План-конспект урока по русскому языку (5 класс) на тему: Конспект урока «Состав слова» 5 класс | План-конспект урока по русскому языку (5 класс) на тему:

                                                      Вырубовский филиал

МБОУ «Никифоровская  средняя  общеобразовательная школа №1»

Тема :         « Состав слова»

Учитель

 русского языка и литературы

                                                                                                Полякова Татьяна Викторовна

ТЕМА УРОКА:        

Важность изучения  данного раздела  определяется тем, что более  двух третьих орфографических правил, включенных в школьные учебники, опираются на умение анализировать слово по составу.

ЦЕЛИ УРОКА:

1. Образовательные:

• Подвести учащихся к пониманию  морфемы как значимой части слова;
• Научить школьников обоснованно выделять морфемы;
• Различать формы одного и того же слова и однокоренные слова;
• Формировать умение подбирать однокоренные слова с учетом значения корня;

2. Развивающие:

• Помочь школьникам осознать взаимосвязь языковых явлений, сформировать умение устанавливать эти связи, сравнивать, обобщать, сопоставлять;
• Формирование навыков монологической устной речи научного стиля;

3. Воспитательные:

• Воспитание интереса к русскому  языку;
• Формирование умения работать  в парах, группах;
• Воспитание чувства коллективизма, сплоченности, взаимовыручки и дружбы;

ОБОРУДОВАНИЕ:

• Лист учета  знаний учащихся;
• Карточки с заданиями;
• Таблицы;
• Короны с названиями морфем;
• Учебник «Русский язык 5класс» под редакцией Т.А. Ладыженской;
• Тест.

ХОД УРОКА:

1. ВСТУПИТЕЛЬНОЕ СЛОВО УЧИТЕЛЯ.

— Все на свете из чего-нибудь состоит: облака- из множества водяных капель, лес- из деревьев , а предложения- из слов. Слова сделаны из своего «строительного материала», «кирпичиков». И каждый из «кирпичиков» вносит  в слово свою часть смысла — «смыслиночку».  И  наша цель – подробно исследовать те самые «кирпичики», из которых построено слово.

2. ЧАСТИ СЛОВА  «РАССКАЗЫВАЮТ» О СЕБЕ. (Дети в коронах с названием  частей слова  выходят к доске и читают  стихи.)

КОРЕНЬ:

Корень слова – главная ,

Значимая часть.

Родственные связи  дарит

Корню власть.

Выясни умело линию родства-

Однокоренные подбери слова.

ПРИСТАВКА:

У Корня в недругах, представь-ка,

Есть дама гордая — Приставка,

А злит она его одним:

Стоит лишь только перед ним.

СУФФИКС:

За корнем  СУФФИКС обогрел местечко,

Не словом угодил, а лишь словечком.

Река большая превратится в речку,

Лес – в лесника,

А печь – всего лишь в печку.

ОКОНЧАНИЕ:

Та слова часть, что изменяется,

Окончанием называется.

Остальную же часть слова

Именуем мы основой.

3. СЛОВАРНЫЙ  ДИКТАНТ.

— Ребята, какая часть является сердцевиной слова, его смысловым центром? Правильно, корень. Именно от него  «растут»,как ветви на дереве, слова. Издревле о самом  важном, главном говорили: «Смотри в корень!» или «Зри  в корень!» Продиктуйте друг другу слова и выделите в них корень.(взаимодиктант, взаимопроверка)

4. ПУТЕШЕСТВИЕ В СТРАНУ МОРФЕМ.

— Мы продолжаем исследование и отправляемся  в небольшое путешествие. На остановках нас ожидают испытания. Нужны смельчаки.

1- я  остановка- столица КОРЕНЬ (на доске  записаны слова: родник, Родина, родит, народ, родня, родинка, родитель, родной).

— Являются ли эти слова однокоренными? Докажите.( дети обсуждают вопрос в группах и дают ответ)

— А вот как об этом  размышлял лесник из произведения К.Паустовского «Золотая роза»: «Родник родит реку, а река льется – течет  через … всю родину, кормит народ… И все эти слова как бы родня между собой». Лесник правильно подсказал: у всех этих слов есть общий объединяющий смысл. Общая часть- корень — род — .

        2- я  остановка — ПРИСТАВОЧНАЯ ГОРА.

На ПРИСТАВОЧНОЙ  ГОРЕ  нужно указать слова с приставкой – по

( подорожник, подушка, подозрение, подоить, подоконник, подержать ).

        3- я остановка- СУФФИКСАЛЬНОЕ ПОЛЕ.

На пути к СУФФИКСАЛЬНОМУ ПОЛЮ разрушился мостик через овраг, по одну сторону  оврага остались  суффиксы, по другую- слова. Чтобы восстановить мостик, надо суффиксы присоединить к словам, с которыми они могут сочетаться , и сказать, какое значение вносит  суффикс в слово.( таблица )

        4- я  остановка- ПИК  ЗНАНИЙ.

— Последняя остановка- ПИК  ЗНАНИЙ. Назвать слова с одинаковым окончанием. ( домов, столов, голов, коров, аллей, степей, юношей, батарей )

5. РАБОТА В ГРУППАХ.

— А сейчас, ребята, вам  предстоит выдержать еще одно  испытание. Возьмите карточки с заданиями. Внимательно прочитайте  условие. Приступаем  к  выполнению.( экзамен по карточке  принимает вся группа.

КАРТОЧКА № 1

Найдите однокоренные слова и отметьте их, оставив формы одного  и того же  слова.

1.Еж, ежик, ежи, съежился, ежевика, ежовый, ежиком, съежилась, ежевичный;

2.Вера, верный, вероятно, вероятный, верно, верить, веришь, верой, веровать, неверие, верным;

3.Глубина, вглубь, глубоко, углублять, углубление, глубиной, глубинный, глубокомысленный, глубокий, углубляем, глубокомысленная.

КАРТОЧКА№ 2

Найдите « четвертое лишнее» слово.

1. Рисунок, рисовый, зарисовка, рисую.
2. Столик, столетие, застольная, столица.
3. Жалость, жалкий, жало, жалко.

КАРТОЧКА № 3

Заполните таблицу примерами

КАРТОЧКА № 4

Найдите  и укажите  правильный  вариант  ответа.

1. Слово с уменьшительно- ласкательным суффиксом.

• Мальчик
• Хорошенький
• Подводник
• Ребенок

2. Слово с суффиксом, указывающим на профессию.

• Зайчик
• Водный
• Плотник
• Настойчивый

3. Слово с приставкой со значением приближения.

• Прибрежный
• Окружить
• Переход
• Отдалить

4. Слово с приставкой со значением отдаления.

• Пришкольный
• Отбежать
• Сговориться
• Рассчитать

КАРТОЧКА № 5

Найдите слова  с нулевыми  окончаниями  и  отметьте  их.

КАРТОЧКА №  6

Найдите слова с ошибками в  разборе  по составу. Исправьте их.

КАРТОЧКА № 7

Прочитайте внимательно текст. Ответьте на вопросы.

Однажды охотник встретил на лесной дороге маленькую девчушку  с золотистыми волосами. Это была дочка лесника . Она собирала в корзину еловые шишки.

У девочки были зеленоватые глаза , и в них отражался огонь осиновых листьев.

Она проводила охотника до избушки лесника.

Вопросы к тексту.

1. Указать средства связи предложений в тексте.

2. Составить схему четвертого предложения. Что связывает в нем союз И.

3. Найти однокоренные слова. Чем они отличаются по составу?

4. Назвать слова с нулевым окончанием. Какие это части речи? На что указывают в них нулевые окончания?

5. Есть ли в тексте слова без окончания? Что это за части речи?

6. Выделите суффиксы в именах прилагательных. Назовите  слова с уменьшительно-ласкательными суффиксами. Какие это части речи?

7. В какой форме стоят глаголы? Какая морфема указывает  на данную форму глагола?

6. ОТГАДЫВАНИЕ ШАРАД.

Каждая группа загадывает шарады другим группам.

1 группа

Корень тот же, что в слове отдавать,

Приставка взята из слов преграда и посылка,

Суффикс  и окончание взяты из слова знание.

Корень мой находится в цене.

В очерке найди приставку мне,

Суффикс мой в тетрадке все встречали,

Вся же- в дневнике я и в журнале.

Суффикс и окончание ищи в слове терпеливый, приставку- в слове выписать,

Корень- в слове преподносить.

2 группа

Суффиксы взяты из слова значительный, корень- из слова переполненный,

Приставка и окончание- из слова исключительный.

Мой  корень- родственник сраженья,

Приставка- в слове заявленье,

В наборщике есть суффикс мой,

А  весь- тружусь я под землей.

Корень извлечь из начинки несложно,

Приставка в сосуде хранится надежно,

Суффикс в гудении явно услышишь,

Вместе на темы различные пишешь.

3 группа

Корень — из слова приветствие, приставка — из слова отличник,

Суффиксы взяты из слов мужество, откровенный, смелость.

В списке вы мой обнаружите корень,

Суффикс- в собрании встретите вскоре,

В слове рассказ вы приставку найдете,

В целом- по мне на уроки пойдете.

Суффикс тот же, что в словах железный и старость,

Приставки те же, что в словах приезд и настройка,

Корень тот же , что в слове подлежащее.

4 группа

Корень тот же , что в слове сказка,

Суффикс тот же , что в слове извозчик,

Приставка та же, что в слове расход.

Корень с дорогой роднится,

В сборе приставка таится,

Суффикс как в слове дневник,

Целым же в космос проник.

Суффикс- из слова руководитель,

Приставка- из слова возможность,

Корень- из слова пропитание.

7. ПРАКТИЧЕСКАЯ ЧАСТЬ.

Учащиеся  «заявляются» на  выбранную оценку и выполняют:

на «5»-упр.391

на «4»-упр.392

на «3»-упр.388

8. ИТОГОВЫЙ ТЕСТ.

1. Найдите слово, соответствующее схеме.         ¬∩∧•

• Предлагать
• Ниспровержение
• Исстари
• Звездочки

2. Найдите слово с буквой З в приставке:

• бе…образие
• …десь
• бе…подобный
• ра…думать

3. Найди слово с буквой С в приставке:

• сортировать
• бессовестный
• сибирский
• нет такого слова

4. Найди  слово с корнем –лож- :

• возл…жить
• возл…гать
• и то и другое слово
• нет такого слова

5. Найди слово с корнем –лаг- :

• прил…гательное
• прил…женный
• и то и другое слово
• предл…жить

6. Найди слово, соответствующее схеме                ∩         •

• хорошо
• безвкусный
• шелк
• цыганка

7. Найди слово с корнем – рост — :

• р…сток
• р…стение
• перер…сти
• нет такого слова

8. Найди слово с корнем –раст — :

• Р…стислав
• Подр…сли
• Выр…сли
• Выр…стили

9. Найди слово, соответствующее схеме                ¬∩ •

• здоровье
• сбросить
• поеду
• подумали

10. Найди форму слова ТРУДНЫЙ

• трудному
• труднейший
• потрудиться
• трудность

11. Найди однокоренное слово к слову МЕЧТА

• мечты
• мечтой
• мечтать
• нет такого слова

12. Найди слово с суффиксом –Н- :

• мечтательный
• крупный
• апельсиновый
• караван

13. Найди слово с буквой О после шипящей в корне слова:

• щ…лкнуть
• щ…чка
• ш…рох
• щ…голь
• ш…пот

14. Найди слово с буквой Е после шипящей в корне слова:

• ш…в
• ч…лка
• крыж…вник
• ш…колад
• нет такого слова

15. Найди слово с буквой И после Ц:

• ц…трусовый
• ц…пленок
• ц…почки
• нет такого слова

16. Найди слово с буквой Ы после Ц:

• ц…ркуль
• ц…ферблат
• улиц…
• ц…гейка
• нет такого слова

17. Найди слово с гласной И после Ц:

• околиц…
• столиц…
• ц…кнуть
• нет такого слова

18. Где слова однокоренные:

• корить – кора
• резать – резкий
• дом – домовитый
• справа – справедливый

9. ИТОГИ УРОКА (ВЫСТАВЛЯЮТСЯ В ЛИСТАХ  УЧЕТА ЗНАНИЙ )

10. ДОМАШНЕЕ ЗАДАНИЕ

§ 58-64

«5»-упр.365

«4»-упр.362

«3»-упр.368

Предложения со словом «Приветливый». Примеры.

