

Брызги

Мы расскажем вам про еще один не менее интересный мастер-класс, которым можно разнообразить занятия для детей в детском саду. Научите детей кляксографии к технике брызг. Это будет очень красиво и весело.

Занятия и мастер-класс с использованием такой техники рисования нужно проводить, используя акварельную краску. Нужен чистый лист бумаги и краски с кисточкой. Наберите на кисть нужную краску и начните разбрызгивать краску, ударяя кисть о палец руки. На бумаге начнут опечатываться капли. При желании можно добавить несколько больших капель при помощи кисти. Рисунок будет готов тогда, когда вы сочтете это нужным.

Кляксография

Мастер — класс по рисованию (изучение различных техник рисования с детьми дошкольного возраста)

Мастер-класс. Нетрадиционная техника рисования — кляксография «Волшебные кляксы»

Мастер — класс рассчитан для родителей и воспитателей, а также детей дошкольного возраста — от 3 до 6 лет.

Назначение мастер — класса: Кляксография — это отличный способ весело и с пользой провести время, поэкспериментировать с красками, создать необычные образы. Раздувая кляксы нельзя точно предугадать, как они разойдутся, перельются друг в друга, и каков будет окончательный результат… Такое занятие будет интересно и взрослым и детям. Причем не только интересно — но и полезно: например, в качестве артикуляционной гимнастики. Также рисование выдуванием через соломинку укрепляет здоровье и силу легких и дыхательной системы (что особенно полезно при кашле).

Хочется отметить, что с помощью данного вида рисования хорошо, получается, изображать различные деревья (получаются замысловатые стволы, ветки и т.д.). Попробуйте, результат Вам понравится!

Цель : Познакомить детей с таким способом изображения, как кляксография, показать её выразительные возможности

Задачи:

Вызвать интерес к «оживлению» необычных форм (клякс), учить дорисовывать детали объектов (клякс), для придания им законченности и сходства с реальными образами; учить видеть необычное в обычном;

Развивать образное мышление, гибкость мышления, восприятие, воображение, фантазию, интерес к творческой деятельности; воспитывать аккуратность в рисовании красками.

Материалы для работы:

Альбомные листы;

Гуашь или акварель;

Крупная кисть;

Трубочка для напитков или можно использовать пипетку;

Вода в баночке;

Влажная тряпочка — вытирать руки, если запачкаются;

Ватные палочки;

Пластилин.

Кляксографию можно совмещать с разными техниками изобразительного искусства, такими как монотипия, аппликация и другими. Некоторые из них и представлены в данном мастер — классе.

Этот способ рисования «кляксами» можно использовать в работе с детьми 3-4 лет и старше.

Макаем кисть в разведенную краску и брызгаем на лист бумаги. Чем гуще краска — тем насыщеннее цвет, но труднее она выдувается.

Берем трубочку, и дуем через нее на разноцветные капли краски, они превращаются в кляксы. При этом лист бумаги можно поворачивать — кляксы получаются ещё интереснее!

Кляксография с использованием ватных палочек

С помощью крупной кисти ставим кляксу в уголке листа.

С помощью трубочки раздуваем краску в разных направлениях. Получилось вот такое дерево!

Немного подумав, это дерево мне напомнило рябину, одиноко растущую на склоне. С помощью ватных палочек подрисовываем ягоды и листья.

Оформляем рамку также с помощью ватной палочки. Именно о такой рябине, возможно, и написала стихотворение «Рябина» Ирина Токмакова.

Красненькую ягоду

Мне дала рябина.

Думал я, что сладкую,

А она — как хина.

То ли эта ягодка

Просто недозрела,

То ль рябина хитрая

Подшутить хотела?

Кляксография с использованием фломастера

Также как и в предыдущих работах ставим кляксу и выдуваем с помощью трубочки ствол и ветки. А это что за дерево получилось? Конечно же, сосна!

С помощью зеленого фломастера дорисовываем иголки.

Сосна

Над жёлтой осыпью обрыва

Склонилась старая сосна,

Корнями голыми пугливо

Поводит по ветру она. (Тимофей Белозеров)

Украсив все веточки пышными иголочками, приступаем к оформлению полянки вокруг сосны. Наносим кляксы зеленого цвета и раздуваем с помощью трубочки. Получились стебельки цветов!

Дорисовываем на стебельках листья и цветы — одуванчики. Теперь одинокой сосне вовсе не скучно!

Кляксография + пластилинография

С помощью пластилина создаем морское дно: лепим ярких рыбок, морскую звезду, камешки.

Но чего — то не хватает в этом рисунке? Конечно же, морских водорослей! С помощью волшебных клякс и трубочки появляется и морская трава! Кляксы располагаются между камешек, и если краска слегка зайдет на пластилин, ничего страшного, его с легкостью можно подтереть тряпочкой и работа не будет испорчена.

Ну чем не морское дно! Дорисовываем пузырьки и рисунок готов!

Рыбка рыбку догоняла,

Рыбка хвостиком виляла,

Ткнулась в брюшко — Догнала!

— Эй, подружка! Как дела? (Т. Второва)

А этот способ рисования подойдёт для детей более старшего возраста (5 — 7 лет). Набираем краску на кисточку и сбрызгиваем на лист бумаги. С помощью трубочки выдуваем волшебные кляксы. А теперь самый ответственный момент — нужно включить своё воображение!

В каждой кляксе

Кто-то есть,

Если в кляксу

Кистью влезть.

В этой кляксе —

Кот с хвостом,

Под хвостом —

Река с мостом,

На мосту —

Чудак с чудачкой.

Под мостом —

Судак с судачкой.

Рисунок нужно рассмотреть с разных сторон и только потом дорисовать отдельные детали, чтобы образ стал более узнаваем.

Кляксография + монотопия

Заранее готовится фон с помощью техники — монотопия. На высохший слой наносятся кляксы разного цвета и выдуваются с помощью трубочки.

За рощею в речку упала Звезда.

Бегом я отправилась сразу туда!

Она не разбилась — лежала на дне!

А, может быть, это привиделось мне? (Т. Гетте)

Вот лишь малая часть того, что можно выполнить с помощью « волшебных клякс» — кляксографии. А с какими ещё техниками изобразительного искусства можно совмещать Кляксографию — это подскажет Ваша фантазия!

Рисунки из клякс — отличная идея, которая может разнообразить ваше с ребенком творчество. Ее нам подсказал талантливый питерский художник Сергей Рублев. Для Галки-Игралки Сергей подготовил небольшой мастер-класс, который позволит вам с малышом создать свою необычную (и наверняка, не одну) картину из кляксы. Попробуйте, это совсем несложно, а результат может быть очень эффектным.

Сначала небольшая предыстория. Прошлым летом я много времени проводил в компании своего племянника Марка, которому на тот момент было 4 года. Когда мы в очередной раз искали, чем бы заняться, я вспомнил об акварельных кляксах, и мы взялись за дело. И так увлеклись, что за пару часов у нас получилось около 50 клякс. А Марка не так-то просто чем-то заинтересовать, тем более надолго!

Позже, делая уборку в шкафу, я наткнулся на наши художества и решил их дорисовать с помощью туши. Так из клякс получилась серия городских и морских пейзажей, а я после нескольких лет работы и рисования на компьютере снова влюбился в акварель.

Хотите тоже попробовать создать свой маленький шедевр из кляксы? Это будет интересно деткам (да и взрослым) самых разных возрастов (Прим.ред.: с малышами мы используем прием «из руки в руку» ; также это может быть прекрасной идеей для маминого творчества ). Технология достаточно простая, а материалы для творчества наверняка найдутся у вас дома.

1. Нам понадобятся акварельные краски, достаточно 6-12 цветов. Бумага может быть любая, например, мы с племянником рисовали на обычной офисной. Кисти лучше всего взять большие, ими легче и быстрее закрашивать лист. Также пригодятся банка с водой и тряпочка или бумажные полотенца.

2. Листы бумаги перед рисованием складываем пополам: на одной стороне мы будем рисовать, на другой получится отпечаток.

3. Смачиваем кисть водой и берем краску. Воды должно быть достаточно, чтобы цветовые пятна могли смешиваться на бумаге, тогда получится красивый переход между цветами. Рекомендую использовать не больше 3-4 цветов, тогда пятна получатся яркими и насыщенными и не рискуют превратиться в грязно-серые.

4. Когда одна сторона листа раскрашена, можно складывать его пополам.

5. Разглаживаем сложенный лист, чтобы отпечаток получился более четкий и яркий.

6. Клякса готова. Уберем ее пока в сторону, чтобы подсыхала, а пока можно делать следующую.

7. Когда клякса высохла, мы можем дорисовать ее фломастерами, карандашами и гелевой ручкой.

Как же «оживить» нашу кляксу? Сюжет можно продумать заранее или дофантазировать, уже когда клякса будет готова. В первом случае это может быть цветок, бабочка, солнышко или сердце (кстати, интересная идея для валентинки) — что-то симметричное. Тогда вы просто наносите половинку желаемого рисунка на половину листа.


Я делаю новый арт-альбом со своими фотографиями. Самая первая страничка — про беззаботное детство и солнечное лето. В этой записи я выложила не только фото странички, но и небольшой МК «Как сделать кляксу» .

Как же приятно ставить кляксы, особенно яркие! Так приятно, что трудно остановиться, но нужно сделать это вовремя, пока клякс не станет слишком много 🙂

Я достала свои детские акварельные краски и начала создавать творческий беспорядок. Затем я применила созданный фон для странички в альбоме. С помощью штампов добавила надпись «Лето», а также стрекозу и пчелку.

Сложно ли делать кляксы? Нет, это доступно каждому. Сложно поставить кляксу в нужном месте!

Предлагаю вашему вниманию краткий МК «Как сделать кляксу» :

  1. Вам понадобится: бумага для акварели, акварельные краски, кусочек марли и вода.
  2. Из марли сделать комочек, намочить его и обмакнуть в краску.
  3. Бросить марлевый комочек на бумагу.
  4. Можно немного нажать на марлю, прежде чем поднимать ее с бумаги, чтобы клякса получилась более жирная.

Кляксография с трубочкой. Осеннее дерево. Программа краткосрочной образовательной практики для детей старшего возраста (три встречи)

Муниципальное автономное дошкольное образовательное учреждение

«Центр развития ребенка — детский сад № 35»

Рассмотрена Утверждена

на Педагогическом совете Приказ №

Протокол № от « » г.

от « » 2020 г. заведующий ___________/

Е. И. Гарбулева

Кляксография с трубочкой. Осеннее дерево.

Программа краткосрочной образовательной практики

для детей старшего возраста

(три встречи)

Автор: воспитатель высшей квалификационной категории

Шабалина С.А.

Пермь 2020 г.

Аннотация для родителей.

Предлагаем вашему ребенку посетить практикурисование кляксами. Эта практика идеально подходит для детей, так как не требует особых навыков, задатков и талантов.  Ребенок научится рисовать осеннее дерево, раздувая кляксы через трубочку. Помимо этого, работа с трубочкой развивает легкие, что является лучшей профилактикой кашля и бронхита.

Цель:создание осеннего дерева в технике кляксография с трубочкой.

Задачи:

Познакомить детей с одним из видов нетрадиционной техники рисования «Кляксография» — рисование выдуванием через трубочку.

Научить создавать дерево коктельной трубочкой, выдувая кляксу снизу вверх в разные направления так, чтобы ее конец не касался ни пятна, ни бумаги.

Учить дорисовывать листики гуашью способом примакивания кисти к листу бумаги.

Показать новые способы получения абстрактных изображений – клякс.

Развивать у дошкольников фантазию и воображение.

Количество часов – 3

Максимальное количество участников – 8

Оборудование и материалы: палитра, акварельные краски, гуашь, баночки с водой, кисточки, коктейльные трубочки, белая бумага, образцы осенних деревьев, картины художников, выполненные разными материалами, иллюстрации деревьев в разное время года, дырокол, цветная ленточка, магнитофон, аудиозапись «Звуки природы», сюрпризный момент — карточка Клякса.

Предполагаемые результаты: дошкольники умеют рисовать «Осеннее дерево» в технике кляксография, знают, что такое кляксография, продолжают проявлять себя в данном виде деятельности: делятся своим опытом с друзьями и близкими.

Тематический план встреч.

№ п/п

Тематика

Содержание

«Чудесные превращения кляксы»

Беседа «Что такое кляксография». Уточнение знаний детей о кляксах. Познакомить детей с разнообразием клякс, обсудить, что такое пятно и что из него может получиться. Поэкспериментировать с красками, создать необычные образы.

«Дерево»

Рассматриваем иллюстрации деревьев в разное время года, объясняем ход работы, выдуваем ствол дерева через трубочку снизу вверх в разные направления так, чтобы ее конец не касался ни пятна, ни бумаги. Когда клякса разделится на несколько веточек – выдуваем их по отдельности в нужном направлении. Для получения более мелких веточек каждую большую ветку выдуваем быстрыми движениями трубочки вправо – влево, вверх- вниз.

«Цветущее дерево»

Рассматриваем осенние деревья. Оформляем рисунок, дорисовываем листики гуашью способом примакивания кисти к листу бумаги. Выставка детских работ.

Встреча 1

«Чудесные превращения кляксы»

Сегодня мы с вами погрузимся в мир фантазии и воображения. Ребята, как вы думаете: «Что такое клякса?» (ответы детей) «Как она рождается?» Да, вы правы – это след, пятно оставленное краской. В понимании многих она ассоциируется с неаккуратностью и неряшливостью. А вот одна из нетрадиционных техник рисования может помочь вам увидеть обратное.

Она так и называется- кляксография — рисование кляксами, пятнами, каплями, в которых необходимо разглядеть определенный образ, подключив фантазию и воображение.

Кляксография получила свое развитие с конца 19 века, когда известные художники начали пользоваться таким приемом. Они ставили на полотне красочные пятна и дополняли их так, чтобы получался необычный образ.

Ребята, подумайте, во что могут превратиться кляксы? (Ответы детей самые разные.)

— А можно ли с помощью кляксы получить какое-либо изображение? (Да.)

— Какими материалами приходится рисовать художнику? (Красками, карандашами, мелками, углем, фломастерами)

— Посмотрите, какие рисунки получаются у него, непохожие друг на друга (показ рисунков, выполненных различными художественными материалами).

— Чтобы нарисовать такие работы, художнику пришлось потрудиться не один день, а помогала ему.

— Попробуйте отгадать загадку:

«Краска с кисточкой дружила,

Но однажды так случилось:

Что капля на листок упала-

Это (клякса)…… прибежала»

— Показ карточки Кляксы.

— Действительно, Клякса. Ты что здесь делаешь? Уж не хочешь ли ты сказать, что тоже умеешь рисовать? Ребята, Клякса сказала мне, что она нарисовала все эти замечательные картины.

— Вам понравились эти работы? (Да.)

Я предлагаю вам поэкспериментировать. На столе лежат листы бумаги и набор акварельных красок.

— Поставим на лист бумаги большую кляксу (жидкая краска) и осторожно подуем на каплю. Побежала она вверх, оставляя за собой след. Повернем лист и снова подуем. А можно сделать еще одну, но другого цвета. Пусть встретятся. Клякса прыгает и скачет по листочку словно мячик, вправо – влево наклонилась, снова в лужу превратилась. Вопросы к детям: «На что это похоже твоя клякса?» « А что тебе это напоминает?»

Какие рисунки кажутся вам самыми интересными, яркими? (Дети обмениваются мнениями.) Теперь сделаем из рисунков – клякс волшебную книгу. (Скрепляем листы с помощью дырокола и цветной нити.)

Встреча 2

«Дерево»

Ребята посмотрите, что у вас лежит на столе? (коктельные трубочки, кисточки, акварельные краски)

-А вот, что именно мы будем рисовать, вы узнаете, отгадав загадку:

 Весной веселит,

Летом холодит,

Осенью питает,

Зимой согревает. (Дерево.)

Проверим, правильно ли вы отгадали! (Детям показываются иллюстрации, на которых изображено одно и то же дерево в разное время года). Правильно отгадали.

 — Объясните, как дерево весной веселит?

Дети: Появляются зеленые листочки.

 — Как летом холодит дерево?

Дети: Под деревом в жару прохладно, тень.

— Как осенью дерево питает?

Дети: На деревьях созревают плоды: яблоки, груши.

— Как вы понимаете, что дерево зимой согревает?

Дети: печки топят поленьями. 
— Сравните их. Чем они отличаются?
— Как вы думаете, почему они такие разные? (Деревья по-разному выглядят в разное время года.)

-Как выглядит дерево осенью? (на нем появляются разноцветные листочки).

-Посмотрите на предметы и скажите, с помощью каких из них мы можем нарисовать ствол и ветки? (Предположение детей). 
— Мы с вами настоящие волшебники, поэтому попробуем изобразить осеннее дерево без кисти и карандаша. Мы будем использовать трубочку, воздух.

Но  сначала я хочу показать вам иллюстрации знаменитых художников, которые использовали этот метод рисования в своих работах. Это творчество Эрика Булатова и Олега Васильева (показ иллюстраций из сказки «Золушка»).

 — Как вы, думаете, что помогло этим художникам создать образ дремучего леса?

— Правильно! Кляксы!

— Кляксы бывают разные: страшные и милые, злые и добрые. Все зависит от фантазии художника.

Теперь и мы с вами попробуем нарисовать дерево с помощью трубочки, воздуха и кляксы.

Сначала разведем на палитре коричневую краску с водой. Возьмем кисточкой краску и сделаем кляксу на том месте, где будет начинаться ствол дерева. С помощью трубочки дуем на кляксу, чтобы ее конец не касался ни бумаги, не краски. При необходимости лист можно поворачивать, создавая ствол. Когда клякса разделится на несколько веточек, выдуваем их по отдельности в нужном направлении. Для получения более мелких веточек каждую большую ветку выдуваем быстрым движением трубочки вправо – влево, вверх- вниз.

— Вы просто настоящие волшебники! Смогли нарисовать стволы деревьев.

На следующей встрече, наше дерево преобразится. До встречи.

Встреча 3.

«Цветущее дерево»

Повязала осень пестрый фартук

И ведерко с красками взяла.

Ранним утром, проходя по парку,

Листья позолотой обвела.

Сегодня мы с вами будем продолжать рисовать наше осеннее дерево, возьмем кисточки и будем творить чудеса. Посмотрите, каким цветом мы будем рисовать листья (дети называют цвета гуаши, который стоит на столе) желтый, золотой, оранжевый, красный.

Сейчас я покажу, как мы будем рисовать листочки. Беру кисть, опускаю ее в краску. Прикладываю ворс кисти к листу и сразу отрываю. Прикладываю – отрываю.

Давайте вспомним, как правильно держать кисть, как убрать лишнюю воду, набирать краску и промывать кисть.(ответы детей) Приступили к работе. По ходу давать рекомендации, советы.

Дети рисуют под музыку «Звуки природы»

Вот и готовы наши деревья, яркие, нарядные, красивые!

Просмотр детских рисунков проводится с заданием выбора выразительных образов: самое необычное, яркое, нарядное, веселое дерево. Отмечается реалистичность изображения. По окончании практики – выставка  получившихся работ.

.

Литература.

1.Галанов А.С., Корнилова С.Н., Куликова С.Л.. Занятия с дошкольниками по изобразительному искусству. – М: ТЦ «Сфера», 2000. – 80с.

 2. Колль М.-Э. Дошкольное творчество, пер. с англ. Бакушева Е.А. – Мн: ООО «Попурри», 2005. – 256с.

 3. Фатеева А.А. Рисуем без кисточки. – Ярославль: Академия развития, 2006. – 96с.

 4. Соломенникова О.А. Радость творчества. Развитие художественного творчества детей 5-7 лет. – Москва, 2001.

 5. Доронова Т.Н. Изобразительная деятельность и эстетическое развитие дошкольников: методическое пособие для воспитателей дошкольных образовательных учреждений. – М. Просвещение, 2006. – 192с. 

6. Казанова Р.Г., Сайганова Т.И., Седова Е.М. Рисование с детьми дошкольного возраста: Нетрадиционные техники, планирование, конспекты занятий. – М: ТЦ «Сфера», 2004 – 128с.

 7. Лыкова И.А. Изобразительная деятельность в детском саду. – М: «Карапуз – Дидактика», 2006. – 108с.

Адрес публикации: https://www.prodlenka.org/metodicheskie-razrabotki/429887-kljaksografija-s-trubochkoj-osennee-derevo-pr

техники рисования, конспект занятия + фото и видео

Дата: 9 апреля 2018 Автор: Лариса Морозова Рубрика: Для дошкольников

Дошкольный возраст — самое подходящее время для развития творческих способностей ребёнка. Разнообразить изобразительную деятельность, сделать её более увлекательной помогут нетрадиционные техники рисования, в частности, кляксография. Для дошкольников это способ выразить свою личность, проявить фантазию, выплеснуть на бумагу накопившиеся эмоции.

Особенности организации занятий по кляксографии в детском саду

Кляксография — это рисование пятнами. Суть данной нетрадиционной техники заключается в том, чтобы разглядеть в кляксе какой-то образ и дополнить его деталями. Таким образом, ребёнку не требуется для рисования особых навыков — нужно только включить фантазию.

Первый шаг в кляксографии — это идея. Именно воображение юного художника сделает кляксу доброй или злой, милой или страшной. Например, одно и то же чёрное пятно можно превратить в милого спящего котёнка, дорисовав ему усики, лапки и хвостик, или же во взъерошенную любопытную ворону. Ручеёк краски от кляксы иногда убегает в угол листа — изображение получается похожим на жирафа с длинной шеей. Если же струйка пойдёт вниз, то на картинке вырисовывается длинноногий страус. Немного поработав кисточкой, можно создать диковинное сказочное существо, которое никто никогда не видел, и наделить его своим неповторимым характером.

Занятие кляксографией позволяет ребёнку весело провести время, поскольку, раздувая пятно, никогда нельзя предугадать заранее, как будет выглядеть конечный результат. Такая деятельность ещё и полезна для здоровья: выдувание через соломинку укрепляет лёгкие (это особенно полезно для профилактики кашля), что актуально для часто болеющих ребят.

Выдувание воздуха через трубочку укрепляет лёгкие и является профилактикой дыхательных заболеваний

Занятие рисованием способствует разностороннему развитию ребёнка.

Аристотель

Практиковать занятия кляксографией в детском саду можно уже со второй младшей группы. Трёхлетний малыш вполне способен ставить краской кляксы, а затем рассматривать их, чтобы представить какой-то образ. Воспитатель при этом помогает ребёнку наводящими вопросами: «На что похожа твоя клякса?», «Какое животное или растение она тебе напоминает?», «Какой у неё характер, она весёлая или грустная?». Такие рассуждения очень полезны, поскольку развивают мышление, речь и фантазию дошкольника.

Следующий этап — это непосредственно изобразительная деятельность — дорисовка кляксы. Таким образом можно составить целую сюжетную картинку. Благодаря кляксографии дошкольник учится передавать силуэтное изображение, гармонично располагать объекты в пространстве, смешивать оттенки цветов, развивает глазомер и координацию движений рук. Данная техника раскрепощает детей: их творчество становится смелым и непосредственным (ведь на обычном занятии педагог за кляксы делает замечание, а здесь это — основа работы). Кстати, этот способ рисования успешно используют психологи в качестве арт-терапии.