1.  Ни раздражительности, ни лукавства не проявлял он по отношению ко мне; всегда услужливый и приветливый, он был привязан ко мне, как ребенок к родному отцу.

2.  Должно быть, у меня был не особенно приветливый вид, потому что он испуганно заморгал и вышел.

3.  Как мог этот добрый, приветливый человек убить?

4.  Вид у него был нездоровый — и, уж во всяком случае, не слишком приветливый; он поднялся из-за стола, держа руку в кармане, но разговаривал вполне учтиво.

5.  Мы вошли в лес, теперь зеленый и приветливый, а не черный и зловещий, как ночью.

6.  Освещенный светом луны приветливый лес остался далеко позади.

7.  Он был в полной памяти; лицо же его было хотя и весьма утомленное, но ясное, почти радостное, а взгляд веселый, приветливый, зовущий.

8.  У него был четкий профиль, улыбающиеся глаза, бескровное, чисто выбритое лицо, приветливый, мягкий голос, тонкие губы и непринужденные, дружелюбные манеры.

9.  Поутру приветливый врач увидел, что больной вполне избавился от всяких признаков лихорадки и способен перенести тяготы утомительного путешествия.

10.  На этот раз свет не казался угрожающим, это был приветливый белый свет.

11.  Цвет лица был нежный, светлый; взгляд прямой и быстрый, как у мальчика; но косматые белоснежные брови делали этот приветливый, зоркий взгляд острым и испытующе-проницательным.

12.  Общительный и приветливый губернатор и в самом деле питал нежнейшую дружбу к своему узнику.

13.  Характер у него был добрый, благородный, приветливый и откровенный.

14.  Обычно приветливый и улыбающийся, сейчас он был сердит и сильно взволнован.

15.  Оба кувшина она поставила на стол, бросив на меня не очень-то приветливый взгляд.

Антоним

Eckher Dictionary is a modern pronunciation dictionary of the English language. Every pronunciation in Eckher Dictionary is written in IPA (International Phonetic Alphabet). Example English pronunciations: «bamlanivimab».

Eckher’s Periodic Table of the Elements is the modern and accessible version of the periodic table that allows you to easily navigate all 118 elements and view detailed information about each element. It supports both the 18 column (IUPAC) and 32 column (long form) versions of the periodic table and provides the mobile- and touch-friendly interface for viewing the table.

Create sequence logos for protein and DNA/RNA alignments using Eckher Sequence Logo Maker.

Compose speech audio from IPA phonetic transcriptions using Eckher IPA to Speech.

Browse place name pronunciation on Eckher IPA Map.

Enter IPA characters using Eckher IPA Keyboard.

Navigate the Semantic Web and retrieve the structured data about entities published on the web using Eckher Semantic Web Browser.

Turn your phone into a compass using Eckher Compass.

Author, enrich, and query structured data using Eckher Database for RDF.

Create TeX-style mathematical formulas online with Eckher Math Editor.

Create knowledge graphs using Eckher RDF Graph Editor.

Send messages and make P2P calls using Eckher Messenger.

Build event-sourced systems using Eckher Database for Event Sourcing.

View PDB files online using Eckher Mol Viewer.

Listen to your text using Eckher Text to Speech.

View FASTA sequence alignments online with Eckher Sequence Alignment Viewer.

Convert Punycode-encoded internationalized domain names (IDNs) to Unicode and back with Eckher Punycode Converter.

Explore the human genome online with Eckher Genome Browser.

Edit text files online with Eckher Simple Text Editor.

Send test emails with Eckher SMTP Testing Tool.

В морфемном словаре русского языка МОРФЕМА.РУС приведен разбор слов по составу (морфемный разбор, морфемный анализ). Даный словарь поможет в проведении морфемного анализа не только начальных (словарных) форм слов, но и всех их словоформ (всех грамматических форм слов русского языка). В основу морфемного словаря «Морфема» положена наиболее полная лексика русского языка.

Разбор слова «грибочек» по составу (морфемный анализ) представлен в словаре МОРФЕМА.РУС (выделение корня, суффикса, основы и окончания).

Demonym is an online dictionary of demonyms (words used to identify the people from a particular place). Some of these words aren’t well-known or easy to remember, and Demonym can help you quickly find the answer. Examples: Barbados.

Розбір слів за будовою: «ходити».

Разбор слоў па саставе: «рассыпаць».

Ударения в словах: «Шеншин».

Синонимы к словам: «потешить».

Антонимы к словам: «сжать».

определение слова frank в The Free Dictionary

Frank

Член одного из германских племен Рейнского региона в раннехристианскую эру, особенно одного из салианских франков, которые завоевали Галлию около 500 г. н.э. и основали обширную империю, достигшую своего наивысшего могущества в девятом веке.

Сосиски.

Словарь английского языка American Heritage®, пятое издание.Авторские права © 2016, издательство Houghton Mifflin Harcourt Publishing Company. Опубликовано издательством Houghton Mifflin Harcourt Publishing Company. Все права защищены.

откровенный

1. честный и прямой в речи или поведении: откровенный человек.

2. откровенный или прямолинейный

3. открытый и общепризнанный; нескрываемый: откровенный интерес.

6. (Телекоммуникации) для отметки (письма, посылки и т.п.) официальным штемпелем или подписью, указывающей на право бесплатной доставки

7. (Правительство, политика и дипломатия) для облегчения помогать (человеку) приходить и уходить, проходить или беспрепятственно входить

8. (правительство, политика и дипломатия) для получения иммунитета или освобождения (лица)

9. (телекоммуникации) официальная отметка или подпись, проставленная на письме, посылке и т.п., обеспечивающая бесплатную доставку или доставку без печатей

10. (Телекоммуникации) привилегия, выдаваемая определенным лицам и учреждениям, дающая им право на доставку без почтовых марок

[C13: от старофранцузского franc , от средневековой латыни francus бесплатно; Одинаковые с Фрэнком (в Фрэнкиш Галль только члены этого людям пользовались полной свободой)]

откинут мл.

Франкер N

N

откровенные N

Frank

(исторические термины) представитель группы западногерманских народов, которые распространились с восточного берега среднего Рейна в Римскую империю в конце 4 века нашей эры, постепенно завоевывая большую часть Галлии и Германии.Франки достигли своего наибольшего могущества при Карле Великом

[Древнеанглийский Franca ; относится к древневерхненемецкому Франко ; возможно, от названия типичного франкского оружия (ср. древнеанглийское franca javelin)]

Frank

1. Anne 19021 (биография) (биография) 1929–45, немецкая еврейка, чей дневник (1947) записал переживания ее семьи, когда она скрывалась от нацистов в Амстердаме (1942–44).Их предали и она умерла в концентрационном лагере

2. (Биография) Роберт . 1924 г.р., американский фотограф и кинорежиссер, родился в Швейцарии; наиболее известен своей фотографической книгой The Americans (1959)

Collins English Dictionary – Complete and Unabridged, 12th Edition 2014 frank ¹ (fræŋk)

прил. , frank•er, frank•est,
прил.

1. прямая и безоговорочная речь: откровенная критика.

2. отсутствие сдерживания или уловки: откровенное любопытство.

3. безошибочный; клинически очевидно: откровенная кровь.

4. штамп, печатная маркировка или подпись на почтовом отправлении, свидетельствующие об оплате почтовых расходов.

5. пометить (отправить по почте) для передачи на основании франка.

6. чтобы дать возможность пройти или пройти свободно.

7. для облегчения прихода и ухода (человека).

frank’a•ble, прил.

Франкер, н.

франк

н.

сосиски.

[1900–05, Амер. ; путем сокращения]

Frank

сущ.

2. житель раннесредневекового государства, основанного франками.

3. (теперь в историческом контексте) любой уроженец Западной Европы.

[до 900; Средний английский; Староанглийский Franca ]

Frank

сущ.

Энн, 1929–45, немецкая еврейская девушка, погибшая в концентрационном лагере Бельзен в Германии: ее дневники о ее семье, скрывающейся от нацистов в Амстердаме (1942–44), опубликованные в 1947 году.

Random House Словарь колледжа Кернермана Вебстера , © K Dictionaries Ltd, 2010. Авторские права Random House, Inc., 2005, 1997, 1991. Все права защищены.

откровенны

ImperativePresentPreteritePresent ContinuousPresent PerfectPast ContinuousPast PerfectFutureFuture PerfectFuture ContinuousPresent Идеальный ContinuousFuture Идеальный ContinuousPast Идеальный ContinuousConditionalPast Условное

Collins English Verb Tables © HarperCollins Publishers 2011

frank — определение и значение

Как фотографии Роберта Франка помогли определить Америку

Франк родился в Швейцарии в 1924 году в семье швейцарки и отца-еврея. Его семья оставалась в безопасности на протяжении всей Второй мировой войны, но он стал частью послевоенного исхода из Европы, уехав в 1947 году в Нью-Йорк, где он поселился; позже в жизни он начал делить свое время между Манхэттеном и Новой Шотландией.Его ранняя работа в журнале Harper’s Bazaar принесла ему известность в нью-йоркских художественных кругах, но только в 1955 году, когда он взялся за работу, которая стала называться «Американцы», его способности как фотографа и летописца стало широко проявляться. Фрэнк развивался как художник, в конце концов перейдя к кино и режиссуре — в первую очередь «Cocksucker Blues», кинематографической записи американского турне Rolling Stones 1972 года, который стал предметом затяжного судебного процесса. (Стоунз попытались скрыть фильм, отчасти из страха перед тем, как его незаконное содержание будет воспринято в Соединенных Штатах.Во вторник группа выступила с заявлением, назвав Фрэнка «невероятным артистом, чей уникальный стиль сломал стереотипы».) Но «Американцы» остались самой известной работой Фрэнка, точкой отсчета как для него как художника, так и для среды, в которой он создал его.

Часто бывает трудно оценить важность работы спустя долгое время после ее первоначального появления, потому что новаторские идеи одного поколения, как правило, становятся общепринятыми условностями тех, кто следует за ним. Однако «Американцы» были убедительны как современный документ, когда он был опубликован, и он остается таковым как архивное представление шесть десятилетий спустя.Восемьдесят три фотографии в книге были отобраны из более чем двадцати семи тысяч, сделанных Фрэнком в Небраске, Монтане, Коннектикуте, Южной Каролине, Джорджии, Нью-Йорке, Калифорнии и других местах. На оригинальной обложке изящно сложенное изображение троллейбуса в Новом Орлеане, пассажиры смотрят прямо наружу, как будто намеренно поддерживают зрительный контакт со зрителем. Это документ американской передачи середины века, но также тонкое свидетельство гораздо большего. Просто намекают на последствия расположения этих пассажиров — черные путешественники сидят сзади — и на метафорическое изображение тележки всего набора социальных отношений.Франк лаконично, подрывно помещает всех этих людей, которые буквально движутся в одном направлении, под заглавием книги. Они американцы.