Если в младшей группе воспитатель предлагает на занятиях кляксографией простейшие задания, сам иногда помогает дополнить изображение, то в более старшем возрасте вводятся дополнительные техники и более сложное дорисовывание деталей.

Используемые материалы и основа

Для занятия кляксографией педагог предлагает ребятам жидкие акварельные краски — именно они позволяют рисовать пятнами. В качестве альтернативы подойдёт и обычная медовая акварель, однако её нужно разбавить водой в любой ёмкости. Для творчества дошкольникам также понадобятся жёсткие кисти (с плотным ворсом) разного размера (тонкий ворс пригодится для прорисовки деталей) и коктейльные трубочки. Можно использовать пипетки — для образования маленьких пятен.

Коробку, в которой хранятся принадлежности для кляксографии, например, соломинки, можно оформить в этой нетрадиционной технике.

С помощью кляксографии можно креативно оформить коробку для хранения красок или кисточек

В качестве основы желательно использовать плотную бумагу или картон, так как метод кляксографии предполагает большое количество воды на поверхности для рисования. В зависимости от темы занятия бумагу можно предварительно затонировать в определённый оттенок: например, в синий или голубой, если дошкольники будут изображать морское дно с кляксами-водорослями, или в зелёный, если предполагается рисование лесного пейзажа. В младшей и средней группе эту работу делает воспитатель, в старшем возрасте дошкольники могут сделать это самостоятельно.

Лист бумаги также можно предварительно смочить широкой кистью или поролоновой губкой. Это упростит процесс создания пятен. Однако основа не должна быть чересчур мокрой, иначе краска слишком сильно растечётся.

Приёмы рисования: основная техника и дорисовывание деталей

Техника кляксографии основана на использовании двух ключевых приёмов (их можно совмещать или же применять по отдельности):

  • Капельный способ. Больше всего он подходит для создания пейзажей. Большая жёсткая кисть пропитывается жидкой акварелью и встряхивается над местом, где нужно оставить большое пятно. Если же необходимы миниатюрные кляксы, то следует слегка постукивать по деревянной основе кисточки. Для точечного нанесения акварели можно использовать пипетку. Создание разноцветных пятен разного размера позволяет создавать интересные замысловатые композиции.
  • Метод растекания. Для рисования понадобится обычная кисть (не обязательно жёсткая). С помощью большого количества краски образуется жидкое пятно, которое затем раздувается соломинкой в разные стороны. В результате получается клякса с множеством подтёков — это основа для творчества. Далее изображение дополняется в соответствии с фантазией юного художника.

Изображение может создано с помощью метода растекания

Одновременно с указанными способами рисование в технике кляксографии осуществляется в двух направлениях:

  • ребёнок представляет себе некий образ или сюжет, а затем воплощает его на бумаге;
  • вначале создаётся клякса произвольной формы, которая дорисовывается до подходящего образа (форма наполняется конкретным содержанием).
Методика рисования дерева с помощью кляксографии

Эффектно изобразить дерево в технике кляксографии помогут следующие советы:

  • вначале нужно поставить кляксу в нижнюю часть листа;
  • кончик соломинки немного наклонить в краску и подуть на каплю через неё по направлению к верхней части основы — получится ствол;
  • раздувая краску от ствола в разные стороны, формируем ветки, при этом для образования тоненьких ветвей нужно быстро двигать соломинку из стороны в сторону либо резко дуть на маленькие капли.

Важная часть занятия по кляксографии — прорисовка дополнительных деталей образа. При этом для работы дошкольникам понадобится кисть с тонким ворсом и краски. Хотя в некоторых случаях уместно использовать карандаши или фломастеры, например, чтобы изобразить иголки сосны и оформить вокруг неё цветочную полянку.

Для оформления отдельных деталей рисунка могут использоваться фломастеры или цветные карандаши

Оригинальные работы получаются при сочетании кляксографии с другими нетрадиционными техниками рисования и аппликацией. Так, используя ватные палочки, можно красиво изобразить ягоды и листья на ветке рябины, а также оформить таким способом рамку рисунка. Интересна композиция на тему подводного мира: с помощью кляксографии рисуются водоросли, а из пластилина формируются рыбки и морские камешки. Изящную пейзажную зарисовку представляет собой комбинация кляксографии и техники печатания листьями.

Фотогалерея: примеры дополнения рисунка в технике кляксографии

Проведение занятия по кляксографии в разных возрастных группах

Занятия по кляксографии в детском саду проводятся по определённым темам. В основном это растительная тематика: «Красивые цветы» (младшая и средняя группы), «Осеннее дерево» (как вариант — весеннее или зимнее), «Заколдованный лес», «Ветка рябины». В старшей и подготовительной группе деревья рисуются более детально, акцент ставится на дополнительных деталях.

Каждый ребёнок — художник. Трудность в том, чтобы остаться художником, выйдя из детского возраста.

Пабло Пикассо

В младшей группе в технике кляксографии можно рисовать солнышко, а в средней группе задание следует усложнить — дополнить изображение антропоморфными чертами: нарисовать солнышку глазки, носик, ротик, придать ему весёлое либо, наоборот, грустное выражение лица. Другие возможные темы: «Разноцветный салют» (можно организовать как коллективную работу), «Бабочка», Ёжик», «Цыплёнок», «Паучок», «Птички в гнезде».

В старшем дошкольном возрасте можно предложить фантазийную тему «Волшебное превращение кляксы» или «Живая капля»: каждый ребёнок самостоятельно продумывает содержание своего рисунка. Одна и та же клякса может превратиться в рыбку, лисичку, дикобраза и прочих живых существ.

Одна и та же оранжевая клякса может превратиться в самых разных животных

В подготовительной группе кляксография может стать основой создания портрета (например, мамы). Таким способом изображаются волосы, а затем уже дорисовываются черты лица.

Кляксография — оригинальный способ изобразить волосы

Организация мотивирующего начала занятия

Кляксография — само по себе волшебное действие, однако правильная мотивация ещё больше увлечёт детей занятием. Например, в гости к малышам может прилететь красавица-бабочка и пожаловаться на свою беду: она живёт в лесу на большой полянке, где раньше росло много ароматных цветов. Но пришли девочки и все их сорвали, чтобы сплести себе веночки. И бедной бабочке теперь совсем негде жить. Ребята могут помочь ей — нарисовать красивые цветы в технике кляксографии.

Бабочка жалуется ребятам, что девочки сорвали на полянке все цветочки

Занятие можно начать с беседы о весны и её признаках. Это время года тёплое и ласковое, всё вокруг оно украшает зеленью и цветами. Педагог предлагает ребятам стать на время помощниками весны и украсить свою группу нежными весенними цветами.

Поскольку кляксография хорошо подходит для рисования деревьев и кустарников, то за помощью к малышам может обратиться зайчик. На лесной опушке, где он живёт, мало деревьев, и ему негде прятаться от волка и лисы. Ребята с радостью изобразят для него деревья и прочую растительность.

К старшим дошкольникам в гости может прийти сама Клякса (педагог демонстрирует рисунок с антропоморфными чертами) и пригласить их в свою страну Кляксонию. Там живут необычные и весёлые существа. Если подуть на них в трубочку, то жители изменяются — у них могут вырасти ручки и ножки, рожки и хвостик. Чтобы попасть в Кляксонию, нужно выполнить определённое задание (например, посчитать до десяти и обратно либо назвать свой домашний адрес и пр.).

Клякса приглашает ребят в свою сказочную страну Кляксонию

Дошкольникам всегда интересен мотив письма. Например, в группу приходит послание от Кисточки. У неё случилась беда — она хотела нарисовать красивые полевые цветочки, но нечаянно поставила краской на лист бумаги большую кляксу и теперь не знает, что делать. Дети подскажут Кисточке, что эту кляксу можно превратить в красивую картинку, и с радостью сами её нарисуют.

Кисточка расстроена тем, что нечаянно поставила кляксу

Если тема занятия «Заколдованный лес», то начать его можно с просмотра соответствующих иллюстраций. Педагог обращает внимание дошкольников на то, что стволы деревьев напоминают туловище человека, толстые ветки похожи на руки, а тонкие — на пальцы и волосы. В пейзажных картинах ребята находят сказочных существ, необычные для этого места предметы, фантазируют на тему того, кто ещё может скрываться в таком лесу. Таким образом, ребята подключают воображение и воодушевляются желанием самим изобразить таинственный лес с помощью техники кляксографии, дополняя рисунок избушкой, сказочными птицами, мухоморами и пр.

Начать занятие можно с забавного стихотворения про кляксу. Про кляксу существуют также замечательные сказки, которые ребята с удовольствием послушают перед творческой деятельностью. Например, в произведении «Хитрая клякса» Ирис Ревю мальчик Коля Кляксин однажды решил нарисовать домик. Он намочил кисточку и окунул её в краску. Но с кисти скатилась большая капля и на альбомном листе образовалась клякса. Коля расстроился и хотело уже было взять другой лист, как клякса предложила мальчику превратить её во что-нибудь полезное. Он подумал и решил нарисовать маленькое озеро, на берегу которого будет стоять домик. Коля взял голубую краску и так и сделал. Рисунок получился красивым и добрым: мальчик дополнил картинку цветочками, бабочками, девочкой, которая стояла на крылечке домика. С тех пор мальчик всегда рисовал аккуратно: у него не было клякс, однако иногда Коле хотелось пошалить. И тогда он начал изображение именно с кляксы, а потом превращал её в тучку, облачко, медвежонка и пр. Ведь это так интересно.

Такую коротенькую сказку можно рассказать ребятам младшего и среднего дошкольного возраста, а потом провести с ними небольшую беседу по следующим вопросам:

  • Что такое клякса, и как она рождается?
  • Почему произведение называется «Хитрая клякса»?
  • Во что Коля придумал превратить кляксу?
  • Каким можно назвать мальчика Колю? (смышлёный, находчивый, фантазёр и пр.).

Воспитатель также может обсудить с детьми пословицы, которые подходят к содержанию данной сказки:

  • Находчивость на деньги не купишь.
  • Творчество и ум — родственные понятия.
  • Смекалка — умному подмога.

Ребят постарше (старшая и подготовительная группы) заинтересует сказка Владимира Сутеева «Мы ищем кляксу». Это увлекательная история о том, как Маша и Ваня совершили путешествие в мир фантазии, где спасали рисунки художника от проделок злой кляксы, которая сбежала из баночки с тушью. Однажды друзья зашли к своему соседу Художнику, чтобы полюбоваться на его рисунки. Но Маша нечаянно разлила баночку с тушью на альбом. Образовалась огромная клякса, которая вдруг ожила и спряталась между страницами альбома. Ребята решили исправить свою вину и во что бы то ни стало поймать кляксу. Художник быстро нарисовал портреты девочки и мальчика, взмахнул карандашом и произнёс заклинание. Дети начали своё путешествие по сказочной стране. Они побывали в избушке Бабы-Яги, которая хотела сварить их в котле, в открытом море, плывущими в бочке, а затем на лодке, когда их чуть не съела акула. После этого дети попали в жаркую пустыню, где встретили огромного льва, потом на неизвестную планету (которую придумало воображение Художника). Там они увидели инопланетян, среди которых была чёрная клякса, успевшая перескочить на следующую страницу. Была ещё встреча со Змеем Горынычем, с дворником дядей Федей. В конце концов зловредную кляксу поймали только на последней странице альбома. Художник вернул детей в реальность и признался им, что на самом деле он художник-мультипликатор.

На занятиях по кляксографии в качестве мотивационного начала можно продемонстрировать ребятам картины известных художников, рисовавших в этой технике.

Таблица: примеры стихотворений про кляксы

АвторНазваниеТекст стихотворения
Ю. Мориц«Замечательная клякса»В каждой кляксе
Кто-то есть,
Если в кляксу
Пальцем влезть.
В этой кляксе —
Кот с хвостом,
Под хвостом —
Река с мостом,
Судоходная река
Для судов и судака.
На мосту —
Чудак с чудачкой.
Под мостом —
Судак с судачкой.
И плывут туда-сюда
Всевозможные суда:
Туда плывут с тудачками,
Сюда плывут с сюдачками.
Отражаются в реке
Судаки с чудачками,
Чудаки с судачками.
Этой кляксе — конец,
Надо сделать новую,
В ней — огромный дворец
И балкон с коровою!
Цит. по: http://www.morits.ru/cntnt/stih/buket_koto/zamechatel1.html
Д. Чиарди«О том, кто получился из кляксы»Вчера принесла мне в подарок сестра
Бутылочку чёрных-чёрных чернил.
Я стал рисовать, но сразу с пера
Кляксу огромную уронил.
И расплылось на листе пятно,
Стало помалу расти оно:
Слева — хобот, а справа — хвост,
Ноги, как тумбы, высокий рост…
Я немедленно к чёрной туши
Пририсовал огромные уши,
И получился, конечно, он, —
Вы угадали — индийский слон.
Цит. по: http://www.maam.ru/detskijsad/chudesnye-prevraschenija-kljaksy.html

Фотогалерея: изображения заколдованного леса

Фотогалерея: иллюстрации художников, выполненные с использованием техники кляксографии

Некоторые иллюстрации детских книжек выполнены в технике кляксографии
Из клякс получается удивительный заколдованный лес
С помощью клякс можно выполнить отдельные элементы рисунка, например, деревья

Таблица: примеры конспектов занятий по кляксографии (фрагменты)

Автор и название занятияХод занятия
Мальцева И.
«Цветы для бабочки», вторая младшая группа
В группе появляется игрушечная бабочка, которая плачет из-за того, что все цветочки на её полянке сорвали девочки, чтобы сплести себе веночки. <…>
Воспитатель предлагает ребятам помочь бабочке — нарисовать для неё цветы необычным способом — с помощью клякс.
Педагог объясняет технику рисования кляксами: нужно смочить лист водой и поставить на нём пятно любого цвета — это цветочки, которые распустились на полянке. Затем в серединку каждого добавляется сухая гуашь. Когда краска подсохнет, фломастерами дорисовываются листочки и тычинки.
Проводится физкультминутка «Кто прилетит к бабочке на новоселье».
  • Прилетела к нам вчера
    Полосатая пчела. (Дети машут ладошками)
    А за нею шмель-шмелёк
    И весёлый мотылёк,
    Два жука и стрекоза, (На каждое название насекомого загибают один пальчик)
    Как фонарики глаза. (Делают кружочки из пальчиков и подносят их к глазам)
    Пожужжали, полетали, (Машут ладошками)
    От усталости упали. (Опускают руки вниз).

В.: Как вы думаете, что нужно цветочкам, чтобы они выросли красивыми? (Дождик).

  • Дождик, дождик, поливай (Указательным пальцем постукивают по другой ладони)
    Будет хлеба каравай, (Образуют перед собой круг руками)
    Будут булки, будут сушки, (Похлопывают поочерёдно одной ладонью другую)
    Будут вкусные ватрушки. (Соединяют большой и указательный пальцы рук вместе, образовывая большой круг).

Самостоятельная деятельность дошкольников. Выставка работ — все рисунки помещаются на лист ватмана — получается большая цветочная поляна. Бабочка благодарит малышей и улетает.

Цит. по: http://vospitatel.com.ua/zaniatia/izo/cvety-dlya-babochki.html
Хайрова В. К.
«Весёлые капельки»,
средняя группа
Занятие начинается с прослушивания аудиозаписи шума дождя. Дети угадывают, что это за звук, а затем им предлагаются загадки про воду и дождь.
  • Она — и туча, и туман,
    Она — ручей и океан,
    Она летает и бежит
    И стеклянной может быть! (Вода).
  • Он идёт, а мы бежим,
    Он догонит всё равно!
    В дом укрыться мы спешим,
    Будет к нам стучать в окно,
    И по крыше тук да тук!
    Нет, не пустим милый друг! (Дождь).

Воспитатель читает дошкольникам стихотворение «Встреча».

  • Туча тучу повстречала.
    Туча туче прорычала:
    — Что гуляешь на пути?
    Прочь с дороги, дай пройти!
    Отвечала туча туче:
    — Ты меня не трогай лучше!
    Я гуляю, где хочу,
    Если тронешь — проучу!
    Туча тучу — лбом, лбом,
    А по небу — бом, бом!
    Бой над городом грохочет,
    Уступить никто не хочет.
    Бились тучи целый час,
    Искры сыпались из глаз.
    Подрались они всерьёз —
    Довели себя до слёз.

Беседа по содержанию стихотворения: почему тучки поругались, и чем закончилась их ссора.
Демонстрация слайдов о том, откуда на самом деле берётся дождь. Одновременно дошкольники прослушивают аудиозаписи звуков дождя и грома.
Подвижная игра «Ходят капельки по кругу».
Педагог — тучка, а дети — капельки. Под музыку они разбегаются, танцуют. Затем капельки текут ручейками (по двое берутся за руки), становятся одной рекой (дети идут вместе друг за другом), а потом попадают в огромный океан (образуют большой хоровод). Начинает пригревать солнце, и капли испаряются (дошкольники становятся на носочки и поднимают руки).
Пальчиковая гимнастика по стихотворению А. Босева (ребята выполняют движения по тесту).

  • Тёплый дождик лил да лил,
    Дело делал, не шалил.
    Вымыл крышу у скворечни,
    Вымыл ягоды черешни…
    Протянули мы ладошки,
    Дождик их помыл немножко.

Педагог предлагает малышам нарисовать дождик с помощью трубочек и воздуха. Тучка изображается восковым карандашом, а дождик — методом кляксографии: нужно обмакнуть соломинку в чашечку с краской, капнуть пятнышко на листок, а затем подуть на неё.
Самостоятельная деятельность дошкольников. Выставка работ.

Цит. по: mdou125irk.ucoz.ru/interesno/pedagogi/risovanie_vozdukhom.doc
Иванова И. М.
«Волшебные деревья»,
старшая группа
<…> Воспитатель предлагает ребятам превратиться в волшебников (взмахивает «волшебной палочкой», дети кружатся). Педагог рассказывает, что по дороге в детский сад она видела качающиеся деревья. Дети показывают движения деревьев при сильном и слабом ветре. <…>
Ребятам предлагается изобразить волшебные деревья с помощью волшебной палочки-соломинки. Рисование силуэта в воздухе.
Объяснение приёмов работы. Вначале на палитре нужно развести коричневую гуашь с водой. С помощью ложечки ставится клякса в месте, где начинается ствол дерева. Трубочкой пятно раздувается, образуя ствол. Для создания ветвей лист бумаги можно поворачивать.
Самостоятельная деятельность дошкольников. <…>
Анализ готовых работ. Педагог отмечает наиболее интересные рисунки.
Волшебники превращаются обратно в детей и возвращаются в детский сад.
Цит. по: http://kladraz.ru/blogs/irina-mihailovna-ivanova/netradicionaja-tehnika-risovanija-kljaksografija-volshebnye-derevja.html
Белгубаева А.
«Осенний лес»,
подготовительная группа
Беседа о поздней осени, её признаках (серое небо, на деревьях почти нет листьев, уже выпадает снег). Педагог читает стихотворение А. Плещеева «Осень». <…>
Затем воспитатель приглашает ребят в путешествие по осеннему лесу. Имитация одевания тёплой одежды. Дети едут на воображаемом поезде.
Звучит аудиозапись птичьих голосов — детей встречают зимующие птицы. Появляется игрушечный ёжик, в лапках у него карточка с загадкой про ёлку.
  • У неё одёжки колки,
    Всё иголки, да иголки.
    Звери шутят: «Дядя Ёж
    На неё слегка похож!»

Беседа о строении ёлки: ствол, ветки, корни, иголки. Воспитатель обращает внимание на то, что ствол внизу шире, а ветви вверху короче, а внизу длиннее, и растут они вниз. Также затрагиваются и другие деревья, которые поздней осенью стоят почти голые.
Физкультминутка «Листочки».

  • Мы — листочки, (Стоят свободно, руки вверху)
    Мы — листочки,
    Мы — осенние листочки (Покачиваются)
    Мы на веточке сидели,
    Ветер дунул — полетели (Разбегаются)
    Мы летали, мы летали, (Бегают, кружатся)
    А потом летать устали (Приседают на корточки).
    Перестал дуть ветерок —
    Мы присели все в кружок. (Приседают на корточки)
    Ветер снова вдруг подул (Вновь разбегаются)
    И листочки быстро сдул (Помахивают руками).
    Все листочки полетели
    И на землю тихо сели (Идут на свои места).

Перед детьми появляется плачущий игрушечный зайчик: на опушке леса мало деревьев, и ему негде спрятаться от волка и лисы. Дети должны помочь ему — нарисовать лесной пейзаж.
Складывание ёлочек из счётных палочек.
Пальчиковая игра «Собираем листочки».

  • Раз, два, три, четыре, пять,
    Будем листья собирать.
    Листья берёзы,
    Листья рябины,
    Листики тополя,
    Листья осины,
    Листики дуба мы соберём,
    Маме осенний букет отнесём.

Воспитатель объясняет приёмы рисования деревьев и кустарников в технике кляксографии. Опавшую листву можно изобразить кистью способом примакивания, а снег — ватными палочками.
Самостоятельная деятельность дошкольников под музыку П. Чайковского «Времена года». <…>
Обсуждение рисунков. Зайчик благодарит детей за помощь и вместе с ёжиком возвращается обратно в лес.

Цит. по: http://www.maam.ru/detskijsad/konspekt-zanjatija-po-risovaniyu-netradicionoi-tehnikoi-tema-osenii-les-podgotovitelnaja-grupa.html

Примеры рисунков дошкольников, выполненных в технике кляксографии

Кляксография — красивая и выразительная техника, доступная детям самого разного дошкольного возраста.

Фотогалерея: рисунки младших дошкольников

На этом рисунке кляксы дополнены очаровательным петушком
Для начала нужно дать возможность малышам поупражняться в новой технике
В этой работе ребёнок использовал насыщенные цвета
Данный рисунок интересен яркой и разнообразной цветовой гаммой

Рисунки воспитанников младшей группы просты, но тем не менее выразительны. Изображение становится интересным за счёт использования ярких цветов (например, композиция «Одуванчики», «Салют»). В работе «Волшебные капельки» ребёнок превратил кляксы в травку и дополнил картинку красивым петушком с разноцветным хвостом, который клюёт зёрнышки.

Фотогалерея: рисунки воспитанников средней группы

Работы детей среднего дошкольного возраста более замысловаты. Так, с помощью двух жёлтых клякс разного размера создан образ очаровательного цыплёнка с красным клювом и лапками («Цыплёнок»). В композиции «Сказочный лес» деревья кажутся необычными за счёт того, что нарисованы голубой и сиреневой краской. Оригинальные цветочки получились в результате сочетания двух нетрадиционных техник — кляксографии и печатания штампами («Красивые цветы»). Интересна сюжетная композиция «Медведица и медвежата»: с помощью клякс здесь изображены солнышко, облака и травка. В данной технике нарисованы и гнёзда, в которых сидят милые птички: техника кляксографии идеально передаёт переплетение тоненьких веточек.