Совокупность моментов, запечатленных и представленных Фрэнком, представляет собой заявление о широком, громоздком представлении о самой Америке: одинокий Свидетель Иеговы, стоящий в Лос-Анджелесе, с обветренным и напряженным лицом; вдовствующая вдова из Майами посреди разговора с небрежно накинутой на плечи палантином; женщина и ребенок в переполненной машине в Бьютте, штат Монтана, оба настолько усталые и обеспокоенные, что кажутся настоящими Джоадами, отправляющимися в погоню за большей удачей.Американский флаг появляется в сериале случайным образом, прикрепленный к зданию во время парада в Хобокене, штат Нью-Джерси; на праздновании Четвертого июля в Джее, Нью-Йорк; в баре в Детройте. Мужчина в Венеции, штат Калифорния, делает из него навес, чтобы укрыться от солнца. Мотив указывает на различные предприятия здесь, на ошеломляющее разнообразие жизней, сосуществующих в сорока восьми смежных штатах.

Что означает «Блондинка» Фрэнка Оушена?

Три года назад загадочный Фрэнк Оушен выпустил Blonde , один из самых важных и сложных альбомов этого десятилетия.Альбом был выпущен как на физическом носителе, в журналах, раздаваемых во всплывающих магазинах по всей стране, так и в цифровом виде на iTunes. Журнал под названием Boys Don’t Cry является дополнением к альбому и содержит альтернативный трек-лист для Blonde . Однако, несмотря на руководство, которое предлагает журнал, альбом часто оставляет нам больше вопросов, чем ответов.

Одним из аспектов альбома, который стал предметом многочисленных дискуссий, является название и его альтернативное написание на обложке.Поклонники предположили, что использование слов «блондин» на обложке альбома и «блондин» в списке альбомов является отсылкой к сексуальному опыту Фрэнка как с мужчинами, так и с женщинами, а также к темам двойственности между мужественностью и женственностью в его жизни; где «блондинка» — мужская форма слова, а «блондинка» — женская.

Слово «блондинка» имеет два толкования. Во-первых, у детей обычно светлые волосы, которые по мере взросления темнеют до каштановых. Таким образом, Blonde можно рассматривать как отражение юных лет Фрэнка, подробно описывающее его невинность, чистоту и их потерю, что делает альбом более автобиографичным, чем его предыдущие работы.Такие песни, как «Pink + White» и «Ivy», напоминают о взрослении Оушена благодаря использованию вокальной подачи.

Фрэнк Оушен утверждал, что вдохновение для альбома он черпал из этой фотографии.

Вторая интерпретация — символика светлых волос; блондины стереотипно бездумны и беззаботны. В посте на Tumblr Фрэнк написал, что его вдохновила фотография светловолосого ребенка на заднем сиденье автомобиля. Ее «ясные и спокойные» глаза перекликаются с темой альбома о юношеской беззаботности.

В интервью The New York Times Оушен объяснил, почему он использовал разные голоса на протяжении всего альбома:

Иногда мне казалось, что в песне недостаточно моих версий, потому что было много гиперактивного мышления. Несмотря на то, что темп альбома не бешеный, скорость выбрасывания идей такова… моя точка зрения от одного эмоционального состояния к другому — это другая точка зрения. Иногда мне хочется поговорить о песне и разозлиться, потому что я злюсь.Тогда есть часть меня, которая всегда помнит, что эта запись живет за пределами моего гнева, и поэтому я действительно хочу злиться из-за этого? Будет ли это чувство долгим?

В целом, концепция альбома исследует влюбленность и разлюбленность, с темами любви к себе и ненависти, неудавшихся отношений, семьи, наркотиков и депрессии. Эти темы переплетаются, чтобы создать альбом с нюансами, который является самым уязвимым и личным проектом Оушена. Стремясь обобщить весь альбом, Genius собрал биографии каждой песни, написанные его сообществом, чтобы предоставить слушателям дорожную карту знаний.

1. «Найки»

«Nikes» — это критика атрибутов материалистического гедонизма с частыми ссылками на кроссовки Nike, блестящее золото/блеск и фантазии об удовольствии. Видеоверсия этой песни включает два конкурирующих голоса, в то время как в альбомной версии их нет, что добавляет ощущение напряжения и конфликта к мечтательной песне. Фрэнк выпустил три разные версии этой песни: оригинальную, версию Apple Music без третьего куплета с участием японского рэпера KOHH и видеоверсию с импровизацией Фрэнка.

Эта песня и видео вдохновлены «Вратами рая» — сектой 1990-х годов, которая поклялась вместе покончить жизнь самоубийством. Все они были одеты в одинаковую одежду и кроссовки Nike Decades; Фрэнк воссоздает их униформу в видео.

Фрэнк поет двумя разными голосами: одним более высоким, а другим низким. В начале песни Фрэнк говорит, что у него «две версии». Это может означать, что есть две версии этой истории, каждая из которых рассказана голосом в разной тональности.Высота может быть выше в первом куплете, потому что он должен звучать синтетически, что отсылает к материалистической теме песни. Во втором куплете тон возвращается к «реальности», как и лирика.

Песню впервые дразнил Chance the Rapper, который, по слухам, сотрудничал с альбомом, в твите в июле 2015 года:

2. «Плющ»

Фрэнк Оушен размышляет о своих ошибках и исследует неудавшиеся отношения в сериале «Айви». Оушен и его партнер, кажется, отдалились друг от друга.Он был ошеломлен, когда его партнер сказал ему, что любит его. Оглядываясь назад, можно сказать, что отношения были «началом ничего», потому что в конце концов они расстались. Тем не менее, Оушен подтверждает идею о том, что отношения были полезными и памятью, которую нужно сохранить.

Название может быть отсылкой к тому, что плющ душит соседние деревья и вреден для их здоровья. В контексте песни это может быть отражением их нездоровых отношений.

В интервью The New York Times Оушен объяснил, почему в этой песне, как и во многих других на альбоме, звучат разные голоса с разными точками зрения на одну и ту же историю:

Это была моя версия коллажа или бриколажа, как мы иногда воспринимаем память, она нелинейна.Мы не рассказываем истории самим себе, мы знаем историю, мы просто видим ее вспышками, наложенными друг на друга.

Лирика «это началось из ничего» вызвала много споров, так как звучит так, как будто «начало из ничего» лучше подходит по слогам. Лирика на самом деле звучит так: «Все началось с нуля», как указано в журнале, сопровождающем альбом, Boy’s Don’t Cry

3. «Розовый + белый»

Спродюсированный Фарреллом Уильямсом и с неуказанным бэк-вокалом Бейонсе, «Pink + White» рассказывает о юности Оушена и его близком человеке, который скончался.Он помнит этого человека, вспоминая уроки, которые они ему преподали.

Тема смертности играет ключевую роль в этой песне. Во втором куплете он поет об урагане, уничтожающем все на своем пути, и о его последствиях. Ураган, вероятно, является отсылкой к урагану Катрина, который обрушился на Луизиану, когда Оушен был студентом Университета Нового Орлеана. Возможно, любимый человек Фрэнка умер во время «Катрины».

Как можно услышать из первых строк песни, название является отсылкой к поездке на закате с Фрэнком и его старым другом.«Розовое и белое» описывает небо в тот момент, когда он вспоминает.

4. «Будь собой»

«Будь собой» — это голосовое сообщение от Рози Уотсон, матери одного из друзей детства Фрэнка. Когда был выпущен Блондинка , многие фанаты предположили, что голосовая почта была оставлена ​​мамой Фрэнка из-за заключительной строки: «Это мама, позвони мне, пока». Это не так, и это подтвердил брат Фрэнка Райан через Twitter:

Этот трек похож на «Not Just Money» из предыдущего альбома Фрэнка, channel ORANGE , где Рози дает Фрэнку не менее суровый совет о том, что в жизни есть нечто большее, чем просто деньги.

5. «Соло»

В «Соло» Фрэнк затрагивает различные аспекты одиночества, такие как любовь к себе или ожидание звонка от любимого. Название песни имеет две интерпретации. На протяжении всей песни Фрэнк поет о том, что он один или соло, но в припеве Фрэнк объясняет, что он «такой низкий» эмоционально и что ему нужно «подняться».

Джеймс Блейк выступил сопродюсером песни, а Джазмин Салливан (которая внесла вокал в несколько песен на Endless ) добавила дополнительный вокал.

6. «Горизонт К»

В этой песне Фрэнк поет о случайных мыслях от секса до наркотиков и действует как своего рода интермедия между треками, слегка меняя настроение альбома в переходе между «Solo» и «Self Control». На протяжении всей песни Фрэнк упоминает лето, ночь и секс. Лето — постоянная тема в творчестве Оушена.

Первоначально ходили слухи, что Кендрик Ламар был голосом импровизации трека, но это было развеяно с выпуском официальных примечаний к альбому.

7. «Самоконтроль»

«Самоконтроль» — медленная баллада, в которой Фрэнк описывает отношения, которые постепенно разваливаются. На протяжении всей песни Фрэнк намекает, что причина, по которой их отношения рухнули, заключалась в том, что другой человек был слишком незрелым. Во вступлении используется высокий вокальный эффект, который Фрэнк использует на протяжении всего альбома. Скрипучий голос предполагает, что Фрэнк вспоминает события, которые произошли, когда он был моложе.

В интервью The New York Times Фрэнк объяснил свое намерение с помощью песни:

Это было написано о ком-то, с кем я на самом деле был в отношениях, с кем не было безответной ситуации… Это было взаимно, просто мы не могли по-настоящему общаться.Мы действительно не были на одной волне.

Остин Файнштейн из инди-группы Slow Hollows и Юнг Лин поют припевы. Остин поет первую в одиночку, а во второй к нему присоединяется Юнг Лин.

8. «Хороший парень»

«Хороший парень» затрагивает идеи одиночества и пустоты, переживаемые бесплодными встречами. В треке рассказывается история Фрэнка, который пошел на свидание вслепую с парнем, с которым он познакомился через общего друга.

На свидании Фрэнк обнаруживает распутный характер своего партнера и понимает, что близость между ними бессмысленна, тогда как Фрэнк, вероятно, надеялся на что-то большее.Вокал Оушена сопровождается только фортепиано; сырость трека позволяет эмоциям Фрэнка стоять впереди и в центре.

В статье на обложке журнала Gayletter Magazine за апрель 2019 года Фрэнк рассказал, что гей-бар, на который он ссылается в этой песне, — это Boxers, небольшая сеть спортивных баров для ЛГБТ-сообщества, расположенная в районах Нью-Йорка «Адская кухня» и «Челси».

Концовка песни кратко затрагивает квирность и то, как трудно и некомфортно может быть открываться людям и соответствовать гетеросексуальным друзьям, вдумчивый взгляд на две противоположные грани современной мужественности.

9. «Ночи»

«Ночи» начинается с истории одного из предыдущих отношений Оушена с подробным описанием взлетов и падений, с которыми они оба столкнулись во время свиданий. Во второй половине песни Оушен поет о проблемах, с которыми он столкнулся, живя в Хьюстоне после переезда из Нового Орлеана из-за урагана Катрина. Название песни взято из хука, в котором Оушен читает рэп о жизни, связанной бурными ночами.

Структура песни разделена на две части; первая часть представляет собой оптимистичную инструментальную мелодию.Во второй половине музыка становится мрачной и медленной, служа параллелью краху после наркотического опьянения. Изменение темпа используется для обозначения середины альбома, что еще больше усиливает идею двойственности, установленную на протяжении всего альбома. Подобно автомобилям и цветам, двойственность является повторяющимся мотивом для Blonde и восходит к линии «две версии» на Nike.

10. «Соло (Реприза)»

Интерлюдия, повторяющая темы из более раннего трека с таким же названием «Solo (Reprise)», исполняет Андре 3000 из OutKast.Оба трека «Solo» имеют схожие инструменты (орган в «Solo» и фортепиано в репризе) и используют одни и те же аккорды. Кроме того, в обеих песнях участвует один вокалист/рэпер и более или менее один инструмент, что соответствует идее «соло».

Многие фанаты предположили, что слова Андре о написании призраков были выстрелом в Дрейка.

Спустя 20 лет я так наивен, я был под впечатлением
Что каждый написал свои собственные стихи
Это возвращается другим, и да, это дерьмо причиняет мне боль

Однако в интервью Sway In The Morning давний соратник Андре СиЛо Грин заявил, что Андре сказал ему, что его стих был написан за два года до его выпуска — задолго до того, как Дрейк столкнулся с обвинениями в написании призраков.

11. «Довольно мило»

«Pretty Sweet» — один из самых смелых моментов в Blonde , с изначально тревожным изменением темпа, когда Фрэнк дико поет под хаотичную смесь струнных и синтезаторов. Звуковые эксперименты задают тон лирике, которой, кажется, намеренно не хватает структуры, что еще больше подчеркивает хаотичное и асимметричное течение песни. Версия этого трека на компакт-диске, поставляемая с журналом Boys Don’t Cry , содержит другую версию этой песни с другим текстом.

12. «История в Facebook»

«Facebook Story» — это пародия, в которой реальная и цифровая жизнь встречаются, но их невозможно отличить друг от друга. Французский продюсер Себастьян вспоминает, как его отношения развалились из-за обвинений в неверности в Facebook. Это вторая пародия на Blonde после четвертого трека альбома и первой пародии «Be Yourself».

Себастьян в студии с Оушен.

В интервью Pitchfork SebastiAn рассказал о песне:

Да, это я, и это реальная история.Мы просто болтали о жизни и отношениях в целом. Я обнаружил, что Фрэнк иногда записывает разговоры, когда ему что-то кажется интересным, но я не знал, когда именно и почему. Мы просто беседовали, как и все, но он вдруг обратил внимание на эту историю. Возможно, он выбрал этот вариант, потому что такая история раскрывает кое-что о нашем времени. Возможно, у него другая точка зрения.

В этой песне также используются сэмплы инструментального бита Бадди Росса, который «бегает вокруг» на протяжении всего трека.

13. «Рядом с тобой»

«Close To You» представляет собой кавер Стиви Уандера на «Close To You» Берта Бакарака и Хэла Дэвида. Фрэнк интерполирует вокальную мелодию, но меняет текст.

Оушен объяснил, почему он продолжал возвращаться к этой песне Стиви Уандера в интервью GQ в 2019 году:

С «Рядом с тобой» было то же самое, только без ностальгии. Я жил в отеле, и я помню, как слушал его и был действительно пригвожден к полу интерпретацией Стиви Уандера.Эта версия вошла в список моих любимых песен всех времен, там же, где и «When You Were Mine» Принса. Я не знаю, что вызывает чувство «Я должен спеть эту песню».

14. «Белый Феррари»

Автомобиль на «Белом Феррари» символизирует чистоту и невинность отношений, которые теперь помнят как просто «хорошее времяпрепровождение». Искренность их любви представлена ​​Феррари — чем-то одновременно редким, желанным, чрезвычайно ценным и драгоценным.Автомобили — повторяющаяся тема во всех работах Оушена.

15. «Зигфрид»

«Seigfried» можно охарактеризовать как метафизическую песню о расставании. Судя по лирике «пятнистое лицо», песня может быть о модели-мужчине Вилли Картье, у которого, по слухам, был короткий роман с Оушен. Герой скандинавской мифологии Зигфрид часто изображается красивым мужчиной с длинными распущенными волосами, очень похожим на Картье.

Фрэнк Оушен и Вилли Картье

В первом куплете Фрэнк обращается к любовнику из неудавшегося романа и размышляет о своей жизни.Его размышления становятся все более проницательными, переходя от размышлений о жизненном выборе к размышлениям о природе его собственного разума и Бога. Затем песня, кажется, возвращается к размышлениям об утраченной любви и заканчивается заявлением: «Я сделаю все для тебя».

Название, по-видимому, является вариантом написания германского имени Зигфрид, которое состоит из корней sig , означающих победу, и frithu , означающих мир. Имя «Зигфрид» имеет несколько культурных резонансов, которые Фрэнк может передавать:

1. Зигфрид — воин в скандинавской мифологии.В фольклоре Зигфрид убивает дракона Фафнира и побеждает принцессу Брунгильду. Он считается архетипической фигурой храбрости. Зигфрид был популяризирован благодаря операм Рихарда Вагнера (1813–1883), в частности, его четырехчастному произведению « Der Ring des Nibelungen ».

2. В песне также может быть ссылка на Зигфрида Сассуна; британский военный поэт, у которого было несколько романов и встреч с мужчинами и женщинами, что повторяет собственный опыт Фрэнка. Зигфрид Сассун был солдатом — возможно, поэтому Фрэнк постоянно упоминает, был он или не был храбрым.У Зигфрида также был близкий друг по имени Уилфред Оуэн. Уилфред безумно влюбился в Зигфрида и написал ему много любовных писем. Фрэнк может иметь отношение к себе и ситуации, которую он описывает в песне, к Уилфреду Оуэну.

3. Зигфрид — персонаж из серии *Soulcalibur*. Оушен назвал песню из своего ностальгического микстейпа ULTRA в честь игры.

На мосту Фрэнк заимствует слова из песни Эллиота Смита «A Fond Farewell» о преодолении зависимости и изменении характера.«Зигфрид» — о собственном преобразовании Франка.

16. «Удачи»

В «Godspeed» Фрэнк описывает, как он уходит от возлюбленной, но в уважительной форме. Название представляет собой восклицание, используемое, чтобы принести удачу тому, кто начинает путешествие.

В треке много религиозного подтекста, в том числе различные отсылки к Библии, исполняемой под церковный орган, и широкое использование «плагальной каденции». Кроме того, в аутро участвует певица госпел Ким Баррелл.

Название «Godspeed» совпадает со сценарием Фрэнка, опубликованным в его публикации Boys Don’t Cry :

В середине я написал рассказ — он называется «Божественная скорость».По сути, это переосмысленная часть моего детства. Мальчики плачут, но я не думаю, что пролил слезу большую часть своего подросткового возраста. Это удивительно моя любимая часть моей жизни до сих пор. Удивительно для меня, потому что текущая фаза — это то, о чем я просил космос, когда был ребенком. Может быть, у этой части тоже были грубые участки, но в моем зеркале заднего вида он становится достаточно маленьким, чтобы убедить себя, что все было хорошо. А на самом деле… Пока все хорошо.

17. «Футура бесплатно»

«Futura Free» — это свобода двигаться вперед и праздник вновь обретенной независимости Фрэнка.Песня разделена на две части, разделенные немой интерлюдией. В первом Фрэнк размышляет о своей жизни и достижениях в стиле потока сознания. Он болтает о славе, религии и сексуальности, ссылаясь на популярных икон, которые умерли в молодом возрасте, таких как Тупак и Селена.

Вторая половина представляет собой отрывок из старого интервью, проведенного младшим братом Фрэнка Райаном Бро, в котором участвуют члены «Незаконной цивилизации»: Майки Альфред, Сейдж Эльсессер и На-кел Смит.

Название является отсылкой к популярному шрифту без засечек Futura.Это также был любимый шрифт Стэнли Кубрика, который использовал его в трейлерах и рекламных плакатах некоторых из своих самых популярных фильмов, , 2001: Космическая одиссея, и , с широко закрытыми глазами, . Фрэнк известен как большой поклонник Кубрика.

Примечание редактора. Спасибо всем замечательным членам сообщества Genius, которые внесли свой вклад в написание биографий песен, ответов на вопросы и аннотаций к этому альбому, включая, помимо прочего: @goodkidkevcity @s_connoisseur @LouieBaharomIX @jeffreywardman @NatMcMahan @charlesverheggen @Jordan_RR @JayKauz @damkerch @VloneZone @boxgapsrus @MrChristensen @kidcwithaperiod @brndnshv @nalarcon @bbuci @Camermck @zfunk @tomsarram @duncanpree @Zeniths @ezwar @pastelgore @FerDeRuijter @kanyesterday @centnerstage

Масло ладана, полученное из Boswellia carteri, индуцирует цитотоксичность, специфичную для опухолевых клеток.В стволах деревьев делаются надрезы, чтобы образовалась камедь, которая выглядит как молоко, похожее на смолу. Смола затвердевает и превращается в оранжево-коричневую смолу, известную как ладан. Существует множество видов и разновидностей ладана, в том числе

На протяжении веков считалось, что смола ладана обладает множеством полезных для здоровья свойств. Смолы Boswellia carteri и Boswellia serrata использовались для лечения ревматоидного артрита и других воспалительных заболеваний [2], таких как болезнь Крона [3], в народной медицине многих стран.Противовоспалительная активность объясняется способностью смолы регулировать выработку иммунных цитокинов [4] и инфильтрацию лейкоцитов [5,6]. Экстракт Boswellia serrata также проявляет антибактериальную и противогрибковую активность [7]. Кроме того, экстракты смол видов Boswellia могут обладать противораковой активностью, основанной на их антипролиферативной и проапоптотической активности в клеточных линиях астроцитомы крысы [8] и в клеточных линиях лейкемии человека [9], а также их антиканцерогенная активность в моделях химически индуцированного рака кожи у мышей [10].Клинически экстракт смолы уменьшает перитуморальный отек у пациентов с глиобластомой [8] и устраняет множественные метастазы в головной мозг у пациентов с раком молочной железы [11]. Эти результаты свидетельствуют о том, что смола ладана содержит активные ингредиенты, которые модулируют важные биологические активности.

В поисках активных лекарственных ингредиентов смолы ладана, Chevrier et al . сообщили, что этанольный экстракт смолы Boswellia carteri содержит 7 босвеллиевых кислот [4].Акихиса и др. . сообщили, что метанольный экстракт смолы Boswellia carteri состоит из 15 тритерпеновых кислот, включая босвеллиевые кислоты, и 2 дитерпенов мембранного типа [12]. 11-кето-β-босвеллиевая кислота, наиболее мощный противовоспалительный компонент смолы, избирательно блокирует биосинтез лейкотриенов путем ингибирования активности 5-липоксигеназы в нейтрофильных гранулоцитах крыс [13] и оказывает защитное действие в модели химически индуцированного язвенного колита у мышей [13]. 14]. Босвеллиновые кислоты также предотвращают индуцированный эндотоксином/галактозамином гепатит у мышей [15].Кроме того, было показано, что босвеллиевые кислоты обладают противораковой активностью за счет их цитостатического и апоптотического действия на несколько линий раковых клеток человека, включая клетки менингиомы [16], клетки лейкемии [17], клетки гепатомы [18], клетки меланомы, клетки фибросаркомы. [19] и раковых клеток толстой кишки [20].