Фотогалерея: рисунки воспитанников старшей группы

Воспитанники старшей группы экспериментируют на тему живой кляксы — создают антропоморфные сказочные образы, наделяя их определёнными чертами характера («Злые кляксы», «Весёлые кляксы»). Оригинален карандашный рисунок «Волшебный цветок счастья»: с помощью кляксографии здесь намечен центральный рисунок лепестков. На высоком уровне выполнены и пейзажные композиции: позитивным настроением пронизаны рисунки на тему «Летний день», другие работы достоверно передают колорит ранней и поздней осени («Осень в лесу», «Поздняя осень»). Отметим интересные образы ёжиков, несущих на спинке яблоки.

Фотогалерея: рисунки дошкольников подготовительной группы

Рисунки будущих школьников представляют собой выразительные законченные композиции. Это загадочный фиолетовый ёжик, словно появившийся из сказки («Вышел ёжик на прогулку»), грациозные тюльпаны с бутонами красивых оттенков, которые тянутся вверх к солнцу («Тюльпаны»). На рисунке «Цветочная поляна» множество клякс в нежной пастельных гамме слились в замысловатый пейзаж. В композиции «Веселики» разноцветные кляксы похожи на паучков (очень аккуратно прорисована паутина). Оригинальна и изящна работа «Дерево ночью», где яркие белые цветы совпадают по цвету с луной.

Видеоматериалы по теме

Педагогам, желающим освоить технику преподавания кляксографии в ДОУ, помогут видеоролики с тематическими мастер-классами и воплощением интересных идей. А родители воспитанников могут понаблюдать, как протекает творческий процесс по созданию рисунков из клякс у детей дошкольного возраста.

Видео: малыши рисуют в технике кляксографии и монотипии

Видео: мастер-класс по кляксографии «Весенняя веточка»

Видео: рисунок в технике кляксографии «Бабочка на цветке»

Видео: дошкольники рисуют цветы в технике кляксографии

Кляксография в детском саду — не только техника рисования, но и замечательный способ весело провести время. Экспериментируя с красками, ребята создают неожиданные и причудливые образы. Причём, раздувая кляксу, никогда нельзя угадать заранее, как будет выглядеть конечный рисунок. Кроме того, такая деятельность полезна для здоровья дошкольников — укрепляет дыхательную систему и повышает эмоциональный фон.

Высшее филологическое образование. Опыт работы корректором, редактором, ведения сайта, имеется педагогический стаж (первая категория). Оцените статью: Поделитесь с друзьями!

Метки:

Кляксография поэтапно. «Нетрадиционные техники рисования: кляксография

Мастер — класс по рисованию (изучение различных техник рисования с детьми дошкольного возраста)

Мастер-класс. Нетрадиционная техника рисования — кляксография «Волшебные кляксы»

Мастер — класс рассчитан для родителей и воспитателей, а также детей дошкольного возраста — от 3 до 6 лет.

Назначение мастер — класса: Кляксография — это отличный способ весело и с пользой провести время, поэкспериментировать с красками, создать необычные образы. Раздувая кляксы нельзя точно предугадать, как они разойдутся, перельются друг в друга, и каков будет окончательный результат… Такое занятие будет интересно и взрослым и детям. Причем не только интересно — но и полезно: например, в качестве артикуляционной гимнастики. Также рисование выдуванием через соломинку укрепляет здоровье и силу легких и дыхательной системы (что особенно полезно при кашле).

Хочется отметить, что с помощью данного вида рисования хорошо, получается, изображать различные деревья (получаются замысловатые стволы, ветки и т.д.). Попробуйте, результат Вам понравится!

Цель : Познакомить детей с таким способом изображения, как кляксография, показать её выразительные возможности

Задачи:

Вызвать интерес к «оживлению» необычных форм (клякс), учить дорисовывать детали объектов (клякс), для придания им законченности и сходства с реальными образами; учить видеть необычное в обычном;

Развивать образное мышление, гибкость мышления, восприятие, воображение, фантазию, интерес к творческой деятельности; воспитывать аккуратность в рисовании красками.

Материалы для работы:

Альбомные листы;

Гуашь или акварель;

Крупная кисть;

Трубочка для напитков или можно использовать пипетку;

Вода в баночке;

Влажная тряпочка — вытирать руки, если запачкаются;

Ватные палочки;

Пластилин.

Кляксографию можно совмещать с разными техниками изобразительного искусства, такими как монотипия, аппликация и другими. Некоторые из них и представлены в данном мастер — классе.

Этот способ рисования «кляксами» можно использовать в работе с детьми 3-4 лет и старше.

Макаем кисть в разведенную краску и брызгаем на лист бумаги. Чем гуще краска — тем насыщеннее цвет, но труднее она выдувается.

Берем трубочку, и дуем через нее на разноцветные капли краски, они превращаются в кляксы. При этом лист бумаги можно поворачивать — кляксы получаются ещё интереснее!

Кляксография с использованием ватных палочек

С помощью крупной кисти ставим кляксу в уголке листа.

С помощью трубочки раздуваем краску в разных направлениях. Получилось вот такое дерево!

Немного подумав, это дерево мне напомнило рябину, одиноко растущую на склоне. С помощью ватных палочек подрисовываем ягоды и листья.

Оформляем рамку также с помощью ватной палочки. Именно о такой рябине, возможно, и написала стихотворение «Рябина» Ирина Токмакова.

Красненькую ягоду

Мне дала рябина.

Думал я, что сладкую,

А она — как хина.

То ли эта ягодка

Просто недозрела,

То ль рябина хитрая

Подшутить хотела?

Кляксография с использованием фломастера

Также как и в предыдущих работах ставим кляксу и выдуваем с помощью трубочки ствол и ветки. А это что за дерево получилось? Конечно же, сосна!

С помощью зеленого фломастера дорисовываем иголки.

Сосна

Над жёлтой осыпью обрыва

Склонилась старая сосна,

Корнями голыми пугливо

Поводит по ветру она. (Тимофей Белозеров)

Украсив все веточки пышными иголочками, приступаем к оформлению полянки вокруг сосны. Наносим кляксы зеленого цвета и раздуваем с помощью трубочки. Получились стебельки цветов!

Дорисовываем на стебельках листья и цветы — одуванчики. Теперь одинокой сосне вовсе не скучно!

Кляксография + пластилинография

С помощью пластилина создаем морское дно: лепим ярких рыбок, морскую звезду, камешки.

Но чего — то не хватает в этом рисунке? Конечно же, морских водорослей! С помощью волшебных клякс и трубочки появляется и морская трава! Кляксы располагаются между камешек, и если краска слегка зайдет на пластилин, ничего страшного, его с легкостью можно подтереть тряпочкой и работа не будет испорчена.

Ну чем не морское дно! Дорисовываем пузырьки и рисунок готов!

Рыбка рыбку догоняла,

Рыбка хвостиком виляла,

Ткнулась в брюшко — Догнала!

— Эй, подружка! Как дела? (Т. Второва)

А этот способ рисования подойдёт для детей более старшего возраста (5 — 7 лет). Набираем краску на кисточку и сбрызгиваем на лист бумаги. С помощью трубочки выдуваем волшебные кляксы. А теперь самый ответственный момент — нужно включить своё воображение!

В каждой кляксе

Кто-то есть,

Если в кляксу

Кистью влезть.

В этой кляксе —

Кот с хвостом,

Под хвостом —

Река с мостом,

На мосту —

Чудак с чудачкой.

Под мостом —

Судак с судачкой.

Рисунок нужно рассмотреть с разных сторон и только потом дорисовать отдельные детали, чтобы образ стал более узнаваем.

Кляксография + монотопия

Заранее готовится фон с помощью техники — монотопия. На высохший слой наносятся кляксы разного цвета и выдуваются с помощью трубочки.

Лидия Генюш

Мастер -класс рассчитан для родителей и воспитателей, а также детей дошкольного возраста — от 3 до 6 лет.

Назначение мастер — класса :

В наше время получил широкое распространение достаточно нестандартный вид изобразительной деятельности – кляксография . Кляксография – это дорисовывание нанесённой на бумагу произвольной кляксы до узнаваемого художественного изображения.

Нетрадиционные формы рисования вызывают живой интерес у детей. В особенности клякография т . к. обычно за кляксы мы делаем замечание , а при использовании данного метода наоборот хвалим.

Делая кляксы (чёрные и разноцветные) и рассматривая их, уже 3-летний ребёнок может видеть образы, предметы или отдельные детали. «На что похоже?» , «Кого она тебе напоминает?» — такие вопросы развивают мышление и воображение.

Кляксография – это отличный способ весело и с пользой провести время, поэкспериментировать с красками, создать необычные образы. Раздувая кляксы нельзя точно предугадать, как они разойдутся, перельются друг в друга, и каков будет окончательный результат. Такое занятие будет интересно и взрослым и детям. Причем не только интересно — но и полезно : например, в качестве артикуляционной гимнастики. Также рисование выдуванием через соломинку укрепляет здоровье и силу легких и дыхательной системы (что особенно полезно при кашле) .

Хочется отметить, что с помощью данного вида рисования хорошо , получается, изображать различные деревья (получаются замысловатые стволы, ветки и т. д.) . Попробуйте, результат Вам понравится!

Цель : Знакомство с таким способом изображения, как кляксография , показать её выразительные возможности.

Задачи :

Вызвать интерес к «оживлению» необычных форм (клякс , учить дорисовывать детали объектов (клякс , для придания им законченности и сходства с реальными образами; учить видеть необычное в обычном;

Развивать образное мышление, гибкость мышления, восприятие, воображение, фантазию, интерес к творческой деятельности; воспитывать аккуратность в рисовании красками .

Материалы для работы :

Альбомные листы;

Гуашь или акварель;

Крупная кисть или можно использовать пипетку;

Трубочка для напитков;

Вода в баночке;

Влажная тряпочка — вытирать руки, если запачкаются;

Ватные палочки;

Пластилин;

фломастеры .

Ход НОД:

Организационная часть.

Воспитатель : Ребята, а вы знаете, что такое клякса ?

Ответы детей.

Воспитатель : Клякса – это след , пятно, оставленные краской. Клякса может быть и способом рисования .

Воспитатель предлагает вниманию детей несколько готовых рисунков, сделанных приёмом кляксографии .

Дети тренируются на дополнительном листе бумаги одной краской.

Физкультминутка «Дети любят рисовать »

Вот мы взяли краски в руки, (Кисти рук сцепить в «замок» , вращательные движ. по кругу)

И не стало в доме скуки.

Чтобы было веселей, (Хлопки в ладоши)

Яркой краски не жалей!

Это правда! (Встали, рывки руками перед грудью)

Ну чего же тут скрывать?

Дети любят, очень любят рисовать ! (Повороты туловища влево-вправо руки на поясе)

И в трамвае на окне!

Это что же за зверюшка, (Руки на поясе, наклон туловища вперед)

Много ног, одна макушка?

То ли зверь-сороконог, (Прыжки на месте)

То ли очередь в ларёк?

Это правда! (Хлопки вы ладоши)

Ну чего же тут скрывать?

Дети любят, очень любят рисовать ! (Прыжки на месте)

На бумаге, на асфальте, на стене

И в трамвае на окне! (Хлопки в ладоши) (Э. Успенский)

Кляксографию можно совмещать с разными техниками изобразительного искусства, такими как монотипия, аппликация и другими. Некоторые из них и представлены в данном мастер – классе .

Этот способ рисования «кляксами » можно использовать в работе с детьми 3-4 лет и старше.

Макаем кисть в разведенную краску и брызгаем на лист бумаги. Чем гуще краска — тем насыщеннее цвет, но труднее она выдувается.

Берем трубочку, и дуем через нее на разноцветные капли краски, они превращаются в кляксы . При этом лист бумаги можно поворачивать – кляксы получаются ещё интереснее!


Кляксография с использованием ватных палочек

С помощью крупной кисти ставим кляксу в уголке листа .


С помощью трубочки раздуваем краску в разных направлениях. Получилось вот такое дерево!

Немного подумав, это дерево мне напомнило рябину, одиноко растущую на склоне. С помощью ватных палочек подрисовываем ягоды .


Именно о такой рябине, возможно, и написала стихотворение «Рябина» Ирина Токмакова.

Красненькую ягоду

Мне дала рябина.

Думал я, что сладкую,

А она — как хина.

То ли эта ягодка

Просто не дозрела,

То ль рябина хитрая

Подшутить хотела?

Кляксография с использованием фломастера

Также как и в предыдущих работах ставим кляксу и выдуваем с помощью трубочки ствол и ветки. А это что за дерево получилось? Конечно же, сосна!

С помощью зеленого фломастера дорисовываем иголки .

Над жёлтой осыпью обрыва

Склонилась старая сосна,

Корнями голыми пугливо

Поводит по ветру она. (Тимофей Белозеров)

Украсив все веточки пышными иголочками, приступаем к оформлению полянки вокруг сосны. Наносим кляксы зеленого цвета и раздуваем с помощью трубочки. Получились стебельки цветов!

Дорисовываем на стебельках листья и цветы – одуванчики. Теперь одинокой сосне вовсе не скучно!

Кляксография + пластилинография

С помощью пластилина создаем морское дно : лепим ярких рыбок и камешки.


Но чего – то не хватает в этом рисунке? Конечно же, морских водорослей! С помощью волшебных клякс и трубочки появляется и морская трава! Кляксы располагаются между камешек, и если краска слегка зайдет на пластилин, ничего страшного, его с легкостью можно подтереть тряпочкой и работа не будет испорчена.


Ну чем не морское дно! Дорисовываем пузырьки и рисунок готов!

Рыбка рыбку догоняла,

Рыбка хвостиком виляла,

Ткнулась в брюшко — Догнала!

Эй, подружка! Как дела? (Т. Второва)

А этот способ рисования подойдёт для детей более старшего возраста (5 – 7 лет) . Набираем краску на кисточку и сбрызгиваем на лист бумаги. С помощью трубочки выдуваем волшебные кляксы . А теперь самый ответственный момент – нужно включить своё воображение!


В каждой кляксе

Кто-то есть,

Если в кляксу

Кистью влезть.

В этой кляксе —

Кот с хвостом,

Под хвостом —

Река с мостом,

На мосту —

Чудак с чудачкой.

Под мостом —

Судак с судачкой.

Рисунок нужно рассмотреть с разных сторон и только потом дорисовать отдельные детали , чтобы образ стал более узнаваем.


Кляксография + монотопия

Заранее готовится фон с помощью техники — монотопия .


На высохший слой наносятся кляксы разного цвета и выдуваются с помощью трубочки.


Вот лишь малая часть того, что можно выполнить с помощью «волшебных клякс » кляксографии . А с какими ещё техниками изобразительного искусства можно совмещать кляксографию – это подскажет Ваша фантазия!

Итог НОД.

Воспитатель вместе с детьми рассматривают работы, оформляют выставку.

О пользе Карандаша и Кисточки

(отрывок)

…. Кляксу кисточка для смеха

Нам поставит – вот помеха!

Клякса эта очень злится :

Кляксой быть мне не годится ,

Не буду кляксой – это проза ,

Буду ромашкой или розой.

Н. Алексеевская.

Цель: формировать умения применять технику «выдувания» в практической деятельности. Задачи: Образовательные: -познакомить детей с техникой «выдувания» или так называемой «кляксографии»; расширить словарный запас; -Закреплять и обогащать знания детей о разных видах художественного творчества. Развивающие: -Формировать творческое мышление, устойчивый интерес к художественной деятельности; -Развивать художественный вкус, фантазию, изобретательность, пространственное воображение; — Формировать умения и навыки, необходимые для создания творческих работ; — Развивать желание экспериментировать, проявляя яркие познавательные чувства: удивление, сомнение, радость от узнавания нового; -Развивать воображение, фантазию, интерес к творческой деятельности. Воспитательные: — Воспитывать трудолюбие и желание добиваться успеха собственным трудом; — Воспитывать внимание, аккуратность, целеустремлённость, творческую самореализацию; — Воспитывать интерес к данному виду рисования.

Кляксография Отличный способ весело и с пользой провести время, проэкспериментировать с красками, создать необычные образы. Кляксография- такой вид рисования, который относится к нетрадиционным техникам. Кляксография помогает формировать умение передавать силуэтное отражение, отрабатывать навыки работы красками и кистью. Она отлично развивает творчество, фантазию, воображение, воспитывает эстетическое восприятие произведений изобразительного искусства, а также воспитывает сопереживание. Кляксографию с успехом применяют психологи на коррекционных занятиях. Этот вид рисования помогает развить глазомер, координацию.

Материалы: бумага, тушь или гуашь жидко разведенная в мисочке, пластиковая ложечка, трубочка (соломинка для напитков). Способ получения изображения: ребенок зачерпывает пластиковой ложечкой краску, выливает её на лист, делая небольшое пятно (кляксу). Затем на это пятно дует из трубочки так, чтобы её конец не касался ни пятна, ни бумаги. При необходимости процедура повторяется. Недостающие детали дорисовываются.




    Подготовив необходимые материалы, можно переходить к самому творческому процессу.

    Первым шагом в кляксографии, как и в любом виде изобразительного искусства, является идея. Обдумайте образ, который хотели бы создать. Конечно, ваша цель – не повторить этот образ пятном в точности, а только нечто подобное. Идея – это основа рисования пятнами.

    Техника рисование кляксография.

    Существует две основные техники рисования кляксографии, их так же можно совмещать:

    1. Первая техника – капельная. С помощью нее, как правило, создают пейзажи. Возьмите большую жесткую кисть, напитайте ее жидкой или разбавленной водой акварелью того цвета, который вам нужен. Если вам нужно небольшое пятно, то слегка постукивайте по ее деревянной основе. Если же большое, то напитанную кисть нужно встряхивать над тем местом, где хотите оставить пятно. Безусловно, можно и нужно использовать разные цвета и пятна разного размера, чтобы создать интересную композицию.
    2. Техника растекания так же распространена. Как и в предыдущем методе, нужно взять большую «бочкообразную» кисть, но уже не обязательно жесткую. Встряхните кисть и сделайте большое пятно, важно, чтобы оно было очень мокрым и с большим количеством краски. При помощи соломинки (пластмассовой трубочки) раздуйте жидкость в разные стороны, чтобы образовалась клякса с разнообразными потеками. Таким образом, вы создали основу для дальнейшего творчества. Эту основу вы можете оформить и дополнить в зависимости от того, что она вам напоминает. Кстати, при этом можно использовать вышеупомянутую капельную технику, если это уместно и соответствует вашей идее.

    Кляксография – возможность проявить фантазию и получить положительные эмоции от творческого процесса. Два основных направления рисования кляксографии перекликаются с вышеупомянутыми техниками.

  • Первый «путь»: вы задумываете себе некий образ или даже сюжет и воплощаете его на бумаге (используя при этом первую технику).
  • Второй: вы создаете кляксу неопределенной формы, смотрите, что она вам напоминает, и дополняете ее общую форму деталями. То есть исходя из данной формы, создаете свою.

Этот вид изобразительного искусства часто применяется в детских садиках и начальной школе, так как он не трудоемкий, но при этом дает замечательный результат!

Маленькие дети любят оставлять на бумаге кляксы. Родители, недооценивая «шедевры» собственных детей, избавляются от непонятных рисунков. Но, оказывается, из оставленных клякс можно создать уникальный рисунок. Кстати, существует даже такая техника рисования — кляксография.

ПОЛОЖИТЕЛЬНЫЕ СТОРОНЫ КЛЯКСОГРАФИЯ

В последние годы кляксография набирает небывалую популярность. И связан этот момент вовсе не с последними веяниями моды. Оказывается благодаря данной технике рисования, у ребенка усиленно развивается творческое воображение.

Казалось бы, что полезного может почерпнуть малыш из обычной кляксы. На самом же деле, случайно сделанное краской пятно имеет уникальную, неповторяющуюся форму и размер. И если приложить немного фантазии, то обычной кляксе можно придать очертания какого-либо предмета или создать образ животного. Кстати, этой нетрадиционной техникой рисования зачастую увлекаются и взрослые.

Кляксография техника рисования

Для создания уникального рисунка необходимо подготовить следующий материал:

— Художественную кисть. Желательно использовать жесткие кисточки. Порой дети, чтобы изобразить кляксу большого размера прибегают к помощи зубной щетки.
— Краски. В этом виде искусства применяют только жидкую акварель. Если под рукой нет подходящих красок, то можно просто развести имеющуюся акварель водой. Кстати, необходимой для рисунка консистенцией обладает разноцветная тушь. Ее также можно использовать при рисовании.
— Картон или лист белой бумаги.
— Емкость для воды.
— Ватные палочки.
— Влажная тряпочка. Используется для удаления загрязнения с рук.

Этапы творческого процесса

Итак, кляксография техника рисования.
С чего начать?
Если вы новичок в этой области, то первоначально следует определиться с темой будущего рисунка.
Здесь крайне важно направить мыслительную деятельность в нужное русло, говоря другими словами, задать направление.
Сделав кляксу на листе бумаги, включите фантазию и попробуйте увидеть в ней очертания какого-либо предмета или живого существа. Может быть, перед вами расположилась удивительная планета или живописный подводный мир.

Создать рисунок с помощью кляксографии можно несколькими способами.

Наиболее распространенный — капельный метод.

Здесь потребуется широкая, объемная кисть. Ее следует тщательно напитать краской, и затем, расположив ее над листком бумаги начать разбрызгивать акварель. Если вы хотите чтобы капли оросили небольшой участок, постучите кисточкой о палец или руку. Когда же кистью просто встряхивают, область разбрызгивания увеличивается. Для точечного нанесения краски используют пипетку. Кстати, с ее помощью можно создать кляксу большого размера изобразив, таким образом, к примеру, солнце. Чаще всего при помощи такого способа кляксографии создают пейзажи.

Во втором способе кляксографии используют метод растекания.

Для этого в угол листа с помощью кисти наносят большую кляксу. Важно, краска должна быть очень жидкой. Затем с помощью питьевой трубочки начинают раздувать краску по поверхности бумаги. Желательно направлять акварель в разные стороны. Теперь присмотритесь к полученному рисунку, что он вам напоминает? Может быть, рябиновый куст?

Если да, то следует завершить рисунок, нарисовав на ветке красные плоды. Для этого воспользуйтесь ватной палочкой. Просто смочите «инструмент» в краске нужного цвета и прорисуйте рябиновые листочки и ягодки. Полученный рисунок при желании можно украсить оригинальной рамкой.

Первые несколько уроков ребенку может потребоваться помощь взрослых. Чаще всего малыши не могут сразу разглядеть в кляксе знакомые очертания.

Рисунки выполненные в техники кляксография.

Мастер класс для мам — Дюймовочка

Нетрадиционные техники рисования

В одном мгновении видеть вечность,

Огромный мир-в зерне песка,

В единой горсти-бесконечность

И небо — в чашечке цветка.

Ульям Блейк

Вы не задумывались, почему все дети любят рисовать? Как правило, они начинают это делать раньше, чем говорить. Причем для них важен сам процесс; рука движется, оставляет след, остановился, ничего не происходит. Все, что попадает в руки ребенка, подвергается всестороннему испытанию. О чем это говорит? О том, что дети — исследователи, мыслители и открыватели. Давайте по поможем им делать новые открытия. Кто знает, может быть, мы откроем что-нибудь новое и для себя?