Масло ладана, экстракт, полученный паровой дистилляцией из смолы камеди ладана, является одним из наиболее часто используемых масел в ароматерапии. Была проделана значительная работа над составом масла ладана различных видов и торговых марок; и составные части масла ладана различаются в зависимости от климата, условий сбора урожая и географических источников смолы ладана [21].Из-за вклада босвеллиевой кислоты возможно, что масло ладана также обладает противораковыми и противоопухолевыми свойствами. В этом исследовании мы продемонстрировали, что коммерческий источник масла ладана может отличать клетки рака мочевого пузыря J82 от нормальных уротелиальных клеток мочевого пузыря UROtsa и подавлять жизнеспособность раковых клеток. Основываясь на анализе экспрессии генов, масло ладана активировало несколько антипролиферативных и проапоптотических путей, которые могут быть ответственны за вызванную маслом ладана гибель клеток в клетках J82.

Методы

Реагенты и химикаты

Среда для культивирования клеток [MEM и DMEM/F-12 (1:1)], эмбриональная телячья сыворотка (FBS), раствор витамина MEM, заменимые аминокислоты, эпидермальный фактор роста (EGF) ), добавка к среде инсулин-трансферрин-селенит натрия (ITS), пируват натрия и пенициллин-стрептомицин были приобретены у Invitrogen (Grand Island, NY). Масло ладана, содержащее 1200 мг/мл смолы камеди ладана, было получено от Young Living Essential Oils (Lehi, UT). Анализ пролиферации клеток ХТТ и наборов для обнаружения гибели клеток in situ были получены от Roche (Индианаполис, Индиана).Трипановый синий был приобретен у Sigma (Сент-Луис, Миссури). Мини-набор RNeasy ^® был получен от Qiagen (Валенсия, Калифорния).

Линии клеток мочевого пузыря человека

Переходно-клеточная карцинома мочевого пузыря J82 была получена от ATCC (HTB-1; Manassas, VA). Клеточная линия J82 была получена из низкодифференцированной инвазивной переходно-клеточной карциномы мочевого пузыря человека (стадия 3) [22]. Клетки J82 поддерживали в среде для выращивания, состоящей из MEM с добавлением 10% FBS, 0,1 мМ заменимых аминокислот, 1 мМ пирувата натрия, 2% раствора витамина MEM, 100 единиц/мл пенициллина и 100 мкг/мл стрептомицина.Клеточная линия UROtsa первоначально была выделена из первичной культуры нормального уротелия человека и иммортализована конструкцией, содержащей большой Т-антиген SV40 [23]. Клетки UROtsa культивировали в среде DMEM/F12 с добавлением 10 нг/мл EGF, 1× добавки среды ITS, 100 единиц/мл пенициллина и 100 мкг/мл стрептомицина. Клетки хранили во влажном клеточном инкубаторе при 37°C и 5% CO ₂ и пассировали каждые 3–4 дня или когда клетки достигали примерно 80% слияния.

Анализ жизнеспособности клеток

Для определения количества жизнеспособных клеток после обработки маслом ладана клетки J82 и UROtsa высевали в 96-луночные планшеты для тканевых культур с плотностью 1 × 10 ⁴ клеток/мм ² в 100 мкл среда роста.После инкубации в течение ночи для прилипания в каждую лунку в трех повторностях добавляли 100 мкл среды для выращивания клеток или различные разведения масла ладана (конечная концентрация от 1:600 ​​до 1:4000) в их среде для роста, чтобы получить в общей сложности 200 мкл. Жизнеспособность клеток определяли во время обработки и через 24 часа после воздействия масла ладана с использованием набора для анализа пролиферации клеток ХТТ. Вкратце, во время анализа из каждой лунки удаляли 100 мкл питательной среды и обратно в каждую лунку добавляли аликвоту 50 мкл смеси для мечения ХТТ.Реакции проводили при 37°С в течение 4 часов. Поглощение определяли путем считывания данных с планшетов при длине волны 450 нм с помощью считывателя микропланшетов µQuant (Bio-Tek; Winooski, VT). Значения поглощения, полученные через 24 часа для необработанных клеток и клеток, обработанных маслом ладана, нормализовали к значениям, полученным во время обработки, для расчета кратных изменений в выживаемости клеток.

Исключение трипанового синего также было включено для определения жизнеспособности клеток после обработки маслом ладана. Вкратце, клетки J82 и UROtsa высевали в 24-луночные планшеты для тканевых культур с той же плотностью, что и при анализе ХТТ, в 500 мкл питательной среды.После прикрепления клетки получали либо 500 мкл питательной среды, либо различные разведения ладана в каждой лунке. Через 3 часа после обработки маслом ладана собирали культуральную среду для сохранения неприлипших клеток; а оставшиеся клетки обрабатывали трипсином и объединяли с клетками, собранными из культуральной среды. Клетки собирали центрифугированием и ресуспендировали в 200 мкл фосфатно-солевого буфера (PBS). Затем аликвоту (20 мкл) клеточной суспензии смешивали с таким же объемом 0.4% (масса/объем) раствор трипанового синего. Клетки подсчитывали с использованием гемоцитометра для определения количества голубых клеток (нежизнеспособных) и ярких клеток (жизнеспособных). Жизнеспособность клеток выражали как процент клеток, положительных по трипановому синему, по сравнению с общим количеством клеток.

Экстракция РНК и оценка качества

Суммарная РНК была выделена из клеток J82 для анализа на микрочипах. Вкратце, 2×10 ⁵ клеток J82 высевали в 60-миллиметровые планшеты для тканевых культур, культивировали в течение ночи для прилипания и либо не обрабатывали, либо обрабатывали 1:1000 разведением ладана в питательной среде.Суммарную РНК выделяли через 0 часов (без обработки) и через 0,5, 1, 2 и 3 часа после стимуляции с использованием набора для выделения общей РНК RNeasy ^® Mini в соответствии с рекомендациями производителя (Qiagen; Валенсия, Калифорния). Концентрацию общей РНК определяли с помощью сканирующего спектрофотометра с нанокапли, а затем качественно оценивали на предмет деградации с использованием соотношения рРНК 28:18 с помощью системы капиллярного гель-электрофореза (Agilent 2100 Bioanalyzer, Agilent Technologies; Санта-Клара, Калифорния).

Мечение РНК, гибридизация на микрочипах и сканирование

В общей сложности 250 нг РНК из каждой временной точки были помечены с использованием набора Illumina Total Prep RNA Amplification Kit в соответствии с инструкциями производителя (Ambion; Austin.Техас). Вкратце, кДНК подвергали обратной транскрипции с РНК после праймирования T7-oligo-dT, и кРНК синтезировали in vitro из промотора T7 при включении биотинилированной UTP. кРНК гибридизовали в течение ночи с человеческими чипами Illumina Ref-8 версии 3 BeadChips, содержащими зонды, всего 24 526 транскриптов. Чипы микрочипов промывали до высокой степени жесткости и метили стрептавидином -Cy3 (Amersham Biosciences; Пискатауэй, Нью-Джерси) перед сканированием на считывающем устройстве Illumina BeadArray Reader.

Анализ данных биоинформатики

Ненормализованная интенсивность флуоресценции каждого зонда на предметном стекле микрочипа была получена с использованием пакета экспрессии генов DirectHyb в программном обеспечении BeadStudio (Illumina, версия 3.1.3). Фильтрация интенсивности флуоресценции выполнялась для удаления генов, у которых отсутствовала минимальная относительная флуоресценция 64 единицы по крайней мере в один момент времени. Данные остальных зондов были логарифмически преобразованы и нормализованы по квантилям (Matlab). Окончательную фильтрацию проводили для выявления генов с минимальным двукратным изменением нормализованных значений экспрессии между соседними временными точками. Данные об экспрессии доступны на Gene Expression Omnibus (GEO) с регистрационным номером {«type»:»entrez-geo»,»attrs»:{«text»:»GSE14002″,»term_id»:»14002″}}GSE14002.

TUNEL (маркировка концов терминальной дезоксинуклеотидилтрансферазой dUTP) Анализ

Анализ TUNEL проводили в клетках J82 с использованием иммуногистохимической (IHC) процедуры окрашивания, как мы сообщали [24]. Вкратце, прикрепившиеся клетки J83 либо не обрабатывали, либо обрабатывали маслом ладана в разведении 1:1000. Через 3 часа после обработки как неприлипшие, так и прилипшие клетки собирали после центрифугирования. Осадки клеток фиксировали в 10% формалине, погружали в 2% агарозу и заливали в парафин.Заложенные клеточные блоки разрезали, депарафинизировали и регидратировали. Апоптотические клетки выявляли с использованием набора для обнаружения гибели клеток in situ . Вслед за терминальной дезоксинуклеотидилтрансферазной реакцией для проявления окраски добавляли субстрат быстрого красного цвета. Затем предметные стекла промывали и запечатывали водной заливочной средой.

Анализ фрагментации ДНК

Чтобы определить, подвергаются ли клетки J82 фрагментации ДНК после обработки маслом ладана, 2 × 10 ⁵ Клетки J82 и UROtsa высевали в 60-мм планшеты для тканевых культур в среде для выращивания, инкубировали в течение ночи для прилипания и обрабатывали. с разведением 1:1000 масла ладана в питательной среде.Клетки собирали в 0 (необработанный контроль), через 1, 3 и 6 часов после обработки; и геномная ДНК была подготовлена ​​и осаждена на основе описанных процедур [25]. Количество геномной ДНК определяли спектрофотометрически. Аликвоты (10 мкг) геномной ДНК разделяли на 2% агарозном геле; изображения гелей, окрашенных бромистым этидием, получали с помощью системы Gel Doc 100 (Bio-Rad, Hercules, CA).

Статистика

Результаты выражены как среднее значение ± SEM из четырех экспериментов.Сравнение выживаемости клеток J82 и UROtsa после обработки маслом ладана проводили с использованием однофакторного дисперсионного анализа (ANOVA) с последующим апостериорным тестом Даннетта. P < 0,05 считалось статистически значимым.

Результаты

Масло ладана подавляло жизнеспособность клеток мочевого пузыря

Клетки карциномы мочевого пузыря J82 демонстрировали рост, не зависящий от плотности, и росли в мягком агаре, но не были канцерогенными у голых мышей [26]. Иммортализованные уротелиальные клетки мочевого пузыря экспрессировали большой Т-антиген SV40, но не приобретали признаков неопластической трансформации, включая рост в мягком агаре или развитие опухолей у голых мышей [23].Чтобы определить, подавляет ли масло ладана жизнеспособность клеток мочевого пузыря, клетки J82 и UROtsa подвергали морфологической оценке и оценке жизнеспособности клеток. Клетки J82 претерпели значительные морфологические изменения, такие как отделение от планшетов для тканевых культур и начало сморщивания в течение 3 часов после воздействия масла ладана. Через 24 часа после обработки клетки J82 полностью отделялись от чашек для тканевых культур, тогда как необработанные контроли оставались прикрепленными к чашкам (рис. и ).Напротив, клетки UROtsa оставались прикрепленными ко дну чашек и не обнаруживали заметных морфологических изменений (рис. и ).