Существует много техник нетрадиционного рисования, их необычность состоит в том, что они позволяют детям быстро достичь желаемого результата. Например, каждому ребенку будет интересно рисовать пальчиками, делать рисунок собственной ладошкой, ставить на бумаге кляксы и получать забавный рисунок. Ребенок любит быстро достигать результата в своей работе. И каждый юный творец должен твердо знать: В творчестве нет правильного пути, нет неправильного пути, есть только свой собственный путь».

Рисовать можно везде и где угодно…

Монотопия пейзажная — вид печатной графики. Техника монотопии заключается в нанесении красок от руки на идеально гладкую поверхность печатной формы с последующим печатанием на станке; полученный на бумаге оттиск всегда бывает единственным, уникальным. 

Нам понадобятся: Бумага, кисти, гуашь.

Этап работы:

Складываем лист бумаги вдвое. На одной его половине рисуется пейзаж, на другой получается его отражение в озере, реке (отпечаток). Пейзаж выполняется быстро, чтобы краска не успела высохнуть. Половина листа, предназначенная для отпечатка, протирается влажной губкой. Исходный рисунок, после того как с него сделан оттиск, оживляется красками, чтобы он сильнее отличался от отпечатка.

Кляксография с трубочкой — это способ рисования с помощью различных клякс.

В каждой кляксе что-то есть,если в кляксу кистью влезть.

Этапы работы:

1. Зачерпнуть пластиковой ложечкой (пипеткой) краску, вылить (капнуть) ее на лист бумаги, делая небольшое пятно (капельку).

2. Коктельной трубочкой выдуваем кляксу снизу вверх в разные направления так, что бы ее конец не касался ни пятна, ни бумаги.

3. Когда клякса разделится на несколько пробегов (веточек) — выдуваем их по отдельности в нужном направлении.

4. Для получения более мелких веточек каждую большую ветку выдуваем быстрыми движениями трубочки вправо-влево, вверх-вниз. Далее проявляем фантазию и дорисовываем рисунок. 

Техника «Набрызг» — это способ рисования суть которого состоит в разбрызгивании капель краски.

Нам понадобится: акварельные краски или гуашь, зубная щетка и стека, плоская палочка (от мороженного), карандаш, пластиковая линейка или расческа.

Этапы работы:

1. Смочить щетку водой.

2. Стряхнуть лишнюю воду, чтобы не было клякс.

3. Набрать немного краски на зубную щетку.

4. Взять щетку в левую руку, а стеку в правую.

5. Держать щетку над листом, отвернув от себя, и быстрыми движениями проводить стекой по поверхности щетки, по направлению к себе (снизу вверх). Брызги полетят на бумагу. При набрызгивании можно менять направление движения руки (по вертикали, горизонтали, наклонно, волнообразно), изменять величину крапинок, приближая или отдаляя брызги от листа бумаги. Можно использовать краски разного цвета и разной густоты. Применение одновременно нескольких красок помогает создать многоцветный рисунок. В зависимости от количества цветов и от интенсивности напыления каждый раз будет получаться новая, отличная от предыдущих картин работа.

Оттиск — техника рисования засушенными листьями.

Нам понадобятся: Гуашь, салфетки, вода, кисти, листик сухой.

Этапы работы:

1. Нанести краску на засушенный лист (опустить его в тарелочку с краской или аккуратно с помощью кисти нанести краску на одну из его сторон).

2. Наметить на бумаге место для отпечатка, приложить намазанную поверхность засушенного листа, слегка прижать. Можно взять лист китайской капусты. 

3. Теперь на свое усмотрение можете дорисовать не достающие детали вашего пейзажа или кисточкой или любым понравившимся нетрадиционным способом рисования.

Рисование необычными материалами и оригинальными техниками позволяет детям ощутить незабываемые положительные эмоции, а занятия чем либо позитивным вместе с родителями способствует развитию внутрисемейных связей, эмоцианальному положительному семейному общению, умению находить общие интересы и занятия и просто лучше слышать и понимать друг друга.

воспитатель МАДОУ Д/с №3 «Дюймовочка» г. Бирск —  Кузнецова Е.И.

  

Рисунок веселые кляксы. Кляксография

Рисунки из клякс — отличная идея, которая может разнообразить ваше с ребенком творчество. Ее нам подсказал талантливый питерский художник Сергей Рублев. Для Галки-Игралки Сергей подготовил небольшой мастер-класс, который позволит вам с малышом создать свою необычную (и наверняка, не одну) картину из кляксы. Попробуйте, это совсем несложно, а результат может быть очень эффектным.

Сначала небольшая предыстория. Прошлым летом я много времени проводил в компании своего племянника Марка, которому на тот момент было 4 года. Когда мы в очередной раз искали, чем бы заняться, я вспомнил об акварельных кляксах, и мы взялись за дело. И так увлеклись, что за пару часов у нас получилось около 50 клякс. А Марка не так-то просто чем-то заинтересовать, тем более надолго!

Позже, делая уборку в шкафу, я наткнулся на наши художества и решил их дорисовать с помощью туши. Так из клякс получилась серия городских и морских пейзажей, а я после нескольких лет работы и рисования на компьютере снова влюбился в акварель.

Хотите тоже попробовать создать свой маленький шедевр из кляксы? Это будет интересно деткам (да и взрослым) самых разных возрастов (Прим.ред.: с малышами мы используем прием «из руки в руку» ; также это может быть прекрасной идеей для маминого творчества ). Технология достаточно простая, а материалы для творчества наверняка найдутся у вас дома.

1. Нам понадобятся акварельные краски, достаточно 6-12 цветов. Бумага может быть любая, например, мы с племянником рисовали на обычной офисной. Кисти лучше всего взять большие, ими легче и быстрее закрашивать лист. Также пригодятся банка с водой и тряпочка или бумажные полотенца.

2. Листы бумаги перед рисованием складываем пополам: на одной стороне мы будем рисовать, на другой получится отпечаток.

3. Смачиваем кисть водой и берем краску. Воды должно быть достаточно, чтобы цветовые пятна могли смешиваться на бумаге, тогда получится красивый переход между цветами. Рекомендую использовать не больше 3-4 цветов, тогда пятна получатся яркими и насыщенными и не рискуют превратиться в грязно-серые.

4. Когда одна сторона листа раскрашена, можно складывать его пополам.

5. Разглаживаем сложенный лист, чтобы отпечаток получился более четкий и яркий.

6. Клякса готова. Уберем ее пока в сторону, чтобы подсыхала, а пока можно делать следующую.

7. Когда клякса высохла, мы можем дорисовать ее фломастерами, карандашами и гелевой ручкой.

Как же «оживить» нашу кляксу? Сюжет можно продумать заранее или дофантазировать, уже когда клякса будет готова. В первом случае это может быть цветок, бабочка, солнышко или сердце (кстати, интересная идея для валентинки) — что-то симметричное. Тогда вы просто наносите половинку желаемого рисунка на половину листа.


Тема занятия: Кляксография и акварель

Возраст детей — 4-6 лет

Цель: развитие творческих способностей детей через знакомство с нетрадиционными методами рисования.

Задачи:

Обучающие — овладение технологией кляксографии и методом примакивания акварельными красками.

Развивающие — развитие творческого начала, воображения, фантазии на основе ознакомления с нетрадиционными методами рисования.

Воспитывающие — воспитывать у воспитанников аккуратность, собранность при выполнении приёмов работы, трудолюбие, умение слушать.

Методическое оснащение:

Образцы ранее выполненных работ, иллюстраций к детским книгам.

Необходимые материалы: лист мелованной бумаги, формат А-3, чернила, палитра, акварельные краски, баночка с водой, кисти.

Ход занятия.

1. Вступление.

Кляксография — это один из приемов, который любят как дети, так и взрослые. При помощи кляксы и потока воздуха появляются необычные силуэты, которые потом художники превращают в деревья, сказочные персонажи, цветы и многое другое.

Сегодня мы с вами познакомимся лишь с одним способом кляксографии, но для начала мы познакомимся с иллюстрациями знаменитых художников, которые использовали этот метод рисования в своих работах. Это творчество Эрика Булатова и Олега Васильева.

Как вы думаете что помогло этим художникам создать образ дремучего леса?

Правильно! Кляксы!

Кляксы бывают разные: страшные и милые, злые и добрые. Все зависит от фантазии художника.

Послушайте стихотворение о кляксах.

Замечательная клякса.

В каждой кляксе

Кто-то есть,

Если в кляксу

Пальцем влезть.

В этой кляксе —

Кот с хвостом,

Под хвостом —

Река с мостом,

Судоходная река

Для судов и судака.

На мосту —

Чудак с чудачкой.

Под мостом —

Судак с судачкой,

И плывут туда-сюда

Всевозможные суда:

Туда плывут с тудачками,

Сюда плывут с сюдачками,

Отражаются в реке

Судаки с чудачками,

Чудаки с судачками.

Этой кляксе — конец,

Надо сделать новую,

В ней — огромный дворец

И балкон с коровою!

2. Подготовка детей к практическому занятию.

Ребята, сегодня и мы с Вами при помощи клякс будем создавать различные образы деревьев. А поможет нам в этом волшебная баночка с чернилами. Чернила не отстирываются от одежды, поэтому проверяем, чтобы у всех были фартуки и нарукавники.

3. Практическое занятие.

А теперь приступим к созданию кляксографии. Для этого посредине листа ставим большую кляксу чернил и начинаем дуть. Дуем таким образом, чтобы наша клякса росла вверх, превращаясь в дерево.

(Комментарий педагога к каждому этапу изготовления, помощь детям в процессе работы). Кляксы надо выдувать. Поэтому дети быстро устают.

Физкультминутка:

Раз — подняться, потянуться,

Два — нагнуть, разогнуться,

Три — в ладоши, три хлопка,

Головою три кивка.

На четыре — руки шире,

Пять — руками помахать,

Шесть — на место тихо сесть.

После того, как наши деревья готовы, приступаем к завершению работы, используя метод примакивания акварельными красками. На палитре смешиваем желтый и синий цвета. Получаются различные оттенки зеленого. Делаем кистью примакивания, создавая листья у дерева и траву.

Мастер — класс по рисованию (изучение различных техник рисования с детьми дошкольного возраста)

Мастер-класс. Нетрадиционная техника рисования — кляксография «Волшебные кляксы»

Мастер — класс рассчитан для родителей и воспитателей, а также детей дошкольного возраста — от 3 до 6 лет.

Назначение мастер — класса: Кляксография — это отличный способ весело и с пользой провести время, поэкспериментировать с красками, создать необычные образы. Раздувая кляксы нельзя точно предугадать, как они разойдутся, перельются друг в друга, и каков будет окончательный результат… Такое занятие будет интересно и взрослым и детям. Причем не только интересно — но и полезно: например, в качестве артикуляционной гимнастики. Также рисование выдуванием через соломинку укрепляет здоровье и силу легких и дыхательной системы (что особенно полезно при кашле).

Хочется отметить, что с помощью данного вида рисования хорошо, получается, изображать различные деревья (получаются замысловатые стволы, ветки и т.д.). Попробуйте, результат Вам понравится!

Цель : Познакомить детей с таким способом изображения, как кляксография, показать её выразительные возможности

Задачи:

Вызвать интерес к «оживлению» необычных форм (клякс), учить дорисовывать детали объектов (клякс), для придания им законченности и сходства с реальными образами; учить видеть необычное в обычном;

Развивать образное мышление, гибкость мышления, восприятие, воображение, фантазию, интерес к творческой деятельности; воспитывать аккуратность в рисовании красками.

Материалы для работы:

Альбомные листы;

Гуашь или акварель;

Крупная кисть;

Трубочка для напитков или можно использовать пипетку;

Вода в баночке;

Влажная тряпочка — вытирать руки, если запачкаются;

Ватные палочки;

Пластилин.

Кляксографию можно совмещать с разными техниками изобразительного искусства, такими как монотипия, аппликация и другими. Некоторые из них и представлены в данном мастер — классе.

Этот способ рисования «кляксами» можно использовать в работе с детьми 3-4 лет и старше.

Макаем кисть в разведенную краску и брызгаем на лист бумаги. Чем гуще краска — тем насыщеннее цвет, но труднее она выдувается.

Берем трубочку, и дуем через нее на разноцветные капли краски, они превращаются в кляксы. При этом лист бумаги можно поворачивать — кляксы получаются ещё интереснее!

Кляксография с использованием ватных палочек

С помощью крупной кисти ставим кляксу в уголке листа.

С помощью трубочки раздуваем краску в разных направлениях. Получилось вот такое дерево!

Немного подумав, это дерево мне напомнило рябину, одиноко растущую на склоне. С помощью ватных палочек подрисовываем ягоды и листья.

Оформляем рамку также с помощью ватной палочки. Именно о такой рябине, возможно, и написала стихотворение «Рябина» Ирина Токмакова.

Красненькую ягоду

Мне дала рябина.

Думал я, что сладкую,

А она — как хина.

То ли эта ягодка

Просто недозрела,

То ль рябина хитрая

Подшутить хотела?

Кляксография с использованием фломастера

Также как и в предыдущих работах ставим кляксу и выдуваем с помощью трубочки ствол и ветки. А это что за дерево получилось? Конечно же, сосна!

С помощью зеленого фломастера дорисовываем иголки.

Сосна

Над жёлтой осыпью обрыва

Склонилась старая сосна,

Корнями голыми пугливо

Поводит по ветру она. (Тимофей Белозеров)

Украсив все веточки пышными иголочками, приступаем к оформлению полянки вокруг сосны. Наносим кляксы зеленого цвета и раздуваем с помощью трубочки. Получились стебельки цветов!

Дорисовываем на стебельках листья и цветы — одуванчики. Теперь одинокой сосне вовсе не скучно!

Кляксография + пластилинография

С помощью пластилина создаем морское дно: лепим ярких рыбок, морскую звезду, камешки.

Но чего — то не хватает в этом рисунке? Конечно же, морских водорослей! С помощью волшебных клякс и трубочки появляется и морская трава! Кляксы располагаются между камешек, и если краска слегка зайдет на пластилин, ничего страшного, его с легкостью можно подтереть тряпочкой и работа не будет испорчена.

Ну чем не морское дно! Дорисовываем пузырьки и рисунок готов!

Рыбка рыбку догоняла,

Рыбка хвостиком виляла,

Ткнулась в брюшко — Догнала!

— Эй, подружка! Как дела? (Т. Второва)

А этот способ рисования подойдёт для детей более старшего возраста (5 — 7 лет). Набираем краску на кисточку и сбрызгиваем на лист бумаги. С помощью трубочки выдуваем волшебные кляксы. А теперь самый ответственный момент — нужно включить своё воображение!

В каждой кляксе

Кто-то есть,

Если в кляксу

Кистью влезть.

В этой кляксе —

Кот с хвостом,

Под хвостом —

Река с мостом,

На мосту —

Чудак с чудачкой.

Под мостом —

Судак с судачкой.

Рисунок нужно рассмотреть с разных сторон и только потом дорисовать отдельные детали, чтобы образ стал более узнаваем.

Кляксография + монотопия

Заранее готовится фон с помощью техники — монотопия. На высохший слой наносятся кляксы разного цвета и выдуваются с помощью трубочки.

Во время рисования ребенок проявляет свою фантазию, отражает мысли и чувства на бумаге. Не зря детские психологи по рисунку могут рассказать о психоэмоциональном состоянии малыша. Тем не менее в первую очередь это творчество, которое можно разнообразить использованием необычных материалов или техник исполнения. Рассмотрим, как используется кляксография в детском саду.

Для чего нужны занятия

Специалисты также отмечают, что процесс выдувания кляксы способствует укреплению легких и служит отличным профилактическим средством от кашля и других заболеваний дыхательной системы.

После того как рисунок готов, воспитателю рекомендуется задавать наводящие вопросы ребятам. На что похоже пятно? Какое настроение оно передает? Это животное, растение или предмет? Такой диалог позволяет развивать речь и мышление детей.

Уроки кляксографии в детском саду учат воспринимать и распознавать силуэтные картинки, задействовать окружающее пространство рисунка и грамотно располагать объекты, улучшают координацию движений. Такая техника раскрывает потенциал и раскрепощает ребенка, поскольку некоторые стесняются рисовать в окружении других ребят, считая, что у них не очень хорошо получается. Такая техника — не только очень полезное, но и веселое времяпрепровождение.

Положительные стороны

За последние пару лет занятия кляксографией стали необычайно популярными. Это своего рода арт-творчество увлекает как детей, так и взрослых. По некоторым данным, во время рисования активно задействованы клетки головного мозга, развивается гибкость мышления, терпение, усидчивость, аккуратность. Занятия благотворно влияют на нервную систему.

Используемые материалы

Техника рисования кляксографией в детском саду используется в последнее время все шире и шире.

Для занятия потребуются следующие составляющие:

  • листы бумаги формата А4.
  • акварельные краски или гуашь.
  • трубочка для напитков, соломка или пипетка.
  • толстая кисточка.
  • стакан с водой.
  • влажные салфетки или тряпка для вытирания рук.
  • ватные палочки.
  • пластилин, если детали кляксы будут вылепливаться.

Этапы творческого процесса

Перед тем как начать изобразительный процесс, хорошо бы определиться с его направленностью, то есть выбрать тему рисунка. Если это пейзаж за окном или космическая тематика, вероятнее всего, понадобится несколько маленьких пятен. Если одиночный персонаж, животное или рыбина, то начинают с одной большой кляксы. Для этого хорошо подходит прием кляксографии с трубочкой. В детском саду это наиболее популярный метод.

В первую очередь малыш должен придумать, что он хочет изобразить. Затем постараться раздуть кляксу и дорисовать кисточкой завершающие детали. Именно от ребенка зависит, будет ли это добрая картинка или злое черное пятно. Помимо того, чтобы нарисовать изображение, дети, возможно, захотят рассказать о том, что хотели изобразить и почему.

Техники рисования

Каждый прием нанесения рисунка кляксографией в детском саду следует тщательно изучить с малышами. Техника подразумевает некоторые отличия в методах:


Приемы рисования

Нанесение изображения таким способом предполагает использование разнообразных инструментов:

  1. Ватные палочки. Данный прием выполняется с использованием одной из перечисленных техник. В зависимости от задумки юного художника на лист бумаги ставят крупную кляксу или множество мелких, дополнять рисунок можно сразу или после выдувания. С помощью ватных палочек дорисовывают детали. Лучше всего данный прием подходит для прорисовки цветов, деревьев и пейзажей. Поскольку при создании рисунка не используются кисти, такое творчество считается креативным.
  2. Складывание листа бумаги. На основу наносится любое количество пятен, размер не имеет значения. Затем лист складывают: если нужна симметрия, то посередине, если нет, то по желанию. Затем бумага разворачивается и начинается творческий процесс.
  3. Совмещение нескольких способов. Более продвинутый этап кляксографии сочетает в себе применение сразу нескольких изобразительных техник.

Мотивация детей

Чтобы мотивировать детей на творческий процесс в определенной тематике, можно придумать развлекательную игру или рассказать небольшую предысторию.

К примеру, листопад унес все листья с деревьев и их необходимо вернуть назад. После этого предложить детям в технике кляксографии нарисовать дерево. Или пришла пора пчелам собирать мед, а цветы с поляны исчезли, как же им помочь? Дети должны сообразить, что необходимо вернуть цветы, и нарисовать их капельным методом.

Рисунки кляксографией с трубочкой в детском саду очень нравятся малышам, это также является своеобразным мотиватором к действию.

Детям постарше можно рассказать историю о чудесной стране Кляксландии, где живут необычные жители. Чтобы попасть туда, надо изобразить себя в виде необычного существа. Помимо творческого процесса, кляксография в детском саду помогает развивать в детях доброту. Для мотивации также неплохо использовать старые сказки. Во время занятия ребятам можно рассказать любую историю и в месте, где главный герой испытывает трудности, предложить изобразить персонажа, который придет на выручку.

В помощь воспитателю на занятиях кляксографией в детском саду — Буратино. Он может стать отличным мотиватором. Герой детского произведения носом ставил на бумаге пятна. Детям понравится такой образ.

Особенности занятий в разных возрастных группах

Занятия и выбор тематики по кляксографии должны проводиться с учетом возрастной группы.

Для работы с малышами рекомендуется начать с самого простого, к примеру, изобразить салют или звездное небо. На последующих занятиях задачу усложняют и предлагают группе оживить кляксу, нарисовать глаза, нос и так далее. Кляксография в детском саду является начальным этапом, на котором дети постигают азы техники.

В группах постарше ребята должны проявлять больше творчества и фантазии, уметь гармонично вписать кляксу в полноценный рисунок, совмещать два или более пятна в единую композицию. Кроме того, занятие может быть разбито на две части. На первом уроке дети рисуют в одной из техник кляксографии, а на другом с помощью пластилина вылепливают дополнительные детали. К примеру, если пятну приделать уши и лапы, получится заяц, медведь или другое животное. Маленьким кляксам можно добавить плавники, хвост и получить рыбок в море или аквариуме.

Самые старшие воспитанники фантазируют на тему эмоций кляксы. Им предлагают не просто оживить персонажа, а также наделить его чертами характера, сделать добрым или злым, грустным или веселым. При этом ребенок должен объяснить, почему клякса находится в том или ином настроении.

Любой родитель и педагог должен знать, как найти подход к ребенку, что он любит и чем увлекается. Преподнеся информацию в игровой форме, наверняка получится заинтересовать детей такого рода творчеством.

Вестерн-блот — обзор

Вестерн-блот-анализ гемооксигеназы 1

Вестерн-блот-анализ используется для обнаружения индукции белка HO-1 в ответ на LPS-индуцированную эндотоксемию, ишемию и реперфузию миокарда или гипоксическую стимуляцию. Концентрацию белка в образцах измеряют методом с использованием бицинхониновой кислоты (BCA) в соответствии с инструкциями производителя (Pierce, Rockford, IL).

1.

Белковые экстракты разморозить на льду.

2.

Смешать и перенести 5 мк мкл в двух экземплярах в пробирки на 1,5 мл.

3.

Добавьте 20 мкл л воды в каждую пробирку.

4.

Стандарт – БСА (25–0,78 мк г) в 2-кратном разведении.

а.

Концентрация, поставляемая с набором, составляет 2 мг/мл.

б.

Удалите 25 µ л и добавьте к 25 µ л дистиллированной H 2 O в двух повторах.

в.

Смешайте и перенесите 25 мк л в следующую пробирку, повторите и выбросьте 25 мк л из последней пробирки.

д.

Включить пробел (без BSA).

5.

Смешайте реагент BCA (потребуется 0,5 мл на пробирку).

а.

Добавьте 1 часть синего раствора к 50 частям прозрачного раствора.

б.

Перемешайте и дайте постоять при комнатной температуре в течение 5 мин (данный реагент стабилен в течение 1 дня).

6.

Добавьте в каждую пробирку по 0,5 мл реагента и перемешайте.

7.

Инкубировать при 37°С в течение 30 мин.

8.

Перенесите 200 µ мкл в 96-луночный планшет и прочитайте в планшет-ридере при OD 562 .

9.

Постройте стандартную кривую и рассчитайте концентрацию образцов.

Аликвоты, содержащие 25 мкг г тканевого белка, фракционируют на минигелях 10% (масса/объем) трицин-додецилсульфат натрия (ДСН)-полиакриламид следующим образом.Для одного белкового минигеля приготовьте бегущий гель, смешав следующее:

Гель-буфер (3 M Трис-HCl, pH 8,45) 1,25 мл
Раствор акриламида [4] ) Акриламид, 1,5% (W / V) Бисакриламид] 0,775 мл
Distild H 2 O 1,225 мл
N, N, N ‘ ,N’ Тетаметилэтилендиамин (TEMED) 1.25 µ l
Персульфат аммония (APS; 10%, w/v) 25 µ l

После добавления TEM ED смесь загружают в кассету с минигелем (толщиной 1,5 мм; RPI, Маунт-Проспект, Иллинойс) с последующим осторожным наслоением 95% (об./об.) этанола. После полимеризации текущего геля (~ 20 мин) этанол удаляют, верхнюю часть геля промывают дистиллированной H 2 O и удаляют избыток воды бумагой Whatman (Клифтон, Нью-Джерси) 3MM.

Подготовьте укладку GEL:

L
Гель-буфер (3 м Трис-HCL, рН 8,45) 0,375 мл
Акриламидный раствор [48% (W / V) Акриламид, 1,5% / v) бисакриламид] 0.125 мл
Distild H 2 O 1.0625 мл
Temed 3.75 μ L
APS (10%, W / V) 25 µ l

После добавления TEMED и APS раствор быстро перемешивают и примерно 1.2 мл смеси загружают поверх бегущего геля. В верхнюю часть кассеты вставляют гребенку с 10 лунками и дают полимеризоваться укладочному гелю.

Образцы готовят в 1 х буфере для образцов [5 х буфере для образцов: 10% (масса/объем) SDS, 10% (объем/объем) 2-меркаптоэтанол, 0,2 М Трис (pH 6,8), 50% (объем) /v) глицерин, 0,5% (мас./об.) бромфенолового синего] и нагревают при 100° в течение 5 мин, а затем помещают на лед. Маркеры молекулярной массы Rainbow (Amersham Pharmacia Biotech, Piscataway, NJ) также используются для определения молекулярной массы белков и контроля эффективности переноса.

Образцы подвергают электрофорезу с катодным (верхняя камера) буфером [0,1 M Tris (pH 8,25), 0,1 M Tricine и 0,1% (вес/объем) SDS] и анодным (нижняя камера) буфером (0,2 M Tris, pH 8,9) при 80 В, чтобы образцы проходили через стопинг-гель. Увеличьте напряжение до 100 В, чтобы запустить гель, пока фронт красителя не достигнет дна геля.

После электрофореза гелевая кассета разбирается и белки переносятся на нитроцеллюлозные фильтры Protean (Schleicher & Schuell, Keene, NH) с использованием ячейки Mini Trans-Blot (Bio-Rad, Hercules, CA) в буфере для переноса [25 m M База Tris, 0.2 M глицин и 15% (об./об.) метанол] при 20 В, в течение ночи при 4°С при осторожном перемешивании.

После переноса разберите и пометьте стандарты молекулярной массы (предварительно окрашенные стандарты белка) ручкой для стирки или нитроцеллюлозным маркером. Уравновешивают блоты в TBST [25 м M Tris (pH 8), 125 м M NaCl и 0,1% (об./об.) Tween 20] в течение 10 мин на шейкере при комнатной температуре. Затем блоты блокируют 4–10% (масс./об.) обезжиренного сухого молока гвоздики в TBST в течение 40 мин с последующей инкубацией с поликлональной антисывороткой против HO-1 (SPA-895; StressGen Biotechnologies, Виктория, Британская Колумбия, Канада). разведенный 1:1000 в TBST плюс молоко, при комнатной температуре в течение 2 часов.Затем блоты промывают три раза (каждое по 15 минут) 4% (масс./об.) молока в TBST перед инкубацией с козьей антикроличьей сывороткой, конъюгированной с пероксидазой хрена (Amersham, Piscataway, NJ), разбавленной 1:4000, в течение 1 часа. при комнатной температуре. Блоты промывают 4% (масс./об.) молоком в TBST два раза (по 15 мин), а затем два раза (по 10 мин) в TBST. Затем блоты обрабатывают реагентом с усиленной хемилюминесценцией (Pierce) и экспонируют на рентгеновской пленке. Включите флуоресцентную ленту на краю геля, чтобы определить положение стандартов молекулярной массы.Пример вестерн-блоттинга HO-1 белковых экстрактов, выделенных от мышей, получавших ЛПС, показан на рис. 2.

Рис. 2. ЛПС индуцирует белок НО-1 в тканях сердца и легких. Общий белок сердца и легких экстрагировали у мышей, получавших (+) или без (-) ЛПС в течение 24 часов. Аликвоты (25 мкл г) подвергали Вестерн-блоттингу с поликлональной антисывороткой против НО-1.

Протоколы нозерн- и саузерн-блоттинга и введение

Саузерн-блоттинг-протокол

Необходимые материалы

  • Реагенты для выделения и очистки ДНК
  • Реагенты для рестрикционного расщепления ДНК
  • Реагенты и буферы для электрофореза в агарозном геле
  • Аппарат для электрофореза в агарозном геле
  • Фильтровальная бумага Whatman
  • Бумажные полотенца
  • Положительно заряженная нейлоновая мембрана
  • ДНК спермы лосося
  • Пробирка для гибридизации
  • Рентгеновские пленки

Требуются буферы

  • 10X TBE (93290), используемый во время гель-электрофореза.Буфер TAE (65497) можно использовать вместо TBE для более крупных фрагментов ДНК. В качестве альтернативы можно использовать буфер Bionic™ (B6185) вместо TAE или TBE для получения более четких полос за меньшее время. Вы можете приготовить буфер 10X TBE со следующими реагентами:

    ТРИС 1,3 М
    Борная кислота 450 мМ
    ЭДТА 25 мМ

  • 20X SSPE (S2015), используемый в качестве буфера для прегибридизации и переноса. 20X SSC (93017) можно использовать вместо SSPE в аналогичных протоколах блоттинга. В качестве альтернативы вы можете приготовить раствор 20X SSPE со следующими реагентами:

    NaCl2.98 М
    ЭДТА 0,02 М
    Фосфатный буфер (рН 7,4) 0,2 М

  • Денатурирующий раствор (N1531), используемый для денатурации двухцепочечной ДНК, что делает ее доступной для зонда. В качестве альтернативы вы можете приготовить 1X денатурирующий раствор со следующими реагентами:

    NaCl 1,5 М
    NaOH (S5881) 0,5 н.
    Отрегулируйте pH до ~13

  • Нейтрализующий раствор (N6019), используемый для нейтрализации геля после денатурации двухцепочечной ДНК. В качестве альтернативы вы можете приготовить нейтрализующий раствор 1X со следующими реагентами:

    NaCl 1.5 М
    ТРИС HCl 1 М
    Отрегулируйте pH до 7,5

  • *Раствор Денхардта (D2532), используемый во время прегибридизации для блокирования неспецифических гибридизаций ДНК. В качестве альтернативы вы можете приготовить 50-кратный раствор Денхардта со следующими реагентами:

    Альбумин бычьей сыворотки (A7906) 1%
    Фиколл (F2637) 1%
    Поливинилпирролидон (PVP40) 1%

    Компоненты растворяют в воде до конечного объема 50 мл. Стерилизовать фильтрованием.

  • *2X Раствор для предварительной гибридизации (P1415), используемый для подготовки мембраны к гибридизации зонда.В качестве альтернативы вы можете приготовить раствор для прегибридизации 1X (100 мл) со следующими реагентами:

    20X SSPE 30 мл
    100-кратный раствор Денхардта 10 мл
    10% SDS 10 мл
    Вода 50 мл

  • *Раствор для гибридизации (H7140), используемый на стадии гибридизации. В качестве альтернативы вы можете приготовить раствор для гибридизации (100 мл) со следующими реагентами:

    20X SSPE 30 мл
    10% SDS 10 мл
    Вода 60 мл

  • 1X Буфер зонда, используемый для смеси зондов.(100 мкл; сделать свежим):

    1 М ТРИС, pH 7,6 50 мкл
    2 М MgCl 2 5 мкл
    0,5 М ДТТ 10 мкл
    Вода 35 мкл

  • 1X Смесь зондов (27 мкл):

    Буфер для зондов 2,7 мкл
    Олигонуклеотидный зонд (0,2 мкг/мкл) 2 мкл
    Фосфонуклеотидкиназа Т4 (PNK) 1 мкл
    Вода 11,3 мкл
    32 P-АТФ 10 мкл

  • 6X Промывочный раствор низкой жесткости, используемый для удаления низкогомологических гибридизаций и уменьшения фонового шума.Приготовьте 600 мл промывочного раствора, используя следующие реагенты:

    20X SSPE 180 мл
    10% SDS 12 мл
    Вода 408 мл

  • 1X Промывочный раствор высокой строгости, используемый для удаления близких гомологичных гибридизаций и дальнейшего снижения фонового шума. Приготовьте 600 мл промывочного раствора, используя следующие реагенты:

    20X SSPE 30 мл
    10% SDS 12 мл
    Вода 558 мл

* Буфер для гибридизации PerfectHyb™ Plus (H7033) можно использовать вместо растворов Denhardt, растворов для прегибридизации и гибридизации.PerfectHyb™ Buffer был оптимизирован для получения максимального сигнала с минимальным фоном при гибридизации всего за 1-2 часа. PerfectHyb™ Plus был разработан для работы в любом протоколе гибридизации, с использованием любого типа зонда и на любом типе мембраны (положительно заряженный или нейтральный нейлон и нитроцеллюлоза).

Выделение ДНК

Sigma-Aldrich предлагает наборы GenElute™ для выделения ДНК из растений и грибов (E5038), клеток или тканей млекопитающих (G1N70, G1N10 и G1N350) и крови (NA2010 и NA2020).Подробный протокол выделения ДНК с использованием наборов GenElute™ можно найти здесь .

Кроме того, наборы DNAstable ® (93000-001-1EA, 93021-001-1EA, 53091-016-2ML и 93121-017-1EA) могут использоваться в случае транспортировки ДНК или для хранения и стабилизации ДНК. при комнатной температуре.

Ограничение пищеварения

Расщепляют образец ДНК соответствующим ферментом рестрикции в течение 2–24 часов при 37 °C. Если образец ДНК получен клонально, достаточно времени переваривания 1-2 ч.Для геномной ДНК обычно требуется инкубация в течение ночи с избытком фермента (5-10X).

При необходимости сконцентрируйте расщепленную ДНК с помощью преципитации этанолом. Следы этанола должны быть полностью удалены перед разделением на геле.

Гель-электрофорез

Разделите расщепленную ДНК на агарозном геле. TAE следует использовать для более коротких циклов (<4 часов) и больших фрагментов ДНК, тогда как TBE следует использовать для более длинных циклов (> 4 часов) и меньших фрагментов ДНК (<1kb).В качестве альтернативы можно использовать буфер Bionic™ (B6185) для более четкого разрешения полосы за меньшее время, чем TAE или TBE (дополнительную информацию см. в разделе Данные буфера Bionic™). Окрасьте гель бромистым этидием и получите изображение геля с помощью УФ-трансиллюминатора. Если бромистый этидий был включен в агарозу перед электрофорезом, изображение геля можно получить сразу после анализа.

Трансфер

На этапе переноса ДНК (или РНК) из геля для электрофореза будет перенесена на нейлоновую мембрану, чтобы она была доступна для зонда для гибридизации и обнаружения.

  • Перенесите гель в лоток, содержащий денатурирующий раствор в количестве, достаточном для полного покрытия геля. Дважды промывают гель этим раствором, каждую промывку в течение 25 мин на шейкере.
  • Дважды промойте гель водой.
  • Дважды промойте гель нейтрализующим раствором, каждая промывка в течение 15 минут на шейкере.
  • Дважды промойте гель водой.
  • Промойте гель 20X SSPE на шейкере в течение 30 мин.
  • На вышеуказанном этапе подготовьте ватман и мембрану для процедуры переноса.
  • Отрежьте полоску нейлоновой мембраны (15356) и замочите ее в воде. Вырежьте полоску ватмана, шире геля, и замочите ее в буфере 10X SSPE (буфере для переноса).
  • Вырежьте из ватмана три полоски почти одинакового размера с гелем.
  • Вырежьте несколько бумажных полотенец почти одинакового размера с гелем.
  • Поместите устойчивую платформу на лоток, содержащий 10X SSPE.
  • Поместите на платформу сарановую пленку. Поместите ватман, пропитанный 10X SSPE, на сарановую обертку. Убедитесь в отсутствии пузырьков воздуха, скатывая их стеклянной палочкой. Убедитесь, что края бумаги Whatman касаются буфера SSPE в лотке. Этот кусок ватманской бумаги будет действовать как фитиль, протягивая буфер SSPE вверх и через гель, оставляя полосы ДНК на нейлоновой мембране.
  • Поместите гель лицевой стороной вниз на влажный ватман.Поместите мембрану поверх геля. Убедитесь в отсутствии пузырьков воздуха, скатывая их стеклянной палочкой.
  • Поместите на мембрану три полоски ватмана. Убедитесь в отсутствии пузырьков воздуха, скатывая их стеклянной палочкой.
  • Положите на него стопку бумажных полотенец, а затем груз (например, стеклянную плиту).
  • Оставьте эту сборку на ночь для полного переноса фрагментов ДНК. Перенос фрагментов ДНК размером до 15 т.п.н. занимает около 18 часов.
  • После завершения переноса поместите блот в УФ-сшиватель с автоматической настройкой. УФ-сшивание проводится для ковалентного связывания ДНК или РНК с нейлоновой мембраной, что увеличивает сигналы гибридизации во время обнаружения. Другим вариантом является запекание сухой мембраны после переноса, что приводит к нековалентным, но полупостоянным связям нуклеиновых кислот с мембраной. ДНК не может быть сшита УФ-излучением с нитроцеллюлозной мембраной и должна быть запечена.

Вестерн-блоттинг | Пути во времени

Электрофоретический перенос белков

  1. Поместите переносной сэндвич в держатель кассеты, совместив черную сторону кассеты переноса с черной стороной держателя кассеты, а прозрачную поверхность совместив с красной стороной держателя кассеты (справа).ПРИМЕЧАНИЕ. Каждый держатель кассеты может вмещать две кассеты переноса.
  2. Поместите кассетодержатель и собранные кассеты в емкость для электрофореза. Добавьте в аквариум пакет со льдом.
  3. Заполните емкость для электрофореза буфером для переноса доверху.
  4. Установите крышку на бак, совместив черный с черным и красный с красным.
  5. Перенесите белки при 100 В в течение 1 часа при комнатной температуре или при 20 В в течение ночи в холодильной камере. Если вы пересаживаетесь на ночь, не забудьте четко пометить аквариум и скоординировать действия на следующий день с другими людьми, которые живут с вами в одном аквариуме.
  6. По завершении переноса извлеките кассету переноса из резервуара. Перелейте буфер для переноса обратно в исходную бутылку, чтобы его можно было использовать повторно.
  7. Разберите кассету переноса. В зависимости от вашего графика:
    • Если вы собираетесь продолжить западную процедуру, пропустите описанный ниже шаг регидратации (шаг 1) и перейдите к шагу блокировки (шаг 2). Будьте осторожны, чтобы мембрана оставалась влажной!
    • Если вы будете обрабатывать мембрану позже, дайте ей высохнуть.Оберните мембрану полиэтиленовой пленкой и сохраните ее для последующего лабораторного периода.

Упражнение 2 – Иммунодетекция

Это многодневная процедура. Время может варьироваться для разных классов.

Мембраны регидратированные и обработанные блокирующими реагентами

  1. Надев ПЕРЧАТКИ, разверните сухую кляксу из полиэтиленовой пленки. Используйте предварительно окрашенные стандарты, чтобы определить сторону мембраны, с которой связаны белки.Погрузите мембрану в метанол этой стороной вверх. Аккуратно встряхивайте мембрану вручную в течение 30-60 секунд, пока мембрана не станет равномерно смоченной метанолом. Декантируйте метанол в соответствующий контейнер и заполните лоток наполовину деионизированной водой. Аккуратно встряхивайте мембрану в течение дополнительной минуты.
  2. Декантируйте воду и замените ее достаточным количеством TBS-T (забуференный Tris физиологический раствор, содержащий 0,05% Tween 20), чтобы покрыть пятно. Поместите пятно на качающуюся платформу.Уравновешивают пятно в TBS-T в течение 5 минут при медленном покачивании. По истечении 5 минут слейте воду из TBS-T.
  3. Налейте достаточное количество блокирующего раствора (5% обезжиренного молока в TBS-T) на пятно, чтобы покрыть его.
  4. Накройте лоток небольшим куском полиэтиленовой пленки. Четко пометьте лоток и поместите лоток на качающуюся платформу в холодильной камере. Блот должен свободно плавать в лотке, чтобы обе стороны были вымыты. Инкубируйте блот не менее часа или до 24 часов при температуре 4 °C.

Мембраны промывают и инкубируют с первичными антителами (~24 часа)

  1. Найдите свое пятно в холодильной камере и верните его в лабораторию.
  2. Снимите пластиковую пленку с контейнера, в котором находится блот, и слейте блокирующий раствор. СОХРАНИТЕ полиэтиленовую пленку! Он понадобится вам, чтобы снова накрыть контейнер!
  3. Добавьте достаточное количество TBS-T, чтобы покрыть пятно, и поместите контейнер на качающуюся платформу. Рок в течение 5 минут.
  4. Слить TBS-T. Добавьте 15 мл первичных антител, разведенных в блокирующем буфере.
  5. Накройте контейнер таким же куском полиэтиленовой пленки и поместите лоток на качающуюся платформу в холодильной камере с температурой 4 ̊C.Убедитесь, что блот свободно плавает в лотке, а стандарты находятся на верхней поверхности блота. Инкубируйте в течение ночи при 4 ̊C при медленном покачивании. ПРИМЕЧАНИЕ. Время выполнения этого шага является наиболее важным в процедуре. Сокращение времени инкубации с первичными антителами может снизить чувствительность вестерн-блоттинга.

Связывание и обнаружение вторичного антитела (1,5–2 часа)

  1. Найдите свою кляксу в холодильной камере и принесите ее в лабораторию.
  2. Осторожно слейте антитело из блота в пробирку с пометкой «Использованное первичное антитело». (Антитела дороги. К счастью, растворы можно использовать повторно.)
  3. Заполните лоток с пятном примерно наполовину раствором TBS-T. Поместите лоток на качающуюся платформу и промойте мембрану в течение 5 минут, чтобы удалить несвязанное первичное антитело. Слейте воду из TBS-T после завершения промывки.
  4. Повторите шаг 3 еще раз, всего две промывки.
  5. Добавьте достаточно вторичного антитела, чтобы покрыть пятно, и инкубируйте мембрану в течение 1 часа при осторожном покачивании при комнатной температуре.Вторичное антитело, конъюгированное с пероксидазой хрена (HRP), разводили в TBS-T.
  6. Осторожно слейте антитело из блота в пробирку с пометкой «Использованное вторичное антитело».
  7. Промойте мембрану 3 раза по 5 минут TBS-T, как в шаге 3.
  8. Слейте TBS-T из блота. С помощью микропипетки P1000 покройте пятно 1 мл 3,3’5,5’-тетраметилбензидина (ТМБ), колоригенного субстрата для HRP. Пусть цвет продолжает развиваться, пока не станут видны отчетливые полосы.Полосы, вероятно, станут очевидными в течение нескольких минут. Не допускайте чрезмерного развития блота, когда становятся очевидными неспецифические полосы.
  9. Остановите развитие цвета, разбавив субстрат избытком деионизированной воды. Слейте разбавленный субстрат в контейнер для отходов.
  10. Дайте пятну высохнуть на кусочке фильтровальной бумаги. Запишите свои данные с помощью камеры мобильного телефона.

Наверх

Протокол вестерн-блоттинга: советы, методики и видео: Novus Biologicals


Ссылки по теме

Справочник по Вестерн-блоттингу

Руководство по поиску и устранению неисправностей

Рекомендуемые средства управления загрузкой

Подготовка проб

Использование геля SDS-PAGE

Перенос белка из геля на мембрану

Иммуноблоттинг и детекция

Зачистка мембраны и повторное зондирование

Хранение блотов

Просмотреть все протоколы

СОДЕРЖАНИЕ

ВЕСТЕРН-БЛОТЫ ВВЕДЕНИЕ

Вестерн-блоттинг

использует антитела для идентификации отдельных белков в лизате клетки или ткани.Антитела связываются с высокоспецифичными последовательностями аминокислот, известными как эпитопы. Поскольку аминокислотные последовательности варьируются от белка к белку, вестерн-блоттинг можно использовать для идентификации и количественного определения одного белка в лизате, содержащем тысячи различных белков. Во-первых, белки отделяют друг от друга в зависимости от их размера с помощью электрофореза в геле SDS-PAGE. Затем белки переносят из геля на мембрану с помощью электрического тока. Затем мембрану можно обработать первичными антителами, специфичными к представляющим интерес белкам-мишеням.Затем наносят вторичные антитела, связанные с ферментами, и, наконец, добавляют субстрат, который реагирует со вторичным ферментом, связанным с антителами, для обнаружения комплекса антитело/белок.

  Распечатайте копию нашего протокола вестерн-блоттинга

Субсотовое расположение Рекомендуемый буфер
Целоклеточный лизат НП-40
Ядро РИПА
Митохондрии РИПА
Цитоплазма Трис-HCl
Связанный с мембраной белок РИПА

ПРИГОТОВЛЕНИЕ ЛИЗАТА КЛЕТОК ИЗ ПРИСОЕДИНЕННЫХ КЛЕТОК

  1. Промыть чашки для клеточных культур на льду ледяным PBS.

  2. Аспирируйте PBS и добавьте охлажденный льдом буфер для лизиса (1 мл на конфлюэнтную 10 7 клеток/чашку 100 мм/колбу 150 см 2 ). В таблице выше приведены рекомендации по буферу для лизиса, основанные на субклеточном расположении интересующего белка.

  3. С помощью скребка для клеток соскребите прилипшие клетки с чашки и перенесите клеточную суспензию в микроцентрифужную пробирку. При необходимости клетки можно обработать трипсином и промыть PBS перед ресуспендированием в лизирующем буфере.

  4. Встряхивайте клетки в течение 30 минут при 4°C.

  5. Смесь лизатов клеток отцентрифугировать при 4°C.

  6. Примечание. Время и сила центрифугирования различаются для каждого типа клеток, но обычно рекомендуется 20 минут при 12 000 об/мин.
  7. Перенесите супернатант (лизат) в свежую пробирку на льду.

ПОДГОТОВКА ПРОБ

  1. Определите концентрацию белка в каждом клеточном лизате.

  2. Определите количество белка для загрузки (рекомендуется: 10–50 мкг на дорожку) и добавьте равный объем 2X буфера Лэммли.

  3. Восстановление и денатурация образцов путем кипячения лизатов в буфере Лэммли при 95-100°C в течение 5 минут.

    Примечание. Этот шаг следует пропустить только в том случае, если в описании антител рекомендуются невосстанавливающие или неденатурирующие условия.