Морфологические изменения карциномы мочевого пузыря J82 и уротелиальных клеток мочевого пузыря UROtsa после стимуляции маслом ладана . Клетки мочевого пузыря J82 и UROtsa высевали в 96-луночные планшеты для тканевых культур в концентрации 1 × 10 ⁴ клеток/мм ² , культивировали в течение ночи для прилипания и либо оставляли без обработки, либо подвергали стимуляции 1:1000 разведением ладана. .Изображения были получены через 24 часа после обработки (A) необработанных клеток J82, (B) клеток J82, обработанных маслом ладана, (C) необработанных клеток UROtsa и (D) клеток UROtsa, обработанных маслом ладана, с использованием инвертированного микроскопа Olympus IX51. Обратите внимание на усадку клеток, наблюдаемую в клетках J82 после обработки маслом ладана. Напротив, клетки UROtsa не претерпевали заметных морфологических изменений после воздействия той же концентрации масла ладана.

Чтобы определить, влияет ли масло ладана на жизнеспособность клеток J82 и UROtsa, количество жизнеспособных клеток J82 и UROtsa определяли после воздействия различных разведений (от 1:600 ​​до 1:1400) масла ладана.В необработанном контроле количество жизнеспособных клеток J82 и клеток UROtsa увеличилось в 1,62 ± 0,31 и 2,72 ± 0,85 раза через 24 часа после посева клеток соответственно (рис. ). Клетки J82 и UROtsa реагировали на обработку маслом ладана дозозависимым образом. Жизнеспособность клеток J82 снижалась, когда клетки обрабатывали увеличивающимися концентрациями масла ладана. Жизнеспособных клеток J82 не осталось через 24 часа после обработки маслом ладана в разведении 1:1100 (0,47 ± 0,43). Напротив, на жизнеспособность клеток UROtsa не оказывало существенного влияния увеличение концентрации масла ладана до тех пор, пока к клеткам не применяли разведение 1:600.При обработке клеток УРОца маслом ладана в разведении 1:600 ​​жизнеспособность клеток снижалась в 1,29 ± 0,77 раза по сравнению с необработанными клетками. Жизнеспособные клетки УРОца не обнаруживались при увеличении концентрации масла ладана до концентрации 1:400 (данные не представлены). На основании анализа ХТТ значения IC ₅₀ (50% ингибирующие концентрации масла ладана) для клеток J82 и UROtsa составляли 1:600 ​​и 1:1250 соответственно. Исключение трипанового синего дало результаты, аналогичные анализу XTT, за исключением того, что клетки J82 и UROtsa оказались более чувствительными к обработке маслом ладана в разведениях 1:1300 и 1:600 ​​соответственно (рис. ).

Выживаемость клеток мочевого пузыря в ответ на воздействие масла ладана . Жизнеспособность клеток определяли с помощью (A) колометрического анализа XTT через 24 часа и (B) исключения трипанового синего через 3 часа после стимуляции маслом ладана. Все эксперименты были подготовлены в трех экземплярах для анализа ХТТ и в повторах для исключения трипанового синего. Данные были представлены как среднее ± стандартная ошибка среднего (SEM) по крайней мере из 3 независимых экспериментов. * указывает статистическую разницу между клетками J82, обработанными маслом ладана, и клетками UROtsa ( P < 0.05).

Идентификация экспрессии генов, активируемых маслом ладана

Для определения природы гибели клеток J82 был проведен микрочиповый анализ. Из 24 526 генных зондов на микрочипе 8 430 зондов имели значение интенсивности флуоресценции, по крайней мере, вдвое превышающее фоновую интенсивность в течение одного или нескольких оцениваемых моментов времени. В общей сложности 122 гена в клетках J82 были увеличены более чем в два раза, по крайней мере, в двух соседних временных точках с помощью масла ладана (см. Дополнительный файл 1). Только 3 из этих генов увеличились в течение первых 30 мин [белок цинковых пальцев 57, малая ядрышковая РНК C/D 48 и ген ответа на ранний рост 1 (EGR1)].Уровни мРНК EGR1 увеличились в 5,87 раза в течение первых 30 минут и еще в 2,86 раза в течение следующих 30 минут. Еще 15 генов увеличились как минимум в два раза между 30 и 60 минутами после стимуляции маслом ладана; и 11 из которых продолжали проявлять повышенную экспрессию после первого часа. Гораздо большее количество генов увеличивало экспрессию между 1 и 2 и между 2 и 3 часами после воздействия масла ладана.

В клетках J82 ладанное масло подавляло 47 генов (см. Дополнительный файл 2).Три гена [тубулин гамма 1, гомолог сортировки вакуолярного белка 11 и РНК-полимераза II (ДНК-направленный) полипептид K] были первыми, которые уменьшились более чем в два раза между 30 и 60 минутами после воздействия ладаном. Еще 12 генов уменьшились между 1 и 2 часами, а 32 других гена уменьшились между 2 и 3 часами. Были идентифицированы дополнительные 12 генов, уровни экспрессии которых изменялись не менее чем в два раза между двумя соседними временными точками, а затем изменялись в противоположном направлении не менее чем в два раза между следующими соседними временными точками.Эти 12 генов представляли собой анкириновый повторяющийся домен 27, открытую рамку считывания 34 хромосомы 5, белок 1, связывающий кальциневрин, дельта-изомеразу додеценоил-кофермента А, динеин (аксонемальный, промежуточный полипептид 2), ATG2 [родственный аутофагии 2 гомолог A, N-деацетилазы/N -сульфотрансфераза (гепаранглюкозаминил) 2], гликопротеин яйцевода 1, плексин А3, рецептор соматостатина 1, транскрипционный вариант 1 ринуклеотидного повтора, содержащий 5, и цинковый палец и домен BTB, содержащий 11.

Функциональная группировка генов, регулируемых маслом ладана

Генные продукты, которые были изменены в клетках карциномы мочевого пузыря J82, обработанных ладанным маслом, были функционально сгруппированы в соответствии с классификацией Gene Ontology.Основываясь на биологических функциях, продукты генов, которые функционируют как цитокины, мембранные рецепторы, ферменты (включая киназы, пептидазы и фосфатазы) и молекулярный транспорт, были идентифицированы и перечислены в таблице. Полный список генов по каждой классификации приведен в дополнительном файле 3. Генные продукты, регулируемые маслом ладана, которые действуют как факторы транскрипции, остановки клеточного цикла и пролиферации клеток, а также факторы апоптоза, показали, что масло ладана вызывает остановку клеточного цикла и апоптоз у клетки J82.

Таблица 1

функциональные группы ладана регулируется нефтью генов в J82 клетках рака мочевого пузыря

Регуляторы транскрипции

Два факторов транскрипции, Loc12629 и Egr1, были немедленно (в течение 30 минут).Еще 5 транскрипционных факторов, включая ATF3, FOS, FOSB, KLF2 и ZNF234, активировались в течение 1 часа и сохранялись в течение как минимум 2 часов после обработки маслом ладана. Три фактора транскрипции, KLF4, KLF5 и ZBTB11, повышали уровень регуляции маслом ладана между 1 и 2 часами после обработки. Остальные 11 факторов транскрипции (DDIT3, DEDD2, DENR, HES1, ID1, JUN, JUNB, SNAPC1, TSC22T1, UBTF, ZFP36) считались поздними ответчиками, поскольку их экспрессия изменялась через 2 часа воздействия ладана.

Таблица 2

Таблица 2

Факторы транскрипции нефтепродукты в клетки J82

Остановка клеточного цикла и пролиферация клеток с остановкой клеточного цикла (таблица).Гены, которые были идентифицированы как антипролиферативные гены, в том числе IL8, CLK1, DLG1, KLF4, NEDD9, CDKN1A, IL1A, IL6 и SNFILK, были активизированы в клетках J82, обработанных ладанным маслом.Кроме того, DDIT3 вместе с IL8 и CDKNIA, ответственными за остановку клеточного цикла, также активировались маслом ладана. Напротив, h3AFX и HDAC4, гены, ответственные за репарацию ДНК и развитие клеточного цикла, подавлялись маслом ладана. Другие антипролиферативные гены, в том числе SSTR1, IL1A и IL6, также активировались между 0,5 и 2 часами после стимуляции ладанным маслом.

Таблица 3

Таблица 3

Франкиндут Нефтегальтена Гены роста в j82 клетки

Апоптоз

Было обнаружено, что ладанное масло модулирует уровни большого количества генов, ответственных за апоптоз (рис. ). Эти гены включали CDKN1A, DEDD2, IER3, IL6, SGK и TNFAIP3 (активировались между 1 и 2 часами и оставались активными), а также GAD45B, NUDT2 и другие (активировались между 2 и 3 часами). Кроме того, ген выживания клеток, AXL, подавлялся маслом ладана.Однако два антиапоптотических гена, GSTP1 и IL1A, были активизированы. Аналогичное противоречие было замечено с подавлением проапоптотического гена ING4.

Иерархическая кластеризация генов, связанных с апоптозом, регулируемых маслом ладана, в клетках J82 . Карта была получена с использованием программного обеспечения Biometric Research Branch (BRB) ArrayTools версии 3.4.0 – Beta_2 http://linus.nci.nih.gov/BRB-ArrayTools.html после преобразования интенсивности флуоресценции log ₂ . Каждый столбец представляет временные интервалы после воздействия масла ладана, а каждая строка представляет собой набор генных зондов.Уровни экспрессии для отдельных генов обозначены зеленым/красным цветом, что указывает на повышенный/подавленный уровень экспрессии соответственно.

Гибель клеток, вызванная маслом ладана

Анализ TUNEL был проведен для определения того, подвергаются ли клетки J82, обработанные маслом ладана, апоптозу. Обработка маслом ладана привела к увеличению количества ярко-красных TUNEL-положительных клеток по сравнению с необработанными клетками (рис. ). Фрагментацию геномной ДНК определяли между 1 и 6 часами в клетках J82 после обработки маслом ладана.Результаты электрофореза в агарозном геле показали, что вся геномная ДНК осталась в виде больших фрагментов ДНК без образования небольшой лестницы ДНК (рис. ). Геномная ДНК клеток J82, собранных через 12 часов после обработки маслом ладана, не обнаруживается (данные не показаны).

Гибель клеток J82, вызванная маслом ладана . Чтобы определить, вызван ли ладанным маслом апоптоз в клетках рака мочевого пузыря, клетки J82 высевали в 60-миллиметровые чашки для культур тканей в концентрации 2 × 10 ⁵ клеток на чашку, культивировали в течение ночи для прилипания и либо оставляли без обработки, либо обрабатывали 1 : 1000 разбавление масла ладана.(A) Анализ TUNEL проводили через 3 часа после обработки. Апоптозные клетки с поврежденной ДНК окрашивались положительно в ярко-красный цвет (вставки). (B) Фрагментацию ДНК определяли путем разделения геномной ДНК на 2% агаровом геле; и изображение геля было получено с использованием системы Gel Doc 100 (Bio-Rad, Hercules, CA).

Обсуждение

Альтернативная медицина, от трав до акупунктуры, становится все более популярной для решения проблем, связанных со здоровьем. В этом кратком отчете мы описали, что масло ладана в диапазоне концентраций специфически подавляло жизнеспособность клеток в клетках карциномы мочевого пузыря человека J82, но не влияло на жизнеспособность клеток в иммортализованных нормальных уротелиальных клетках UROtsa.Жизнеспособность клеток J82, подавленная маслом ладана, может быть связана с активацией проапоптотических генов. Была рассмотрена возможность того, что наблюдаемые различия в выживаемости клеток могут быть связаны с присутствием EGF в среде. Несмотря на это опасение, мы ожидали, что устойчивость клеток UROtsa к ладанному маслу по сравнению с клетками J82 может не быть результатом присутствия EGF в их питательной среде, основываясь на следующих наблюдениях: во-первых, более высокие концентрации EGF (т.е. 1 мкг/мл) для защиты от апоптоза [27], во-вторых, клетки UROtsa, культивированные в среде без EGF, были менее чувствительны к жизнеспособности клеток, подавленных маслом ладана, по сравнению с клетками J82, хотя общая жизнеспособность клеток UROtsa была снижена ( данные не показаны), и, в-третьих, четыре других масла, включая масло сандалового дерева ( Santalum album ), бальзамическое пихтовое масло ( Abies balsamea ), масло пало-санто ( Burseragraveolens ) и масло цуги ( Tsuga canadensis ). ) (Young Living Essential Oils), индуцировал почти одинаковую цитотоксичность как в клетках J82, так и в клетках UROtsa (данные не показаны).

Коммерческое масло ладана применяли непосредственно в наших экспериментальных моделях клеток без модификации. В этом предварительном исследовании мы не собирались анализировать конкретный химический состав масла ладана или определять его эффективную дозировку, поскольку в некоторых отчетах указывалось, что общий экстракт ладана более эффективен, чем чистые, определенные босвеллиевые кислоты [9]. Однако в будущих клинических испытаниях потребуется стандартная оценка между химическим составом масла ладана и его эффективностью в подавлении опухолей.Кроме того, в этом исследовании было указано, что масло ладана добавляют в среду для культивирования клеток без включения носителя; и дозозависимое подавление жизнеспособности клеток наблюдалось как в клетках J82, так и в клетках UROtsa в отсутствие какого-либо масляного носителя. Отсутствие носителя устраняло зависимые от носителя эффекты экстракта смолы ладана, как сообщалось Chevrier et al. . [4].

Анализ экспрессии генов был прекращен в течение 3 часов после обработки маслом ладана, поскольку качество и количество выделенной РНК были недостаточными для анализа микрочипов после этого времени.Мы сообщили в общей сложности о 122 повышающих и 47 отрицательно регулируемых генах с более чем двукратной индукцией или супрессией в течение 3 часов. Эти данные свидетельствуют об очень специфических действиях масла ладана. Полногеномный анализ экспрессии генов подтверждает модели стресса, активацию остановки клеточного цикла, подавление клеточной пролиферации и активацию апоптотической передачи сигналов в клетках J82, обработанных ладанным маслом, в течение 1 часа после стимуляции, и некоторые из этих процессов поддерживались в течение 3 часов. часы.

Основываясь на временной регуляции генов, идентифицированных с помощью микрочипов и биоинформатического анализа, мы предположили, что масло ладана индуцирует различные пути гибели клеток J82. Волны факторов транскрипции регулировались маслом ладана от 30 минут до 3 часов. EGR1 был одним из немногих генов, которые быстро активировались в течение первых 30 минут. Хотя было показано, что EGR1 является ранним геном, который немедленно активируется в других системах и коррелирует с репарацией ДНК [28], механизм повышенной экспрессии EGR1 под действием ладана неясен.Сообщалось, что EGR1 увеличивает транскрипцию другого транскрипционного фактора ATF3 [29]; и уровни ATF3 были повышены в нашей системе между 30 и 60 минутами после воздействия ладана. ATF3 индуцируется стрессами и может связываться с DDIT3 [30], который в нашей системе активировался между 2 и 3 часами. Кроме того, DDIT3 реагирует на повреждение ДНК [31] и отвечает за остановку клеточного цикла [32]. Более того, используя веб-инструмент PAINT http://www.dbi.tju.edu/dbi/tools/paint/[33] для поиска в базе данных TRANSFAC, мы идентифицировали связывающие последовательности EGR1 и ATF3 выше по течению от множества генов, связанных с апоптозом, идентифицированных в нашем исследовании. система.EGR1 может связываться с 5′-фланкирующими областями 5 идентифицированных генов, связанных с апоптозом (FGFR1, GADD45B, HES1, RHOB и TRIB1), которые активировались между 2 и 3 часами. Сайты связывания для ATF3 были обнаружены в 5′-фланкирующих областях 3 генов, связанных с апоптозом (FOSB, GEM и LAMA5), которые активировались между 1 и 2 часами, и 3 дополнительных генов (HSPA1A, ID1 и JUN). между 2 и 3 часами. Аналогичным образом, ATF3 может также отвечать за экспрессию 2 подавленных генов: ING4 (1–2 часа) и ATG5 (2–3 часа).Последовательная экспрессия этих идентифицированных факторов транскрипции может быть в конечном итоге ответственна за остановку клеточного цикла, подавление клеточной пролиферации и апоптоз в клетках J82, обработанных ладанным маслом.

Подавление жизнеспособности и пролиферации клеток в клетках J82, обработанных маслом ладана, также было подтверждено повышенной экспрессией генов, ответственных за остановку клеточного цикла и антипролиферацию. Показано, что активация IL8 [34] и CDKN1A [35] ответственна за остановку клеточного цикла и подавление клеточной пролиферации.IL1A является негативным регулятором прогрессирования клеточного цикла и клеточной пролиферации [36]; было показано, что IL6 вызывает остановку роста [37]. Однако уровни ING4, молекулы, которая является негативной регуляцией клеточной пролиферации в клеточной линии гепатоцеллюлярной карциномы печени человека (HepG2) [38], были повышены в клетках, обработанных маслом ладана. ING4 может функционировать по-разному между клетками J82 и клетками HepG2; или активность ING4 подавляется большим количеством проапоптотических молекул в ответ на масло ладана.

Масло ладана активировало несколько проапоптотических генов, включая CDKN1A [39], DEDD2 [40], NUDT2 [41], SGK, TNFAIP3 и IER3 [42]. Повышенная экспрессия (от 0,5 до 2 часов), за которой следует подавленная экспрессия (2-3 часа) мембранного рецептора выживания клеток, AXL [43], предполагает, что клетки могут пытаться продлить выживание клеток после воздействия масла ладана. Мы также предполагаем, что масло ладана может активировать как внешнюю, так и внутреннюю передачу сигналов смерти в клетках J82 через рецепторы стресса и смерти, соответственно, для запуска апоптоза.Внутренний сигнал о смерти был предположен за счет повышенной экспрессии SSRT1, GADD45B, DDIT3, CDKN1A, которые, как было показано, необходимы для остановки клеточного цикла, вызванного повреждением ДНК [35,39]. Внешняя передача сигналов смерти была связана с повышенной экспрессией DEDD2, который является рецептором домена смерти и индуцирует апоптоз [40].

Хотя представленные здесь биоинформатика и анализ TUNEL показали, что масло ладана индуцирует апоптоз, а не некроз, в клетках J82, масло ладана не вызывает фрагментации ДНК, что является отличительной чертой апоптоза, в этой клеточной линии рака мочевого пузыря.Возможно, что фрагментация ДНК произошла между 6 и 12 часами после обработки маслом ладана. Альтернативно, в нескольких случаях сообщалось об апоптозе без фрагментации ДНК [44-46]; и гибель клеток J82, вызванная маслом ладана, может подпадать под эту категорию. Подробные молекулярные и биологические пути, используемые маслом ладана для индуцирования специфической гибели клеток рака мочевого пузыря, требуют дальнейшего изучения.

Это исследование помогает показать, что масло ладана может быть подходящим в качестве альтернативной терапии рака мочевого пузыря.Это первый отчет, демонстрирующий, что масло ладана может различать клетки рака мочевого пузыря и нормальные уротелиальные клетки в системе культивирования клеток, а также использование технологии микрочипов для выявления потенциальных биологических путей, активируемых маслом ладана. Наши результаты согласуются с сообщением новостей о том, что масло ладана специально воздействует на злокачественную меланому, но не на нормальные клетки кожи у лошадей http://www.purepeace.com/press/press_frankincense.pdf. Необходимы дальнейшие исследования, чтобы определить, оказывает ли масло ладана аналогичное воздействие на другие клеточные линии рака мочевого пузыря различной степени тяжести, такие как RT4, T24 и 5637, за которыми следуют исследований in vivo с использованием моделей рака мочевого пузыря на животных.Кроме того, необходимо применить стандартное производство и показания, прежде чем коммерческое масло ладана можно будет использовать в качестве альтернативной или дополнительной терапии для лечения рака мочевого пузыря.

Факты и краткое изложение дела — Коремацу против США

Задний план

Примерно через 10 недель после вступления США во Вторую мировую войну президент Франклин Д. Рузвельт 19 февраля 1942 г. подписал Указ № 9066. Приказ уполномочил военного министра и вооруженные силы выселять лиц японского происхождения из районов, которые они определили как военные. и окружающие сообщества в Соединенных Штатах.Эти районы были по закону закрыты для японских иностранцев и граждан США японского происхождения.

Приказ привел в действие массовую транспортировку и переселение более 120 000 японцев в места, которые правительство назвало лагерями для задержанных, которые были созданы и заняты примерно за 14 недель. Большинство переселенных проживало на Западном побережье, а две трети были гражданами США. В соответствии с приказом военные доставили их примерно в 26 объектов в семи западных штатах, в том числе в отдаленные районы Вашингтона, Айдахо, Юты и Аризоны.

Факты

23-летний Фред Коремацу был американским гражданином японского происхождения, который не выполнил приказ покинуть свой дом и работу, несмотря на то, что его родители бросили свой дом и свой цветочный питомник, готовясь к явке в лагерь. Коремацу планировал остаться. Ему сделали пластическую операцию на глазах, чтобы изменить свою внешность; изменил свое имя на Клайд Сара; и утверждал, что он испанского и гавайского происхождения.

30 мая 1942 года, примерно через шесть месяцев после нападения японцев на Перл-Харбор, ФБР арестовало Коремацу за то, что он не явился в центр переселения.После своего ареста, ожидая в тюрьме, он решил позволить Американскому союзу гражданских свобод представлять его интересы и сделать его дело проверочным, чтобы оспорить конституционность распоряжения правительства. Коремацу предстал перед федеральным судом в Сан-Франциско, признан виновным в нарушении военных приказов, изданных в соответствии с указом президента 9066, приговорен к пяти годам условно и отправлен в сборочный центр в Сан-Бруно, Калифорния.

Адвокаты Коремацу обжаловали решение суда первой инстанции в У.С. Апелляционный суд, который согласился с судом первой инстанции в том, что он нарушил воинские приказы. Коремацу обратился в Верховный суд США с просьбой рассмотреть его дело. 18 декабря 1944 года разделенный Верховный суд в решении 6-3 постановил, что задержание было «военной необходимостью», не связанной с расой.