SDS-PAGE ГЕЛЬ-ЭЛЕКТРОФОРЕЗ


Размер белка Процент геля
4–40 кДа 20%
12–45 кДа 15%
10–70 кДа 12.5%
15–100 кДа 10%
25–100 кДа 8%
>200 кДа 4-6%

  1. Приготовьте или купите готовый гель с соответствующим процентным содержанием полиакриламида, чтобы наилучшим образом разделить интересующий вас белок на основе молекулярной массы.

  2. Загрузите образцы, содержащие равные количества белка (10–50 мкг/дорожку белка из клеточного лизата или 10–100 нг/дорожку очищенного белка), приготовленные в буфере для образцов, в лунки SDS-PAGE.Включите маркер молекулярной массы в одну из дорожек.

  3. Заполните аппарат для электрофореза рабочим буфером 1X в соответствии с инструкциями производителя.

  4. Используйте гель в соответствии с рекомендациями производителя.

    Примечание: 1-2 часа при 100 В является стандартным, но может потребоваться оптимизация времени и напряжения.

ПЕРЕНОС БЕЛКА

  1. Подготовьте ПВДФ-мембрану, смачивая ее в метаноле в течение 30 секунд, а затем ненадолго замачивая в дистиллированной воде с последующим добавлением буфера для переноса 1X.Аккуратно обращайтесь с мембраной, лучше всего с закругленным пинцетом, чтобы не поцарапать и не проколоть поверхность.

    Примечание. Мембрана PVDF должна быть смочена в метаноле, но можно использовать буфер для переноса, не содержащий метанола. НЕ смачивайте нитроцеллюлозные мембраны метанолом, иначе мембрана растворится.

    Примечание. Мембрана из ПВДФ обладает более высокой связывающей способностью и лучше всего подходит для низкоэкспрессируемых белков, но нитроцеллюлозная мембрана идеально подходит для низкомолекулярных белков.


  2. Замочите фильтровальную бумагу и губки в буфере для переноса 1X на 10 минут перед сборкой «сэндвича» для переноса.

  3. После электрофореза удалите гель из аппарата для электрофореза и уравновесьте его, замачивая в буфере для переноса 1X на 10 минут.

  4. Подготовьте переносной сэндвич, как показано на рисунке ниже. Последовательно соберите слои сэндвича. Аккуратно удалите пузырьки воздуха валиком или пипеткой. Пузырьки между гелем и мембраной препятствуют переносу белков на мембрану.

  5. Поместите сэндвич в кассету для переноса и выполните полусухой или влажный перенос в соответствии с инструкциями производителя блоттинга.

  • Полусухой перенос: обычно более быстрый, лучше подходит для более крупных белков >100 кДа. Обычно используемое время передачи: 1 час при постоянном токе (1,25 мА/см2).

  • Влажный перенос: рекомендуется для более мелких белков, особенно белков

Примечание. Время переключения/напряжение может потребовать оптимизации. Может произойти избыточный перенос (или протягивание белка через мембрану), поэтому необходимо соблюдать осторожность, особенно в отношении небольших белков.

ИММУНОБЛОТИНГ

  1. После переноса быстро промойте мембрану дистиллированной водой или 1X TBST.

    Примечание. Не допускайте высыхания мембраны в процессе блоттинга.


  2. Аккуратно отметьте карандашом полосы лестницы молекулярной массы для определения размера. Если использовались все синие маркеры молекулярной массы, этот шаг можно пропустить, поскольку полосы всех синих маркеров будут видны после обнаружения при использовании в конъюгации с антителом синего маркера.

  3. При желании окрасьте мембрану Ponceau S (обратимое окрашивание белка) в течение 30 секунд, чтобы визуализировать полосы белка и подтвердить, что перенос белка прошел успешно. Непродолжительное ополаскивание мембраны дистиллированной водой после окрашивания Понсо позволит выявить полосы белка. Смойте Ponceau S несколькими промывками в 1x TBST, пока мембрана не станет прозрачной. Кроме того, окрашивание геля кумасси синим после переноса может помочь определить качество переноса с геля на мембрану.

  4. Инкубируйте мембрану в блокирующем растворе в течение 1 часа при комнатной температуре или в течение ночи при 4°C при постоянном покачивании.

  5. Необязательный этап: промывайте мембрану в течение 5 минут в 1X TBST при постоянном встряхивании.

  6. Чтобы приготовить первичный раствор антител, разведите первичное антитело до рабочей концентрации в 1X TBST с 1% молока или BSA (оставаясь в соответствии с блокирующим раствором).

    Примечание. Типичные рабочие разведения антител находятся в диапазоне от 1:500 до 1:5000.Таблицы спецификаций антител часто содержат рекомендуемые разведения, но оптимальные разведения следует определять титрованием. Подробнее см. в разделе об устранении неполадок этого руководства.


  7. Дополнительно: для визуализации маркеров молекулярной массы в дополнение к интересующему белку добавьте 1 мкг/мл синего маркерного антитела в раствор первичного антитела. Это антитело не вступает в перекрестную реакцию с белковыми лизатами и специфически связывается с синим красителем каждого маркера молекулярной массы.

  8. Инкубируйте мембрану в растворе первичных антител в течение 1 часа при комнатной температуре или в течение ночи при 4°C при осторожном покачивании.

    Примечание. На этот раз может потребоваться оптимизация. В большинстве случаев инкубация в течение ночи при 4°C увеличивает силу сигнала и снижает фоновый сигнал по сравнению с инкубацией в течение 1 часа при комнатной температуре.


  9. Промойте мембрану раствором 1X TBST три раза по 10 минут каждый раз, осторожно покачивая.

  10. Инкубируйте мембрану в соответствующем разведенном вторичном антителе (в 1X TBST и может включать 1% молока или BSA) в течение 1 часа при комнатной температуре при осторожном покачивании.

    Примечание. См. листок с информацией о первичных антителах для правильного выбора вторичных антител — необходимо распознавать виды хозяев первичных антител. Рекомендации по концентрации вторичных антител приведены в информационном листке продукта. Для получения дополнительной информации о вторичных антителах прочтите Справочник по вторичным антителам Novus.


  11. Промойте мембрану в растворе 1X TBST три раза по 10 минут каждый раз, осторожно покачивая.


ОБНАРУЖЕНИЕ (ХЕМИЛЮМИНЕСЦЕНЦИЯ)

  1. Подготовьте субстрат ECL непосредственно перед использованием в соответствии с инструкциями производителя.

  2. Инкубируйте мембрану в реагенте ECL в соответствии с инструкциями производителя. Типичное время инкубации составляет 1-5 минут.

    Примечание. Для более чувствительных субстратов может потребоваться более короткое время инкубации или разбавления для достижения оптимального сигнала и предотвращения чрезмерного воздействия.


  3. Осторожно снимите мембрану с реагента ECL и поместите ее между слоями пластика (например, защитным листом или полиэтиленовой пленкой) и убедитесь, что между мембраной и пластиком не образуются пузыри.

  4. Поместите мембрану на пленку авторадиографа в темной комнате или на изображение с помощью системы хемилюминесцентной визуализации, такой как ChemiDoc.

    Примечание. Отрежьте верхний правый угол пленки в качестве ориентира для ориентации пленки в темной комнате.

    Примечание. Используйте несколько значений длины экспозиции, чтобы определить наиболее оптимальное время экспозиции.


  5. Проявленную пленку или изображение можно выровнять в правильной ориентации поверх блота, чтобы обозначить положения лестницы молекулярной массы, если антитело синего маркера не используется.

    Примечание. Мембранный блот можно снять и повторно исследовать по мере необходимости. Чтобы снять и повторно исследовать свой блот, ознакомьтесь с нашим протоколом по снятию и повторному зондированию вестерн-блотов.

БУФЕРЫ И РЕАГЕНТЫ

Буфер для лизиса

  • НП-40
  • 150 мМ NaCl
  • 1% NP-40 или Triton X-100
  • 50 мМ трис pH 8,0

  • РИПА
  • 150 мМ NaCl
  • 1% NP-40 или Triton X-100
  • 0.5% дезоксихолат натрия
  • 0,1% ДСН
  • 50 мМ трис, pH 8,0
  • Трис-HCl
  • 20 мМ Tris-Hcl, pH 7,5

  • Трис-HCl
  • 20 мМ Tris-Hcl, pH 7,5

ПБС

  • 1X ПБС
  • 137 мМ NaCl
  • 2,7 мМ KCl
  • 4,3 мМ Na2HPO 4
  • 1.47 мМ KH 2 ПО 4
  • Довести pH до 7,4

Загрузка буфера

  • 2X Буфер Лэммли
  • 4% ДСН
  • 5% β-меркаптоэтанол или 100 мМ ДТТ
  • 20% глицерин
  • 0,004% бромфеноловый синий
  • 0,125 М Трис HCl, pH 6,8

Рабочий буфер

  • 1X Рабочий буфер
  • 25 мМ Трис основание
  • 192 мМ глицин
  • 0.1% ДСН
  • Отрегулируйте pH до 8,3

Буфер передачи

  • 1X Буфер для переноса (влажный)
  • 25 мМ Трис основание
  • 192 мМ глицин
  • 20 % метанол
  • Отрегулировать pH до 8,3

  • 1X Буфер для переноса (полусухой)
  • 48 мМ Трис основание
  • 39 мМ глицин
  • 20 % метанол
  • Отрегулируйте pH до 8.3

ТБСТ

  • 1X TBST
  • 20 мМ Трис основание
  • 150 мМ NaCl
  • 0,1% Твин-20

Блокирующий буфер

  • Блокирующее решение
  • 1X TBST
  • 5% обезжиренное сухое молоко ИЛИ 5% BSA

Буфер для зачистки

  • Раствор для отпарки №1 (отпарка с кислым рН)
  • 25 мМ глицин-HCl
  • 1% ДСН
  • Довести pH до 2

  • Раствор для удаления № 2 (удаление с помощью тепла и моющего средства)
  • 100 мМ β-меркаптоэтанол
  • 2% ДСН
  • 62.5 мМ Трис-HCl
  • Довести рН до 6,7

Протокол вестерн-блоттинга | Абкам

Наш протокол вестерн-блоттинга включает растворы и реагенты, процедуры и полезные ссылки, которые помогут вам в проведении эксперимента.

Отзыв от 14 декабря 2020 г.

Вестерн-блоттинг — это метод, в котором используются специфические антитела для идентификации белков, разделенных по размеру с помощью гель-электрофореза.В иммуноанализе используется мембрана из нитроцеллюлозы или ПВДФ (поливинилиденфторида). Гель помещают рядом с мембраной, и приложение электрического тока вызывает миграцию белков из геля на мембрану. Затем мембрану можно дополнительно обработать антителами, специфичными для интересующей мишени, и визуализировать с использованием вторичных антител и реагентов для обнаружения.

Содержание

Посмотрите наше видео о протоколе вестерн-блоттинга ниже.


​Растворы и реагенты: буферы для лизиса

Эти буферы можно хранить при 4°C в течение нескольких недель или аликвотировать и хранить при -20°C до года.

NP-40 Buffer
  • 150 мм NaCl
  • 1,0% NP-40 (возможно для замены 0,1% Triton X-100)
  • 50 мм TRIS-HCL, PH 8.0
  • ингибиторы протеазы
буфер RIPA (буфер радиомумопреципитации)
  • 150 мм NaCl
  • 1% IGEPAL CA-630
  • 1% IGEPAL CA-630
  • 0,5% дезоксихолота натрия
  • 0,1% SDS (натрий додецилсульфат)
  • 50 мм TRIS-HCL, pH 8,0
  • Ингибиторы протеазы
Трис-HCl
  • 20 мМ Трис-HCl
  • Ингибиторы протеазы

Буфер Лэммли 2X/загрузочный буфер
  • 4% SDS
  • 10% 2-меркаптоэтанол
  • 20% глицерин
  • 0.004% BROMOPHENOL BLUE
  • 0.125 M TRIS-HCL

Проверьте pH и отрегулируйте до 6.8


Бегущий буфер (TRIS-Glycine / SDS)
  • 25 мм TRIS Base
  • 190 мм глицин
  • 0,1% SDS

Проверьте pH и отрегулируйте до 8.3

буфер передачи (мокрый)
  • 25 мм TRIS-базы
  • 25 мм глицин
  • 20% метанол
  • Проверьте pH и отрегулируйте до 8.3

Для белков размером более 80 кДа мы рекомендуем включать SDS в конечной концентрации 0.1%.

буфер передачи (полусухой)
  • 48 мм TRIS
  • 39 мм глицин
  • 20% метанол
  • 0,04% SDS
Блокирующий буфер

3-5% молока или BSA (Bovine сывороточный альбумин)

Добавить в буфер TBST. Хорошо перемешайте и профильтруйте. Отсутствие фильтрации может привести к образованию пятен, когда крошечные темные зерна будут загрязнять пятно во время проявления цвета.



Лизис образца

Приготовление лизата из клеточной культуры
  1. Поместите чашку для клеточных культур на лед и промойте клетки охлажденным льдом PBS.
  2. Аспирируйте PBS, затем добавьте охлажденный льдом лизирующий буфер (1 мл на 10 7 клеток/чашка 100 мм/150 см 2 колба; 0,5 мл на 5×10 6 клеток/чашка 60 мм/75 см 2 колба).
  3. Соскоблите прилипшие клетки с чашки с помощью холодного пластикового скребка для клеток, затем осторожно перенесите клеточную суспензию в предварительно охлажденную микроцентрифужную пробирку. В качестве альтернативы клетки можно обработать трипсином и промыть PBS перед ресуспендированием в лизирующем буфере в микроцентрифужной пробирке.
  4. Поддерживать постоянное перемешивание в течение 30 мин при 4°C.
  5. Центрифуга в микроцентрифуге при 4°C. Возможно, вам придется варьировать силу и время центрифугирования в зависимости от типа клеток; рекомендуется 20 минут при 12 000 об/мин, но это должно быть определено для вашего эксперимента (лейкоциты нуждаются в очень легком центрифугировании).
  6. Аккуратно извлеките пробирки из центрифуги и поместите на лед, аспирируйте надосадочную жидкость и поместите в свежую пробирку, хранящуюся на льду, и выбросьте осадок.

Приготовление лизата из тканей
  1. Препарируйте интересующую ткань чистыми инструментами, предпочтительно на льду, и как можно быстрее, чтобы предотвратить деградацию под действием протеаз.
  2. Поместите ткань в микроцентрифужные пробирки с круглым дном или пробирки Эппендорфа и погрузите в жидкий азот для быстрой заморозки. Храните образцы при температуре -80°C для последующего использования или храните на льду для немедленной гомогенизации. Для образца ткани размером ~ 5 мг быстро добавьте в пробирку ~ 300 мкл охлажденного льдом лизирующего буфера, гомогенизируйте с помощью электрического гомогенизатора, дважды промойте лезвие еще 2 x 200 мкл лизирующего буфера, затем поддерживайте постоянное перемешивание в течение 2 часов. при 4°C (например, поместить на орбитальный шейкер в холодильник). Объемы буфера для лизиса должны определяться в зависимости от количества присутствующей ткани; белковый экстракт не должен быть слишком разбавленным, чтобы избежать потери белка и больших объемов образцов, которые необходимо загрузить в гели.Минимальная концентрация 0,1 мг/мл, оптимальная концентрация 1–5 мг/мл.
  3. Центрифугировать в течение 20 мин при 12 000 об/мин при 4°C в микроцентрифуге. Аккуратно удалите пробирки из центрифуги и поместите на лед, аспирируйте супернатант и поместите в свежую пробирку, хранящуюся на льду; выбросьте гранулу.


Подготовка проб
  1. Возьмите небольшой объем лизата для проведения количественного определения белка. Определите концентрацию белка для каждого клеточного лизата.
  2. Определите, сколько белка нужно загрузить, и добавьте равный объем 2X буфера для образцов Лэммли. .

  3. Для восстановления и денатурации образцов прокипятите каждый клеточный лизат в буфере для образцов при 100°C в течение 5 минут. Лизаты можно разделить на аликвоты и хранить при температуре -20°C для использования в будущем.


​Загрузка и запуск геля
  1. Загрузите равные количества белка в лунки геля SDS-PAGE вместе с маркером молекулярной массы.Загрузите 20–30 мкг общего белка из клеточного лизата или гомогената ткани или 10–100 нг очищенного белка.
  2. Запустите гель на 1–2 часа при 100 В.

T Время и напряжение могут потребовать оптимизации. Мы рекомендуем следовать инструкциям производителя. Восстанавливающий гель следует использовать, если в паспорте антител не рекомендуются невосстанавливающие условия.

Процент геля требуется зависит от размера вашего белка интереса:

95

Размер белка

GEL процент

4-40 KDA

20%

12-45 KDA

15%

10-70 KDA

125%

15-100 KDA

15-100 KDA

10%

25-100 KDA

8%

8%

Градиентные гели также могут быть использованы



​Перенос белка из геля на мембрану

Мембрана может быть нитроцеллюлозной или ПВДФ. Активируйте PVDF метанолом в течение 1 мин и промойте переносным буфером перед подготовкой стека. Время и напряжение передачи могут потребовать некоторой оптимизации.Мы рекомендуем следовать инструкциям производителя. Перенос белков на мембрану можно проверить с помощью окрашивания Ponceau S перед стадией блокировки.

Подготовьте стопку следующим образом:

Рис. 1. Пример подготовленной стопки.

Все дорожки: бета-актиновое антитело – контроль загрузки (ab8227) в разведении 1/5000 предоставляются Abcam «КАК ЕСТЬ» на основе экспериментов в лабораториях Abcam с использованием реагентов и продуктов Abcam; ваши результаты от использования протоколов вне этих условий могут отличаться.



Стенограмма веб-семинара​

Целью вестерн-блоттинга является разделение белков на геле в соответствии с молекулярной массой. Затем белки переносятся на мембрану, где их можно обнаружить с помощью антител. Нагрейте образцы до 95°C в течение 5–10 минут в буфере для образцов, содержащем восстановитель, такой как бета-меркаптоэтанол. Это приводит к линеаризованным белкам с отрицательным зарядом, пропорциональным их размеру.

Поместите гель в емкость для электрофореза и добавьте буфер, убедившись, что верх лунок закрыт. Процентное содержание акриламида в используемом геле зависит от молекулярной массы целевого белка. Загрузите рынок молекулярной массы в первую дорожку, затем загрузите образцы в соседние лунки. Все образцы содержат одинаковое количество белка. Как только все образцы загружены, добавьте рабочий буфер, поместите крышку на резервуар для электрофореза. Включите источник питания и установите напряжение, рекомендованное производителем гелей в резервуаре для геля.Вы должны увидеть пузырьки, поднимающиеся из резервуара. Работайте с гелем до тех пор, пока фронт красителя не переместится достаточно вниз по гелю.

Следующим этапом является перенос белков из геля на мембрану. Мембраны обычно изготавливаются из нитроцеллюлозы или PVDF. Выньте гель из резервуара и осторожно освободите его из пластикового футляра. Отрежьте лунки и гелевую ножку и поместите гель в переносной буфер. Подготовьте стопку для переноса, поместив мембрану и гель между фильтровальной бумагой и губками.Мембрана должна быть ближе всего к положительному электроду, а гель ближе всего к отрицательному электроду. Используйте небольшой валик, чтобы удалить пузырьки между гелем и мембраной. Закройте раздаточную коробку и погрузите ее в передаточный резервуар, содержащий передаточный буфер. Добавьте воду во внешнюю камеру, чтобы система оставалась прохладной, и накройте крышкой. Включите источник питания, чтобы начать перенос белка. Время и напряжение требуют оптимизации, поэтому ознакомьтесь с инструкциями производителя.

Теперь, когда белки переместились из геля на нитроцеллюлозную мембрану, интересующий белок можно обнаружить с помощью антитела.Мембрану можно снять с кассеты, и теперь должен быть виден маркер молекулярной массы. При необходимости перенос белков можно подтвердить окрашиванием мембраны раствором понсо S. Чтобы предотвратить неспецифическое связывание антител, необходимо заблокировать мембрану. Налейте блокирующий буфер на мембрану и осторожно встряхните на качалке. Как правило, это делается с использованием раствора пятипроцентного молочного или бычьего сывороточного альбумина, БСА, в течение двух часов при комнатной температуре или в течение ночи при четырех градусах.Время и тип блокирующего буфера должны быть оптимизированы, поэтому для получения подробной информации обратитесь к техническому описанию первичного антитела, которое вы собираетесь использовать.

После блокировки мембраны удалите блокирующий буфер и добавьте разведенное первичное антитело в тот же раствор. Инкубируйте на качалке, как и раньше. Обычно инкубация первичных антител проводится в течение одного часа при комнатной температуре или в течение ночи при температуре 4°С. Необходимо оптимизировать концентрацию антител и время инкубации. Обратитесь к техническому описанию антител для руководства.Слейте первичное антитело и дважды промойте мембрану промывочным буфером. Затем выполните одно 15-минутное мытье и три 10-минутных мытья на качалке. Промывочный буфер обычно представляет собой забуференный трис физиологический раствор, TBS, или забуференный фосфатом физиологический раствор, PBS с 0,1% твина 20.

Слейте промывочный буфер и инкубируйте мембрану в конъюгирующих вторичных антителах, разведенных в блокирующем буфере. Обычно это делается в течение одного часа при комнатной температуре, но необходимо оптимизировать концентрацию антител и время инкубации.Слейте вторичное антитело и промойте мембрану, как показано ранее.

Существует несколько различных систем обнаружения. Если вторичные антитела конъюгируют с ферментом, инкубируйте мембрану в соответствующем субстрате перед визуализацией. Если вторичные антитела представляют собой флуоресцентные конъюгаты, вы можете перейти непосредственно к этапу визуализации. Визуализация может быть выполнена с помощью рентгеновской пленки или цифровой системы визуализации. Поместите мембрану в лоток для изображений. Поместите лоток формирования изображения в систему формирования изображения.Время экспозиции, скорее всего, необходимо будет оптимизировать, чтобы четко определить полосы, относящиеся к интересующим белкам.

Саузерн-блоттинг — Учебный центр MyBioSource

Краткое введение: Методы блоттинга

Блоттинг используется в молекулярной биологии для идентификации белков и нуклеиновых кислот и широко применяется в диагностических целях. Этот метод иммобилизует интересующую молекулу на подложке, которая представляет собой нитроцеллюлозную мембрану или нейлон.Он использует методы гибридизации для идентификации конкретных нуклеиновых кислот и генов. Метод блоттинга — это инструмент, используемый для идентификации биомолекул, таких как ДНК, мРНК и белок, на разных стадиях экспрессии генов. Синтез белка включает экспрессию сегмента ДНК, который превращается в мРНК с образованием соответствующего белка. Молекулы, такие как ДНК, РНК и белки, подвергаются биохимическому анализу, который отделяется с использованием методов блоттинга. В случае клетки эти молекулы присутствуют вместе, и, следовательно, с помощью блотинга ученые могут распознать конкретную молекулу среди всех других.Блоттинг выполняется путем пропускания смеси представляющих интерес молекул через блок геля, который разделяет молекулы в зависимости от их молекулярного размера. Таким образом, обработанные молекулы должны быть сильно прижаты к подходящей мембране, которая, в свою очередь, перенесет молекулы из геля на подходящую мембрану (нейлон, нитроцеллюлоза или ПВДФ) посредством капиллярного действия. После переноса молекул на мембрану их положение не меняется.