Повторное открытие дела

В 1983 году группа юристов, занимающихся pro bono, с новыми доказательствами вновь открыла дело 40-летней давности в федеральном окружном суде на основании неправомерных действий правительства.Они показали, что правительственная юридическая группа намеренно скрыла или уничтожила доказательства правительственных разведывательных служб, сообщавших, что американцы японского происхождения не представляют военной угрозы для США. Официальные отчеты, в том числе отчеты ФБР под руководством Дж. Эдгара Гувера, не были представлены в суд. 10 ноября 1983 года федеральный судья отменил обвинительный приговор Коремацу в том же здании суда Сан-Франциско, где он был осужден в молодости.

Решение окружного суда оправдало имя Коремацу, но решение Верховного суда остается в силе.В письме от имени большинства судья Хьюго Блэк постановил, что «все юридические ограничения, ограничивающие гражданские права одной расовой группы, вызывают немедленное подозрение» и подлежат проверке «самой строгой проверкой», не все такие ограничения по своей сути неконституционны. «Настоятельная общественная необходимость, — писал он, — может иногда оправдывать существование таких ограничений; расовый антагонизм — никогда».

В резко выраженном несогласии судья Роберт Джексон заявил: «Коремацу … был осужден за деяние, которое обычно не считается преступлением», — написал он.«Это просто присутствие в государстве, гражданином которого он является, рядом с местом, где он родился и где прожил всю свою жизнь». Он утверждал, что заботы страны о безопасности во время войны недостаточны для того, чтобы лишить Коремацу и других интернированных их конституционно защищенных гражданских прав.

Он назвал приказ об исключении «легализацией расизма», нарушающим пункт о равной защите Четырнадцатой поправки. Он сравнил приказ об исключении с «отвратительным и презренным обращением с группами меньшинств со стороны диктаторских тираний, которые эта нация теперь обязуется уничтожить.Он пришел к выводу, что приказ об исключении нарушил Четырнадцатую поправку, «упав в уродливую бездну расизма».

Процедурная история

Нижний суд

Окружной суд США, Северный округ Калифорнии

Суд низшей инстанции постановил: Коремацу был признан виновным в нарушении военными приказа об исключении.

Нижний суд

Девятый окружной апелляционный суд

Суд низшей инстанции постановил: оставил в силе решение суда первой инстанции.Приговор оставлен в силе.

140 F.2d 289 (9-й округ 1944 г.)

Постановление Верховного суда

Утверждается нижестоящими судами. Приговор оставлен в силе.

• Голосование в Верховном суде: 6-3
• Аргументировано: 11-12 октября 1944 г.
• Решено: 18 декабря 1944 г.

Мнение большинства написано: Джастис Блэк

Большинство: Приговор подтвержден. Верховный суд постановил, что приказ об эвакуации, нарушенный Коремацу, был действительным, и в этом случае не было необходимости решать конституционные вопросы расовой дискриминации.

Совпадающее мнение Автор: судья Франкфуртер

Согласие: следует рассмотреть конституционные вопросы, но при их оценке становится ясно, что «военная необходимость, возникающая из-за опасности шпионажа и саботажа» оправдывала приказ военных об эвакуации. Приговор подтвержден

Особое мнение написано: судья Джексон

В резко выраженном несогласии судья Роберт Джексон заявил: «Коремацу … был осужден за деяние, которое обычно не считается преступлением.Он состоит просто в том, чтобы находиться в государстве, гражданином которого он является, рядом с местом, где он родился и где прожил всю свою жизнь». других интернированных их конституционно охраняемых гражданских прав.

Судья Джексон назвал постановление об исключении «легализацией расизма», нарушающим пункт о равной защите Четырнадцатой поправки. Он сравнил приказ об исключении с «отвратительным и презренным обращением с группами меньшинств со стороны диктаторских тираний, которые эта нация теперь обязалась уничтожить.Он пришел к выводу, что приказ об исключении нарушил Четырнадцатую поправку, «упав в уродливую бездну расизма».

Проблема

Был ли приказ военных об исключении оправданным?

Рассуждение

По мнению большинства, суд не должен рассматривать весь приказ, по которому Коремацу был осужден, который включает положения, требующие от граждан явиться в центры сбора и переселения. Большинство сочло необходимым только принять решение о действительности конкретного положения, по которому Коремацу был осужден: положения, требующего, чтобы он покинул указанную территорию.

Поскольку приказ применялся только к японцам или лицам японского происхождения, он подвергался «самой строгой проверке». Большинство сочло, что, хотя изгнание граждан из их домов, как правило, является недопустимым использованием государственной власти, существует исключение, когда существует «серьезная [ ] неминуемая опасность для общественной безопасности», если существует определение и тесная связь между действия правительства и предотвращение шпионажа и саботажа.Большинство постановило, что существует достаточная опасность и достаточная связь между приказом и предотвращением опасности, чтобы оправдать требование эвакуации Коремацу. Большинство заявило, что приказ действителен.

Несогласные не согласились. Они изложили свою позицию, согласно которой приказ должен был рассматриваться в целом, и Суд должен был рассмотреть другие одновременные приказы, все из которых, если рассматривать их вместе, привели к заключению граждан США в по сути концлагеря, основанные только на на их гонке.

Дэн Франк был одаренным и щедрым редактором

Я не знаю, сколько людей в читающей публике узнают имя Дэна Франка. Миллионы из них должны. Он был одаренным редактором, наставником, лидером и другом, известным в издательском мире. Его безвременная смерть от рака вчера, в возрасте 67 лет, является ужасной потерей, особенно для его семьи и коллег, а также для обширного сообщества писателей и читающей публики.

Минута за минутой, страница за страницей писатели жалуются на редакторов.Год за годом, книга за книгой, мы осознаем, как глубоко мы полагаемся на них. На протяжении десятилетий мне посчастливилось работать с рядом самых талантливых и поддерживающих книжных редакторов нашей эпохи. Когда-нибудь я напишу обо всей последовательности, которая привела меня 20 лет назад к Дэну Фрэнку. А пока я хочу сказать, как много Дэн Франк значил для публичного дискурса в наше время и как много его будет не хватать.

Дэн начал работать в издательском деле, когда ему было 20, после колледжа и аспирантуры.Когда ему было 30, он стал главным редактором Viking Books. Среди знаменитых книг, которые он редактировал и издавал, была « Chaos: Making a New Science » Джеймса Глейка, которая стала бестселлером и имела успех у критиков. Он также представлял собой документальную литературу (и художественную литературу), к которой стремился Дэн: хорошо информированный, элегантно написанный, доступно представляющий сложные темы, помогающий читателям войти и понять сферы, о которых они раньше не знали. Так случилось, что Глейк работал с Дэном над всеми его последующими книгами, включая его биографии Ричарда Фейнмана и Исаака Ньютона, а также « Faster » и « The Information ».

В 1991 году, после перестановки в Пантеоне, Дэн Франк перешел туда в качестве редактора, а с 1996 года он стал главным редактором и руководителем Пантеона. Как написал вчера Рейган Артур, нынешний глава импринтов Knopf, Pantheon и Schocken в Penguin Random House, в записке о смерти Дэна: мировая литература, современная художественная литература и графические романы. Авторы, опубликованные под именем Дэна, были награждены двумя Пулитцеровскими премиями, несколькими Национальными книжными премиями, многочисленными премиями NBCC и несколькими премиями Эйснера [за графические романы]…

На протяжении десятилетий Дэн был публичным лицом Пантеона, задавая тон всему дому и контролируя список. У него было ненасытное любопытство к жизни, и действительно, это любопытство повлияло на многие его приобретения. Столь же важны, как изданные им книги и авторы, которых он редактировал, Дэн служил наставником для младших коллег, бесконечно щедро делясь своим временем и опытом. Известный своим тихим голосом, «писательским редактором» и обладающий искренним смехом, который эхом отдавался на тринадцатом этаже, он настолько отождествлял себя с отпечатком, что некоторые из его писателей стали называть это место Дан Теон.

В Интернете на удивление мало фотографий Дэна. Я считаю это признаком его скромности; о контрасте между его высоким статусом в издательском мире и его намеренно низким статусом за его пределами; и о его сосредоточении на тихой внутренней работе, когда он сидит с рукописями или разговаривает с авторами. Единственный сегмент YouTube, который я нашел с его участием, — это фрагмент 2015 года, когда Дэн брал интервью у автора Томаса Маллона в Центре фантастики в Нью-Йорке. (Использую с разрешения Центра.)

Дэн сидит справа, в своих фирменных круглых очках. Клип даст представление о его манере поведения, его мягком, но проницательном любопытстве, его интеллекте и ободрении, его готовности улыбаться и подбадривающе смеяться. Глядя, как он разговаривает с Мэллоном, я вспоминаю его поведение, когда мы разговаривали в его кабинете в Пантеоне или в соседнем ресторане.

Всему, что в современной культуре является безумным и рассеянным, Дэн Франк был противоположностью. Самый верный способ заставить его скептически приподнять бровь, услышав предложение написать новую книгу, состоял в том, чтобы предложить какую-нибудь тему, которая на мгновение стала горячей добела на ток-шоу и в экстренных новостях.Я знаю это не понаслышке. Книжные идеи, от которых он уводил меня и не давал тратить на них время, представляли собой руководство столь же важное, как и то, что он предложил по четырем книгам, которые я написал для него, и самой последней, над которой он работал со мной и моей женой, Деб.

Дэн знал, что у книг долгий период созревания — исследования и отчеты, размышления, написание, редактирование, открытие их миру. Они требовали напряженной работы многих людей, начиная с автора и редактора и заканчивая гораздо большей командой.Поэтому ему казалось справедливым, чтобы что-либо, требующее таких больших усилий, было написано так, как будто оно имело 90 900 шансов 90 901 на существование. Очень немногие книги выживают; почти никто не получает должного внимания; но Дэну нужны были книги, которые заслуживали того, чтобы их читали через год после выхода, или через десять лет, или дольше, если с ними сталкивались люди.

Длинный список авторов, с которыми он работал, опубликованный издателем, который я включу в конце этого поста, только начинает предлагать его диапазон. Когда я добрался до последней страницы нового захватывающего романа эпического масштаба о современном Китае Орвилла Шелла под названием « Мой старый дом », казалось неизбежным, что кульминационным словом благодарности автора будет его «замечательный, сдержанный» редактор. , Дэн Фрэнк.

Что именно делает такой редактор, чтобы заслужить такую ​​благодарность? Частью этого является «редактирование строк» ​​— вырезание или перемещение предложения, изменение слова, пометка неудобных переходов. Дэн преуспевал в этом, но это не было его главным монтажным даром. Как и все хорошие редакторы, он понимал, что первой реакцией писателя, увидевшего новый материал, всегда и неизменно должно быть: «Это будет здорово!» или «Я думаю, у нас действительно что-то есть». Затем, как и все хорошие редакторы, Дэн продолжал комбинировать вопросы, расширения, сокращения и поощрения, которые заставляют писателей создавать наилучшую осуществимую версию идеи, которую они имели в виду.Их роль подобна роли футбольного тренера, с планом перед игрой и речью в перерыве: они не сами играют в игру, но помогают спортсменам делать все возможное. Или как родитель или учитель, помогая молодому человеку избежать предсказуемых ошибок.

Вы можете узнать больше о собственных взглядах Дэна Фрэнка на роли автора, редактора, издателя и агента в этом интервью от Riverrun Books в 2009 году. Там даже есть его фото! И вы можете подумать о книгах, которые он поддерживал, редактировал и помогал создавать, если вы рассмотрите эту часть заметки Рейгана Артура:

Дэн работал с писателями, которые публиковались как в Pantheon, так и в Knopf.