Саузерн-блоттинг был введен Эдвином Саузерн в 1975 году как метод обнаружения определенных последовательностей ДНК в образцах ДНК.Другие методы блоттинга, возникшие из этого метода, были названы нозерн-блоттингом (для РНК), вестерн-блоттингом (для белков), восточным (для посттрансляционных модификаций белков) и юго-западным (для взаимодействий ДНК и белка).

Подтипы блоттинга, такие как северный, вестерн и южный, зависят от искомой молекулы-мишени. Когда последовательность ДНК является основой или кодом для белковой молекулы, конкретная интересующая молекула ДНК может быть подвергнута блотингу с использованием метода Саузерн-блоттинга.Во время экспрессии генов, когда ДНК экспрессируется в виде мРНК для производства белка, этот процесс можно идентифицировать с помощью Нозерн-блоттинга. Наконец, закодированная мРНК производит соответствующий белок, идентификация этого белка может быть выполнена с помощью вестерн-блоттинга.

Методы блоттинга рассматриваются в качестве вспомогательного средства для гель-электрофореза, который обычно применяется для разделения ДНК/РНК/белков и дает воспроизводимые результаты благодаря их превосходной разрешающей способности. Таким образом, определенные молекулы могут быть обнаружены среди комбинации молекул, которые подвергаются разделению.Большинство методов имеют общую стадию, на которой интересующие молекулы после разделения переносятся из геля в фазу твердой мембраны, что достигается путем пропитки раствором геля и мембраны через проницаемую бумагу. Многие типы многогранных устройств также поставляются многими поставщиками для электроблотинга, которые особенно полезны для переноса, инициированного из менее пористых полиакриламидных гелей по сравнению с обычно используемыми пористыми агарозными гелями.В случае ДНК и РНК обнаружение специфических последовательностей в мембране осуществляется путем гибридизации с мечеными нуклеиновыми кислотами зондами, которая в случае белков заменяется использованием меченых зондов антител. Первоначально разработанные протоколы применяли радиоактивные зонды, меченные радиоактивными изотопами, для целей обнаружения путем выполнения процедур авторадиографии. В этом процессе использование картины распада эмиссии, излучаемой радиоактивным материалом, применяется для получения изображения на рентгеновской пленке, которое также может быть доступно в виде цифрового изображения с помощью сцинтилляционных детекторов газа или систем, основанных на люминесцентном изображении.Принимая во внимание вредные последствия воздействия радиоактивности, были разработаны другие виды систем маркировки, которые включают флуоресцентные и хемилюминесцентные реагенты. Методы на основе люминесценции/флуоресценции считаются чувствительными и не содержат фона, что дает более точные результаты. Кроме того, есть несколько других модификаций, которые были реализованы в отличие от исходного метода, например, чаще применяются ДНК-зонды, а не РНК, нейлоновые мембраны заменили традиционную нитроцеллюлозу, чтобы избежать ренатурации последовательностей ДНК во время переноса. в щелочной, которая должна была быть в нейтральном растворе в соответствии с первоначальным протоколом.ДНК подвергают кислотной обработке для уменьшения ее размера, чтобы увеличить скорость переноса более крупных фрагментов. Гелевые полоски и гели в тюбиках, применявшиеся в исходном протоколе, больше не используются, вместо них применяются гелевые форматы. Хотя в исходный протокол было внесено много изменений, современные протоколы сохраняют большинство основных функций исходного протокола.

Блоттинг по Саузерну применялся во многих важных исследованиях, таких как генетическое картирование генома человека, основанное на обнаружении полиморфизма длины рестрикционных фрагментов на основе блоттинга.Кроме того, снятие отпечатков пальцев ДНК было впервые разработано путем гибридизации продуктов рестрикционного расщепления ДНК человека с мини-сателлитными зондами. Однако большинство основных применений этого метода в настоящее время заменены секвенированием ДНК и полимеразной цепной реакцией (ПЦР), поскольку они предоставляют более обширные факты или данные и, кроме того, их легко реализовать. Тем не менее, блоттинг по-прежнему применяется во многих областях, таких как измерение числа копий, анализ длинных участков ДНК, которые трудно амплифицировать или секвенировать с помощью ПЦР или секвенирования ДНК, а также в случае структурного анализа ДНК, в котором физические формы ДНК разделяют с помощью двумерного гель-электрофореза, а затем обнаруживают с помощью блоттинга специфических компонентов.

Общая процедура блоттинга

Гомогенизация образца, включающая очистку ДНК/РНК/белков, которая проводится после экстракции из различных источников, таких как клетки или ткани.

Расщепить ДНК рестрикционными ферментами на фрагменты, что не требуется для РНК (нозерн-блоттинг).

Разделение интересующей молекулы с помощью мембраны для электрофореза, как правило, на агарозном геле для фрагментов ДНК. В случае образцов РНК их можно разделить на агарозном геле в присутствии формальдегида в качестве денатурирующего агента.Это необходимо, поскольку формальдегид ограничивает вторичные структуры молекул РНК.

Перенос молекул (фрагментов ДНК/РНК) на нитроцеллюлозную мембрану/нейлоновую мембрану из геля.

Прегибридизация (блокировка): Промывание нейлоновой мембраны раствором для прегибридизации или блокирования, содержащим ДНК спермы лосося, требуется для блокирования неспецифических взаимодействий ДНК, а также помогает уменьшить фоновый шум. В качестве альтернативы существуют некоторые коммерчески доступные блокирующие буферы, такие как буфер PerfectHyb™ Plus, в которых не требуется ДНК спермы лосося для блокирования.

Для приготовления зонда готовят свежую ДНК зонда, меченную 32 P альфа-меченым dCTP.

Гибридизация или идентификация молекулы, которая достигается путем инкубации блота со специальным меченым зондом.

Для обнаружения зонда и интересующей последовательности ДНК/РНК пленку подвергают воздействию температуры -80°C.

Саузерн-блоттинг

Первым из этих разработанных методов был саузерн-блоттинг, названный в честь доктора Дж.Эдвин Саузерн, который разработал его для идентификации определенных последовательностей ДНК. Саузерн-блоттинг — это метод обнаружения, используемый для поиска целевых последовательностей ДНК в образце ДНК в области молекулярной биологии. Процесс начинается с электрофореза молекул ДНК, которые гибридизуются в мембране для блоттинга, после чего следует этап переноса, когда ДНК из геля переносится на мембрану для блоттинга.

Историческая справка

Способность нитей ДНК к гибридизации исходит из их комплементарной природы, четко изображенной в модели структуры ДНК Уотсона-Крика.Вначале были проведены эксперименты для изучения ренатурирующей способности ДНК и образования гибридов ДНК/РНК для понимания ткане- или клеточно-специфической экспрессии. После этого возникла гибридизация с разработкой зондов, которые могут обнаруживать специфические последовательности внутри мишени, и иммобилизацией целевых последовательностей на твердой подложке, такой как порошок нитроцеллюлозы, что в дальнейшем привело к нитроцеллюлозным мембранам. Демонстрация Саузерн того, что фрагменты ДНК, разделенные с помощью гель-электрофореза, могут быть перенесены на мембрану, позволила охарактеризовать ДНК по характеру гибридизации и по размеру их молекул.Позднее этот метод был применен для пространственной идентификации мишеней и блоттинга бактериальных колоний.

Этап электрофореза можно проводить с использованием двух различных типов гелей, таких как полиакриламидный гель (ПААГ) с мочевиной и додецилсульфат натрия (ДСН) с мочевиной. Эти два геля имеют разное применение. При использовании геля PAGE такое же количество фрагментов ДНК переносится на промокательную бумагу. Если используется SDS, разрешение сформированной полосы пропускания остается прежним. В этом методе можно идентифицировать молекулу ДНК размером 100 пг.Этот метод можно обобщить как формирование двухцепочечной ДНК, в которой одна цепь состоит из ДНК-мишени, а другая — из ДНК-зонда. ДНК-зонд получают in vitro для интересующей последовательности.

Принцип

Эндонуклеаза рестрикции, представляющая собой фермент, используется для разрыва ДНК на небольшие фрагменты. Затем эти фрагменты разделяют с помощью электрофореза. Полученные фрагменты затем классифицируют в соответствии с их размером (кДа). Таким образом, фрагменты ДНК переносят на промокательную бумагу, где инкубируют с зондами.Зонды, используемые в Саузерн-блоттинге, могут быть высокоселективными. Они могут избирательно связываться с разрешением 1 на миллион и характеристиками связывания с предполагаемыми целевыми фрагментами.

Необходимые материалы

Реагенты
  • Для электрофореза используется буфер TAE или TBE.
  • Предпочтительная агароза должна иметь чистоту для электрофореза.
  • Для окрашивания ДНК используется бромистый этидий (0,5 мкг мл–1, растворенный в H 2 O).Но есть и другие красители для окрашивания ДНК, такие как зеленый SYBR, который может заменить бромистый этидий для безопасного обращения.

Примечание. Бромид этидия, являющийся мутагеном, требует осторожного обращения. Рекомендуется надевать перчатки во время его использования и соблюдать соответствующие правила утилизации наконечников пипеток. Избегайте прикосновения к каким-либо предметам в перчатках, загрязненных бромистым этидием.

  • 2X и 20X SSC (состав 20X SSC включает 3,0 М NaCl и 0,3 М цитрата натрия)
  • 6X Буфер для загрузки ДНК, состоящий из 0.25 % бромфенолового синего, 0,25 % ксилолцианола FF и 30 % глицерина в воде.
  • Подходящие маркеры ДНК с различной молекулярной массой, также называемые лестницами ДНК, используются в качестве стандартов для справки.
  • Смесь для прегибридизации и гибридизации состоит из 0,5% SDS, 6X SSC, 5X раствора Денхардта и 100 мг/мл –1 расщепленной, денатурированной ДНК спермы лосося или тРНК дрожжей.
  • Раствор Денхардта
  • , широко используемый для гибридизации, состоит из 0,02% фиколла, 0,02% поливинилпирролидона и 0.02% бычий сывороточный альбумин (БСА)
  • Парафиновое масло
  • Мембранный фильтр из нитрата целлюлозы или нитроцеллюлозы с равномерной пористостью. (например, Millipore 25 HAWP; нейлоновые мембраны, используемые для протоколов блоттинга, доступны под различными торговыми названиями у коммерческих поставщиков)
  • Для специфического расщепления требуется
  • РНКаза А (20 пг/мл –1 в 2X SSC).
  • Используется рестрикционный фермент и соответствующий буфер.
  • Радиоактивно меченая РНК в качестве зонда для специфического обнаружения при проведении авторадиографии.

Примечание. Обращаться с радиоактивными зондами следует осторожно, что требует надежных мер безопасности и правовых норм.

  • Для обнаружения РНК, меченной такими метками, как 3H, 35S, 125I или 14C, требуется 2,5-дифенилоксазол (PPO) в толуоле в концентрации 20 % масс./об.

Оборудование
  • Перенос с узких полосок геля можно осуществить с помощью трех кусочков стекла или плексигласа размером 5 см × 20 см с толщиной, аналогичной толщине геля.
  • Требуется толстая сухая фильтровальная бумага (четыре-пять штук) или бумажные полотенца размером 10 см × 18 см.
  • Сосуд для гибридизации имеет больший размер (глубина 0,8 мм × высота 2 см × длина примерно на 1 см), чем у мембраны, используемой для гибридизации, а материал, используемый для разработки сосуда для гибридизации, — плексиглас (примечание: для гибридизации используется несколько альтернативных процедур)
  • Четыре узких кусочка плексигласа толщиной с гель.Длина плексигласа достаточна, чтобы окружить гель на расстоянии ~3 мм
  • Лоток глубиной 20–50 мм (прибл.) и длиной и шириной на 20 мм (прибл.) больше, чем у геля
  • Стеклянный лист с длиной, достаточной для размещения на подносе, и более узким, чтобы иметь зазор 10 мм с каждой стороны
  • Несколько толстых кусков фильтровальной бумаги, имеющих большую площадь по сравнению с гелем. Длина фильтровальной бумаги достаточна, чтобы покрыть стеклянный лист, и ее можно окунуть в лоток.
  • Увлажненный кусок нитроцеллюлозной мембраны, имеющий более широкую площадь, которая может покрыть весь гель. Нитроцеллюлозная мембрана размещена поверх четырех полос из плексигласа. Увлажнение нитроцеллюлозной мембраны осуществляется с помощью 2× SSC.
  • Бумажные полотенца, уложенные друг на друга.
  • Аппарат для заливки геля.
  • Бак с гелем для проведения электрофореза необходим.
  • Требуется источник питания для всего устройства.

Настройка реагента
  • ДНК: Вся процедура начинается с использования ДНК, расщепленной ферментами, в различных концентрациях, что позволит количественно определить оптимальную концентрацию ДНК и указать, какой фермент рестрикции следует использовать. Как правило, количество 1 мкг ДНК, полученной из клонов (например, из плазмид или клонов бактериофагов), достаточно для плазмид с низким числом копий. Нам требуются большие количества для разделения сложной ДНК (например, геномной ДНК).Рекомендуемый диапазон, который следует учитывать, составляет 5–10 мкг.
  • Используемый буфер для электрофореза представляет собой ТАЕ, который имеет состав 40 мМ Трис, 20 мМ уксусной кислоты, 1 мМ ЭДТА с диапазоном рН 7,4–8,2, который обычно производится в виде исходной концентрации 20Х, или ТВЕ, состоящий из 89 мМ Трис, 2,5. мМ ЭДТА, 89 мМ бората, обычно готовят в виде 10-кратного запаса).
  • TAE рекомендуется как лучший, когда мы запускаем гели в течение более короткого интервала времени и когда необходимо провести восстановление фрагментов ДНК из геля.
  • TBE считается лучшим буфером, особенно когда нам приходится запускать гели в течение периода времени, превышающего 2 часа.

Процедура

Этап 1: очистка ДНК

Чтобы извлечь ДНК, находящуюся внутри ядра клетки, мы должны сначала лизировать всю клетку, чтобы сделать возможной вытеснение ДНК. Инкубация клеточной культуры с детергентом лизирует всю клетку. Теперь лизированный образец содержит ДНК, белок и остатки. Белок лизируют добавлением фермента протеиназы и инкубируют.ДНК очищают и разделяют путем осаждения спиртом, а волокна удаляют с помощью буфера.

Помимо стандартных процедур выделения вручную, существуют коммерчески доступные наборы, такие как GenElute™, для выделения ДНК из различных источников, таких как клетки млекопитающих, растения, бактерии, грибы. Высокая чистота выделенной ДНК обеспечивается при использовании коммерческих наборов.

Шаг 2: Фрагментация

Длинные последовательности нуклеотидов должны быть разбиты на более мелкие фрагменты для процесса очистки или идентификации.Это осуществляется ферментом эндонуклеазой рестрикции.

Все реагенты, необходимые для процесса расщепления, должны храниться на льду до проведения реакции рестрикционного расщепления с подходящим ферментом и соответствующей концентрацией ДНК. Компоненты добавляют в многолуночные планшеты или микроцентрифужные пробирки (ПЦР-пробирки) и перемешивают, медленно отсасывая содержимое с помощью пипетки во избежание образования пузырьков. Следует позаботиться о том, чтобы фермент добавлялся на последнем этапе, а до этого его следует хранить при температуре -20 °C.Для обеспечения полного расщепления ДНК предполагается добавление избыточного количества фермента, поскольку фрагменты, полученные в результате частичного расщепления, могут вызвать неоднозначность результатов, что приведет к неточному анализу последующего блота. Тем не менее, общая концентрация добавляемого фермента не должна превышать одной десятой от общего объема перевариваемого продукта, поскольку содержание глицерина, обычно присутствующего в запасе ферментов, может препятствовать процессу пищеварения, если оно присутствует в высокой концентрации.Кроме того, чтобы свести к минимуму возможные ошибки из-за пипетирования, мастер-миксы должны быть подготовлены соответствующим образом, когда требуется анализ большого количества образцов.

Инкубацию гидролизатов проводят при 37 °C либо в инкубаторе, либо на водяной бане. Водяная баня обычно предпочтительнее. Для образцов ДНК, полученных в результате клонирования, достаточно 1–2 ч. В случае геномной ДНК требуется переваривание в течение ночи, при этом есть вероятность, что фермент закончится между ними.Чтобы убедиться, что ночная реакция прошла успешно, половину фермента следует добавить в начале реакции пищеварения, а вторую половину можно добавить утром, и инкубацию можно продолжать в течение часа.

После завершения расщепления может потребоваться этап концентрирования, чтобы обеспечить наличие подходящего объема ДНК для загрузки в гель, который обычно фиксируется на уровне 20 мкл на лунку. Это делает общий объем равным 24 мкл после добавления загрузочного буфера 6X.Стандартный метод концентрирования образцов ДНК включает осаждение в присутствии этанола, после чего образец ДНК ресуспендируют в ddh3O. Следы этанола должны быть полностью удалены, что в противном случае может привести к высыпанию образцов из лунок после их загрузки.

Этап 3: Гель-электрофорез

Нуклеиновые кислоты представляют собой отрицательно заряженные молекулы. Поэтому они движутся к аноду в камере для электрофореза. Движение фрагментов ДНК дифференцирует скорость транспорта, что позволяет разделить их по размеру.

Необходимо определить процентное содержание используемого геля и размер геля. Процент будет определять размер фрагментов, которые будут разделены, а размер геля, с другой стороны, даст диапазон фрагментов, которые можно разделить. Более длинные гели обычно необходимы в случае разделения геномной ДНК или нескольких фрагментов одинакового размера, чтобы гарантировать надлежащее разделение. Как правило, 0,7–2% геля считается достаточным для большинства применений.Однако в случае некоторых образцов геномной ДНК может потребоваться, чтобы для необходимого разделения фрагментов использовался небольшой процент геля. Когда для обработки требуется менее 0,8 % геля, требуется высокий процент основного геля (до 2 %), чтобы обеспечить поддержку, поскольку гели с низким процентным содержанием очень хрупкие. Необходимо, чтобы базовый гель был нанесен до установки гребня. Как только базовый гель затвердеет, сверху наливают низкопроцентный гель, а расческу помещают так, чтобы она не касалась базового геля внизу.

  • Буфер для электрофореза 1X готовят после разбавления подготовленного исходного раствора в ddh3O и добавления к нему агарозы в конической колбе, которую постоянно перемешивают во избежание образования комков. После этого агарозу расплавляют в микроволновой печи или на мешалке с подогревом при постоянном перемешивании. В случае использования микроволновой печи гель следует взбалтывать каждые 30 с, чтобы обеспечить однородную консистенцию. В большинстве стандартных микроволновых печей гель полностью плавится в течение 3 мин.

Примечание: агарозу следует регулярно проверять во время нагревания, так как она быстро закипает. Во избежание утечки рекомендуется использовать коническую колбу достаточно большего объема при приготовлении агарозы.

  • Колбу с расплавленным гелем необходимо перенести в магнитную мешалку и дать гелю медленно остыть примерно до 60ºC при осторожном, но постоянном перемешивании. На этой стадии в гель предполагается добавить бромид этидия в концентрации 5 мкг мл –1 .
  • К тому времени, когда гель охлаждается, буфер для электрофореза 1X готовится в соответствующем количестве, чтобы заполнить резервуар резервуара до уровня нескольких миллиметров над пластиной геля, чтобы обеспечить надлежащее погружение,
  • Лоток для заливки геля подготовлен с помощью гребенки с зубьями подходящего размера в зависимости от объема загружаемого образца. Лоток для литья должен стоять на прямой платформе, прежде чем наливать на него гель. Предполагается, что образования пузырей следует избегать, насколько это возможно, поскольку они заставляют ДНК двигаться неравномерно.Пузырьки в случае образования можно лопнуть с помощью наконечника пипетки, и это следует сделать, как только гель будет вылит.
  • Как только гель затвердеет, это можно понять по его опалесцирующему виду, и гребешок следует аккуратно снять. Затем гель переносят в резервуар и добавляют к нему 1X рабочий буфер, чтобы погрузить гель. Буфер следует добавлять в достаточном количестве с учетом максимальной вместимости резервуара, поскольку он увеличивает буферный эффект, а также защищает гель от плавления из-за выделения тепла, особенно если гель будет работать в течение более длительного периода времени. .При снятии гребней нужно быть осторожным, чтобы не порвать лунки. Если в используемом гелевом аппарате предусмотрено удаление гребенки после того, как гель помещен в бак и погружен в буфер, гребенку следует удалить на заключительном этапе во избежание поломки лунок. Когда используется гель с более низким процентным содержанием, перед удалением соты кратковременное охлаждение может помочь сохранить лунки в надлежащей форме.
  • Образцы ДНК готовятся путем добавления загрузочного буфера 1X на каждые 5 мкл образца.Загрузочный краситель и образец должны быть хорошо перемешаны без образования пузырьков, которые в конечном итоге приведут к высыпанию образцов из лунок после их загрузки.
  • Затем образцы осторожно загружают в лунки, и одну или, предпочтительно, две лунки оставляют незаполненными для загрузки маркера молекулярной массы, который обычно поставляется в готовом для загрузки составе. При загрузке наконечник пипетки должен располагаться ниже угла в верхней части лунки, чтобы наконечник пипетки не давил на дно лунки, что также может привести к перфорации лунки.Пробу следует загружать медленно, чтобы избежать вытекания из лунок и смешивания проб с содержимым следующей лунки.
  • Затем крышка помещается сверху и подключается к блоку питания с напряжением, установленным на соответствующем уровне. Чтобы убедиться, что установка работает нормально, можно увидеть появление маленьких пузырьков при включении питания. В случае геномной ДНК напряжение должно быть низким, желательно не выше 20 В, а для плазмидной ДНК оно может составлять около 100 В.Электроды должны быть расположены в правильном положении, чтобы ДНК двигалась в нужном направлении. Положительный разъем обычно красного цвета, а отрицательно заряженный — черного.

Этап 4: Денатурация

Полученные таким образом ДНК

являются двухцепочечными по своей природе. Для нашей цели гибридизации зондов нам нужна одноцепочечная ДНК. Таким образом, ДНК денатурируется в щелочном растворе. Это приводит к образованию денатурированной ДНК.

 

Шаг 5: Блоттинг

Блоттинг — это перенос фрагментированной последовательности ДНК на нитроцеллюлозную или нейлоновую мембрану.Этот процесс осуществляется с помощью электроблотинга или капиллярного блоттинга. Молекула ДНК насыщается с помощью раствора NaCl и постоянно фиксируется с помощью УФ-излучения или сушки.

Выбор мембраны для блоттинга

В исходном протоколе нитроцеллюлозные мембраны использовались для блоттинга в случае саузерн-блоттинга, но в последнее время для процесса блоттинга стали использовать нейлоновые мембраны из-за их способности эффективно связывать большее количество ДНК, что позволяет проводить саузерн-блоттинг с меньшим количеством ДНК-мишени.

  • Подготовка к переводу занимает примерно 2–3 часа
  • Если гель работает без бромистого этидия, его необходимо погрузить в буфер для электрофореза, смешанный с бромистым этидием, на 0,5–2 часа.
  • После этого гель осторожно переносят в систему документирования геля для получения фотографии геля в ультрафиолетовом свете с длиной волны 256 нм, хотя, когда ДНК присутствует в больших количествах, ее также можно обнаружить при длине волны 310 или 365 нм. Если шкала помещается вместе с гелем, это помогает сопоставить флуоресцентную фотографию с окончательной радиоауторадиограммой, которая будет создана.
  • Если достаточного разделения ДНК не произошло, гель можно использовать в течение более длительного времени после возвращения в резервуар. Отчетливые полосы обычно появляются в случае клональной ДНК и геномных
  • ДНК в основном дает мазок, в котором повторяющиеся элементы ДНК представлены появлением более ярких полос. После этого часть геля, которую необходимо подвергнуть промоканию, можно разрезать на части с помощью лезвия. В экспериментах, где необходимо перенести большие фрагменты, гель следует подвергнуть ванне с разбавленной кислотой примерно на 10 мин, чтобы вызвать депуринизацию.
  • На следующем этапе гель полностью денатурируют, погружая его на 15–30 мин в лоток, помещенный в качающуюся платформу, в присутствии 1,5 М NaCl, 0,5 М NaOH.
  • Вышеупомянутый раствор затем заменяют 0,5 М Tris HCl (рН 7) и 3 М NaCl. Далее инкубировали в течение 15-30 мин, что приводило к нейтрализации геля.

Время, необходимое для перевода, составляет около 15 мин.

  • В случае переноса полосок компоненты гелеобразного переноса готовятся таким образом, что должен быть кусок толстой фильтровальной бумаги соответствующего размера, предпочтительно 20 см × 18 см, погруженный в буфер 20X SSC вместе с нитроцеллюлозным фильтром, равным на длину полоски геля шириной 1 см, погруженной в 2Х SSC.Фильтровальную бумагу необходимо погружать в воду, а мембрану следует перемещать, сначала плавая на поверхности раствора, чтобы избежать неравномерного переноса из-за захваченного воздуха.
  • Большая фильтровальная бумага укладывается на стеклянную или пластиковую платформу после замачивания в 20× SSC в случае узких полосок. Особое внимание следует уделить тому, чтобы воздух не оставался внизу. В случае более широких полос лоток сначала заполняется 20× SSC, а затем на него кладется стеклянная пластина. После этого на него помещают компактную стопку фильтровальной бумаги, пропитанной 20× SSC, перед погружением в лоток.
  • Стекло или лист плексигласа кладут сверху и ближе к одной из сторон влажной бумаги.
  • Затем гель удаляют из вышеуказанного нейтрализующего раствора и укладывают параллельно стеклу на расстоянии примерно 2–3 мм друг от друга. Точно так же с противоположной стороны геля укладывают второе стекло на расстоянии 2–3 мм друг от друга.
  • Затем на верхнюю часть геля укладывают нитроцеллюлозную мембрану так, чтобы концы балансировали на стекле, образуя между ними воздушное пространство. Воздух не должен задерживаться между мембраной и гелем, поэтому выравнивание должно выполняться с осторожностью.Мембраны не следует встряхивать после установки.
  • Впитывающая бумага, наконец, помещается сверху. Следует отметить, что размещение тяжелого груза сверху может дезориентировать гель, что, в свою очередь, повлияет на окончательные результаты.
  • Затем начинается процесс переноса в течение приблизительно 3 часов, которые варьируются в зависимости от концентрации геля, а также размера рассматриваемого фрагмента. Во избежание высыхания во время переноса необходимо пополнить 20× SSC во избежание усадки геля.Во время этого процесса добавления буфера он не должен заполнять зазор между гелем и стеклом или листами.
  • После завершения переноса нитроцеллюлозная мембрана осторожно удаляется таким образом, чтобы гель оставался прикрепленным.
  • Затем переворачивают нитроцеллюлозную мембрану и обводят границы геля карандашом
  • Затем гель удаляют с нитроцеллюлозной мембраны, и, если во время переноса остается некоторое количество ДНК, ее можно визуализировать в УФ-свете, как объяснялось ранее.
  • Часть нитроцеллюлозной мембраны, которая соприкасалась с гелем, следует удалить с помощью лезвия.
  • Затем отрезанную часть погружают в 2X SSC примерно на 10–20 минут, а затем подвергают запеканию при 80 °C в течение 2 часов в вакуумной печи. Другим способом ДНК также можно зафиксировать с помощью УФ-сшивания, опосредованного воздействием коротковолнового УФ-света в коммерческом оборудовании. При желании сухие мембраны также можно хранить при комнатной температуре для дальнейшего использования
  • .

После завершения процесса переноса необходимо провести подготовку к реакции гибридизации.Для этого обязателен этап блокировки, который обычно занимает около часа для устранения неспецифических реакций. Этот этап также известен как этап прегибридизации.

Мембрану инкубируют в стандартном растворе Денхардта в течение 1 ч или в некоторых случаях требуется больше времени в зависимости от типа реакции. ДНК спермы лосося также широко применяется в качестве блокирующего агента. Коммерчески доступный раствор для предварительной гибридизации, такой как буфер PerfectHyb™ Plus, используется для приготовления блокирующего раствора, содержащего ДНК спермы лосося.Вскоре после инкубации предгибридизационного раствора при 42°C к нему добавляют резко охлажденную ДНК спермы лосося в концентрации 50 мкг/мл. Предгибридизационному раствору, содержащему ДНК сперматозоидов, позволяют взаимодействовать с промокательной мембраной внутри камеры для гибридизации на срок до 5 часов.

Шаг 6: Гибридизация

Меченый зонд добавляют к мембранному буферу и инкубируют в течение нескольких часов, чтобы зонд нашел точную целевую последовательность.

Время, необходимое для гибридизации, обычно 1–16 часов, зависит от таких факторов, как сложность зонда и концентрация

Радиоактивные РНК присутствуют в ограниченном количестве, поскольку они получены из клеток, что делает их важным фактором для исходного протокола.В связи с этим предполагается, что объем используемого раствора для гибридизации должен быть меньше, чтобы можно было достичь желаемой концентрации РНК. Может быть два подхода к эксперименту по гибридизации: в одном используется меньший объем, а в другом используется сосуд, предназначенный для удержания мембраны в небольшом объеме жидкости. Подходящая установка включает пластиковый пакет, который можно запечатать с помощью нагревания, он состоит из оптимального количества смеси для гибридизации и может быть погружен в водяную баню или пробирку для гибридизации с закрытыми концами.В случае с трубкой необходимо обеспечить, чтобы мембрана была влажной, когда трубка подвергается циклам вращения в печи-гриле. Применяемые зонды могут быть как РНК, так и ДНК. Клетки действуют как источник РНК или, альтернативно, они также могут быть получены из клонов или продуктов ПЦР путем транскрипции in vitro. В случае ДНК они могут быть либо клонами, либо продуктами ПЦР. Процедура, принятая для метода маркировки, зависит от источника, из которого получен зонд.

  • В случае гибридизации погружением в вазелиновое масло каплю раствора, содержащего РНК-зонд соответствующей концентрации в зависимости от размера мембраны, помещают на пластиковый лист.
  • Один из концов нитроцеллюлозной мембраны пропитывается жидкостью из капли путем медленного перемещения мембраны по поверхности капли. После намокания то же самое повторяется для другой стороны мембраны.
  • Затем мембрану погружают в раствор для гибридизации, насыщенный парафиновым маслом, при температуре 40–65 °C, в зависимости от типа используемого растворителя. Здесь следует принять во внимание, что когда мембрана прокаливается в присутствии 2X SSC, это приводит к введению соли, которая, в свою очередь, будет решающим фактором для растворителя, в котором будет растворяться РНК.Этот процесс дает хорошие результаты, но имеет недостатки, такие как неравномерный фон, который можно устранить, если проводить гибридизацию при 40°C в присутствии 2X SSC и 40% формамида. Этот метод также хорошо работает в случае гибридизации с участием крупных фрагментов.
  • В случае гибридизации с использованием сосуда, предназначенного для помещения мембраны в присутствии небольшого количества жидкости.
  • Сосуд изначально заполнен растворителем, необходимым для проведения гибридизации.
  • Мембрана затем подается в него через тонкое отверстие в верхней части.
  • Затем растворитель сливают и добавляют раствор зонда. Количество необходимого раствора зависит от размера мембраны. Для более широких мембран этот тип сосуда не подходит, вместо этого их можно гибридизовать внутри плотно прилегающей цилиндрической трубки для переноса нескольких гелей, которые слишком широки для гибридизации в сосуде этого типа. В случае, если гибридизацию проводят внутри водяной бани, верхняя часть закрыта, так как водяная баня содержит крышку.Кроме того, еще одним преимуществом является то, что в этом случае РНК можно использовать повторно.
  • Затем мембрану подвергают гибридизации в течение подходящего периода времени, зависящего от концентрации и чистоты РНК, а также других условий. В большинстве случаев уместно оставить его на ночь.
  • По истечении периода гибридизации мембраны удаляют и промокают фильтровальной бумагой
  • После этого его промывают в течение 20–30 мин большим количеством растворителя, используемого при гибридизации, и при той же температуре, при которой проводят гибридизацию.
  • Избыточное количество зонда промывается хлоридом натрия и буферами, состоящими из детергентов. В случае снижения концентрации соли промывка считается более жесткой, и большее количество такого неспецифического зонда, связанного с мембраной, удаляется с постепенным увеличением количества строгих промывок. Применение высокой температуры во время стирки также увеличивает жесткость стирки. После завершения промывки на блоте остаются только специфические гибриды, а неспецифические удаляются.
  • Мембрана проверяется на фон с помощью радиационного монитора. В случае высокого уровня мембрану обрабатывают РНКазой в течение 30 мин при 20 °C, а затем промывают с использованием 2X SSC.
  • Наконец, мембраны сушат на воздухе.

Время обнаружения составляет примерно 1–48 часов, что в основном зависит от типа зонда

  • При обнаружении радиоактивности РНК существует два варианта, а именно обнаружение 32P-меченой РНК и обнаружение 3H-, 35S-, 125I- или 14C-меченой РНК.
  • Для обнаружения 32Р-меченой РНК мембрану заворачивают в пластик без пузырьков воздуха и укладывают на рентгеновскую пленку. При приложении легкого давления мембраны уплощаются.
  • Для обнаружения 3H-, 35S-, 125I- или 14C-меченой РНК применяется флюорография. Мембраны замачивают в растворе ПФО в толуоле, а затем высушивают на воздухе. После этого их укладывают на рентгеновскую пленку и выдерживают при –70 °C
  • .

Приблизительное время выполнения всех процессов имеет решающее значение для получения хороших результатов.

  • Ограниченное расщепление обычно занимает от 2 до 24 часов, что может включать переваривание в течение ночи.
  • Аналогичным образом, в случае электрофореза время может варьироваться от 1 до 16 часов и может проводиться в течение ночи
  • Подготовка к переводу занимает около 0,5–3 ч
  • Для настройки аппарата для переноса требуется примерно 15 мин.
  • Время перевода может составлять от 3 до 16 часов, включая ночной перевод.
  • Блокирование для уменьшения неспецифичности может выполняться до 1 часа
  • Процесс гибридизации занимает от 1 до 16 часов и, в зависимости от характера и количества зонда, может продолжаться в течение ночи.
  • Обнаружение занимает от 1 до 48 часов, на что влияет выход гибридизации и специфичность зонда.

Поиск и устранение неисправностей

Для устранения неполадок процесса можно рассмотреть следующие шаги

  • Образцы могут вытекать из лунок из-за повреждения или прокола лунок. Нужно быть осторожным при удалении гребенки, а также при загрузке геля.
  • Обычно наблюдается всплывание проб из скважины из-за остаточного этанола, а также из-за поспешной загрузки геля.Этанол должен быть полностью удален перед загрузкой образца, а гель должен загружаться медленно.
  • Образцы расположены неровно, полосы имеют неровный вид. Это может произойти, когда гель работает при слишком высоком напряжении, и проблему можно решить, выбрав более низкое напряжение.
  • ДНК
  • , включая маркеры молекулярной массы, не видны. Это может быть связано с меньшим количеством используемого бромистого этидия, что может быть решено путем использования соответствующей концентрации.
  • В случае, когда маркеры молекулярной массы видны, но образцы не визуализируются, возможно, ДНК деградировала.Качество образца ДНК должно быть проанализировано.
  • Если ДНК, а также маркеры молекулярной массы не разделены, это может быть связано с тем, что гель состоит из воды, а не из однократного рабочего буфера.
  • ДНК образца не разделена, но маркеры разделены. Это может иметь место, когда концентрация ДНК в образце слишком высока, что приводит к прилипанию ДНК к лункам.
  • Если на фоне появляются пятна, это может быть связано с присыпкой перчаток, поэтому рекомендуется использовать перчатки без присыпки.Увеличение количества промывок также может устранить фон.
  • Интенсивность сигнала меньше. Это может быть связано с меньшим содержанием образца, поэтому концентрацию ДНК следует увеличить.
  • Также на интенсивность сигнала может повлиять более короткое время переноса или время гибридизации. Следовательно, передача должна быть разрешена на более длительный период, а также должна быть разрешена на соответствующее время. Температура гибридизации также может быть оптимизирована для лучшего сигнала.

Повторное использование блотов

В случае анализа клинических образцов с меньшим количеством ДНК-мишени может быть целесообразным повторное использование блотов.С этой целью зонд можно удалить, обработав его теплой щелочью на короткий промежуток времени. После этого мембрана проходит стадию нейтрализации, после чего ее можно гибридизировать с другим зондом.

Сравнение Саузерн-блоттинга с ПЦР и хроматографией

В большинстве приложений технология ПЦР заменила метод Саузерн-блоттинга. Однако технология ПЦР зависит от точной информации о последовательности ДНК для разработки конкретных праймеров, но Саузерн-блоттинг не зависит от такого требования.Кроме того, в ПЦР, если дизайн праймеров не соответствует анализируемой генной перестройке, саузерн-блоттинг сможет предоставить по крайней мере некоторую информацию. Преимущество метода Саузерн-блоттинга по сравнению с хроматографией заключается в том, что он увеличивает уровни предела обнаружения, которые необходимы или полезны для исследования определенных геномных локусов. Но этот метод сталкивается с недостатками, такими как необходимость высокой исходной концентрации ДНК-мишени, и метод также зависит от эффективности используемого рестрикционного фермента, что, в свою очередь, влияет на результаты.

Результаты

Гибридизация зонда со специфической ДНК на мембране приводит к выводу, что зонд специфичен к фрагменту на мембране из-за наличия комплементарной последовательности во фрагменте. Зонд, который гибридизировался с одним фрагментом ДНК, не расщепленным рестрикционными ферментами, даст только одну полосу в конечном блоте. В случае, если зонд свяжется со многими похожими последовательностями, это приведет к множеству полос.Специфичность зонда, а также снижение неспецифической гибридизации обычно модулируются за счет оптимизации температуры, при которой проводится гибридизация, а также необходимо регулировать концентрацию соли.

Ниже приведен пример типичного результата Саузерн-блоттинга.

В данном документе гипервариабельные отпечатки ДНК человека расщепляли с помощью Hinf I и/или Sau3A, после чего саузерн-блот гибридизовали с одноцепочечными ДНК-зондами, помеченными 32 P.Здесь каждый представляет человеческий минисателлит, содержащий тандемные повторы тесно связанных вариантов консенсусной последовательности.

 

Приложение

Саузерн-блоттинг используется в ряде приложений. Саузерн-блоттинг используется в первую очередь для идентификации конкретной ДНК в образце ДНК. Он в основном используется для выявления вирусной инфекции и некоторых бактериальных инфекций. В технологии рДНК метод Саузерн-блоттинга используется для выделения определенной ДНК.Это также полезно при изучении мутаций и перестройки генов, это свойство используется для диагностики заболеваний новорожденных и генетических заболеваний. Благодаря точности идентификации ДНК этот метод используется в филогенетических исследованиях, анализе отцовства и материнства, судебно-медицинских исследованиях и идентификации личности.

Саузерн-блоттинг можно применять для изучения структуры гена или для выяснения карт рестрикционных ферментов. В частности, саузерн-блоттинг можно использовать для идентификации метилированных сайтов, присутствующих в некоторых генах.Это можно реализовать, применяя нуклеазы рестрикции, такие как MspI и HpaII , которые могут как идентифицировать, так и расщеплять идентичные последовательности. Открытие RFLP саузерн-блоттингом помогло в картировании нескольких геномов, которые имели решающее значение для картирования. В области иммунологии клональные реаранжировки иммуноглобулинов, а также генов рецепторов Т-клеток, которые играют важную роль в возникновении иммунного ответа, могут быть проанализированы Саузерн-блоттингом.

каков срок годности крови и транспортировка образца крови?

После того, как образец крови собран и промаркирован, его необходимо доставить, отправить или иным образом перевезти в лабораторию для тестирования. Каков срок годности образцов крови? Образцы жидкой или «влажной» цельной крови имеют короткий срок хранения. Например, шесть недель считаются максимальным «сроком хранения» донорской крови, предназначенной для переливания. Всего через три недели кровь менее эффективно доставляет богатые кислородом клетки по телу, а также менее способна течь через мельчайшие капилляры организма.Здесь мы исследуем срок годности крови и путешествие образца крови, взятого для лабораторного анализа.

Сбор крови для лабораторных исследований

«Для обеспечения целостности образцов и точных результатов анализов образцы крови должны транспортироваться и храниться особым образом, — говорит Джеймс Радж, доктор философии, технический директор Neoteryx. «Способ первоначального сбора крови, а также способы ее транспортировки и хранения влияют на ее долгосрочную жизнеспособность».

Например, влажный образец крови, собранный с помощью традиционного флеботомического забора крови во флаконы или пробирки, не может оставаться при комнатной температуре более восьми часов.

Проблемы сохранения жизнеспособности образцов влажной крови

Если влажный образец крови хранится при комнатной температуре, в большинстве случаев он должен быть доставлен в лабораторию для анализа в течение восьми часов после сбора крови. Если тестирование не может быть завершено в течение этого 8-часового периода, образец обычно помещают в холодильное хранилище при температуре от +2°C до +8°C не более чем на семь дней. Если анализы не будут завершены в течение семи дней или если образец будет храниться более семи дней, его следует заморозить при температуре от -15°C до -20°C.

Преимущества сухих образцов крови

«В целом высохшая кровь остается стабильной при температуре окружающей среды намного дольше, чем влажная кровь», — добавляет доктор Радж. «Образцы высушенной крови обычно остаются жизнеспособными в течение нескольких недель при комнатной температуре. Кроме того, многие образцы высушенной крови не требуют транспортировки в холодильнике или хранения в холодильнике для обеспечения средней, а иногда даже долгосрочной жизнеспособности, поэтому многие ученые-исследователи и медицинские работники перешли на использование высушенных образцов крови для лабораторных исследований.»

Независимо от того, считается ли образец крови «влажным» или «сухим», что происходит с ним после того, как он был взят?

Путешествие с образцом крови

После того, как образец крови доставлен или отправлен в лабораторию, обученные специалисты используют различные методы для его анализа в зависимости от того, какие типы тестов необходимы. Если необходимо несколько тестов, лаборанты будут использовать более одного образца крови. Вот почему флеботомист, выполняющий забор крови из вены, собирает несколько пробирок с кровью для одного анализа крови.Флеботомист знает, что если образец крови слишком мал, лабораторный анализ нельзя повторить, чтобы подтвердить первый результат.

Понимание объема пробы для лабораторных испытаний

Традиционный подход к «влажным» заборам крови заключается в том, чтобы собрать от 2 до 2,5 раз больше объема, чем требуется для анализа крови — достаточно для проведения двух тестов каждого типа. Однако для большинства стандартных заборов крови требуется слишком много крови, и даже после проведения двух тестов из одного образца большая часть крови выбрасывается.

То же правило «два раза больше объема» применяется к анализу сухой крови, хотя для каждого теста требуется гораздо меньший объем крови. Например, если вы используете портативное устройство для сбора небольших капель крови с кончика пальца для анализа сухой крови, вам потребуется собрать капли крови на 2–4 наконечника устройства или 2–4 точки на карточках фильтров.

Маркировка проб крови для надлежащей идентификации и документирования

При заборе крови пробирки, устройства или фильтровальную бумагу маркируют.Это обеспечивает правильное сопоставление образцов крови и результатов со всеми документами для этого лица. В некоторых центрах или лабораториях по забору крови на этикетке предварительно напечатано имя человека и его идентификационный номер пациента. В качестве альтернативы пробирки или устройства могут быть помечены уникальным штрих-кодом, который включает в себя соответствующую информацию о человеке или уникальную строку чисел. Если вы самостоятельно собираете образцы крови дома для анализа сухой крови, убедитесь, что устройство или фильтровальная бумага снабжены уникальным штрих-кодом или этикеткой пациента.Крайне важно, чтобы пробирки, устройства или документы были должным образом маркированы до того, как образцы крови покинут вас.

В лаборатории этикетка на ваших образцах крови будет зарегистрирована в системе отслеживания. Эта информация гарантирует, что ваши образцы будут проверены надлежащим образом, а результаты будут идентифицированы вместе с вами на протяжении всей обработки. После тестирования лаборатория отправит электронную форму со списком ваших результатов и другой информацией соответствующему лицу, например, вашему врачу или руководителю клинического исследования.

Обработка и анализ крови

Для анализа цельной крови образец крови может быть проанализирован непосредственно с помощью, возможно, простого разбавления. Однако, в зависимости от того, какие тесты необходимы, ваш образец крови часто подвергается дальнейшей обработке перед анализом. Многие анализы крови выполняются либо на плазме, либо на сыворотке, что требует этапа разделения для удаления клеточной фракции. Некоторые анализы крови, такие как неонатальный скрининг на врожденные нарушения метаболизма, выполняются из высушенной крови, что также требует обработки образца перед анализом.

Плазма , представляющая собой жидкую часть крови, собирается в пробирку с антикоагулянтом. В лаборатории плазма отделяется от клеточной части образца влажной крови путем быстрого вращения в центрифуге. Этот процесс центрифугирования осаждает клеточную фракцию, оставляя плазму соломенного цвета в верхней части пробирки.

Сыворотка , представляющая собой жидкость, оставшуюся после процесса свертывания, получают путем центрифугирования, при котором свернувшиеся клеточные фрагменты оседают на дне пробирки, оставляя прозрачную жидкость наверху пробирки, готовую для анализа.

Сухая кровь представляет собой образец капиллярной крови, собранный из кончика пальца или пятки, который высыхает на устройстве для взятия микропроб крови или на карточке сухой капли крови (DBS). Наконечник микропробоотборника или пятно на карте DBS, впитавшее кровь, обычно добавляют в пробирку с жидкостью для извлечения и анализа в лаборатории. Используемый экстрагент зависит от типа теста. Хотя капиллярная кровь не идентична венозной или артериальной крови, высушенные образцы капиллярной крови дают результаты, эквивалентные образцам венозной крови.Они предоставляют научные и клинические данные, которые предоставляют как исследователям, так и поставщикам медицинских услуг важную информацию.

admin

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *